全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
含量调整用药剂量。
本试验所收集的 10 批无名异药材中，有 5 批重
金属限度超标。因此对矿物药的质量标准的制定迫
在眉睫［9］，否则将会制约矿物类中药产业的
发展［10］。
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［责任编辑 邹晓翠］
［收稿日期］ 20121211(009)
［基金项目］ 河南省教育厅自然科学基金(2009B360001) ;河南大学校内基金(2011YBZＲ015)
［第一作者］ 王培卿，在读硕士，从事中药活性成分及新药开发，Tel:0378-3880680，E-mail:huobingstar@ 163. com
［通讯作者］ * 康文艺，教授，从事中药活性成分及新药研究，Tel:0378-3880680，E-mail:kangweny@ hotmail． com
9 种蓼科植物抗菌活性
王培卿1，张橡楠2，刘瑜新1，3，李昌勤1，康文艺1*
( 1. 河南大学中药研究所，河南 开封 475004;
2. 河南医药技师学院，河南 开封 475008; 3. 河南大学淮河医院，河南 开封 475001)
［摘要］ 目的:研究 9 种蓼科植物的体外抗菌活性。方法:采用纸片扩散法和多孔板法研究 9 种蓼科植物的不同提取物
对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MＲSA)和 β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)的抑制活
性。结果:四季红甲醇提取物和四季红乙酸乙酯提取物质量浓度在 50 g·L －1对 SA，MＲSA和 ESBLs-SA的抑菌圈直径较大，其
中四季红乙酸乙酯提取物对 3 种菌均有抑制作用，MIC全部为0. 062 5 g·L －1;多孔板法中，辣蓼乙酸乙酯提取物(IC50 0. 45 g·
L －1)活性最好。结论:实验证明蓼科植物提取物对 SA，MＲSA，ESBLs-SA有较好的抑制作用，尤其是四季红和辣蓼的抗菌活性
较显著。
［关键词］ 蓼科;抗菌活性;金黄色葡萄球菌;耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌;β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌
［中图分类号］ Ｒ285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)17-0109-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013170109
Antibacterial Activities of Nine Polygonaceae Plants
WANG Pei-qing1，ZHANG Xiang-nan2，LIU Yu-xin1，3，LI Chang-qin1，KANG Wen-yi1*
(1. Institute of Chinese Materia Medica，Henan University，Kaifeng 475004，China;
2. Henan Institute of Medical Technicial，Kaifeng 475008，China;
·901·
第 19 卷第 17 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 17
Sep．，2013
3. Huaihe Hospital of Henan University，Kaifeng 475001，China)
［Abstract］ Objective:To evaluate the antimicrobial activity of nine plants of Polygonaceae in vitro．
Method:Disc diffusion methods and porous plate methods were used to evaluate the inhibitory activity of different
extracts of nine Polygonaceae plants against Staphylococcus aureus (SA) ，Methicillin-resistant Staphylococcus
aureus (MＲSA)and ESBLs-SA． Ｒesult:The results indicated that methanol extract of Polygonum capitatum D．
Don and ethyl acetate extract of P． capitatum at the concentration of 50 g·L －1 had a larger inhibiting diameter than
that of other extracts of plants，among them MIC in the ethyl acetate extract of P． capitatum against SA，MＲSA
and ESBLs-SA was 0. 062 5 g·L －1 ． The ethyl acetate extract of P． hydropiper L． var hispidum (Jook． F．)
Steward． showed the highest inhibitory effect (IC50 0. 45 g·L
－1)in porous plate methods． Conclusion:Ｒesults
showed that nine plants extracts of Polygonaceae have better inhibitory activity against the tested bacteria，especially
P． capitatum and P． hydropiper L． var hispidum (Jook． F．)Steward． showed more significant antimicrobial
activity．
［Key words］ Polygonaceae;antimicrobial activity;SA;MＲSA;ESBLs-SA
蓼科 Polygonaceae 主要分布于北温带，我国有
13 属约 269 种，属种超过了世界属种的 1 /4［1］。蓼
科植物多数具有清热解毒、散结消肿、活血止痛、顺
气解痉、收敛止泻、通经利尿等功效，其中何首乌、虎
杖、药用大黄、羊蹄等为常用的中药材。从 20 世纪
80 年代开始，蓼科植物化学成分研究逐渐受到关
注，发现黄酮及蒽醌类化合物［2］在该科植物中普遍
存在，此外还含有芪、酮、萜、有机酸等化合物［3］。
药理研究表明具有抗菌［4］、抗氧化［5］、调节血脂［6］、
降血糖和抑制 α-葡萄糖苷酶［7-13］等活性。
本文对采集的 9 种蓼科植物进行了体外抗菌活
性筛选，为进一步发现具有抗菌活性的蓼科植物，指
导追踪分离抗菌活性成分。
1 材料
1. 1 药材 何首乌、首乌藤、四季红、辣蓼和蛇倒退
于 2007 年 10 月采集于贵州省都匀地区，由黔南州
民族师范学院郭治友教授鉴定为蓼科蓼属 Ｒadix
Polygonum multiflori， Cauliset folium Polygoni
multiflori，Polygonum capitatum D． Don，Polygonum
hydropiper L． var hispidum (Jook． F．)Steward，P．
perfoliatum L．。大马蓼、酸模叶蓼、粘毛蓼、头状蓼、
尼泊尔酸模和齿果酸模 2006 年 7 月采集于河南省
伏牛山区，经过河南大学中药研究所李昌勤副教授
鉴定为 P． nodosum Pers，P． lapothifolium L． var．
salicifolium Sibith．，P． viscosum Buch-Ham． ex D．
Don，P． alatum Buch-Ham． ex D． Don，Ｒumex
nepalensis Spreng．，Ｒ． dentatus L．。
1. 2 供试菌种 金黄色葡萄球菌(Staphlococcus
aureus，SA)ATCC25923 购买于上海天呈生物信息
有限公司(批号 TC-26) ，耐甲氧西林的金黄色葡萄
球菌 (Methcillin-resistant S． aureus，MＲSA) 和
ESBLs-SA由河南大学附属淮河医院临床分离得到，
经全自动微生物分析仪 VITEK-AMS 鉴定，符合
率 99%。
1. 3 培养基 Nutrient Agar(北京奥博星生物技术
有限公司) ，Broth Medium(北京奥博星生物技术有
限公司) ，试剂均为分析纯。
1. 4 仪器 LＲH-150 型生化培养箱(上海一恒科
技有限公司) ，索氏提取器，LDZX-30KB 型立式压力
蒸气灭菌器(上海申安医疗器械厂) ，JJ-CJ-2FD 型
洁净工作台(吴江市净化设备总厂) ，ZWX-201A 型
紫外线空气消毒器，电子天平(Mettler-Toledo) ，旋转
蒸发仪(Heidolph)。
2 方法
2. 1 提取 将各样品分别置索氏提取器中，依次分
别加入石油醚、乙酸乙酯、甲醇各 300 mL，回流 7 h，
浓缩回收溶剂得到相应的提取物。
2. 2 样品的制备 用 DMSO溶解样品浸膏，配制成
50 g·L －1的溶液备用。
2. 3 供试菌株的活化 将所有供试菌种接入斜面
培养基，置于 37 ℃恒温培养箱内培养 24 h，待用。
2. 4 制备平板 细菌培养基采用琼脂培养基，将配
制好的培养基移入锥形瓶，121 ℃高压蒸气灭菌 15
min后，冷却至 50 ～ 60 ℃，在超净工作台里倾注平
板，冷却为固体培养基，备用。
2. 5 菌液的制备 菌株活化后，将菌种接于肉汤培
养基，制备成一定浓度的菌悬液备用，4 ℃冰箱保存
(不超过 12 h)。
·011·
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 17
Sep．，2013
2. 6 含药纸片的制备 将样品各提取液浸膏释稀，
灭菌备用。每张纸片(直径 6 mm)分别加溶液各 5
μL，空白对照组加无菌蒸馏水 5 μL，阴性对照组加
分析纯 DMSO 5 μL。
2. 7 K-B实验法 在超净工作台上将灭菌后的琼
脂培养基倒入培养皿中，平皿标记后，用无菌移液管
移取已配好的菌液 0. 1 mL加入平皿中，用涂布器将
菌液涂布均匀，将上述纸片等距置于含菌平板，制成
带菌平板。室温放置 3 ～ 5 min 后，贴加含药纸片，
置入 37 ℃恒温生化箱培养 24 h，观察菌落生长情
况，精确测定抑菌圈直径［7］。各稀释液的每项抑菌
实验均平行重复 2 次。
2. 8 最低抑菌浓度(MIC)的测定 将样品用适量
的溶剂(DMSO)进行倍比稀释后，每张纸片分别加
样品溶液 5 μL，空白对照组加无菌蒸馏水 5 μL，阴
性对照组加分析纯 DMSO 5 μL，完全没有抑菌直径
的最低浓度为该物质的最低抑菌浓度(MIC) ，所有
操作均在无菌条件下进行。
2. 9 半数抑制浓度(IC50)的测定
［8-13］ 将在肉汤
培养基中培养 18 h 的金黄色葡萄球菌菌液(SA，
MＲSA，ESBLs-SA)90 μL 分别加入洁净无菌的 96
孔培养板中，然后加入不同浓度梯度的样品母液
10 μL，溶剂(DMSO)终浓度为 1 /10 样品母液浓度。
同时设阴性对照、空白对照和溶剂对照，每个处理 3
个重复。将 96 孔板于 37 ℃下，培养 20 h 后，用酶
标仪测定 595 nm处的吸光值(A) ，各样品以相同条
件下的上清液 A作为空白对照，减去空白对照即为
含菌量的 A，相应上清液是在10 000 /6 min 的条件
下制备，对应吸取 100 μL。按下面公式计算出抑制
率(%) :
抑 制 率 =
(A溶剂对照 － A对照上清)－(A药液 － A药液上清)
A阳性 － A阴性上清
× 100%
以样品浓度和抑制率作图，求出线性回归方程，
计算抑制率为 50%时的浓度即为 IC50值。
3 结果
3. 1 抑菌圈的测定 按照 2. 6 项实验方法分别进
行试验，各样品的抑菌圈数据见表 1。
3. 2 MIC的测定 实验各样品按照 2. 7 项实验方
法进行试验，对 SA，MＲSA，ESBLs-SA 的 MIC 实验
数据见表 2。
3. 3 IC50的测定 选取 MIC 较好的样品进行 IC50
的测定，包括以下样品:辣蓼石油醚提取物对 SA 是
3. 69 g·L －1、对 MＲSA是 0. 84 g·L －1，辣蓼乙酸乙酯
表 1 各提取物对受试菌种的抑菌圈
样品
初筛质量
浓度
/ g·L －1
抑菌圈(平均值)/mm
SA MＲSA ESBLs-SA
何首乌根石油醚提取物 50 9 NA NA
何首乌藤石油醚提取物 50 10 NA NA
大马蓼甲醇提取物 50 NA 9 NA
粘毛蓼石油醚提取物 50 9 8 8
粘毛蓼乙酸乙酯提取物 50 NA 8 NA
粘毛蓼甲醇提取物 50 NA 8 NA
辣蓼石油醚提取物 50 10 12 NA
辣蓼乙酸乙酯提取物 50 10 8 NA
头状蓼甲醇提取物 50 NA 9 NA
蛇倒退乙酸乙酯提取物 50 9 NA NA
蛇倒退甲醇提取物 50 NA 8 NA
尼泊尔酸模根石油醚提取物 50 NA 8 9
尼泊尔酸模根乙酸乙酯提取物 50 8 8 NA
齿果酸模乙酸乙酯提取物 50 NA 8 NA
四季红石油醚提取物 50 9 NA NA
四季红乙酸乙酯提取物 50 10 10 10
四季红甲醇提取物 50 15 15 15
空白 0 0 0
DMSO 0 0 0
阳性对照(小檗碱) 2. 5 15 16 16
注:NA为无抑菌圈;初筛浓度是以提取物计。
提取物对 SA 是 0. 45 g·L －1，四季红石油醚提取物
对 SA是 4. 34 g·L －1，四季红乙酸乙酯提取物对 SA
是 2. 11 g·L －1、对 MＲSA 是 0. 80 g·L －1、对 ESBLs-
SA是 1. 54 g·L －1，四季红甲醇提取物对 SA 是 1. 05
g·L －1、对 MＲSA 是 1. 15 g·L －1、对 ESBLs-SA 是
1. 63 g·L －1。
4 讨论
由表 1 可知，在 50 g·L －1下各样品浸膏对 SA的
抑菌 圈 ＞ 10 mm 比 较:四 季 红 甲 醇 提 取 物
(15 mm)＞四季红乙酸乙酯提取物(10 mm)=辣蓼
石油醚提取物(10 mm)=辣蓼乙酸乙酯提取物(10
mm)=何首乌藤石油醚提取物(10 mm) ;对 MＲSA
的抑菌圈 ＞ 10 mm 比较:四季红甲醇提取物(15
mm)＞辣蓼石油醚提取物(12 mm)＞四季红乙酸乙
酯提取物(10 mm) ;对 ESBLs-SA的抑菌圈 ＞ 10 mm
比较:四季红甲醇提取物(15 mm)＞四季红乙酸乙
酯提取物(12 mm)。
·111·
王培卿，等:9 种蓼科植物抗菌活性
表 2 各提取物对受试菌种的MIC mg /disc
样品 SA MＲSA ESBLs-SA
何首乌根石油醚提取物 0. 125 NT NT
何首乌藤石油醚提取物 0. 062 5 NT NT
大马蓼石油醚提取物 0. 062 5 NT NT
大马蓼乙酸乙酯提取物 0. 25 NT NT
大马蓼甲醇提取物 NT 0. 062 5 NT
粘毛蓼石油醚提取物 0. 125 0. 25 0. 25
粘毛蓼乙酸乙酯提取物 NT 0. 25 NT
粘毛蓼甲醇提取物 NT 0. 25 NT
辣蓼石油醚提取物 0. 062 5 0. 031 3 NT
辣蓼乙酸乙酯提取物 0. 062 5 NT NT
头状蓼甲醇提取物 NA 0. 25 NT
蛇倒退乙酸乙酯提取物 0. 125 NT NT
蛇倒退甲醇提取物 NT 0. 25 NT
尼泊尔酸模根 P NT 0. 25 0. 125
尼泊尔酸模根乙酸乙酯提取物 0. 25 0. 25 NT
齿果酸模乙酸乙酯提取物 NT 0. 125 NT
四季红石油醚提取物 0. 125 NT NT
四季红乙酸乙酯提取物 0. 062 5 0. 062 5 0. 062 5
四季红甲醇提取物 0. 062 5 0. 062 5 0. 031 3
阳性对照(小檗碱) 0. 000 156 0. 000 156 0. 000 156
注:NT为未测定
由表 1，2 可知，在 50 g·L －1下所研究植物的 3
个部位(石油醚部位，乙酸乙酯部位、甲醇部位)均
有抗菌活性的是大马蓼、粘毛蓼和四季红。其中粘
毛蓼石油醚提取物，四季红乙酸乙酯提取物和四季红
甲醇提取物对 3 种受试菌种均有抗菌活性，其对 SA
的 MIC值依次为 0. 125，0. 062 5，0. 062 5 g·L －1;对
MＲSA的 MIC 值依次为 0. 25，0. 062 5，0. 062 5 g·
L －1;对 ESBLs-SA 的 MIC 值依次为 0. 25，0. 062 5，
0. 031 3 g·L －1。结果显示四季红乙酸乙酯提取物抗
菌活性最好，对 3 种菌均有抑制作用，但仍低于阳性
对照(小檗碱)。
对相应样品浸膏的 IC50进行比较，对 SA的抑制
作用大小为辣蓼乙酸乙酯提取物(0. 45 g·L －1)＞四
季红甲醇提取物(1. 05 g·L －1)＞辣蓼石油醚提取物
(3. 69 g·L －1)＞ 四季红石油醚提取物(4. 34 g·
L －1) ;对 MＲSA的抑制作用大小为四季红乙酸乙酯
提取物(0. 80 g·L －1)＞辣蓼石油醚提取物(0. 84 g·
L －1)＞四季红甲醇提取物(1. 15 g·L －1) ;对 ESBLs-
SA的抑制作用大小为四季红乙酸乙酯提取物(1. 54
g·L －1)＞四季红甲醇提取物(1. 63 g·L －1) ，但所有
提取物对 3 种菌株的活性均低于阳性对照药物小
檗碱。
综上所述，试验中 9 种蓼科植物提取物对 SA，
MＲSA，ESBLs-SA有较好的抑制作用，总体评价四季
红和辣蓼的抑菌效果较好。蓼科植物在植物源农
药、医药、兽药、食品添加剂等方面有着良好的开发
前景。如能进一步明确活性植物中的有效成分，对
开发各种治疗致病菌感染药物具有一定意义。
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［责任编辑 邹晓翠］
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