全 文 ：广 西 植 物 G uih a ia 性 2 ( i ): 5 5一4 9 .Fe往 19 9 2
日 本 落 丝 子 的 生 防 研 究 `
寄生真菌的筛选和利用
廖咏梅 周广泉 周志权 蒋冬荣
(广西植物研究所 , 桂林 5 4 1。。 6 )
摘要 对 日本冤丝子有较强致病力的刺盘抱菌 , 其在P D A培养基上的特点是 , 菌落桔红色 ,
产抱量大 , 气生菌丝稀疏 , 不形成分生抱子盘和刚毛 。
不太可能筛选少万个对所有寄主上的日本芡丝子都有较强致病力的菌株 , 但完全有可能筛 选
出对其中少数几个主要寄主上的冤丝子均有较强致病力的菌株。
高温高湿和伤口对菌株的侵染有利 ; 菌株的抱子悬浮液中加入 2 耳蔗糖或少量冤丝子压榨液
戈可促使抱子提早萌发拜提高其萌发率 。
冤丝子的茎蔓尤其幼嫩部分比花穗更易感病 。
固体扩大培养基的成分中 , 用 80 多麦鼓加 20 耳玉米粉配制较好 , 菌株的产饱量大 。
关键词 日本冤丝子 ; 刺盘抱菌
在 日本芜丝子 ( C u s c 川 a j a P o n i e a O h o i s y ) 的生防研究中 , 对菌株的筛选结果表明 :
具有较强致病力的菌株 , 仍然棣属于刺盘抱菌属 C ol el 才ot ri hc 。 。 C or d a[ “ “ ! 中的某些种 ,
同时还观察到 , 菌株致病力的强弱 , 固然是不同 “ 种 ” 的特性之 ,一 , 然而既便是同一个 “ 种 ”
也受诸多因素的制约 (勿文报道 ) , 就其应用来说 , 筛选一个相对多效的菌株并进而提高其
侵染力 , 是生防中迫切需要解决的问题 , 为此 , 本文将就上述何题 , 汇总成文报告如下 。
一 、 对日本莞丝子有较强致病力的刺盘袍菌菌落的基本特点
先后在不同地区的不同寄主上 , 分离出2 0 多号刺盘抱菌菌株 , 根据在P D A 培养基 ( 马
铃薯葡萄搪琼脂培养基 ) 上产饱量的大小 , 气生菌丝的多少以及菌落的色泽等特性 , 初步分
成12 个类群 [ ’ 、 “ 、 3 1 , 每个类群选几个代表分别对不同颜 色及几个主要寄主上的芜丝子 进 行
接种 , 测试其致病力 , 结果发现 : 凡对 日本芜丝子有较强致病力的菌株 , 毫无例外地均棣属
于具有下列特点的类群 t ` 、 毛 ’ “ l : 菌落致密 , 菌丝多紧贴培养基质的表面或埋生 , 基面菌丝
大量着生分生抱子 , 集结成粉红色或桔红色的分生抱子堆 , 不形成分生抱子盘和刚毛 , 外围
有少量的稀 疏气生菌丝` , 培养后期底部部分或全部变黑 , 多呈轮纹状 。
从实用的角度看 , 上述几个基本特性作为分 “ 类群 ” 的依据还是可行的 , 有助于今后对
日本冤丝子进行生防菌株的定向筛选研究 。
. 丰项研究系国家自然科学基金资助的课题,
1期 廖咏梅等 : 日本苑丝子的生防研究
二 、 菌株筛选的可行性选择
取经初测具有较强致病力的菌株 , 在 P D A 培养基上培养后 , 制成抱子悬浮液 , 对不同
寄主上和含有不同色素的冤丝子 ( 紫红色和黄色 ) 进行致病性的进一步测试 , 方法是 : 将待
测的健壮芜丝子茎蔓缠绕在铁丝架上 , 喷洒供试菌株的抱子悬浮液 , 置于盛有清 水 的 搪 瓷
盘中 , 并用大烧杯分别罩起保湿 , 每个菌株 “ 个重复 , 另以不接种衅建理的芜丝子为对照 ,在 25 一28 ℃条件下 , 经一周 , 分别检查蓖丝子病死百分率 , 取其平拘值进行比较 。 测试结果
如表 1 。
表 1 供试菌株对不同寄主上的日本览丝子与色泽的致病率 ( 男 )
- - - ~ - 一一- - - - - - - - -
菌 株冤丝子的寄
主与色泽 2 2 ( 2 ) 1 7 b 1 1 0 f s 0 4一 3 1 8 7一 1 1 1 5h : 对照
6Uó
冬青、 紫红
冬青、 黄
泡桐 、 黄
桂花 、 黄
粗叶悬钩子 、 黄
夹竹桃 、 黄
红豆 、 黄
4 5
.
0
9 0
.
0
1 00
.
0
7 5
。
0
1 0 0
.
0
1 0 0
_
0
3 0
。
0
8 5
.
0
9 0
。
0
3 5
。
0
7 5
.
0
8 0
。
0
5 0
。
0
8 5
.
0
8 0
。
0
8 2
。
5
8 7
。
5
9 0
。
0
6 0
。
0
8 2
。
5
3 5
。
0
1 0 0
。
0
5 5
。
0
9 5
.
0
9 0
。
0
8 0
。
0 7 5
.
0 0
表 2 不同培养基质对抱子萌发的关系
\ 麟嚣拿一一一 ~里匕一 一 .全些止一兰里- 一 一卫竺兰一
\ (多) 1,2 毕 3户 1月 平 3户 1子 毕 3户 1; 2产 3户培养基贫\ 爵 爵 翁 肯 爵 翁 翁 静 碍 碍 爵 谷
一洲ùOUQ甘丹0甘Qù月性了ō匕住`O甘QU反JQ口仓d,1OUQU,dgnó0口n,
1上
J任UQ00厅了O甘公
一óJ
八匕1孟-11QU00
O口
八JU曰八hnùé
1上咨tù
清 水
水惊脂
黄豆粉 一 P D A
1 2
。
5
7 6
9 8
5 9
9 6
7 1 1 1 5 4
1 0 0 9 4 9 8
1 0 0 9 8 1 0 0
从表 1 不仅可看出 : 不 同菌株对含有不 同色素的芜丝子致病力不尽相同多 同时对不同寄
主上的芜丝子的致病力 , 也有明显差异 , 显然有其 “ 专化性 ” 。 但是日本芜丝子的寄生又是多寄
主, 其中有很多还是极有经济价值的林木果树 , 因此 , 这对生防菌株的筛选和利用 , 不是一
个有利的因素 , 然而可喜的是从表中还可看出 , 虽然筛选一个对各种色泽和各种寄主上的芜丝
子都具有较强致病力的菌株 , 就当前来说 , 不是一件容易的事 , 可是筛选一个针对主要寄主
上的冤丝子还是可行的 , 例如 , 对含有不同色素特别是含有紫色素的芜丝 子 来 说 , 8 7 一 1 和
1 15 h : 等都具有较强的致病力 , 而 2 2 ( 2 ) 、 17 b 和 1 1 5h 2等对供试的几个寄主上的芜丝子都有
相对较高的致病力 。 因此 , 对 日本冤丝子生防菌种的筛遥 , 应 当面向区内几个主要经济价值
9 0广 西 植 物 1 2卷
较高的寄主上的芜丝子为主 。 这是一个可行的明智选择 。
三 、 生防菌株利用中的几个相关因素
1
. 袍子的萌发 菌株悬浮液中的抱子萌发速度 与萌发量 , 都直接和间接地影响其对冤
丝子的致病率 , 因此我们对抱子萌发的适宜条件进行了探讨 。
` 铆
( 1 ) 抱子的萌发 与培养基质的关 系
取培养在 P D A 培养基上的 2 2 ( 2) 等四个供试菌株的抱子 , 制成抱子悬浮液 , 经稀释后 ,
为保持湿润而不干燥 , 分别将 5m l移植在清水 、 水琼脂培养基和黄豆粉 一 P D A 培养基继续培
养 , 每隔 12 小时 , 镜下检查其萌发率 , 共检三次 , 每处理重复 2 次 , 每次重复检查 3 个视野 ,
取其平均值进行 比较 , 结果如表 2 。
试验结果表明 : 供试的各菌株在清水中连续培养的抱子萌发率普遍偏低 , 特别是在 1 2小
时内 ; 而在水凉脂培养基和黄豆粉 P D A 培养基上连续培养的抱子发芽率均接近或超过 90 % 。
在镜检中发现 , 不同基质培养中的抱子萌发状态亦有所不同 , 在清水中继培的抱子 , 多
在一端或两端伸出较短的芽管 , 在水琼脂培养基上继培的抱子 , 伸出的芽管很快就延伸成菌
丝 , 多为单支 (少有分枝 ) , 而在黄豆粉 P D A 培养基上继培的抱子 , 不仅很快长成较长的菌
丝 , 并且大量分枝 , 有些分枝的尖端还膨大为次生抱子 , 这种现象的出现可能说明 : 这些抱
子的萌发快时间早在前几个小时就已开始 , 而次生抱子的形成可能是 , 芽管或 由此而延伸成
的菌丝 , 在找不到寄主借以吸取营养的情况下 , 以次生抱子形式延长其寿命 , 这种现象我们
在P h夕 t o 夕夕*h o r a `n f e s 才a n s d Be e r y 也发现过 L。 ] 。
在 同一时间内 , 清水中继培的抱子发芽率 与在有一定营养而又湿润的培养基上继培的抱
子发芽率的悬殊差异 , 不能简单地用营养来解释 , 可能还受着 “ 水浸 ” 的影响 , 为了证实这
一推测了 我们在菌株 2 2 ( 2) 的抱子悬浮液中 , 分别加入。 . 5% N H ` N O 3 、 。 . 5%蔗搪 、 0 . 5% 葡
萄搪 、 。 . 5% 葡萄搪 + 。 . 5% N H ` N O 。 以及0 . 5%芜丝子压榨液 , 每种处理均用 10 m l 水兑成
溶液 , 以不加添加物为对照 , 然后各取 5 滴 , 分散滴于水琼脂培养基上 , 剩下钓抱子悬浮液
静置培养 , 经 7 小时检查 , 结果如表 3 。
表 3 中可见 , 凡继续处于悬浮液状态者 , 经 7 个小时均未发现萌发的抱子 , 而把加入不
同物质的抱子悬浮液散滴在水琼脂平面培养基上 , 则显示出不同物质对袍子萌发的影响 , 其
中高者可达 81 一86 % , 而清水对照仅为39 . 0% , 添加芜丝子汁液者 , 其萌发率较高 , 可能是
寄主对病原的刺激效应 , 这种现象在植物病理上是较常见的 [ 4 ] 。 同时观察到 , 凡抱子 萌 发
早而多的部位 , 均是在琼脂平板培养基上悬浮液流淌而无积水的地方 , 而有积水部分 , 抱子
萌发量较小 , 说明抱子萌发与空气中氧的供应有关 。
这项试验结果充分表明 , 菌株抱子悬浮液转加到有适当和适量营养的培养基上并使之处
于湿润状态时 , 可以提早和增加抱子的萌发 , 延长袍子的寿命 , 因此也就可能间接提高其侵
染有效率 。
`
( 2 ) 不同添加物的浓度时袍子萌发 的影响
根据表 a 所列数据 , 添加 0 · 5% N H ` N O : 和 0 . 5% 葡萄搪的发芽率较添加两者之一的抱子
发芽率高得多 , 这种 “ 互促 ” 的效果 , 很可能是 “ 浓度 ” 问题 ( 实质上是渗透压问题 ) , 于
1期 廖咏梅等 : 日本冤丝子的生防研究
表 3一胞子悬浮液加入不同物质后不同状态下的萌发状况 ( 多 )
态 . 0 5` . 0 5` . f 0漓葡萄糖 . 0 5` 芜丝 . 0 5,
N H 4N 0 3 葡萄搪 + 。 . 5多 N H 4N O : 子压榨液 蔗糖 清水
抱子悬浮液滴 柱
在水琼脂培养基上
继续浸在水中 l
表 4 不同温湿度对菌株侵染的影响
相对湿度供试条件 温度 (℃ )
(拓 )
高温高湿 2 8一 2 9 95 以上
温暖高湿 2 3一 2 5 95 以上
温暖低湿 2 3一 2 5 75 左右
冷凉高湿 1 0一 2 0 8 左右
供试菌株对芜丝子的致病率 (万 )
2 2 ( 2 ) 1 7b 1 4 ( 3 ) 对照
是又以蔗搪为添加物 , 分别在抱子悬浮液 ( 菌株仍为 2 2 ( 2) 中加入 1 % 、 2 % 、 4 % 、 8 %
和 1 6% 的蔗糖 , 结果以添加 2 %蔗糖的抱子悬浮液抱子萌发效果最好 , 三小时开始发芽 , 五
小时萌发率可达 “ o% 以上 , 经 7 小时可达 85 % , 而 1 %和 4 %浓度者 , 经 7 小时其萌发率分
别仅为 37 % 和26 % 。 因此 , 在抱子悬浮液中加入 2 % 蔗糖 , 可提早萌发 , 也能提高萌发率 ,
有利于菌株对芜丝子的侵染 。
2
. 有利于菌株怪染的温湿度条件
为使生防菌株喷施后发挥最大效果而提供依据 , 我们对喷施后的温湿度条件 进 行 了 试
验 , 把接种过的 日本冤丝子 ( 冬青上的黄色日本冤丝子 , 接种方法 同前 ) , 分别置于高温高
湿 ( .温度为 28 一 29 ℃ , 相对湿度 95 % 以上 ) ; 温暖高湿 ( 23 一 25 ℃ , 95 % 以上 ) , 温暖低湿
( 2 3一 25 ℃ , 75 %左右 ) 和冷凉高湿 ( 10 一 20 ℃ , 8 % ) 等四 种条件 , 重复三次 , 另设不接
种的作对照 , 供试菌株分别为2 2 ( 2 ) 、 1 7b 和 1 4 ( 3) , 一个星期后 , 分别统计其发病率 , 取其
平均值 , 汇总如表 4 。
根据试验结果可看出 : 相对湿度是菌株侵染的限制因素 【“ ] , 高湿有利于菌株对冤 丝 子
的侵染 。
3
。 笼丝子茎笙的伤口和老熟度与被怪染的关系
为创造有利于侵染的条件和提供适宜的施菌期提供依据 , 我们把冬青上的黄色日本芜丝
子, 截成带有茎尖和伤口的茎段 , 圈绕在铁丝架上 , 进行接种 ( 方法同前 ) , 供试菌株分别
为 2 2( 2) , 8 7 一 1 , 17 b 和 12 一 l a , 每处理重复 2 次 , 共计 30 根 , 另设不接种的作 对 照 , 在 25 ℃
和相对湿度 90 % 条件下 , 四天后检查 , 结果如表 5 。
从表 5 所列数据可以看出 : 绝大多数发病的冤丝子 , 都是从伤 口侵入 , 部分从茎尖即从
幼嫩部分侵入并开始发病 , 极少从既无伤口 又不是幼嫩部位的茎蔓中间开始发病 , 充分说明
广 西 植 物 1 2卷
表 5不同菌株对冤丝子的不同状态和部位摄染惰况
菌株号 接种根数 伤 口发病根数 芽尖发病根数 中段非伤 口处有病根数
n QnU, i,工OOQé才生尸O,曰11,白自n.Unù日ùUnQOJno2 2 (2 )
8 7
一 1
1 7b
1 2 ~ l a
1 5
4
1 1
1 7
注 : 对照的发病率均为零 , 表中所列数据有多重侵染现象 。
表 6 冤丝子花稼和茎芡的感病性统计
冤丝子的寄主 供试部分 发 病 率 (拓)七天 九天 备 注
冬 青
桂 花
金 银 花
4 0
。
0
1 0 0
. 。 对照组均未发病
3 3
。
3
7 5
。
0
8 0
。
0
100
`
0
八UOùnéU802513穗蔓矿花茎
. 金银花上的冤丝子生长细弱 , 花穗尤小 。
表 7 不同成分的培养基组合对 22 ( 2 〕产抱 t 的影响
培养基成分及含量 (声 )
米 木
攘 糠
每克菌
剂含袍
子 量
(亿)
麦鼓磷酸ō钙磷二氢酸钾硫酸镁硫酸钱马铃薯汁冤丝子汁花黄豆 饼生粉木薯粉玉米粉
养培基号
572418306..21..801 0
9
。
5
户宝
0
。
5
0
。
5
2
2
1
9
.
5
1 0 1 5
1 0 2 0 0
.
4 0
.
0 5
nùOn公弓11.二, t一生
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0
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0 5 0 5
八ùnU,JQ山八U一吕R丹b内O
nnù只ù八石1 9
2 0
.勺介O
表 8 不同成分的培养基对产抱量的影响 ( 亿 / 克 )
菌 株 80 万麦鼓+ 20 多玉米粉 80 万麦鼓
十 19 万玉米粉
+ 1 多黄豆粉
80 万麦鼓 + 10 写玉米粉
+ 10 多木薯粉
1 2
.
5 0
15
.
7 7
16
。
3 0
8
.
7 2
1 3
.
8 8
1 0
。
1 0
1 3
。
50
13
。
6 0
11
。
2 5
1期 廖咏梅等 : 日本苑丝子的生防研究 9 3
喷洒生防菌剂时人为地对芜丝子创造伤口的重要性 , 同时还提示喷洒菌剂 , 应在芜丝子幼嫩
时期 , 即恢复生长的早春为宜 。
4
· 笼丝子茎盆和花抽的感病性差异
为了抑制芜丝子的有性繁殖 , 我们对花穗的感病性进行了测定 , 测定方法是 分 别 将 冬
青 、 桂花和金银花上的芜丝子花穗和茎蔓 , 分别缠绕在铁丝架上 ( 接种方法同前 ) , 供试菌
株为2 2 ( 2) , 重复三次 , 以不接种为对照 , 试验结果见表 6 。
从 表 6 的统计数据着 , 花穗远比茎蔓更抗病 , 既便是花穗细弱也比茎蔓更抗病 ( 寄主金
银花 ) 。 值得提出的是 , 供试的茎蔓又是充分老熟的阶段 , 因此 , 秋季进行生防 , 不论是从
茎蔓的老熟度 , 还是从 抑制有性繁殖的产生来看 , 都不是理想的时期 。
四 、 固体扩大培养基的筛选
览丝子的生防菌株 , 是以抱子为主要侵染体 , 因此 , 固体扩大培养基的筛选 , 必需以产
抱量的多少为准 。 结合我区的农副产品的特点 , 参考已有的报道 〔’ 、 “ 1 , 我们设计了七个不同
成分组合 , 供试菌株为 2 2 (2 ) , 在 25 ℃恒温条件下进行筛选 , 每处理重复二瓶 , 培养 8 天后 ,
镜检结果见表 7 。
根据表 7 的统计数据看 , 主要以麦鼓和玉米粉组成的第六和第七个培养基组合的产抱量
较大 , 分别为每克含 10 . 51 亿和 1尽. 0 亿 , 但差异仍较显著 , 这或是试验中偶然出现的误差 ,
或是黄豆粉有抑制产抱的作用 , 为此 , 我们又用 2 2 ( 2) , n s h : 和 8 7 一 1菌株作试验 , 设计了 3
种仍以麦鼓和玉米粉为主的成分组合 , 试验结果见表 8 。
综合表 7 和表 8 可见 , 作为产抱量大的固体扩大培养基以由80 纬麦鼓和 20 %玉米粉配方
最好 ; 培养基的成分中加入黄豆粉 , 即使是 1 % 也对菌株的产抱能力有抑制作用 , 至于黄豆
粉是否对菌株累代致病能力具有稳定的作用 , 尚需进一步探讨 〔` “ l 。
小 结
在芜丝子的生防研究中 , 就其应用方面来说 , 初选的菌株在 P D A 培养基上应是 , 生长
迅速 , 菌落桔黄色或桔红色分生抱子堆 , 产抱量大 , 气生菌丝稀疏 , 对备选的菌株 , 其生防
对象要 目标明确 , 比如 日本芜丝子的色译及所在寄主等 , 这样筛选才更为有效 。
对生防菌株的应用 , 应掌握下列几个环节 :
1
. 商品化的培养塞 最好选用8 %的新鲜麦鼓加 20 % 的玉米粉 , 不宜添加黄豆粉 ,
2
. 配制的抱子悬浮液 , 加入 2 %蔗糖可促使抱子提早萌发并提高萌发率 ;
3
. 施菌适期 , 最好选在早春芜丝子恢复生长的早期阶段进行 ,
4
. 喷洒前 , 对霓丝子人为造成伤口是必要的 , 可提高侵染率 , 提高防效 ,
5
. 喷洒时 , 在我区宜选 “ 南风天 ” 进行 , 可提高防效 。
9通 广 西 植 物 1 2卷
〔 1〕
( 2〕
( 3 〕
鱿纽寸
〔 5 〕
〔 6〕
〔 7 )
〔 8 〕
〔 9〕
〔 1 0〕
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L i匆 Y o n gm e i , Z ho u G u a n g q u na , Z h o u Z h i q u a n a n d J i a n g D o n g r o鳍
(G u a n g x i l n s t i t u t e o f B o t a n y
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C o l le t o t r f c h u , n s P P
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S e t a e
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o g e n i e i t y t o C
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ja p o n i e a P a r a s i t i z i n g o n a l l h o s t P l a n t s
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b u t i t 15 e n t i r ly p o s i b l e t o
s e r e e n f o r w h i e h o n a f e w m
a i n h o s t P l a n t s
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H i g h t e m P
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h i g h h u m id i t y
a n d w o u n d s a r e o f b e n e f i t t o i n f e e t i v i t y
,
I n
s P o r e s u s P e n s i o n Z 万 s u e r o s e o r a l i t t i l C . j a P o ” I’ e a s q u e e z e j u i e e a r e a d d e d , t h e
s p r o u t i n g o f s p o r e e a n b e s h i f t e d t o a n e a r l i e r t im
e a n d i t s s p r o u t i n g r a t e e a n b e
f a i s e d
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T li e s t e m o f C
.
j
a P o ” `。 。 p a r t i e u l a r l y t h e t e n d e r p o r t i o n 15 m o r e s u s e e P t i v e
t h a n t h e i n f lo r e s e e n e e
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A b e t t e r s o l i d e x t e n s i o n e u l t u r e m id i
u m g e t t i n g h i g h o u t p u t o f s p o r e s o f t h e
s t r a i n 15 e o m P o s e d o f 5 0多 w h e a t b r a n a n d 2 0多 m i a z e f lo u r .
K e y w o r d s C “ ` c 封 t a j a P o n 犷e a ; C o l l e to t r ie 人“ 。 s P p .