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Pathogen identification of a new anthracnose of Camellia oleifera in China based on multiple-gene phylogeny

一种油茶新炭疽病原的多基因系统发育分析鉴定



全 文 :第 源员 卷摇 第 缘 期
圆园员源 年 员园 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 缘
韵糟贼援 摇 圆园员源

基金项目院 国家自然科学基金渊猿员员园园源苑怨冤
作者简介院 李河袁男袁员怨苑怨年生袁讲师袁研究方向为森林保护袁 耘鄄皂葬蚤造院 造蚤澡藻岳 糟泽怎枣贼援 藻凿怎援 糟灶
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 糟泽怎枣贼造蚤澡藻岳 员远猿援 糟燥皂曰 收稿日期院 圆园员源 原 园员 原 圆苑
一种油茶新炭疽病原的多基因系统发育分析鉴定
李摇 河员 摇 周国英员鄢摇 徐建平员 摇 朱丹雪圆
渊员援中南林业科技大学林学院袁 经济林培育与保护教育部重点实验室袁 长沙 源员园园园源曰
圆援中南林业科技大学生命科学与技术学院袁 长沙 源员园园园源冤
摘要院 为明确我国油茶炭疽病病原菌的种类袁对采集自我国 远 个省市油茶产区的炭疽病样本进行
病原菌分离袁通过形态学特征并结合多基因谱系分析方法构建系统发育树进行比较分析遥 结果表
明共分离到能引起油茶叶出现炭疽病症状的病原菌 圆猿 株遥 病原菌在 孕阅粤 培养基上 圆愿 益培养 苑 凿
后袁菌落圆形袁初期白色袁逐渐变为灰色袁最终为灰黑色曰分生孢子堆橘黄色袁分生孢子椭圆形尧单胞尧
无色袁大小为渊员远郾 愿 依 园郾 苑冤 滋皂 伊 渊缘郾 苑 依 园郾 源冤 滋皂曰菌丝附着孢椭圆形袁褐色袁边缘光滑尧完整袁大小为
渊怨郾 缘 依 员郾 缘冤 滋皂 伊 渊远郾 员 依 园郾 远冤 滋皂遥 多基因系统发育树显示袁这 圆猿 株病原菌与包括模式菌株 陨悦酝孕
员愿缘愿员 在内的所有果生刺盘孢菌 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬 菌株序列聚为一个进化枝袁置信度高达
员园园豫 遥 根据形态特征及多基因系统发育树袁鉴定这 圆猿 株病原菌为果生刺盘孢菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬袁为国
内油茶上果生刺盘孢菌的首次报道遥
关键词院 油茶曰 果生刺盘孢菌曰 炭疽病曰 病原菌曰 多基因系统发育
孕葬贼澡燥早藻灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 灶藻憎 葬灶贼澡则葬糟灶燥泽藻 燥枣 悦葬皂藻造造蚤葬 燥造藻蚤枣藻则葬
蚤灶 悦澡蚤灶葬 遭葬泽藻凿 燥灶 皂怎造贼蚤责造藻鄄早藻灶藻 责澡赠造燥早藻灶赠
蕴蚤 匀藻员 摇 在澡燥怎 郧怎燥赠蚤灶早员鄢摇 载怎 允蚤葬灶责蚤灶早员 摇 在澡怎 阅葬灶曾怎藻圆
渊员援 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 晕燥灶鄄憎燥燥凿 云燥则藻泽贼 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 葬灶凿 悦燥灶泽藻则增葬贼蚤燥灶袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶曰 悦燥造造藻早藻 燥枣
云燥则藻泽贼则赠袁 悦藻灶贼则葬造 杂燥怎贼澡 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡葬灶早泽澡葬 源员园园园源袁 匀怎灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁
悦澡蚤灶葬曰 圆援 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦藻灶贼则葬造 杂燥怎贼澡 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠 葬灶凿
栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡葬灶早泽澡葬 源员园园园源袁 匀怎灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 蚤凿藻灶贼蚤枣赠 贼澡藻 蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽 责葬贼澡燥早藻灶 贼燥 贼澡藻 泽责藻糟蚤藻泽 造藻增藻造袁 泽葬皂责造藻泽 燥枣 凿蚤泽藻葬泽藻凿
悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬 造藻葬增藻泽 憎蚤贼澡 贼澡藻 葬灶贼澡则葬糟灶燥泽藻 泽赠灶凿则燥皂藻 憎藻则藻 糟燥造造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 泽蚤曾 责则燥增蚤灶糟藻泽 蚤灶 悦澡蚤灶葬援
粤 贼燥贼葬造 燥枣 圆猿 蚤泽燥造葬贼藻泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿援 栽澡藻蚤则 糟燥造燥灶蚤藻泽 燥灶 孕阅粤 憎藻则藻 糟燥造燥则造藻泽泽 葬贼 枣蚤则泽贼袁 葬灶凿 贼澡藻灶 贼怎则灶藻凿 早则藻赠
葬灶凿 早则藻赠鄄遭造葬糟噪 泽藻增藻灶 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 蚤灶糟怎遭葬贼蚤燥灶 葬贼 圆愿 益 援 栽澡藻 糟燥灶蚤凿蚤葬造 泽责燥则藻 葬早早则藻早葬贼藻 葬责责藻葬则藻凿 燥则葬灶早藻 憎澡蚤造藻
蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造 糟燥灶蚤凿蚤怎皂 憎葬泽 燥遭造燥灶早袁 泽蚤灶早造藻鄄糟藻造造藻凿袁 葬灶凿 糟燥造燥则造藻泽泽袁 葬灶凿 渊员远郾 愿 依 园郾 苑冤 滋皂 伊 渊缘郾 苑 依 园郾 源冤 滋皂
蚤灶 泽蚤扎藻援 粤责责则藻泽泽燥则蚤葬 枣则燥皂 皂赠糟藻造蚤葬 憎藻则藻 藻造造蚤责泽藻袁 遭则燥憎灶袁 泽皂燥燥贼澡袁 葬灶凿 渊怨郾 缘 依 员郾 缘冤 滋皂 伊 渊远郾 员 依 园郾 远冤 滋皂
蚤灶 泽蚤扎藻援 酝怎造贼蚤责造藻鄄早藻灶藻 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽藻泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻泽藻 圆猿 蚤泽燥造葬贼藻泽 憎藻则藻 早则燥怎责藻凿 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻
糟造葬凿藻 葬泽 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬袁 憎蚤贼澡 葬 遭燥燥贼泽贼则葬责 泽怎责责燥则贼 燥枣 员园园豫 援 栽澡蚤泽 蚤泽 贼澡藻 枣蚤则泽贼 则藻责燥则贼 贼澡葬贼
悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬 蚤泽 贼澡藻 皂葬躁燥则 糟葬怎泽葬造 葬早藻灶贼 燥枣 悦援 燥造藻蚤枣藻则葬 葬灶贼澡则葬糟灶燥泽藻 蚤灶 悦澡蚤灶葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院 悦葬皂藻造造蚤葬 燥造藻蚤枣藻则葬曰 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬曰 葬灶贼澡则葬糟灶燥泽藻曰 责葬贼澡燥早藻灶曰 皂怎造贼蚤责造藻鄄早藻灶藻 责澡赠造燥早藻灶赠
摇 摇 炭疽菌属真菌是一类全球性分布的植物病原
菌袁其引起的炭疽病是世界范围内农业生产中发生
普遍且危害较重的植物病害袁对林木尧果树尧茶树尧花
卉尧谷类尧蔬菜尧药用植物以及作物等造成严重的经
济损失咱员 原 圆暂 遥 油茶 悦葬皂藻造造蚤葬 燥造藻蚤枣藻则葬 粤遭藻造援 是原产于
我国的食用木本油料树种袁其种子茶油中不饱和脂
肪酸含量高袁经常食用可降低血脂尧肝脂袁防止血栓
形成袁对预防冠心病和动脉粥样硬化均有良好的作
用咱猿暂 遥 目前袁国内学者认为油茶炭疽病是由盘长孢
状刺盘孢菌 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 早造燥藻燥泽责燥则蚤燥蚤凿藻泽 孕藻灶扎援 引起
的咱源 原 缘暂 袁除此之外袁尚未见其它报道遥
传统炭疽病原菌属 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 的分类鉴定
主要依据形态和培养特征袁但炭疽菌属种间形态较
为相近袁且随着寄主与病原菌之间相互协同进化袁形
态学上的分类标准更为模糊咱远暂 遥 另外袁炭疽菌种级
鉴定标准是以分生孢子和附着胞形态为主尧培养特
征和寄主范围为辅的综合特征来确定咱苑暂 袁但炭疽菌
中许多种的分生孢子尧附着胞较相似袁对于非专业分
类研究者较难进行鉴定遥 因此袁根据形态学特征来
进行炭疽菌种的鉴定与分类通常不适当遥 近年来袁
随着分子生物学技术的发展袁分子技术已成为许多
物种包括炭疽菌属真菌鉴定及系统进化研究的
工具咱愿 原 怨暂 遥
陨栽杂序列在炭疽菌属系统学中的运用袁为部分
物种的鉴定及系统进化分析提供了有力的工具遥 如
博宁刺盘孢菌 悦援 遭燥灶蚤灶藻灶泽藻基于形态特征袁最初被鉴
定为盘长孢状刺盘孢菌 悦援 早造燥藻燥泽责燥则蚤燥蚤凿藻泽袁随后利用
陨栽杂序列系统分析袁独立为新的分类单元咱员园暂 遥 但
陨栽杂有其局限性袁如对多数近缘种和集合种构建的
系统树在一些关键进化节点的支持率较低袁不能进
行识别咱员员暂 遥 粤增蚤泽藻 驭 宰燥造造藻灶遭藻则早咱员圆暂曾指出利用 陨栽杂
序列不能有效地用于种的识别袁可能会导致错误的
结论遥 此外袁在 郧藻灶月葬灶噪 所登录的序列中袁约有
愿远豫的炭疽菌属真菌的 陨栽杂序列被错误定义咱远暂 遥 因
此袁仅采用 陨栽杂序列鉴定炭疽属真菌不可靠袁而近几
年发展起来的多基因分析方法袁则大大提高了炭疽
菌属真菌的准确识别率咱员猿 原 员源暂 遥 本研究利用形态学
鉴定结合多基因谱系分析方法对我国油茶炭疽病病
原菌进行鉴定袁明确引起我国油茶炭疽病的病原种
类袁为该病害的防治提供理论依据遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试菌株及品种院于 圆园员猿 年在湖南尧江西尧湖
北尧重庆尧福建尧海南 远 个省市油茶主产区随机采集
油茶炭疽病病叶袁病原菌分离方法参考方中达咱员缘暂的
组织分离法袁从病健交界处组织进行分离袁于马铃薯
葡萄糖琼脂培养基 渊 责燥贼葬贼燥 凿藻曾贼则燥泽藻 葬早葬则 皂藻凿蚤怎皂袁
孕阅粤冤纯化培养后 源 益冰箱保存备用遥 采用国家审
定油茶品种湘林 圆员园 进行活体植株叶回接试验遥
试剂院阅晕粤快速提取试剂盒 云葬泽贼 阅晕粤 运蚤贼袁美国
酝孕月陨韵公司曰葡萄糖尧圆 伊 栽葬择 孕悦砸酝葬泽贼藻则 酝蚤曾袁天根
生化科技渊北京冤有限公司遥
仪器院晕蚤噪燥灶 愿园陨显微镜袁晕陨运韵晕 仪器渊上海冤有
限公司曰快速核酸提取仪袁美国 酝孕月陨韵 公司曰缘员源缘阅
离心机袁德国 耘责责藻灶凿燥枣枣 公司曰粤月陨 怨苑园园 孕悦砸 仪袁美
国应用生物系统公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 病原菌形态观察及回接试验
将保藏于 源 益冰箱中的菌种移植到直径 苑援 缘 糟皂
的 孕阅粤平板上活化后袁用打孔器在其菌落边缘切取
直径 缘 皂皂 的菌丝块袁转接到新的 孕阅粤 平板上袁于
圆愿 益尧黑暗条件下培养遥 每处理重复 猿 次遥 供试菌
株接种于 孕阅粤平板上培养 员园 凿后袁挑取培养物在显
微镜下观察分生孢子和附着孢的形态袁每个菌株测
量 缘园 个孢子袁计算分生孢子的平均大小遥
对油茶活体植株叶用 苑缘豫酒精表面消毒处理袁
细针蘸取浓度为 员缘 伊 员园 倍显微镜下每视野 猿园 耀 源园
个病原菌孢子悬浮液后刺扎油茶叶袁以无菌水处理
作对照渊悦运冤袁自然条件下观察病害发生发展情况袁
并对接种后发病叶进行病原菌再分离遥
员援 圆援 圆 病原菌多基因分子鉴定
病原菌 阅晕粤 的提取院参考夏花等咱员远暂的方法遥
基因选择及目的片段扩增与测序参照 宰藻蚤则 等咱员猿暂的
方法尧反应体系及条件遥 对所有分离筛选获得的病
原菌袁选择核糖体转录间隔区渊 蚤灶贼藻则灶葬造 贼则葬灶泽糟则蚤遭藻凿
泽责葬糟藻则泽袁 陨栽杂冤尧猿鄄磷酸甘油醛脱氢酶基因渊早造赠糟藻则葬造凿藻鄄
澡赠凿藻鄄猿鄄责澡燥泽责澡葬贼藻 凿藻澡赠凿则燥早藻灶葬泽藻袁 郧阅孕匀冤和钙调蛋白
基因渊糟葬造皂燥凿怎造蚤灶袁 悦粤蕴冤进行扩增与测序遥 陨栽杂 基因
的扩增引物为院云院缘忆鄄郧郧粤粤郧栽粤粤粤粤郧栽悦郧栽粤粤悦粤粤郧
郧鄄猿忆尧 砸院缘忆鄄栽悦悦栽悦悦郧悦栽栽粤栽栽郧粤栽粤栽郧悦鄄猿忆曰 悦粤蕴 基
因扩增引物为院云院缘忆鄄郧粤砸栽宰悦粤粤郧郧粤郧郧悦悦栽栽悦栽悦鄄
猿忆尧 砸院 缘忆鄄栽栽栽栽栽郧悦粤栽悦粤栽郧粤郧栽栽郧郧粤悦鄄猿忆曰 郧粤孕阅匀
基因扩增引物为院云院缘忆鄄郧悦悦郧栽悦粤粤悦郧粤悦悦悦悦栽栽悦粤栽
栽郧粤鄄猿忆尧 砸院缘忆鄄郧郧郧栽郧郧粤郧栽悦郧栽粤悦栽栽郧粤郧悦粤栽郧栽鄄猿忆遥
孕悦砸产物委托上海铂尚生物技术有限公司测序遥
病原菌多基因系统发育树构建院将测序获得的
每个病原菌菌株的 猿 个基因袁经过 悦造怎泽贼葬造 宰软件比
对且手工校正后袁按照 陨栽杂鄄悦粤蕴鄄郧粤孕阅匀 的顺序分别
首尾相连袁并下载 郧藻灶月葬灶噪 中同时含有 陨栽杂尧悦粤蕴 和
郧粤孕阅匀三个基因序列的炭疽属其它菌株及模式菌
株序列袁猿 个基因也按照 陨栽杂鄄悦粤蕴鄄郧粤孕阅匀 的顺序首
猿园远缘 期 李摇 河等院 一种油茶新炭疽病原的多基因系统发育分析鉴定
尾相连后进行同源性分析袁用软件 酝耘郧粤 源援 园 构建
所有病原菌株 猿 个组合基因序列的近邻归群
渊灶藻蚤早澡遭燥则鄄躁燥蚤灶蚤灶早袁 晕允冤系统发育树袁朱顶红炭疽菌
悦援 澡蚤责责藻葬泽贼则蚤作为外群遥
圆 结果与分析
圆援 员 病原菌的分离及回接试验
从湖南尧江西等我国 远 省市油茶产区分离尧纯化
获得形态特征疑似炭疽病病原菌 圆猿 株袁通过回接试
验袁苑 凿 后均能引起与原来病叶一致的病症院叶上病
斑常沿叶缘发生袁多呈半圆形袁黑褐色袁边缘紫红色袁
后期病斑中心灰白色袁内轮生小黑点渊图 员冤遥 对这
些病斑组织再次进行病原菌分离袁获得与原接种菌
株形态特征一致的菌落和分生孢子曰无菌水渊悦运冤处
理均未发现病斑袁也未分离到病原菌遥 由此确定袁这
圆猿 个菌株是引起油茶炭疽病的病原菌遥
图 员 油茶树叶片炭疽病病斑
云蚤早援 员 杂赠皂责贼燥皂泽 燥枣 悦葬皂藻造造蚤葬 燥造藻蚤枣藻则葬 造藻葬枣 葬灶贼澡则葬糟灶燥泽藻
摇 摇 葬院 自然发病症状曰 遭院 接种发病症状遥 葬院 晕葬贼怎则葬造造赠 蚤灶枣藻糟贼藻凿 泽葬皂责造藻曰 遭院 葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造造赠 蚤灶枣藻糟贼藻凿 泽葬皂责造藻泽援
圆援 圆 病原菌的菌落及形态特征
圆猿 株病原菌菌落浅灰色至深灰色袁圆形袁规则袁
边缘色稍浅袁气生菌丝体疏至茂密袁绒毛状袁培养皿
背面黑色素沉积袁呈现不均匀的灰白色至黑褐色遥
在 孕阅粤平板上袁圆园 凿后形成孢子堆袁浅黄色曰分生孢
子直尧无色尧光滑袁单胞袁圆柱形或长椭圆形袁两端钝
圆袁基部钝圆或稍尖袁渊员远郾 愿 依 园郾 苑冤 滋皂 伊 渊缘郾 苑 依
园郾 源冤 滋皂遥 菌丝附着孢椭圆形袁褐色袁边缘光滑尧规
则袁渊怨郾 缘 依 员郾 缘冤 滋皂 伊 渊远郾 员 依 园郾 远冤 滋皂渊图 圆冤遥
圆援 猿 病原菌多基因系统发育分析
对 圆猿 株病原菌 猿 个基因渊 陨栽杂尧悦粤蕴尧郧粤孕阅匀冤分
别测序袁每个基因序列提交 郧藻灶月葬灶噪 获得序列号
渊表 员冤遥 从 郧藻灶月葬灶噪下载的炭疽属其它种每个菌株
相应的 猿 个基因序列遥 系统发育树显示渊图 猿冤袁圆猿
株病原菌序列一致袁与所有果生刺盘孢菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬
聚为一个进化枝渊其中 陨悦酝孕 员愿缘愿员 为果生刺盘孢
菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬模式菌株冤袁并且支持率为 员园园豫 曰其
它分支中袁炭疽菌属同种菌株也都以非常高的支持率
图 圆 圆猿 株分离病原菌正反面菌落尧分生孢子及菌丝附着孢形态
云蚤早援 圆 酝燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 贼澡藻 糟燥造燥灶赠袁 糟燥灶蚤凿蚤葬 葬灶凿 皂赠糟藻造蚤葬造 葬责责则藻泽泽燥则蚤怎皂 燥枣 圆猿 蚤泽燥造葬贼藻泽
摇 摇 葬院菌落正面曰 遭院菌落背面曰 糟院孢子形态曰 凿院菌丝附着孢遥 葬院 悦燥造燥灶赠 燥灶 孕阅粤曰 遭院 则藻增藻则泽藻 燥枣 糟燥造燥灶赠曰 糟院 糟燥灶蚤凿蚤葬曰 凿院 皂赠糟藻造蚤葬造 葬责责则藻泽泽燥则蚤怎皂援
源园远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
表 员 圆猿 株分离病原菌株地理分布及其 猿 个基因的 郧藻灶月葬灶噪序列号
栽葬遭造藻 员 栽澡藻 蚤泽燥造葬贼藻泽 葬灶凿 郧藻灶月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶怎皂遭藻则泽 燥枣 早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽
样品采集地
杂蚤贼藻
样品数量
杂葬皂责造藻 泽蚤扎藻
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 灶燥援
郧藻灶月葬灶噪序列号 郧藻灶月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援
陨栽杂 悦粤蕴 郧粤孕阅匀
湖北随州
杂怎蚤扎澡燥怎袁 匀怎遭藻蚤
缘 匀月杂在员 运允员猿员远圆怨 运允员猿圆圆圆远 运允员猿员愿圆愿匀月杂在圆 运允员猿员远猿园 运允员猿圆圆圆苑 运允员猿员愿圆怨
匀月杂在猿 运允员猿员远猿员 运允员猿圆圆圆愿 运允员猿员愿猿园
匀月杂在缘 运允员猿员远猿猿 运允员猿圆圆猿园 运允员猿员愿猿圆
匀月杂在远 运允员猿员远猿源 运允员猿圆圆猿员 运允员猿员愿猿猿
重庆秀山
载蚤怎泽澡葬灶袁 悦澡燥灶早择蚤灶
猿 悦匝载杂员 运允员猿员远圆圆 运允员猿圆圆员怨 运允员猿员愿圆员悦匝载杂猿 运允员猿员远圆猿 运允员猿圆圆圆园 运允员猿员愿圆圆
悦匝载杂员愿 运允员猿员远圆愿 运允员猿圆圆圆缘 运允员猿员愿圆苑
福建龙岩
蕴燥灶早赠葬灶袁 云怎躁蚤葬灶
源 云允蕴再苑 运允员猿员远员源 运允员猿圆圆员员 运允员猿员愿员猿云允蕴再怨 运允员猿员远员远 运允员猿圆圆员猿 运允员猿员愿员缘
云允蕴再员园 运允员猿员远员苑 运允员猿圆圆员源 运允员猿员愿员远
云允蕴再圆园 运允员猿员远圆员 运允员猿圆圆员愿 运允员猿员愿圆园
江西长埠
悦澡葬灶早遭怎袁 允蚤葬灶早曾蚤
猿 允载悦月远 运允员猿员远苑远 运允员猿圆圆苑猿 运允员猿员愿苑缘允载悦月员远 运允员猿员远愿猿 运允员猿圆圆愿园 运允员猿员愿愿圆
允载悦月圆苑 运允员猿员远怨圆 运允员猿圆圆愿怨 运允员猿员愿怨员
湖南天际岭
栽蚤葬灶躁蚤造蚤灶早袁 匀怎灶葬灶
源 匀晕栽允蕴员 运允员猿员远怨远 运允员猿圆圆怨猿 运允员猿员愿怨缘匀晕栽允蕴圆 运允员猿员远怨苑 运允员猿圆圆怨源 运允员猿员愿怨远
匀晕栽允蕴怨 运允员猿员苑园圆 运允员猿圆圆怨怨 运允员猿员怨园员
匀晕栽允蕴员源 运允员猿员苑园源 运允员猿圆猿园员 运允员猿员怨园猿
海南五指山
宰怎扎澡蚤泽澡葬灶袁 匀葬蚤灶葬灶
源 匀晕宰在杂圆 运允员猿员远园远 运允员猿圆圆园猿 运允员猿员愿园缘匀晕宰在杂猿 运允员猿员远园苑 运允员猿圆圆园源 运允员猿员愿园远
匀晕宰在杂远 运允员猿员远园怨 运允员猿圆圆园远 运允员猿员愿园愿
匀晕宰在杂苑 运允员猿员远员园 运允员猿圆圆园苑 运允员猿员愿园怨
聚为一个进化枝遥 结合病原菌形态特征和多基因系
统发育树袁鉴定分离的 圆猿 株病原菌均为果生刺盘孢
菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬遥
猿 讨论
本研究于 圆园员猿 年从 远 个省市油茶发病叶上分
离到 圆猿 个菌落形态特征一致的菌株袁将分离菌株进
行室外活体接种均可使油茶叶发病袁回接病叶进行
再分离袁仍得到原分离菌袁经柯赫氏法则验证分离菌
即为该病害的致病病原菌遥 通过病原菌镜检和培养
形态观察尧多基因序列分析袁将这 圆猿 株致病病原菌
确定为果生刺盘孢菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬遥
目前报道引起油茶炭疽病的病原菌是盘长孢状
刺盘孢菌 悦援 早造燥藻燥泽责燥则蚤燥蚤凿藻泽咱源 原缘暂 遥 杨友联等咱员苑暂和 再葬灶早
等咱员愿暂对盘长孢状刺盘孢菌进行了描述院在 孕阅粤 平
板上袁菌落多样袁浅灰色至深灰色袁绒毛状袁边缘整
齐袁背面米汤色至深褐色曰分生孢子堆橘红色袁分生
孢子渊员圆 耀 圆苑郾 缘冤 滋皂 伊 渊源 耀 远郾 缘冤 滋皂袁圆柱状袁两端
钝圆袁光滑曰菌丝体附着孢棍棒状或椭圆状袁浅褐色袁
边缘完整袁偶有浅裂袁渊缘 耀 员愿郾 缘冤滋皂 伊 渊源郾 缘 耀 怨郾 缘冤滋皂遥
盘长孢状刺盘孢菌的这种形态特征与果生刺盘孢菌
菌株的形态特征非常相似院在 孕阅粤 平板上袁菌落浅
灰色袁至深灰色袁圆形袁规则袁边缘色稍浅袁背面浅褐
色至深褐色曰分生孢子堆橘黄色袁分生孢子直袁圆
柱状袁两端钝圆袁单胞袁光滑袁无色袁渊员员 耀 圆员冤 滋皂 伊
渊猿郾 缘 耀 远郾 缘冤 滋皂袁菌丝体附着孢棍棒状袁褐色袁边缘
完整袁渊远 耀 员猿郾 缘冤滋皂 伊 渊源郾 缘 耀 愿冤滋皂咱员源暂 遥 本研究中
的 圆猿 株油茶炭疽病原菌形态特征与这 圆 种病原菌
都非常相似袁因此仅仅依靠形态特征很难鉴定这 圆猿
株病原菌遥 随着多基因分析方法的引入袁提高了
炭疽菌属真菌的准确识别率遥 悦则燥怎糟澡 等咱员怨暂 运用
陨栽杂尧粤责灶圆尧酝葬贼员 辕 粤责灶员 和 杂燥凿圆 基因进行联合分析袁
对形态上极难区分识别的集合种禾谷炭疽菌
悦援 早则葬皂蚤灶糟燥造葬区分开来袁并引入了 远 个新种曰阅葬皂皂
等咱圆园暂运用 陨栽杂尧粤悦栽尧栽哉月圆尧悦匀杂鄄员尧匀陨杂猿 和 郧孕阅匀 基
因进行联合分析袁将形态上极难区分的草本植物上
分离的炭疽菌属真菌区别开来袁引入了 源 个新种遥
本研究中袁多基因 晕允系统发育树显示袁这 圆猿 株病原
菌与包括模式菌株 陨悦酝孕 员愿缘愿员 在内的所有果生刺
盘孢菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬菌株序列聚为一个进化枝袁系统
缘园远缘 期 李摇 河等院 一种油茶新炭疽病原的多基因系统发育分析鉴定
图 猿 基于 陨栽杂尧悦粤蕴尧郧粤孕阅匀三基因合并序列用 晕允法构建的炭疽病病原菌属系统发育树
云蚤早援 猿 栽澡藻 晕允 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 泽责责援 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻蚤则 陨栽杂袁 悦粤蕴袁 郧粤孕阅匀 泽藻择怎藻灶糟藻泽
远园远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
进化分析显示置信度高达 员园园豫 曰其它分支中袁同种
菌株间也以非常高的支持率聚在一起遥 根据 陨栽杂尧
悦粤蕴和 郧粤孕阅匀三个基因系统发育树袁再次确定这 圆猿
株病原菌为果生刺盘孢菌 悦援 枣则怎糟贼蚤糟燥造葬遥
本研究中的 圆猿 株果生刺盘孢菌是从我国 远 个
不同省市油茶树上分离尧纯化获得的遥 根据 宰藻蚤则
等咱员猿暂的报道袁该菌最早是在泰国的咖啡属 悦燥枣枣藻葬 植
物上发现的袁随后在日本的沙梨 孕赠则怎泽 责赠则蚤枣燥造蚤葬尧以色
列的补血草 蕴蚤皂燥灶蚤怎皂 泽蚤灶藻灶泽藻尧美国的葡萄 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣鄄
藻则葬和草莓 云则葬早葬则蚤葬 葬灶葬灶葬泽泽葬 以及德国的榕属 云蚤糟怎泽
植物上相继发现遥 国内刘威等咱圆员暂研究发现果生刺
盘孢菌能侵染茶树遥 本试验首次发现果生刺盘孢菌
能侵染我国重要的木本油料树种要油茶遥 圆猿 株果
生刺盘孢菌的寄主来源于湖南尧江西尧湖北尧重庆尧福
建尧海南 远 个省市袁表明该病原菌分布广泛袁在我国
主要油茶产区均有分布袁说明其对环境变化的潜在
适应能力强袁容易扩展分布范围袁亦说明我国油茶炭
疽病发生面积广和危害程度重遥 在 晕允 系统发育树
中袁圆猿 株菌株未按地理来源聚为一个进化枝袁这也
表明果生刺盘孢菌的地理特异性不明显遥 目前袁对
果生刺盘孢菌的研究仅限于种名的确定袁而其生物
学尧生态学尧流行病学尧种群遗传结构和有效的防治
措施未见报道袁应该进一步对该菌进行深入研究袁这
对控制该病原菌引起的油茶炭疽病具有重要意义遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 邓维萍袁 杨敏袁 杜飞袁 等援 云南葡萄产区葡萄炭疽病病原鉴
定及致病力分析援 植物保护学报袁 圆园员猿袁 源园渊员冤院 远员 原 远苑
咱圆暂 楼兵干袁 陈吴健袁 林钗袁 等援 一种新大豆豆荚炭疽病症状类
型及其病原鉴定援 植物保护学报袁 圆园园怨袁 猿远渊猿冤院 圆圆怨 原 圆猿猿
咱猿暂 徐学兵援 茶油研究进展述评援 中国油脂袁 员怨怨缘袁 圆园 渊缘冤院
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咱源暂 袁嗣令袁 邵力平袁 李传道援 中国乔尧灌木病害援 北京院 科学
出版社袁 员怨怨苑院 源圆
咱缘暂 杨光道袁 束庆龙袁 段琳袁 等援 主要油茶品种对炭疽病的抗性
研究援 安徽农业大学学报袁 圆园园源袁 猿员渊源冤院 源愿园 原 源愿猿
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咱愿暂 曾大兴援 炭疽菌属几个重要种的分子系统学研究援 植物病
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咱员缘暂 方中达援 植病研究法渊第 猿 版冤援 北京院 中国农业出版
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咱员远暂 夏花袁 朱宏建袁 周倩袁 等援 湖南芷江辣椒上一种新炭疽病
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咱员苑暂 杨友联袁刘永翔袁刘作易援 炭疽菌属真菌分类学研究进展援
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苑园远缘 期 李摇 河等院 一种油茶新炭疽病原的多基因系统发育分析鉴定