全 文 ：IS-RP-HPLC法快速测定杉科植物中有机酸含量
周光明＊1　高智席 1　黄　成 1　李昌晓 2　王　莉 1
1(西南师范大学化学化工学院 , 重庆 400715)　　2(西南师范大学生命科学学院 , 重庆 400715)
　 2005-04-25收稿;2005-06-21接受
本文系重庆市自然科学基金资助项目(No.CSTE-2004BB7087)
1　引　　言
传统化学法测定有机酸易受干扰 ,误差大 , 且每次只能测一种有机酸;薄层色谱法定量精度差;气相色谱法往往需要
衍生步骤 , 繁琐且影响分析结果;高效液相色谱测定方法简便 , 已被广泛用于各种食品和天然物中有机酸的测定。目前
杉科植物中有机酸的定性和定量分析未见报道。草酸 、酒石酸 、L-苹果酸 、莽草酸是池杉 、落羽杉(杉科植物)的代谢中间
物。本实验采用离子抑制反相高效液相色谱(IS-RP-HPLC)方法快速测定了池杉 、落羽杉中有机酸。该法所用试剂简单
易得 、操作简便迅速 、分离不需梯度洗脱 ,准确度和精密度均较理想 , 方法的线性范围宽 、重现性好 ,为杉科植物的进一步
开发提供可靠依据。
2　实验部分
2.1　仪器及试剂　Agilent1100型高效液相色谱仪;DAD检测器;KQ-50超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);
TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂);HypersilODS2 5μm(4.6 mm×150 mm)色谱柱(大连依利特分析仪器有
限公司);微孔过滤装置。草酸和酒石酸(美国 Sigma公司);莽草酸(深圳市吉德威尔国际有限公司)和 L-苹果酸(上海
化学试剂研究所)均为分析纯;池杉 、落羽杉根系样品(重庆某绿林花木园艺场提供);HClO4 70.0% ～ 72.0%(成都化学
试剂厂);二次蒸馏水。
2.2　色谱条件　色谱柱:HypersilODS2 5 mm(4.6mm×150mm);流动相:HClO4 pH=2.5溶液 ,使用前经 0.45 μm滤
膜减压过滤;流速:0.8 mL/min;检测波长:214 nm, 带宽 4 nm;参比波长:300 nm, 带宽 80 nm;柱温:30℃;进样量:
20 mL。标准品和样品溶液用前均经 0.45μm滤膜过滤。
3　结果与讨论
3.1　抑制剂和流动相的选择　分别考察了以磷酸盐 、醋酸盐缓冲溶液和高氯酸溶液等作流动相的分离情况 , 发现
HClO4(pH=2.5)溶液作流动相灵敏度 、峰形和分离度 、保留时间最佳。实验表明 , 以高氯酸为抑制剂 , 以 HClO4(pH=
2.5)水溶液作流动相 ,草酸 、酒石酸 、L-苹果酸和莽草酸获得较好的分离。
3.2　流速的影响　经优化本实验选择流速为 0.8mL/min。
3.3　工作曲线及检出限　本法测定草酸 、酒石酸 、L-苹果酸和莽草酸的线性范围分别为 4.4×10-5 ～ 3.5×10-2 、8.6 ×
10-4 ～ 2.6×10-2 、1.0×10-4 ～ 3.0和 1.3×10-5 ～ 0.27 g/L;线性回归方程分别为 y=2.177x+7.7874、y=0.2656x-
1.0911、y=1.7973x+0.4786和 y=2.816x+1.1532;相关系数分别为 r=0.9954、r=0.9991、r=0.9999和 r=0.9998,方
法检出限分别为 4.6×10-7、 3.5×10-5 、2.4×10 -6和 1.2×10 -7 g/L(S/N=3)。
3.4　精密度和回收率　以池杉为样品 ,在所选色谱条件下作 HPLC分析。重复操作 6次(n=6), 草酸 、酒石酸 、L-苹果
酸和莽草酸测定的相对标准偏差(RSD, %)分别为 2.3、1.5、2.1和 1.3。在池杉中定量加入标准有机酸溶液 ,测定回收
率。重复测定 5次 , 其平均回收率(%)分别为草酸 101.2、酒石酸 98.5、L-苹果酸 97.7和莽草酸 102.6。回收率测定的
RSD(%)分别为 1.37、0.95、1.20和 2.56。
3.5　样品分析　取池杉 、落羽杉根系样品 0.1160 g,粉碎 ,过 0.45 mm筛 , 加入 25.00 mL二次蒸馏水 , 称重 ,超声提取
30 min, 取 5.00mL上清液 , 以 0.45μm微孔滤膜滤过 , 滤液作为样品试液。草酸 、酒石酸 、L-苹果酸和莽草酸在池杉主
根中含量(%)分别为 1.67、0.79、0.85和 2.74, 相对标准偏差(%)分别为 1.22、1.35、2.61、 3.12;侧根中含量(%)分别
为 2.94、1.13、1.05和 3.76;相对标准偏差(%)分别为 2.38、 2.11、2.67、 3.54。草酸 、酒石酸 、L-苹果酸和莽草酸在落羽
杉主根中含量(%)分别为 1.76、0.96、0.87和 1.38;相对标准偏差(%)分别为 1.69、1.45、 1.97、3.34;侧根中含量(%)
分别为 2.01、1.40、1.50和 3.19;相对标准偏差(%)分别为 2.53、 2.46、1.87、2.96。实验结果表明;池杉 、落羽杉的根系
中侧根比主根的有机酸的含量高 ,而根中草酸和莽草酸比酒石酸和 L-苹果酸高。
第 34卷
2006年 1月　　　　　 　　　　　　　
分析化学 (FENXIHUAXUE)　来稿摘登
ChineseJournalofAnalyticalChemistry 　　　　　　　　 　　　　
第 1期
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