全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2009, 21:737-739, 775
文章编号:1001-6880(2009)05-0737-04
　
　
　收稿日期:2008-04-22　　　接受日期:2008-07-29
　基金项目:河北省归国留学人员科技活动项目;河北省自然科学
基金项目
＊通讯作者 Tel:86-311-86265634;E-mail:shiqingwen@hebmu.edu.cn
日本榧树果实的化学成分研究
曹聪梅 1 ,董　玫 2 ,王　伟 1 ,杨　雁 1 ,吴　明 1 ,顾玉诚 1, 3 ,史清文 1＊
1河北医科大学药学院天然药物化学教研室 ,石家庄 050017;
2河北医科大学基础医学院 , 石家庄 050017;3先正达集团 Jealott sHil研究中心 , 英国 RG42 6E
摘　要:本文研究了日本榧树果实的化学成分。原植物用甲醇提取后经硅胶柱色谱 、制备薄层色谱和制备
HPLC色谱进行分离纯化 , 从日本榧树果实中分离得到了 4个化合物 , 用质谱 、红外 、紫外 、核磁等波谱方法鉴定
为 18-羟基弥罗松酚(1)、kayadiol(2)、花柏酚(3)和落叶松脂素(4), 化合物 1、3、4为首次从该植物果实中分离
得到。用 MTT法检测了化合物 1 ～ 3的细胞毒性 , 在浓度 100 μmol/L时 RSa细胞生存率分别为 100.00%、
26.30%和 59.74%。
关键词:日本榧树;紫杉科;半日花烷;松香烷;木脂素;果实;细胞毒性
中图分类号:Q946.91;R284.1 文献标识码:A
ChemicalConstitutesintheFruitofTorreyanucifera
CAOCong-mei1 , DONGMei2 , WANGWei1 , YANGYan1 , WUMing1 , GUYu-cheng1, 3 , SHIQing-wen1＊
1DepartmentofMedicinalNaturalProductChemistry, SchoolofPharmaceuticalSciences, HebeiMedicalUniversity,
Shijiazhuang050017 , China;2ColegeofBasicMedicalSciences, HebeiMedicalUniversity, Shijiazhuang050017 , China;
3Jealot sHilInternationalResearchCentre, Syngenta, Berkshire, RG42 6EY, UK
Abstract:ThechemicalconstituentsofTorreyanuciferafruitwerestudied.Theconstituentswereextractedwithmethanol
andisolatedbycolumnchromatographyonsilicagel, andfurtherpurifiedbypreparativeTLCandHPLC.Thecompounds
isolatedwereidentifiedas18-hydroxyferuginol(8, 11, 13-abietatriene-12, 18-diol, 1), kayadiol(8(17), 13-labdiene-
15, 18-diol, 2), hinokiol(8, 11, 13-abietatriene-3, 12-diol, 3)andpinoresinol(4)onthebasisofspectraldata.Com-
pounds1, 3and4 wereisolatedfromthefruitsofTorreyanuciferaforthefirsttime.MTTmethodwasusedtoevaluatethe
cytotoxicitiesofthethreediterpenoids(1-3).ThesurvivalrateoftheRSatumorcelsinthepresenceofcompounds1-3
ataconcentrationof100μmol/Lwere100.00%, 26.30% and59.74%, respectively.
Keywords:Torreyanucifera;Taxaceae;labdane;abietane;lignan;fruit;cytotoxicity
　　日本榧树是日本 、朝鲜和中国特有的一种红豆
杉科植物 ,其种子有很强的杀虫活性 ,在我国和朝鲜
用于治疗绦虫感染 ,在日本民间用作流产药 。关于
日本榧树的化学成分研究主要集中在它的叶子和心
材上。倍半萜 、二萜 、木脂素和黄酮被认为是其中的
活性成分[ 1-8] 。我们对日本榧树的果实进行了化学
成分研究 ,以对比果实与其它部位的化学成分异同 。
从日本榧树果实中分离得到了四个化合物 ,包括一
个半日花烷型二萜 ,两个为松香烷二萜和一个双环
氧型木脂素 ,并通过 MTT法对三个二萜的细胞毒性
进行了检测 。本文报道了这四个化合物结构鉴定及
三个二萜的细胞毒性检测结果 。其中化合物 1、3、4
为首次从该植物中分离得到 。
1　仪器和试药
　　MRK显微熔点测定仪 ,未校正;VarianUnity
Inova核磁共振仪(CDCl3或 CD3OD, TMS为内标);
VacuumGeneratorsZAB-HS;分析型高效液相 Waters
Aliance2695-2996,分析型液相 Whatmanpartisil10
ODS-2色谱柱(4.6 ×250 mm);制备型高效液相
WatersDeltaPrep3000-UV2487,制备色谱 ODS-2柱
MAG-20(9.4 ×250mm);HPLC所用色谱系统为乙
腈-水线性梯度洗脱 , 乙腈 50 min内从 25%到
100%,洗脱剂流速 3 mL/min;薄层色谱硅胶 GF254、
柱色谱硅胶(300 ～ 400目)均为青岛海洋化工厂产
品;无水硫酸钠为干燥剂;乙腈为色谱纯试剂 ,其余
DOI :10.16333/j.1001-6880.2009.05.020
均为分析纯 。薄层色谱显色剂为 10%硫酸乙醇液 ,
浸渍后加热显色 。
日本榧树果实于 1998年 10月采于日本宫城县
仙台市西部青叶山 ,由日本富山县立大学的折谷隆
志教授鉴定为日本榧树果实 ,标本保存在日本东北
大学农学部应用生物化学科生物有机化学研究室。
细胞毒性测试所用 RSa肿瘤细胞由日本千叶
大学医学部的铃木信夫教授实验室提供。
2　提取与分离
自然干燥的日本榧树果实 1.3 kg适当粉碎后
用 10 L甲醇室温冷浸 ,浸液减压浓缩后所得浸膏悬
浮在 1 L饱和盐水中 ,用 3 L正己烷脱脂三次 。脱
脂后用水饱和的二氯甲烷萃取再经无水硫酸钠脱
水 ,回收溶剂得到 43.15 g浅黄色半透明膏状物 。
日本榧树果实提取物二氯甲烷部位 31.15 g经
硅胶柱色谱石油醚-乙酸乙酯(10∶7 ～ 10∶2)梯度洗
脱得到组分 Fr1-Fr40。薄层色谱检识后相近组分合
并 。Fr15经 RP-HPLC分离得到 1(tR=29.69min);
Fr29经高效液相色谱进一步纯化得到 2(tR=33.75
min);Fr37-Fr40经制备薄层色谱和制备液相色谱分
离得到 3(tR=31.43min)和 4(tR=25.46min)。
3　结构鉴定
　　18-羟基弥罗松酚(1)　白色针晶(石油醚-乙酸
乙酯母液),白色片晶(丙酮)。 mp.183.5 ～ 184 ℃;
[ α] 22D +70.9°(c0.10, CHCl3);UVλmaxnm:282.3;
IRυKBrmax cm-1:3470, 3250, 1620, 1510, 1420, 1240,
1170, 1050, 990;HREI-MSm/z:302.2239[ M] +(计
算值 302.2246)。1HNMR(CDCl3 , 600 MHz)δ:1.43
(1H, m, H-1a), 2.18(1H, dt, J=12.6, 3.8 HzH-
1b), 1.68(2H, m, H-2), 1.43(2H, m, H-3), 1.62
(1H, dd, J=12.2, 2.2Hz, H-5), 1.63(2H, m, H-6),
2.84(2H, m, H-7), 6.64(1H, s, H-11), 6.83(1H, s,
H-14), 3.11(1H, sep, J=6.9 Hz, H-15), 1.23(3 H,
d, J=6.9 Hz, H-16), 1.23(3 H, d, J=6.9 Hz, H-
17), 3.48(1H, d, J=11.0 Hz, H-18a), 3.22(1H, d,
J=11.0 Hz, H-18b), 0.88(3H, s, Me-19), 1.22
(3H, s, Me-20), 4.55(1H, br.s, OH-12);13 CNMR
(CDCl3 , 150 MHz)δ:38.4(C-1), 18.6(C-2), 35.0
(C-3), 37.3(C-4), 43.8(C-5), 18.9(C-6), 29.4(C-
7), 126.6(C-8), 148.3(C-9), 37.8(C-10), 110.9
(C-11), 150.6(C-12), 131.5(C-13), 127.1(C-14),
26.8(C-15), 22.5(C-16), 22.7(C-17), 72.2(C-
18), 17.4(C-19), 25.2(C-20)。根据 1H-1HCOSY
及 18-oxoferuginol的波谱数据 [ 2] ,鉴定化合物 1是
18-羟基弥罗松酚。
Kayadiol(2)　白色簇晶(二氯甲烷),白色方晶
(丙酮)。mp.115.5 ～ 116.5 ℃;[ α] 22D +45.9°(c=
0.23, CHCl3 );IRυKBrmax cm-1:70, 3330, 1660, 1640,
1440, 1380, 1040, 1000, , 890。1HNMR(CDCl3 , 600
MHz)δ:1.77(1H, m, H-1a), 1.02(1H, dt, J=4.1,
12.6 Hz, H-1b), 1.63(2H, m, H-2), 1.43(1H, m, H-
5), 1.34(1H, m, H-6a), 1.63(1H, m, H-6b), 2.39
(1H, m, H-7a), 2.01(1H, m, H-7b), 1.63(1H, m, H-
9), 1.63(1H, m, H-11a), 1.45(1H, m, H-11b), 2.16
(1H, d, J=12.6 Hz, H-12a), 1.82(1H, td, J=4.9,
12.7 Hz, H-12b), 5.39(1H, t, J=6.9 Hz, H-14),
4.15(2H, d, J=6.6 Hz, H-15), 1.68(3H, s, Me-
16), 4.84(1H, s, H-17a), 4.53(1H, s, H-17b), 3.42
(1H, d, J=10.8 Hz, H-18a), 3.12(1H, d, J=10.8
Hz, H-18b), 0.75(3H, s, Me-19), 0.72(3H, s, Me-
20);13CNMR(CDCl3 , 150MHz)δ:38.3(C-1), 18.6
(C-2), 35.3(C-3), 37.9(C-4), 48.5(C-5), 21.7
(C-6), 24.1(C-7), 148.4(C-8), 56.2(C-9), 39.4
(C-10), 38.0(C-11), 38.5(C-12), 140.5(C-13),
123.1(C-14), 59.3(C-15), 16.2(C-16), 106.4(C-
17), 72.0(C-18), 17.5(C-19), 14.8(C-20)。化合
物 2的波谱数据与文献 [ 4]报道的 8(17), 13-lab-
diene-15, 18-diol即 kayadiol的波谱数据基本一致 。
花柏酚(3)　无色粒晶(二氯甲烷)。mp.221.5
～ 222.0 ℃;[ α] 22D +64.9°(c0.25, CHCl3);UVλmax
nm:283.5;FAB-MSm/z:07 [ M+H] +;1H NMR
(CD3OD, 500 MHz)δ:1.46(1H, td, J=13.2, 3.9
Hz, H-1a), 2.24(1H, dt, J=13.2, 3.4 Hz, H-1b),
1.24(1H, dd, J=12.2, 1.5 Hz, H-2a), 1.86(1H, m,
H-2b), 3.23(1H, dd, J=11.7, 4.4 Hz, H-3), 1.81
(1H, d, J=3.4 Hz, H-5), 1.76(2H, m, H-6), 2.70
(1H, m, H-7a), 2.82(1H, dd, J=10.3, 5.9 Hz, H-
7b), 6.61(1H, s, H-11), 6.74(1H, s, H-14), 3.16
(1H, sep, J=6.8 Hz, H-15), 1.67(3 H, d, J=6.8
Hz, H-16), 1.15(3 H, d, J=6.8 Hz, H-17), 1.18
(3H, s, Me-18), 1.05(3H, s, Me-19), 0.87(3H, s,
Me-20), 4.88(1H, br.s, OH-12);13CNMR(CD3OD,
125 MHz)δ:38.5(C-1), 28.8(C-2), 79.6(C-3),
40.1(C-4), 51.7 (C-5), 20.4(C-6), 31.3(C-7),
738 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.21
126.7(C-8), 148.6(C-9), 38.5(C-10), 111.7(C-
11), 153.4(C-12), 133.5(C-13), 127.2(C-14),
27.7(C-15), 23.2(C-16), 23.2(C-17), 25.4(C-
18), 16.2(C-19), 28.8(C-20)。化合物 3的波谱数
据与文献 [ 11] 报道的 8, 11, 13-abietatriene-3, 12-diol
即花柏酚的波谱数据基本一致 。
落叶松脂素(4)　1HNMR(CDCl3 , 500 MHz)δ:
6.89(1H, d, J=1.9 Hz, H-2), 6.88(1H, d, J=8.1
Hz, H-5), 6.81(1H, dd, J=8.1, 1.9 Hz, H-6), 3.90
(3H, s, OMe-3), 5.58(1H, s, OH-4), 4.73(1H,
br.d, J=4.3 Hz, H-7), 3.09(1H, m, H-8), 4.24
(1H, br.dd, J=9.2, 6.9 Hz, H-9a), 3.87 (1H,
br.dd, J=9.2, 3.8 Hz, H-9b);13CNMR(CDCl3 , 125
MHz)δ:132.7(C-1), 108.4(C-2), 146.5(C-3),
145.5(C-4), 114.0(C-5), 118.7(C-6), 85.7(C-7),
54.0(C-8), 71.5(C-9), 55.8(OCH3)。化合物 4的
波谱数据与文献[ 14, 15] 报道的落叶松脂素的波谱数
据基本一致 。
本实验从日本榧树果实中分得的四个化合物
中 ,化合物 2从叶中分离得到过 ,化合物 1、3、4均为
首次从该植物中分离得到。日本榧树中所含有的主
要成分松香烷二萜 ,虽然有报道从红豆杉属植物中
分离出了这类成分[ 16-18] ,但到目前为止 ,我们尚未
从日本榧树中分离得到紫杉烷类二萜化合物 。仅从
次生代谢产物这一角度来看 ,日本榧树和紫杉属植
物的之间分类学联系尚不明确。
4　体外活性测试
用 MTT法检测了化合物 1 ～ 3的体外抑瘤活
性 ,所用细胞株为 RSa肿瘤细胞株。被试样品采用
体外培养法 ,分别检测了 0.1、1、10和 100 μmol/L
四个浓度 。其中 ,前三个浓度中 ,除化合物 2的 10
μmol/L组外 ,各被试样品组与空白对照组相比没有
显著差异。各被试样品的 100 μmol/L组对 RSa细
胞生存率分别为 100.00%、 26.30%和 59.74%,化
合物 2的 100μmol/L组与空白对照组相比具有显
著性差异 。
对 RSa肿瘤细胞株的抑瘤率实验结果表明化
合物 1和 3没有活性 ,化合物 2有中等活性。具体
试验结果见表 1。
表 1　经化合物 1 ～ 3处理后 Rsa细胞的存活率
Table1　Survival(%)rateofRSaceltreatedwithcompounds1-3 for24h
化合物
Compound
剂量 Dose(μmol/L)
0.1 1 10 100
x±s P x±s P x±s P x±s P
1 100.00±55.57 0.46 100.00±45.84 0.57 100.00±0.68 0.10 100.00±4.3 0.22
2 86.45±0.68 0.02 100.00±23.86 0.91 100.00±13.38 0.89 26.30±5.89 0.04
3 100.00±2.27 0.10 100.00±15.59 0.38 100.00±9.30 0.22 59.74±12.36 0.17
　　致谢:本研究得到了河北省归国留学人员科技
活动项目以及河北省卫生厅 ,河北省自然基金和英
国先正达集团的资助 。日本东北大学农学部名誉教
授折谷隆之先生提取粗提物 ,日本东北大学山田女
士协助测定 1HNMR和 13CNMR谱 ,日本千叶大学
铃木信夫教授提供筛选细胞和相应的实验设施 。
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739Vol.21 　　　　　　曹聪梅等:日本榧树果实的化学成分研究 　
CD86等共刺激分子。本研究通过采用倒置显微镜
及透射电镜以及流式细胞技术 ,可初步判断本实验
所得细胞为小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞 ,细
胞表面表达 DCs特异性标志 CD11c可达 70%以上 ,
能够满足后续的实验要求。本研究所采用方法简
单 ,实验可靠 ,能够稳定获得树突状细胞 ,可以用于
植物化学物活性筛选 。
在本实验中 ,我们观察了青钱柳多糖对树突状
细胞功能表型的影响 ,包括 CD11c和 MHCII研究结
果提示 ,与对照组相比 ,青钱柳多糖组 DCs其 CD80
和 MHCI类分子的表达水平升高。 MHCII类分子
主要参与识别 、提呈外源性抗原 , CD80是参与抗原
提呈 ,激活 T细胞的重要协同刺激分子。 CD80和
MHCI类分子表达水平升高更利于 DCs呈递外源
性抗原以及激活 T细胞 ,使机体更好的发挥免疫监
视和免疫应答能力。因此可初步判断青钱柳多糖可
能通过上调树突状细胞表面 MHCI类分子的表达 ,
从而调节机体的免疫应答 。
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