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HPLC法测定不同采收期鸢尾科3种植物中有效活性成分含量



全 文 :39
第 1 4卷 第 1 1 期
2012 年 11 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 14 No. 11
Nov .,2012
鸢尾科植物为单子叶植物,约60属、800种,分布
于热带和温带地区,但主产地为东非和热带美洲,中
国连引入栽培的有9属、50余种,其中射干属和鸢尾
属为中国国产属,全国皆产,主产地为西北部和北部。
鸢尾科植物的药用部位为根茎,本实验为合理开发利
用鸢尾科药用植物,确定其质量的优劣和最佳采收
期,我们采用HPLC法测定了不同月份采收的射干、
德国鸢尾、日本鸢尾中射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、
野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、白射干素的含量。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
1100液相色谱仪(美国Agilent),超声波提取
器,25μL微量进样器,万分之一天平。
射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次
野鸢尾黄素、白射干素对照品;乙腈、磷酸为色谱
纯;其余试剂为分析纯。
射干1、射干2、德国鸢尾、日本鸢尾根茎均采自
沈阳市皇姑区川江教师新村,于2011年8月和2011
年9月各采摘1次,自然干燥,备用。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件
采 用kromasil C18色 谱 柱(200mm×4.6mm,
5 μm);柱温30℃;流动相为乙腈(A)和0.1%磷
酸溶液(B)两相梯度洗脱,0~25min、15%~28% A ;
25~35min、28%~35%A ;35~50min、35%~50%。 流 速
1.0mL/min,检测波长265 nm,进样量10μL。
1.2.2 对照品溶液的配制
精密称取适量对照品,置同一10mL 量瓶中,加
甲醇定容。
1.2.3 供试品溶液的配制
分别取0.2g样品粉末,精密称定,置50mL锥形
瓶中,精密加入25mL 70% 乙醇,超声提取30min,放
冷,摇匀,用0.22μm 微孔滤膜过滤,取续滤液作为
供试品溶液。
1.2.4 线性关系
分别精密吸取混合对照品溶液2、4、6、8、10μL
HPLC法测定不同采收期鸢尾科3种植物中有效活性成分含量
赵玥,李国信
(辽宁省中医药研究院,辽宁 沈阳 110034)
摘 要:目的:对不同采收期鸢尾科射干属和鸢尾属植物射干、日本鸢尾、德国鸢尾的有效活性成分进行比较
分析,以确定最佳的采收期。方法:采用HPLC法对8月、9月采集的射干、日本鸢尾、德国鸢尾中射干苷、野鸢尾苷、
鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、白射干素进行测定。结果:9月采集的射干和德国鸢尾中射干苷、野鸢尾苷、
野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素含量高于8月采集的样本。日本鸢尾中有效成分含量没有明显差异。结论:鸢尾科植物
射干、德国鸢尾的最佳采收时间为9月。
关键词:射干;德国鸢尾;日本鸢尾;HPLC;含量测定
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1673-842X (2012) 11- 0039- 03
收稿日期:2012-05-29
基金项目:科技部重大专项“十一五”重大新药创新项目(2009ZX09103-330)
作者简介:赵玥(1984-),女,辽宁沈阳人,实习研究员,硕士,研究方向:中药分析。
通讯作者:李国信(1963-),男,辽宁沈阳人,教授,博士,研究方向:临床药理研究。
Determination of Effective Active Ingredients of Three Plants in
Iridaceae Plants at Different Havest Periods by HPLC
ZHAO Yue,LI Guo-xin
(Liaoning Academy of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034,Liaoning,China)
Abstract:Objective :The article carried on analysis and comparison for active ingredients of
Belamcanda chinensis(Linn.)Redoute,Iris germanica,Iris japonica Thunb in different havest periods to
ascertain the best havest time. Method:Content determinations for Tectoridin,Irisflorentin,Iridin,Irigenin,
Tectorigenin and Dichotomintin of Belamcanda chinensis(Linn.)Redoute,Iris germanica,Iris japonica
Thunb which collected in August and September were made by HPLC. Result :Tectoridin,Irisflorentin,
Iridin,Irigenin,Tectorigenin and Dichotomintin of Belamcanda chinensis(Linn.)Redoute,Iris germanica,
Iris japonica Thunb collected in September were more higher than those collected in August.The active
ingredients in Iris japonica Thunb had no significant differences. Conclusion:The best havest time of
Belamcanda chinensis(Linn.)Redoute and Iris germanica is September.
Key words:Belamcanda chinensis(Linn.) Redoute;Iris germanica ;Iris japonica Thunb;HPLC;
content determination
DOI:10.13194/j.jlunivtcm.2012.11.41.zhaoy.001
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 4 卷
溶液,注入液相色谱器仪中,测定色谱峰面积,以进
样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线,
经线性回归,回归方程如表1。
表1 线性关系
样品 标准曲线 R
射干苷 y=1399.2x+127.3 0.9954
野鸢尾苷 y=2714.5x+18.10 0.9999
鸢尾黄素 y=5452x-34 0.9994
野鸢尾苷元 y=4262.9x-140.2 0.9995
次野鸢尾黄素 y=5710.1x-35.2 0.9995
白射干素 y=2450.9x-8.5 0.9994
1.2.5 稳定性试验
精密吸取供试液,分别在0、2、4、6、8、10h进
样,按峰面积计算,结果得射干苷、野鸢尾苷、鸢尾
黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、白射干素的峰
面 积RSD分 别 为2.2%、2.3%、2.2%、2.3%、1.9%、
1.6%,表明在10h内待测组分化学性质稳定。见图
1~6。
A:射干苷 B:野鸢尾苷 C:鸢尾黄素
D:野鸢尾苷元 E:次野鸢尾黄素 F:白射干素
图1 样品HPLC测定结果
图2 射干苷
图3 野鸢尾苷
图3 鸢尾黄素
图4 野鸢尾苷元
图5 次野鸢尾黄素
图6 白射干素
2 含量测定结果
取不同采收期鸢尾科药材供试品溶液,按上述
色谱条件进样,每次10μL,用所得峰面积进行含量
计算。所得结果见表2,图7~8。
表2 样品测定结果(%)
编号 采收时间 样品 射干苷野鸢尾苷鸢尾黄素
野鸢尾
苷元
次野鸢尾
黄素
白射
干素
1 8月 射干1 0.524 0.566 0.256 0.012 0.448 1.146
2 8月 射干2 0.213 0.446 0.054 0.003 - 3.150
3 8月 德国鸢尾 0.004 0.290 0.002 0.004 0.096 1.110
4 8月 日本鸢尾 0.004 0.008 0.002 - - 0.120
5 9月 射干1 0.976 1.370 0.014 0.407 0.536 0.269
6 9月 射干2 0.715 0,977 0,008 0,282 0,474 0.757
7 9月 德国鸢尾 0.024 0.305 - 0.135 0.486 0.184
8 9月 日本鸢尾 - 0.015 0.002 0.015 - -
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
射干1 射干2 德国鸢尾 日本鸢尾
%
射干苷
野鸢尾苷
鸢尾黄素
野鸢尾苷元
次野鸢尾黄素
白射干素
图7 8月采集样品中各个有效成分含量比较
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
射干1 射干2 德国鸢尾 日本鸢尾
%
射干苷
野鸢尾苷
鸢尾黄素
野鸢尾苷元
次野鸢尾黄素
白射干素
图8 9月采集样品中各个有效成分含量比较
3 结 论
本实验采用HPLC法测定鸢尾科射干属植物射
干和鸢尾属植物德国鸢尾、日本鸢尾中的6种有效
成分含量:射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、野鸢尾苷
元、次野鸢尾黄素、白射干素的含量,且不同植物中
含量均有差异。
本实验结果表明,不同采集样品中其有效含量
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第 1 4卷 第 1 1 期
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 14 No. 11
Nov .,2012
有所不同。如图8、9所示,在8月采集样品中,射干
和德国鸢尾以白射干素含量最高,野鸢尾苷元含量
最低,而日本鸢尾除白射干素外其他含量均较低;
在9月采集的样品中,各个样品的含量与8月样品相
比较都有变化,射干以野鸢尾苷元含量最高,德国鸢
尾以次野鸢尾黄素含量最高,而日本鸢尾各个有效
成分含量均较低,说明采集样品中各个有效成分含
量随时间变化而变化。德国鸢尾和日本鸢尾虽同属
鸢尾属植物,但其有效成分含量差异明显,可能与其
生理因素和生长环境因素有关。
本实验结果显示,9月采集的2份射干样品和
德国鸢尾中射干苷、野鸢尾苷、野鸢尾苷元、次野
鸢尾黄素的含量均高于8月采集的样品,9月采集
的日本鸢尾中各个有效成分含量与8月采集的样
品中含量无明显差异,含量极少。因此射干和德
国鸢尾的采收期可以参考射干苷、野鸢尾苷、野鸢
尾苷元和次野鸢尾黄素的含量和生物学产量,在9
月采收为宜,为合理地采收和利用提供了理论依
据。采收时间与药材药用功效的关系还有待进一
步研究。◆
参考文献
[ 1 ] 秦民坚,徐国钧,徐珞珊,等. 鸢尾科药用根茎类的药源调查
与基源鉴定研究[ J ] .中国中药杂志,1997 ( 8 ) :4-6.
[ 2 ] 秦民坚,吉文亮,王铮涛.不同采收期鸢尾中4中异黄酮含量
的动态变化[ J ] .中国天然药物,2005 ( 6 ) :3-4.
[ 3 ] 秦民坚,余国奠,徐国钧等.栽培射干4种异黄酮含量的季节
性动态变化[ J ] .中药材,2002,25 ( 3 ) :9-10.
中医脾脏学说是一个功能、形态、结构的综合
性概念,脾的生理、病理与膜结构、功能之间存在着
密切的联系[1]。脾虚证是中医脾胃理论的重要组成
部分,脾虚时可出现多系统功能改变[2]。所以,对于
脾虚证的研究,必须全方位、多角度、不同层次地进
行。不仅要从中医角度研究,也要结合现代医学理
论和方法、结合现代科技的最新成果进行研究。
1 脾虚证动物模型的研究
自20世纪80年代,脾虚模型从证型上分有脾
气虚模型、脾阳虚模型、脾阴虚模型。其中,以脾气
虚模型为主,共有19种造模方法[3]。依据文献分析,
脾虚证动物模型的制作经历了单因素造模到复合因
素造模的转变,由单一证型复制到病证结合造模的
转变。但是,脾虚证病证结合模型的制作方法,仍然
需要探究。复制病与证的模型的先后顺序,将影响
模型的成功制作。笔者根据研究者造模的思路,将
其分为3类加以阐释。
(1)以中医脾虚病因为依据复制病因模型,如
脾虚证现代研究与思考
马捷,李峰,宋月晗,刘晶,刘晓萌
(北京中医药大学,北京 100029)
摘 要:中医脾脏学说是一个功能、形态、结构的综合性概念,脾的生理、病理与膜结构、功能之间存在着密切的
联系。文章针对脾虚证的模型研究进行分析,并深入探讨脾虚证病理状态下的生物学机制,从而建立一些与脾胃相
关的学说,在不同水平上研究脾虚证的本质,从而为脾虚证研究开辟一条新途径。
关键词:脾虚证;能量代谢;模型
中图分类号:R241.6 文献标识码:A 文章编号:1673-842X (2012) 11- 0041- 03
收稿日期:2012-05-18
基金项目:国家自然科学基金项目(30873217);国家自然科学青年基金项目(81001501);北京市自然基金项目(7112071);教育部高等学
校博士学科点专项科研基金项目(2010013120005)
作者简介:马捷(1982-),男,天津人,2010级博士研究生,研究方向:中医病证结合规律的研究。
通讯作者:李峰(1966-),男,山西人,教授,博士研究生导师,博士,研究方向:中医病证结合规律的研究。E-mail :lifeng95@vip.sina.com。
Modern Research and Discussion of Spleen Deficiency Syndrome
MA Jie,LI Feng,SONG Yue-han,LIU Jing,LIU Xiao-meng
(Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China)
Abstract:The TCM spleen doctrine is a comprehensive concept of form. There is a close contact in the
structure,physiology,pathology,functions and membrane structure of the spleen. This study analyzed the
model of spleen deficiency syndrome,and explored the biological mechanisms of the pathological state of
spleen deficiency syndrome,which established the stomach doctrine at different levels to study the essence
of the spleen deficiency syndrome. Thus this study will open up a new avenue for the research of spleen
deficiency syndrome.
Key words :spleen deficiency syndrome ;energy metabolism ;model