全 文 :中国药房 2015年第26卷第28期 China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 28
Δ基金项目:浙江省教育厅科研项目(No.Y201431468);嘉兴市
科技局科技计划项目(No.2009AY2067);嘉兴学院2014年度校级SRT
项目(No.117)
*副教授,硕士。研究方向:中药药理学。电话:0573-83643848。
E-mail:hyylinda@163.com
通过化学合成研发新药往往代价昂贵,且不良反应多,因
此,以中药为代表的天然药物资源成了新药研发的重要补充
手段,传统中医药学理论也为从天然药物中开发提取有效活
性物质指明了方向。茄科植物广泛分布于温热带地区,是药
用植物资源中历史较早、种类较多的科属[1]。该科常见品种包
括枸杞、龙葵、颠茄、白英、天仙子、山莨菪、曼陀罗、洋金花等,
均为传统中药材资源,且茄科的酸浆、旋花茄、夜来香、乳茄、
红丝线、龙珠、烟草等也可作一定药用[2]。茄科药用植物在清
热解毒、祛风除湿、解痉止痛、止咳平喘等方面有一定临床疗
效[3],其化学成分包括生物碱、多糖、黄酮及其苷类、皂苷、挥发
油、有机酸及其衍生物等 [2]。研究表明,龙葵多糖、枸杞多糖
(LBP)等多糖类成分在抗肿瘤、免疫调节等方面具有较好药理
活性和潜在应用价值,正日益受到重视[4-5]。故笔者以“茄科”
“枸杞”“多糖成分”“提取”“药理作用”等为关键词,组合检索
2007年 1月-2015年 3月中国知网、万方、维普数据库中的相
关文献。结果得到相关文献 87条,对其中45条有效文献分析
总结后,就茄科药用植物中多糖类化合物在提取分离方法及
药理作用两个方面的研究进展作一综述,以期为茄科植物多
糖类成分进一步研究及茄科药用植物资源的有效开发利用提
供参考。
1 提取分离方法
1.1 水提醇沉法
根据“相似相溶”原理,对多糖这类极性大分子化合物,水
是较好的提取媒介,再向水提液中加入高浓度乙醇可使多糖
沉淀分离。因此,水提醇沉法是植物多糖最常用的提取方法,
该法简单方便、成本低、无污染,但缺点是提取温度高、耗时
长、效率低。王林江等[6]采用水提醇沉法从白英中提取多糖,
采用苯酚-硫酸法测定了3个产地白英的多糖含量。张文杰等[7]
设计 L9(34)正交试验,以提取温度、溶剂用量、提取次数和时间
为因素,以多糖含量为指标确定天仙子多糖的最佳提取工艺
为 100℃、加水 10倍量回流提取 3次、每次 1 h,此工艺下多糖
含量为2.201%。常建红等[8]先采用热水提取LBP,工艺为温度
100℃、pH 11.0、料液比1∶2、提取时间2 h;再以二乙基氨基乙
基-葡聚糖A-50柱层析得到纯度较高的LBP,并采用Sevag法
[氯仿-正丁醇(4∶1)]与酶法联用纯化,先加 0.1%木瓜蛋白酶、
pH 6.5、50℃下酶解2 h,后以Sevag法脱蛋白1次,醇沉烘干得
脱蛋白LBP,脱蛋白率达86.8%。江培等[9]采用水提醇沉法提
取洋金花多糖,以苯酚-硫酸法测定洋金花多糖含量,并进行效
能指标认证。结果显示,测定平均回收率为99.41%。王萍等[10]
采用水提醇沉法提取毛酸浆多糖,以提取温度、提取时间、料
液比和提取次数作为单因素考察,再通过正交试验得到毛酸
浆多糖的最佳提取条件为提取温度 100 ℃、时间 3 h、料液比
1∶20,此工艺条件下毛酸浆多糖得率为5.38%。
1.2 碱提法
碱提法的原理是利用碱液破坏植物细胞壁及细胞膜的完
整性,使其通透性提高,以利于酸性多糖的浸出。常用碱液有
0.1~1 mol/L NaOH、KOH、CaO、Ca(OH)2等。但碱提取后的
液体需中和,程序较繁琐,仅适用于特定类型的多糖,如LBP、
灵芝多糖等。杨瑞欣[11]在传统水提取基础上研究更优的提取
LBP的方法,分析了浸提温度、浸提液 pH、液料比和提取时间
等因素对LBP得率的影响。确定了碱液提取最优工艺为液料
比70∶1、pH 10.0、温度65℃、浸提时间3.5 h,此时LBP得率达
7.46%,比传统水提工艺提高了 1.59%。碱提法提取效率高,
但碱液浓度对多糖稳定性有影响[12],有些多糖在碱性较强时会
水解。因此提取过程应控制碱液浓度不宜过高,提取液应迅
速中和或透析,常通以氮气或加入硼氢化钠以防止多糖水解
而造成多糖得率下降[13]。
1.3 超声波辅助提取法
超声波辅助提取是利用超声波的空化作用及其次级效
应,如机械振动、乳化、扩散和击碎等,在植物细胞周围形成微
流,同时在细胞内形成胞内环流,使细胞受到严重损坏,提高
细胞膜和细胞壁的通透性,达到加快细胞释放多糖、缩短提取
时间和提高多糖提取率的目的[14]。超声提取在常压、室温下操
·综述讲座·
茄科药用植物中多糖成分提取及药理作用的研究进展Δ
黄越燕*,潘琳琳,周吉芳(嘉兴学院医学院,浙江嘉兴 314001)
中图分类号 R284.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2015)28-3989-04
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2015.28.33
摘 要 目的:为深入研究茄科药用植物的多糖类化合物提供理论基础。方法:以“茄科”“枸杞”“多糖成分”“提取”“药理作用”等
为关键词,组合检索2007年1月-2015年3月中国知网、万方、维普数据库中的相关文献,简述各种茄科药用植物中多糖类化合物
的提取分离、药理作用研究进展。结果:共检索到相关文献87条,其中有效文献45条。多糖类化合物提取分离方法有水提醇沉
法、碱提法、酶解法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、闪式提取法、复合法等;其在抗肿瘤、免疫调节、保肝、抗氧化、抗衰老、降
血糖、生殖保护等方面都有药理作用。结论:茄科药用植物中多糖成分的药理活性广泛,建议加强对多糖成分的分离纯化及化学
结构研究,并对单一组分多糖进行药理活性和作用机制研究。
关键词 茄科;多糖;提取方法;药理作用;研究进展
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作,简便安全、提取率高、有效成分损失少,缺点是可能导致可
溶性多糖降解。舒俊生等[15]采用超声辅助提取法对烟叶多糖
进行提取。结果,上中下部烟叶粗多糖含量分别为 10.13%、
7.36%、7.18%,并通过离子色谱法分析发现烟叶多糖主要由
阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和果糖组成。许春平等[16]通过单因
素试验和正交试验对低次烟叶多糖提取工艺进行了优化,得
到最佳提取条件为超声波功率600W、提取时间4 min、料液比
1∶25、温度 60℃,此工艺条件下多糖得率为 2.56%。孙汉文
等[17]建立以超声波辅助水提取LBP的工艺,设计单因素和正交
试验考察了提取温度、时间、次数及料液比的影响。结果显示
料液比对提取率影响最大,温度影响最小,超声提取以室温为
宜;超声20 min、料液比1∶3、提取4次时LBP收率可达10%。
1.4 微波辅助提取法
微波提取作为天然植物有效成分提取的新技术,其原理
是利用高频电磁波穿透萃取溶剂达到细胞内部,由于溶剂及
细胞液吸收能量,使细胞内部温度升高、压力增大,从而使细
胞壁破裂,位于细胞内部的有效成分则从细胞中释放出来,被
溶剂溶解[18]。该法具有穿透力强、加热效率高、升温快而均匀、
萃取时间显著缩短、提取效率高、安全无污染等优越性。但有
研究认为,微波提取得到的多糖在单糖组成上有一定差异性[19]。
邱志敏等[20]利用响应面法优化LBP的微波辅助水提取工艺。
确定最佳提取工艺为微波功率300 W、微波时间1.8 min、液料
比 26∶1,枸杞粗多糖得率可以达到 9.57%。王月囡等[21]采用
单因素和正交试验研究LBP提取工艺,比较了料液比、微波功
率、微波时间、提取次数等因素对提取率的影响。结果表明,
微波提取最佳条件为微波功率料液比1∶30、微波功率480W、
微波时间 20 min 、提取 2次,此条件下多糖提取率接近 40%,
且该法提取LBP优于热水浸提法。于开源等[22]研究了微波功
率、提取时间及料液比对脱脂酸浆籽中多糖提取率的影响,以
多糖提取率为响应值确定优化条件为料液比1∶12、微波功率
610W、微波时间83 s,多糖提取率达5.57%。
1.5 酶解法
酶解法是利用酶水解植物纤维素,使细胞壁破裂释放壁
内的多糖,从而实现快速高效提取[14]。常用的酶有蛋白酶、纤
维素酶、果胶酶等。酶解法提取多糖虽选择性高、多糖活性
高、易除杂质,但成本较高、条件苛刻、酶容易失活,因此限制
了其在大规模工业化中的应用。汪焕林等[23]以LBP得率为指
标,用单因素和正交试验对料液比、提取时间、提取温度和酶
质量分数等因素进行考察,确定LBP最佳提取工艺为 50 ℃、
料液比 1∶20、提取时间 20 min、酶质量分数 0.5%,此时多糖
得率为2.95%。于翠芳等[24]利用复合酶法提取LBP的工艺,采
用响应曲面法分析了酶解温度、酶解时间、加酶量对LBP的提
取率的影响。结果表明,采用复合酶[蛋白酶-纤维素酶-果胶
酶(1∶1∶1)]提取LBP的最佳条件为酶解温度51℃、酶解时间
60 min、加酶量 0.32%,LBP提取率为 13.96%;与单一酶法相
比提取率差异不大,但提取速度提高约50%。
1.6 复合法
将多种方法结合提取多糖,能大大加速多糖的溶出,通过
工艺优化达到最优的提取效果。较常使用的如微波-酶法、微
波-超声联用提取等。王启为等[25]对微波联合纤维素酶法提取
LBP进行研究,确定最佳工艺条件为微波功率 450 W、微波时
间6 min、物料80目、液料比25∶1(ml/g)、纤维素酶用量1.5%、
酶解温度 50℃、酶解时间 60 min、体系 pH值 4.8,此时LBP得
率为 13.2%。周丹红等[26]利用微波-超声波辅助提取LBP,采
用正交试验考察料液比、提取温度、微波和超声波功率、提取
时间等对LBP提取效率的影响。结果显示,最佳提取工艺为
料液比 1∶10、提取温度 100 ℃、微波功率 300 W、提取时间 6
min、超声处理 20 min、超声功率 300 W、温度 70 ℃。任雪峰
等[27]研究了酶解超声协同提取茄蒂多糖条件,在pH为5、50℃
水浴温度下用1%纤维素酶酶解30 min,采用响应面法优化超
声提取条件。结果表明,茄蒂多糖最佳提取条件为料液比 1∶
36(g/ml)、超声时间 22 min、超声温度 68℃,此条件下多糖得
率为5.49%。
1.7 闪式提取法
闪式提取是利用高速机械剪切力和搅拌力,迅速破坏植
物细胞组织,使细胞内部的有效成分与溶剂充分接触而快速
溶解转移,从而实现有效成分的高效提取,具有提取快速、不
需要加热、有效成分损失小的特点[28]。黄越燕等[28]采用总多糖
提取量和浸膏得率为综合评价指标,采用L9(34)正交试验考察
提取电压、提取时间、提取次数、料液比等因素。结果表明,龙
葵总多糖的闪式提取最佳工艺为加30倍量水、电压80 V、提取
2次、每次 2 min,总多糖提取量为 4.585 mg/g。李娇等[29]比较
研究了水提法、超声法和闪式法提取铁皮石斛多糖的效果,并
用正交试验对工艺条件进行了优化。结果显示,闪式提取最
优条件为固液比1∶15、闪提时间2 min、转速4 000 r/min,此时
多糖提取率为24.05%,耗时仅为2 min。与传统水提法和超声
法比较,闪式提取具有明显优越性。
2 药理作用
近年来茄科药用植物在临床应用广泛,其多糖类化合物
药理作用的研究主要有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化和抗衰老、
降糖、生殖保护等几个方面。
2.1 抗肿瘤和免疫调节作用
李健等[30]研究了龙葵多糖对U14荷瘤模型小鼠生长的抑
制及对荷瘤小鼠的免疫调节作用。采取MTT法检测龙葵多糖
体外对U14细胞增殖的影响;建立U14宫颈癌腹水瘤模型,观
察给药对肿瘤的抑制作用和对荷瘤小鼠存活时间的影响;用
酶联接免疫吸附法检测荷瘤小鼠血清的细胞因子水平。结果
表明,180 mg/kg的龙葵多糖对宫颈癌 U14生长抑制率达
53.68%,并能显著延长荷瘤小鼠生命周期,可增加荷瘤小鼠血
清γ干扰素水平,降低白细胞介素(IL)44水平,推测该多糖可
能通过激活机体内免疫系统的活动,调节细胞因子分泌而发
挥抗肿瘤作用。张杰等[31]采用不同浓度的白毛藤多糖作用于
胰腺癌细胞,检测肿瘤细胞凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白
酶3(Caspase-3)的表达。结果表明,白毛藤中多糖成分可以抑
制胰腺癌细胞增殖,其抗癌机制可能是通过活化Caspase-3途
径来诱导肿瘤细胞凋亡。LBP被认为是茄科植物枸杞的重要
活性成分,其抗肿瘤作用及免疫调节作用得到较多研究的证
实,其对于肝癌、宫颈癌、前列腺癌、卵巢癌、大肠癌、食管癌、
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血癌、肺癌等方面均具有一定的抗肿瘤活性[32]。LBP能作用于
免疫活性细胞如T细胞、B细胞等,发挥细胞和体液的免疫功
能,或降低肿瘤免疫抑制因子血管内皮生长因子(VEGF)、转
化生长因子61(TGF-61)的分泌,达到抑制肿瘤的作用[33]。
2.2 保肝作用
章培军等[34]研究了LBP对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性
肝损伤、小鼠血清中 IL-6和 IL-8水平的影响,并采集肝组织病
理样品进行病理学观察。结果显示,LBP能显著防止CCl4引
起的小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的升高,且药物存在
量效关系,还可降低CCl4引起的小鼠血清 IL-6、IL-8水平升高;
病理学镜检结果表明,LBP可明显减轻 CCl4对肝组织的损
伤。实验证实了LBP具有良好护肝作用,其机制可能与降低
小鼠血清 ALT、IL-6、IL-8的水平有关。秦树森等[35]采用CCl4
诱导大鼠急性肝损伤模型,观察了红丝线多糖对模型大鼠血
清中ALT、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)及超氧
化物歧化酶(SOD)水平的影响。结果表明,红丝线多糖可抑
制急性肝损伤大鼠血清中ALT、AST的活性,降低MDA的水
平,升高SOD的水平。可见,红丝线多糖对CCl4致大鼠急性肝
损伤具有较好的保护作用。
2.3 抗氧化和抗衰老作用
茄科植物多糖的抗氧化和抗衰老作用被广泛研究,其中
对LBP的研究较多。邵鸿娥等[36]通过小鼠游泳耐疲劳实验研
究了LBP对小鼠耐力和血清中SOD活性、MDA含量的影响,
进而探讨LBP的抗衰老作用机制。结果显示,50、100 mg/kg
剂量的 LBP均可显著延长小鼠力竭游泳时间(分别提高
12.32%、1.23%),提高抗疲劳能力,小鼠血清中SOD活性明显
升高、MDA含量明显降低。龚涛等[37]研究了枸杞粗多糖在小
鼠体内的抗氧化作用,发现100、200、400 mg/kg剂量的枸杞粗
多糖能显著提高D-半乳糖衰老模型小鼠血清、肝脏及脑组织
中SOD活性,降低MDA含量,能显著提高正常小鼠常压耐缺
氧能力和游泳抗疲劳能力,小鼠的脾指数和胸腺指数也得到
显著提高。结果表明,枸杞粗多糖能促进提高小鼠的机体免
疫水平,具有显著的抗氧化、抗衰老作用。许春平等[16]研究了
低次烟叶多糖的生物活性,发现其具有较强的抗氧化活性和
自由基清除能力。刘鹏举等[38]从酸浆中提取水溶性粗多糖,经
体外实验表明酸浆多糖对羟基自由基及超氧阴离子自由基均
具有清除功能。
2.4 降血糖作用
李晓冰等[39]探讨了LBP对糖尿病大鼠血糖水平及机体免
疫功能的影响。通过尾 iv给予链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模
型,经给药干预比较大鼠血糖水平、脾脏指数、胸腺指数、脾淋
巴细胞刺激指数及外周血T淋巴细胞亚群水平。结果显示,第
2、4周多糖组大鼠血糖水平均较模型组降低,胸腺指数、脾淋
巴细胞刺激指数及CD3、CD4及CD4/ CD8值均较模型组升
高,CD8值较模型组降低,表明LBP能较好地调节血糖水平,
其作用与改善糖尿病大鼠免疫功能低下有关。宗灿华等[40]观
察了LBP对2型糖尿病(2-DM)大鼠胰岛素抵抗及肾周脂肪组
织脂联素基因mRNA表达的影响。实验选用高脂饲料加小剂
量链尿佐菌素建立 2-DM大鼠模型,ig给药 8周后,采用逆转
录-聚合酶链反应法检测肾周白色脂肪组织脂联素基因mRNA
水平,并测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)和血脂的含
量,计算胰岛素抵抗指数(IRI)。结果,LBP组2-DM大鼠肾周
脂肪组织脂联素基因mRNA表达明显升高,FBG、FINS、IRI、
总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平明显降低。这表明
LBP可通过增加脂联素基因mRNA表达,改善2-DM大鼠脂代
谢紊乱,降低胰岛素抵抗,从而实现降血糖作用。
2.5 生殖保护作用
曹池等[41]研究了早期低剂量接触氯化甲基汞(MMC)对大
鼠生殖生长发育的影响及LBP的早期干预作用。实验将健康
7日龄大鼠经颈部 sc给予MMC,自然观察大鼠体质量、发育、
生殖繁育能力及子代仔鼠早期生长发育和存活状况,并将已
孕母鼠哺乳期仔鼠染毒,观察母鼠产仔情况。结果显示,MMC
染毒大鼠毛色萎缩、精神状态倦怠、食欲不振、生长较缓慢,未
产仔或产仔的产死率高、或产畸胎,仔鼠出生体质量异常,染
毒仔鼠影响其已孕母鼠再次生育;而使用 LBP干预可抑制
MMC对大鼠引起的生殖发育毒性。
2.6 其他作用
现代药理研究表明龙葵多糖具有抗炎、抗过敏、抗菌、解
热镇痛、镇静、杀虫活性等药理作用[42-43]。LBP还具有明目、防
治青光眼、防治白内障、抗溃疡等作用[44-45]。
3 结语
茄科植物多糖成分的提取方法在传统热水提取、碱水提
取、酶法提取的基础上,逐渐应用到超声波、微波辅助、闪式提
取等新方法,大大提高了多糖的提取效率,节约了操作时间。
茄科植物多糖的药理作用广泛,体现在抗肿瘤和免疫调节、保
肝、抗氧化抗衰老、降血糖、生殖保护等诸多方面。
目前对茄科植物多糖的研究面临的问题主要有:(1)对茄
科植物多糖的研究,主要集中在对枸杞、龙葵、酸浆和烟叶多
糖的研究,而其他茄科植物如天仙子、白英、刺天茄、颠茄等含
生物碱、莨菪碱成分高,对于此类植物多糖的研究还不多。此
外,旋花茄、夜来香、乳茄、龙珠多糖成分仍有待进一步研究。
(2)提取得到的多糖多为粗品,大多数多糖的化学结构尚未明
确,在提取成分中分离出选择性高、广谱的化合物仍是研究的
重要内容。
因此,在今后的研究开发中,应更加注重对茄科植物中天
仙子、白英、刺天茄、颠茄、旋花茄、夜来香、乳茄、龙珠等多糖
成分的研究;并加强茄科植物多糖的分离纯化,用均一的单一
组分多糖进行药理活性和作用机理研究;深入研究单体成分
的作用机制,加强多糖的化学结构研究。茄科植物种类繁多、
分布广泛、多糖含量高、资源丰富,对茄科植物多糖进行广泛
深入研究,阐明其生物活性及构效关系,对寻找新药先导化合
物,具有医学和经济意义。
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(收稿日期:2015-05-18 修回日期:2015-06-05)
(编辑:林 静)
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