全 文 ：作者简介 韦龙宾(1968-),男,广西罗城人,硕士,讲师,从事经济林和
生态学的教学与科研工作。
收稿日期 2007!02!11
植物抗氧化剂广泛应用于食品、医药、保健品和化妆品
等行业[1-2]。自由基清除剂与自由基反应使之还原成非自由
基化合物,能有效地清除体内过多的自由基,从而起到防
病、治病作用及抗衰老保健作用。因此,近年来有关自由基
清除剂的研究受到世界各国的重视[3-5]。清除自由基的检测
方法有许多种[6-7]。体内试验比较灵敏,但繁琐、周期较长、费
用高,不适于大量样品的测定。大量样品的抗氧化活性筛选
需采用体外试验法[8-11],其中电子自旋振波谱法(ESR)是测
定自由基的最直接而有效的体外试验技术,但需要昂贵的
仪器和复杂的自由基捕集技术。DPPH检测法[12-13]是通过分
子中1个稳定的DPPH自由基与抗氧化剂提供的1个电子
配对结合,使DPPH的特征紫色消失,因此可用于抗氧化剂
清除自由基能力的评价。
为开发天然自由基清除剂产品,笔者采用 DPPH检测
法,对马鞭草科一些植物鲜叶醇提物清除自由基的活性进
行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料 主要仪器:UV/VIS2802PCS型分光光度计,尤尼
柯(上海)仪器有限公司生产;7230G可见分光光度计,上海
精密科学仪器有限公司生产;E01140型电子分析天平,
Swizerland生产;GZX!9140MBE电热恒温鼓风干燥箱,上海
博迅实业有限公司医疗设备厂生产。试剂:2,2!Diphenyl!1!
picrylhydrazyl(2,2!二苯基 !1!苦肼基,DPPH),C18H12N5O6,
Mr394.33,Sigma-Aldrich公司产品;芦丁,四川光泰制药有
限公司产品;槲皮素,生化试剂,国药集团化学试剂有限公
司产品;抗坏血酸,分析纯,北京医药采购供应站产品;没食
子酸,张家界贸源化工有限公司产品。体积分数 95%乙醇
为国产分析纯。水为实验室自制新鲜蒸馏水。
供试植物:所用植物鲜叶于2007年1月下旬采自广西
药用植物园和广西大学校内,由广西药用植物园黄辉东和
广西大学朱栗琼鉴定。
1.2 试验方法
1.2.1 DPPH贮备液的配制。准确称取 2,2!Diphenyl!1!
picrylhydrazyl试剂 0.2577g,用浓度 95%乙醇溶解,转入
1000ml容量瓶中,用浓度95%乙醇定容,摇匀得浓度为
257.7mg/LDPPH贮备液(约6.5×10-4mol/L),置于冰箱中冷
藏备用,使用前用浓度95%的乙醇稀释。
1.2.2 试液的制备。将采集的植物鲜叶冲洗并晾干表面水
分后,剪碎(粒度约1mm),碎片放入250ml锥形瓶中,用浓
度 95%的乙醇浸泡过夜,过滤,滤渣中加入浓度 95%的乙
醇,水浴加热控制 80℃,回流提取 2次,每次 2h,过滤,用
少许浓度 95%的乙醇洗涤滤渣,合并滤液和洗液,得鲜叶
提取液,蒸发浓缩。浓缩液使用前以 2000r/min转速离心
15min,倒出上清液备用。
1.2.3 提取液清除 DPPH自由基能力的测定。将 DPPH贮
备液稀释至浓度为51.54mg/L使用。在试管中依次加入4.0
ml浓度 51.54mg/LDPPH溶液和 1.0ml样品提取液,总体
积为5.0ml。混匀50min后,用1cm比色皿在517nm波长
处测 A值,记为 A0;加入 4.0ml51.54mg/LDPPH溶液的溶
剂和1.0ml待测试样溶液,混匀后测定 A值,记为 Ar;加入
4.0ml51.54mg/LDPPH溶液和1.0ml待测试液混匀 50min
后测A值,记为As。按式(1)计算自由基清除率[14-16]。
清除率=1-(As-Ar)/A0 (1)
抗氧化剂清除DPPH自由基能力采用清除的 IC50值表
示。将待测提取液配制成系列溶液,测定待测提取液浓度与
DPPH自由基清除率,并绘制DPPH自由基清除率对提取液
浓度曲线,由曲线读取或用方程计算出 DPPH自由基清除
马鞭草科一些植物鲜叶提取物清除DPPH自由基活性的研究
韦龙宾 1,陈丛瑾 2,朱栗琼 2,陶世红 2,黄宝优 3,黄辉东 3
(1.广西林业干部学校,广西南宁 530001;2.广西大学,广西南宁 530004;3.广西药用植物园,广西南宁 530004)
摘要 用DPPH检测法对马鞭草科植物鲜叶提取物清除DPPH自由基的活性进行了比较,发现不同种植物鲜叶提取物清除自由基的
活性有较大差异:其中假连翘、三对节、云南石梓的鲜叶提取物以总固物计的清除DPPH自由基的IC50值分别为6.343、4.757、4.233,有
较大的开发植物抗氧化剂的潜力;柚木、黄素梅、苦郎树、黄毛豆腐柴的鲜叶提取物以总固物计的清除DPPH自由基的IC50值大于或
接近2,也有一定的开发植物抗氧化剂的潜力;马缨丹清除DPPH自由基的IC50值大于1,有一定的清除自由基的能力;而蔓荆、冬红
清除DPPH自由基的IC50值均较小,清除自由基能力较弱。
关键词 马鞭草科植物;鲜叶提取物;清除能力;二苯基苦肼基
中图分类号 Q949.9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)20-06011-02
StudyonScavengingActivitiestoDPPHFreeRadicalofExtractsfromFreshLeavesofSomePlantsofVerbenaceae
WEILong!binetal(GuangxiGadreSchoolofForestry,Nanning,Guangxi530004)
Abstract DPPHdetectionmethodwasusedtodeterminethefreeradicalscavengingactivityofthe95%ethanolextractsfromthefreshleaves
ofsomeVerbenaceae.Theresultsrevealedthataltheplantstestedhaddiferentfreeradicalscavengingcapacities.Amongthem,IC50of
scavengingDPPHfreeradicaloftotalsoluteofthe95%ethanolextractsfromthefreshleavesofDurantarepensLinn.var.repens,Clerodendrum
seratum (Linn.)MoonandGmelinaarboreaRoxb.were6.343,4.757and4.233respectively,whichshowedstrongerfreeradicalscavenging
capacity;whilethatofTectonagrandisLinn.f.,Durantarepensvar.GoldenLeaves,Clerodendruminerme(Linn.)Gaertn.andPremnafulvaGraib
weregreaterthan2orcloseto2,showedfreeradicalscavengingcapacity;thatofLantanacamaraLinn.was1.502,whichshowedsomefreeradical
scavengingcapacity;butthatofVitextrifoliaLinn.andHolmskioldiaanguineaRetz.werelessthan1,whichshowedweakerfreeradical
scavengingcapacity.
Keywords Verbenaceae;Extractsoffreshleaves;Scavengingactivity;2,2!Diphenyl!1!picrylhydrazyl
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(20):6011-6012 责任编辑 王丽莉 责任校对 王 淼
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.20.044
率为 50%时所需提取液浓度 C50,计算出提取液中溶质质
量,按式(2)计算IC50值。重复测定2次。
IC50=50%×加入的 DPPH质量/加入的试样溶液中溶质
质量 (2)
1.2.4 提取液固含物的测定。取10.0ml试液用烘干法测定
固含物。提取液清除DPPH自由基能力以提取物中的总固
物计。
1.2.5 几种抗氧化剂清除DPPH自由基的能力测定。配制
芦丁、槲皮素、抗坏血酸、没食子酸标准溶液,逐级稀释使
用。按“1.2.3”方法测定、计算抗氧化剂对DPPH自由基的清
除能力。
2 结果与分析
2.1几种抗氧化剂清除DPPH自由基的能力 测定结果表
明,芦丁、槲皮素、抗坏血酸、没食子酸的 IC50分别为 3.300、
6.734、4.730、13.506。IC50值越高,抗氧化剂的自由基清除能
力越强[16],可见单位质量抗氧化剂清除 DPPH自由基能力
次序为没食子酸>槲皮素>抗坏血酸>芦丁。
2.2 马鞭草科一些植物鲜叶醇提物清除 DPPH自由基的
活性 表1表明,不同植物鲜叶醇提物对DPPH自由基的清
除能力不同。IC50值越高,抗氧化剂的自由基清除能力越强。
鲜叶醇提物以总固物计清除 DPPH自由基能力次序为:假
连翘>三对节>云南石梓>柚木>黄素梅>苦郎树>黄毛豆腐
柴>马缨丹>蔓荆>冬红。将这些植物鲜叶醇提物以总固物计
的清除 DPPH自由基的 IC50值与芦丁、槲皮素、抗坏血酸、
没食子酸的 IC50值比较,可知假连翘清除 DPPH的 IC50为
6.343,大于抗坏血酸的 IC50值 4.730,接近槲皮素的 IC50值
6.734;三对节的IC50值为4.757,稍大于抗坏血酸的IC50值;
云南石梓的 IC50值为 4.233,稍小于抗坏血酸的 IC50值,但
大于芦丁的 IC50值 3.300。总清除 DPPH自由基能力次序
为:没食子酸>槲皮素>假连翘>三对节>抗坏血酸>云南石
梓>芦丁>柚木>黄素梅>苦郎树>黄毛豆腐柴>马缨丹>蔓
荆>冬红。
注:A采自广西药用植物园;B采自广西大学。
表1 马鞭草科一些植物鲜叶醇提物清除DPPH自由基的活性结果
植物 拉丁名 来源 以总固物计的清除DPPHC50∥mg/L 以总固物计的清除DPPHIC50
蔓荆 VitextrifoliaLinn. A 134.58 0.766
冬红 HolmskioldiaanguineaRetz. A 381.56 0.270
假连翘 DurantarepensLinn.var.repens A 16.25 6.343
黄素梅(黄叶假连翘) Durantarepensvar.GoldenLeaves B 43.65 2.362
柚木 TectonagrandisLinn.f. B 40.65 2.538
三对节 Clerodendrumseratum(Linn.)Moon A 21.67 4.757
马缨丹 LantanacamaraLinn. B 68.61 1.502
黄毛豆腐柴 PremnafulvaGraib A 52.98 1.946
云南石梓 GmelinaarboreaRoxb. A 24.35 4.233
苦郎树 Clerodendruminerme(Linn.)Gaertn. A 52.41 1.967
3 结论
用DPPH检测法对马鞭草科一些植物鲜叶醇提物清除
DPPH自由基的活性进行了比较,发现不同种植物鲜叶的
95%乙醇提取物的自由基清除活性有较大差异。其中假连
翘、三对节、云南石梓的鲜叶有较大的开发植物抗氧化剂的
潜力;柚木、黄素梅、苦郎树、黄毛豆腐柴也有一定的开发植
物抗氧化剂的潜力;马缨丹有一定的清除自由基的能力。但
蔓荆、冬红清除自由基的能力小。
该研究仅对上述植物清除DPPH自由基活性进行了初
步比较分析,植物提取物中具有清除DPPH自由基能力的
有黄酮类、酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类等,甚至多糖类
等都具有一定的抗氧化活性[17],各种微量元素、叶绿素等物
质,也可能对IC50的测定造成影响,究竟上述植物含有哪些
化学成分,哪些成分对清除自由基能力贡献较大,其化学组
成及其与活性和药用价值的关系都需进一步研究。
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安徽农业科学 2007年6012