全 文 ：· 化学成分 ·
撷草属药用植物 HP L C 指纹特征研究
陈 磊 , 康鲁平 ` 秦路平 , 郑汉臣“ 郭 澄 , 张 纯 ,
( 1
. 福州总院药剂科 , 福州 3 5 0 0 0 1 ;2 . 第二军 医大学药学院 , 上海 20 0 4 3 3 ; 3 . 长征 医院药学部 , 上海 2 0 0 4 3 3 )
摘要 目的 :建立撷草属药用植物 H P L C 指纹特征谱 。 方法 : 采用 H P L C 法对样品甲醇提取液进行分析 。 结
果 :在给定的色谱条件下 ,从撷草属植物 H P L C 图中取出 9 个峰作为鉴别特征 , 发现撷草属植物 H PL C 图中各峰的
重叠率 、特征峰的检出率与撷草素成分含量之间呈正相关 。 结论 :本研究为撷草属药材品质的鉴定和评价提供了
科学 、 客观 、公正的依据 。
关键词 撷草属植物 H P L C 指纹特征 撷草素 乙酞撷草素
蜘蛛香 ( Va le r i a n a aj t a m a ns i J o n e s ) 、 撷草 ( V. -of
五e i n a l i s L ) 、 宽叶撷草 ( V. 磷c i n a l i、 L : a r xl a t i肠 l ia
M i q )和黑水撷草 ( V. a m u er n s is Sm i r . e x K o n )均为
败酱科撷草属植物 。 蜘蛛香主治院腹胀痛 、 消化不
良 、腹泻 、痢疾等疾病 ,曾收载于 19 7 7 年版中国药典
(一部 )川 。 撷草在民间用于治疗神经衰弱 、 失眠等
疾病 。 宽 叶撷草和 黑水撷草在个别地方作撷草
用图 。 我国撷草属植物资源分布广 , 不同品种 、 同
品种不同产地的撷草属植物药材质量差异很大 , 这
严重影响临床用药的质量 。 为了充分利用我国丰富
的撷草属植物资源 ,有必要建立一个简便 、 准确的质
量控制方法 。 笔者以我国常见 4 种撷草属植物的不
同产地及同一品种的不同部位共 14 个样品为研究
对象 ,采用 H PL C 技术 , 从化合物群体角度对 14 个
样品进行比较 ,获得了其指纹特征 。
1 色谱一相对保留指纹谱的构建
在给定的实验条件下 , 样品各组分的相对保留
值为该样品组分所特有 , 如指纹一般 ,相对保留值能
直接从色谱上每个峰的保留时间经过计算而获得 ,
方便 ,简单易行 。
1
.
1 相对保留值 a 的计算 在梯度洗脱的色谱条
件下 , 色谱峰较多且相当密集 ,难以插人一个合适的
参照物 。 故选择一个出峰时间较居中 、 在各样品中
均存在的组分作为参照物 ( 。 二 1 ) 。 求出样品所有
峰的相对保留值为 : 。 = t iR八 R。 , 式中 t R I为各组分的
出峰时间 , tR 。为参照峰的出峰时间 。
1
.
2 a 值窗 口的设定 由于保留时间受各种实验
因素的影响 ,每一次的实验数据不可能完全一致 ,故
对每个峰位的 a 值根据统计学的处理设定窗 口 续
5%
,即通过大量的实验数据计算出每个峰位的 。
值取可信限在 土 5% 的范围内。
1
.
3 指纹谱的建立 按 a 值大小次序排列 , 在每
·
25 6
·
个 。 项下标出该组分的相对面积值 ( R 、 ) 。 样品的
a 与 R , 构成了其 H PL C 指纹特征 。
,
.
4 重叠率 峰重叠率是在 2 个相互比较样品的
各自峰数及两者共有峰数 (指 a 值相同的峰 )的基
础上 ,从质的角度考虑其相关性 ,计算方法是以某样
品的指纹谱为基准 , 以其峰数与被比较样品的峰数
之和为分母 ,两者共有峰的两倍为分子 ,求得其百分
率即为峰的重叠率 。
2 仪器和试剂
W a te r s 高效液相系统 ( Wa t e r s 6X() E 四元泵 、 W a -
et sr 9 6 紫外检测器 、 w at e sr 脱气机 ) 。 水为超纯水 ,
甲醇为色谱纯 。 撷草素和 乙酞撷草素由笔者 自制 。
药材样品见表 1 ,并经笔者鉴定 。
表 1 样品的名称 、部位和来源
样品号 名称 部位 来源
1 蜘蛛香 根茎及根 云南开远
2 蜘蛛香 地上全植株 云南开远
3 蜘蛛香 根茎及根 贵州安顺
4 蜘蛛香 根茎及根 贵州兴义
5 蜘蛛香 根茎及根 贵州贵阳
6 撷草 根茎及根 重庆南川
7 撷草 地上全植株 重庆南川
8 颗草 根茎及根 甘肃武都
9 撷草 地上全植株 甘肃武都
10 撷草 根茎及根 陕西留坝
1 撷草 地上全植株 陕西留坝
12 宽叶撷草 根茎及根 浙江天目山
13 宽叶撷草 地上全植株 浙江天目山
14 黑水撷草 根茎及根 黑龙江佳木斯
3 实验方法
3
.
1 色谱条件 S y m m e r叮 C , 8色谱柱 ( 1 5 0 m m x
3
.
9 m m
,
5 林m ) ; 甲醇 一水二元梯度洗脱 , 流速 0 . 5
m F m in
, 检测波长 : 2 56 n m 。 甲醇一水流动相梯度见
表 2 。
中药材第 26 卷第 4 期 20 3 年 4 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2003. 04. 009
表 2 流动相梯度 照品溶液进样 , 以确定其峰位 。
时间 ( m i n ) A ( 甲醇% ) B (水% ) 4 结果
。 10 0 4 . , 相对保留值指纹特征的建立 在获得的 14
20 65 35 个色谱图及其 D A D信息 中 , 以乙酞撷草素峰为内参
40 65 35 照峰 , 以 5 号贵阳蜘蛛香根茎的总峰面积为分母 , 计
卢0 . … 10 0 0 算各样品色谱峰的 。 和 R 、 值 ,凡是 a 值相同或相3 . 2 样品供试液制备 精密称取各样品粉末 0 . 2 近 (误差感 1% ) ,最大吸收波长 、 比吸收值都相等的g (过 60 目筛 ) ,置 or iln 容量瓶中 ,加 10 ml 甲醇超 峰 , 即可认为同一化合物峰 。 将各个样品每个峰的
声提取 30 m in ,过滤 ,滤液再过 0 . 45 林m 微孔滤膜 。 R A 值列在相应的 a 值项下 , 某 a 值项下无相应峰
3
.
3 样品分析 将 14 个撷草属植物样品制成的 的样品其 R 、 值计为 0 。 得到相对保留值指纹特征
供试液 ,按以上色谱条件进样分析 ,依据 H PL c 图获 (见表 3 ) 。 宽叶撷草地上全植株的 H P Lc 图谱中没
得相应的数据信息 , 同时用领草素和乙酞撷草素对 有乙酞撷草素峰 ,无法建立其相对保留值指纹谱 。
表 3 1 3 个撷草属植物样品的相对保留值指纹谱
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 12 14
0
.
0 37
0
.
0 70
0
.
0 94
0
.
1 14
0
.
15 0
0
.
2 12
0
.
22 8
0
.
264
0
.
2 84
0
.
3 38
0
.
47 6
0
.
56 3
0
.
60 2
0
.
64 4
0
.
7 1 1
0
.
8 22
0
.
9 5 1
0
.
96 9
1 73
1
.
7 8
总峰数
总峰面积
0
14
.
0 9
3 64
0
.
9 9
0
0
0
0
0
0 0 1
0 0 2
0
.
24
0
0
.
0 8
0
.
14
0
0
.
0 1
0
.
13
2
.
83
0
.
1 1
0
.
04
0
.
2 3
0
.
26
2
.
0 2
3 5
.
1 4
0
.
07
3
.
4 2
0
.
14
0
.
10
0
0
0
.
14
2 2
6 3
.
8 5
0
.
09
7
.
04
0
0
0
17
.
4 8
0
0
.
1 1
0
.
02
16
.
0 8
1
.
0
0
.
9 3
2
.
7 1
0
0
.
3 0
2
.
15
0
0
8
.
0 1
0
0
.
18
0
0
0
.
0 3
2
.
12
0
0
1
.
10
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
.
29
0
0
0
.
07
6
.
50
0
.
13
0
.
09
0
0
.
6 3
0
5 8 3
0
.
15
0
0
.
10
0
0
0
.
04
0
l 3
2 1
.
07
0
.
07
17
.
4 3
0
,
4 6
8 8 4
0
.
8 0
0
.
0 5
0
.
0 4
0
.
1 1
0
.
12
0
.
15
0
.
3 6
0
.
3 2
0
.
2 0
0
,
2 3
0
.
35
0
.
19
0
.
2 0
0
.
38
0
3
.
9 3
0
.
6 2
0
.
04
0
.
0 8
0
.
0 2
0
.
04
0
.
4 2
0
0
0
.
2 0
0
.
3 9
0
0
0
.
05
0
.
1 8
0
.
34
0
.
17
0
.
1 1
0
.
08
0
.
06
0
.
4 9
0
.
0 3
0
.
0 5
0
.
16
0
1 77
0
.
53
0
0
.
0 6
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
.
1 1
1
.
2 0
2 2 3
0
.
10
0
0
.
0 5
0
.
7 5
0
0 15
0
.
2 5
0
0 10
0
.
0 2
0
0
0
.
05
0 47
0 19
0
.
65
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
O
、
04
4
,
64
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
4
.
6 1
0
.
02
0
.
4 1
0
.
2 3
2
.
1 8
0
0
.
1 1
0
5
.
0 2
0
.
10
0
.
4 3
0
.
32
4
.
8 1
9 9 3
0
.
0 2
0
.
4
0 4 8
3 3 8
0
`
16
59
、
10
0
3
.
6 9
0
.
14
0
0
0
0
25
9 8
.
8 0
0 10
0 15
0
0
、
0 6
0 25
0
0
0
2
.
49
0
2
.
6 6
0
0
0
.
0 3
0
0
.
05
2 8
,
7 7
0
.
6 1
0
0
1
.
6 6
0
.
0 5
0
.
4 9
0
.
0 5
30
69
.
4 3
0
.
2 1
5 2
.
0 8
0
.
12
3
.
10
0
.
14
O
0
0
0
2 l
89
.
6 6
0
.
1 1
0
.
04
0
0
0
.
3 0
0
0
0
0
.
19
0 12
0
.
0 5
0
l 8
11
.
9 2
0
0
.
2 1
0
0
0
7
1
.
5 3
0
0
.
3 8
0
.
0 2
0
0
0 8 3
0
.
06
2
.
9 6
0
0
0
0
0
0
0
7
8
.
9 3
O
0
.
0 8
0
0
.
0 2
0
.
1 0
0
0
0
0
0
.
0 5
0
0
0
0
0
0
0
6
8
.
3 2
0
.
0 2
3
.
7 5
0
0
0
0
0
0
0
0
0
.
09
0
0
0
0
.
0 7
0
0
0
0
.
2 8
0
.
06
0
.
0 7
0
0
.
10
O
2
.
3 3
0
0
0
O
0
0
0
9
6
.
7 7
0
0
0
0
0
0
0
.
0
0
D
0
.
0 2
0
0
0
0
0
0
.
05
0
0
0
0
0
0
0
6
3
.
4 3
0
0
0
.
0 6
0
.
0 5
0
.
09
0
1
.
22
0
.
8 1
0
0
0
.
0 7
0
0
.
0 5
0
0
0
0
0
0
0
l 4
6
.
8 0
0
7
,
2 1
0
0
0
0
0
0
.
1 2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
.
3 7
0
0
0
0
0
0
.
3 8
0
0 2 7
0
0
0
0
0
06125834
8
.
3 5
注 :第一列为 a 值 , 第一行为样品号 , 表中数值为 R A 值 , a 值为 1 者为乙酞撷草素峰 , a 值为 1 . 30 者为撷草素峰 。
中药材第 26 卷第 4 期 20 3 年 4 月 · 2 57 ,
表 4 7 个样品的六强峰 (丫R A )
样品 占总面积 (% )
1
.
30 / 3 5
.
1 4
0
.
0 7/ 7
.
0 4
1
.
30 / 28
.
7 7
1
.
30 / 52
.
08
1
.
30 / 9 5
.
10
1
.
30 / 2
.
66
0
.
07 / 2
.
2 3
0
.
0 7/ 1 4
.
0 9
1
.
0 / 6
.
0 5
0
.
0 7/ 1 7
.
43
0
.
0 7八 7. 48
0
.
07 / 1 6
.
0 8
1
.
18 / 2
.
9 4
1
.
0八 . 2 2
0
.
0 9 4/ 3
.
64
1
.
30 / 5
.
8 3
0
.
1 1 / 84
.
8 4
1
.
0 / 5
.
0 2
1
.
0 / 9
.
9 3
0
.
0 7/ 2
.
1 5
0
.
03 7/ 1
.
2 0
1
.
1/ 43
.
2 4
1
.
1 8 / 0
.
3 6
1
.
0 / 4
.
61
1
.
18 / 4
.
8 1
1
.
41 / 3
.
9 6
0
.
2 4 6/ 1
.
7 7
1
.
0 6/ 0
.
8 1
1
.
00 / 2
.
8 3
0
.
71 1/ 0
.
29
1
.
1 8 / 2
.
1 8
0 1 1 4/ 3
.
9 3
1
.
1 8 / 3
.
3 8
0
.
28 / 40
.
53
0
.
2 1 2 / 0
.
7 5
1
.
2 1/ 2
.
0 2
1
.
33 / 0
.
1 5
1
.
3 / 61
.
66
1
.
1 / 43
.
1 0
0
.
1 5/ 2
.
71
0
.
64 4/ 0
.
7 4
0
.
2 8 4/ 0
.
1 0
面积和
61
.
1 4
20
.
4
63
.
49
8 6
.
42
9 4
.
89
1 0
.
0 7
6
.
31
9 5
.
8
9 7
.
0
9 1
.
4
9 6
.
4
9 6
.
0
8 4
.
5
9 2
.
8
4
.
2 7个样品的 H L P C六强峰 自 13 个样品中挑
选出峰数达 13 及 13 以上的样品共 7个 , 每个样品
均选出其中峰面积最大的 6 个峰排列成表 ,得 7 个
样品的六强峰表 , 见表 4 。
4
.
3 特征指纹峰 以上述 7 个样品的六强峰为主
体 ,并结合它们在 13 个样品中出现 的频率 , 。 值为
0
.
0 3 7 和 0 . 0 7 两个峰因位于溶剂附近 ,受干扰严重
而不用 , 选 出 a 值为 0 . 1 14 、 0 . 2 6 4 、 0 . 7 1 2 、 1 . 0 0 、
1
.
0 6
、
1
.
1 8
、
1
.
3 0 共 7 个色谱峰为撷草属植物的指
纹特征峰 。 现将 13 个样品的指纹特征峰检出情况
列于表 5 ,并列出样品中撷草素和乙酞撷草素含量 ,
以寻找两者之间的相关性 。 表 5 反映了四种撷草属
植物的化学成分内在特性 ,特征峰群可鉴别撷草属
植物 , 以供药用 。 指纹特征的检出率与撷草素类成
分含量的相关性将构成撷草类药材质量标准的重要
内容之一 。
表 5 13 个样品的指纹特征峰检出率和
撷草素 、 乙酞撷草素含 t
及二种撷草素成分含量的比较研究 (见表 6) 发现 :
撷草类生药蜘蛛香 、 撷草 、宽叶撷草和黑水撷草之间
撷草素类成分含量差异显著 ,其中以蜘蛛香含量最
高 ,撷草次之 , 宽叶撷草再次 , 黑水撷草含量最低 。
不 同产地的蜘蛛香中撷草素类成分含量差异较大 ,
其中以贵州贵阳蜘蛛香含撷草素类成分最高 。 不同
产地的撷草 中撷草素类成分含量差异也较明显 , 其
中以重庆南川产撷草含撷草素类成分最高 。 撷草 、
宽叶撷草和黑水撷草根茎药材在外观和显微鉴别上
都较难区分 ,从表 6 看出 ,它们的撷草素和乙酞撷草
素峰面积比值具有较明显 的指纹特征 , 可作为它们
的鉴别指标 。 它们的重叠率 、检出率 、撷草素成分含
量之间呈正相关性 。
表 6 根茎及根之间的相似性
纂污 指纹特征峰检出率 二种领草素成分含% )
和草积素颧面比酞峰草之颧乙素
样品号 检出特征峰 撷
草素含量 ( % )
1 6 8 5
.
7 1
.
87 1 0
.
14 7
2 5 7 1
.
4 0
.
3 10 0
.
3 38
3 7 10 0 1
.
5 3 2 0
、
2 4 0
4 6 8 5
.
7 2
.
7 7 2 0
.
2 6 1
5 7 10 0 3 14 1 0
.
5 17
6 6 8 5
.
7 0
.
14 1 0
.
054
7 2 2 8
.
6 0
.
0 16 0
.
0 0 2
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.
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.
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.
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.
1 0
.
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.
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.
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.
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.
9 0
.
02 0 0
.
0 19
5 讨论
5
.
, 各种根茎及根之间的相似性 选撷草素和 乙
酞撷草素含量最高的 5 号样品为基准 ,通过与一些
根茎及根样品的指纹谱重叠率 、 指纹特征峰检出 以
·
2 5 8
·
1 80
.
9 85
.
7 12
.
42 2
.
0 1 7
3 8 3
.
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.
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.
77 0
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.
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.
7 10
.
57 3
.
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.
95 3
.
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.
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.
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.
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.
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.
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.
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.
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.
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.
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1 4 2 6
.
7 4 2
.
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.
0 3 0
.
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5
.
2 地上全植株样品之间的相似性 蜘蛛香地上
全植株样品含撷草素类成分较高 ,甚至超过了其它
撷草属植物根茎及根中撷草素类成分的含量 ,具有
很好 的开发利用价值 。 除蜘蛛香外 ,其它撷草属植
物地上全植株样品含撷草素类成分极低 , 因此 ,地上
全植株样品的指纹谱研究已无意义 。
5
.
3 量化 色谱指纹谱可产生一 系列参数 这类参
数包括重叠率 、 n 强峰 、 特征峰以及指纹特征检出率
等 ,为鉴定和区分药材的品质提供了科学 、 客观 、公
正的依据 。
中药材第 26 卷第 4 期 20 3 年 4 月
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图 缘草属药用植物 H P L C 指纹图谱
` 南川绷草根茎 b . 云 南开远蜘蛛香地上全植株 c . 贵州安顺蜘蛛香根茎 d . 宽叶濒草根茎 (数字代表六强峰 , “ * ” 代表
指纹特征峰 )
参 考 文 献
卫生部药典委员会 . 中华人民共和国药典 ( 一部 ) . 北
京 :人民卫生出版社 , 19 78 : 63
2 郭济贤 ,等 . 撷草类专题研究 , 见 : 常用中药材品种整
理和质量研究 (第 2 册 ) . 福州 : 福建科学技术出版社 ,
1 99 7
: 4 9 0
( 2X() 2
一 0 9 一 0 9 收稿 )
本 刊 通 知
从 2侧X〕年 10 月 1 日起本刊对来稿收取处理费 (每篇 l以X )字以下 10 元 , l砚旧字以上 30 元 ) ,请作者在邮寄稿件的同时将
处理费通过邮局寄到本刊编辑部 (请勿在稿件中夹带现金 ) 。 汇单上请注明论文题目及第一作者姓名 。
中药材第 26 卷第 4 期 2X() 3 年 4 月 2 59