全 文 ：兰属(Cymbidium)植物在全世界约有48种， 其
中中国有 29种[1]， 海南有 10种[2]。 我国兰属植物
被称为国兰或中国兰， 大部分具有很高的观赏价值
及经济价值。 由于自然杂交的结果， 兰属植物变异
性很高， 中间类型较多， 种的界限不明确， 给花卉
品种的整理和研究带来一定的困难。
在我国， 国兰拥有众多的爱好者， 贸易额极
大， 正确处理其分类问题具有重要的经济意义。 近
年来， 陆续有学者从细胞学标记[3-4]、 同工酶技术[5]
和RAPD标记[6-7]等方面分析兰属植物中不同种或不
同品种间的亲缘关系， 并取得了一些成果。 但利用
SRAP技术分析兰属植物遗传多样性的研究尚未见
报道。 本文运用 SRAP技术研究 8种海南野生兰属
植物的遗传多样性， 构建亲缘关系指纹图谱， 为今
利用 SRAP技术分析海南野生兰属
植物的亲缘关系①
杨光穗② 任 羽 王荣香
(中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/
农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室 海南儋州 571737)
摘 要 利用 SRAP分子标记技术对 8种海南野生兰属植物的遗传多样性和亲缘关系进行分析。 结果显示： 从
30对引物中筛选出 20对 SRAP引物组合， 共扩增出 195条多态性条带， 平均每个引物组合产生 9.75个多态性
条带。 UPGMA聚类分析可将 8种供试材料划分为 4类： 第Ⅰ类为冬凤兰； 第Ⅱ类为纹瓣兰； 第Ⅲ类为多花兰和
独占春； 第Ⅳ类为寒兰、 建兰、 墨兰和兔耳兰， 这与传统的形态分类学结果基本一致。 本研究可为兰属品种的
鉴定和系统分类研究提供依据。
关键词 兰属 ； SRAP； 聚类分析 ； 亲缘关系
分类号 S682.31
Analysis of Genetic Relationship of Wild Cymbidium in Hainan by Using SRAP
YANG Guangsui REN Yu WANG Rongxiang
（Tropical Crops Genetic Resources Institute/Ministry of Agriculture Key Laboratory of Tropical Crop
Germplasm Resources Utilization, CATAS, Danzhou, Hainan 571737）
Abstract In this research, sequence-related amplified polymorphisms （SRAP） molecular markers was
used to detect the genetic diversity and relationship among 8 cymbidium species in Hainan. The result
showed 195 polymorphic bands were generated by 20 SRAP primer combinations selected from 30 ones.
9.75 polymorphic bands were generated by each primer combination on average. UPGMA cluster analysis
indicated that the germplasms were divided into 4 clusters based on SRAP marker, clusterⅠwas composed
of C. dayanum; clusterⅡ included C. aloifolium; cluster Ⅲ was composed of C. floribundum and C.
eburneum, C. kanran, C. ensifolium, C. sinense and C. lancifolium belonged to cluster Ⅳ . The result
showed approximate consistency to the traditional morphological classification, in addition, the research
could offer reference to identification and phylogenetic classification of cymbidium species.
Keywords Cymbidium ; SRAP ; cluster analysis ; genetic relationship
① 基金项目： 林业科技推广项目 “海南野生兰花资源开发及高效利用技术示范推广 ”； 海南省自然科学基金项目(No.
30824)； 中国热带农业科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(No.PZS067)。
收稿日期： 2011-03-01； 责任编辑/黄东杰； 编辑部 E-mail： rdnk@163.com。
② 杨光穗(1972～)， 女， 硕士， 副研究员， 研究方向为热带花卉资源及栽培生理。
Vol．31, No．9
2011年9月 热 带 农 业 科 学
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE
第31卷第9期
Sep． 2011
1- -
2011年9月 第31卷第9期热带农业科学
后兰属植物的分类、 育种及杂交亲本的选择提供了
分子水平上的参考。
1 材料与方法
1. 1 材料
试验所用的8种野生兰属植物材料分别收集于
海南省尖峰岭、 黎母山、 坝王岭等山区中， 保存于
中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所热带
兰种质圃。 材料信息见表1。
1. 2 方法
1. 2. 1 DNA的提取
采集新鲜兰属植物幼嫩叶片 0.2g， 提取基因
组DNA， 其提取方法参照顾红雅等[8]的方法， 并做
了相应改进。 调节DNA浓度为10ng/μL。
1. 2. 2 SRAP分析
反应总体积为25μL， 其中模板100ng， Taq酶
1.5U， Mgcl21.5mmol/L， 引物 1.5×10-5mmol/L，
dNTPs0.2mmol/L， 10×buffer2.5μL。 扩增程序
为： 94℃预变性5min； 94℃变性1min， 35℃复性
1min， 72℃延伸1min， 5个循环； 94℃变性1min，
50℃复性 1min， 72℃延伸 1min， 35个循环； 最
后 72℃延伸 10min。 取 PCR产物 5μL于6%的聚丙
烯酰胺(7mol/L尿素)电泳分析。 电泳缓冲液为1×TBE。
电泳时， 用140W的功率预电泳30min， 上样后用
同样的功率电泳2.5～3.0h， 电泳后银染， 具体操
作参照许绍斌等[9]的方法。
1. 2. 3 数据处理
根据PCR扩增结果， 每个样品的扩增带数按有
带赋值为1， 无带赋值为0进行标记读带， 不具多
态性的带不予考虑， 建立 1， 0型数据。 每 2个品
种间的遗传相似系数用 Nei等的公式计算： GSij＝
2Nij/(Ni＋Nj)， 式中 Nij指2品种共有的带数， Ni＋
N j 指 2品种所有带数之和。 利用 MVSP3.1软件计
算相似系数 ， 获得相似系数矩阵 ， 用 UPGMA(Un-
weightedpairgroupmethodarithmeticaverage， 算术平均数
非加权成组法)进行聚类分析， 并构建树状图。
2 结果与分析
2. 1 种间遗传多样性分析
在 SRAP分析中， 采用 30对引物组合对 8种兰
属植株材料进行扩增， 其中 20对引物组合可扩增
出清晰的多态性条带， 共扩增出 195条多态性带
(图 1为引物 me3-em4的扩增结果)， 每对引物组合的多
态性条带数为3～20条不等， 平均每对引物组合产
生9.75个多态性条带。
2. 2 聚类分析
根据SRAP分析建立的1， 0型数据， 计算出成
对种间遗传相似系数为 0.163～0.656。 以种间遗
传相似系数为基础， 按UPGMA法进行聚类分析并作
聚类图(图 2)。 利用 SRAP标记进行聚类分析时，
在相似系数0.42处可将参试种分为4类： 第Ⅰ类：
冬凤兰； 第Ⅱ类： 纹瓣兰； 第Ⅲ类： 多花兰和独占
春； 第Ⅳ类： 寒兰、 兔耳兰、 墨兰和建兰。 在此分析
中， 多花兰与独占春的亲缘关系最近， 建兰与寒兰的
亲缘关系较近， 而冬凤兰与其它7种兰属植物的亲缘
关系最远， 这与传统的形态学分类结果基本一致。
3 讨论
兰属植物的分类主要以形态学特征为依据， 德
表 1 供试材料及来源
编号 材料名称 来源
1 Cymbidium ensifolium(建兰) 黎母山
2 C. aloifolium(纹瓣兰) 坝王岭
3 C. sinense(墨兰) 坝王岭
4 C. kanran(寒兰) 坝王岭
5 C. lancifolium(兔耳兰) 黎母山
6 C. eburneum(独占春) 尖峰岭
7 C. dayanum(冬凤兰) 坝王岭
8 C. floribundum(多花兰) 坝王岭
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杨光穗 等 利用SRAP技术分析海南野生兰属植物的亲缘关系
国的形态分类学家施莱希特以及英国的分类学家
Puy和 Cribb将建兰、 寒兰和墨兰划为建兰组[10]，
吴应祥[10]将建兰、 墨兰、 寒兰和春剑等划为蕙组的
小花亚组， 独占春等划分在大花亚组。 《中国植物
志》 第十八卷[11]把兰属分为 3个亚属 10个组。 一
般认为建兰、 寒兰和墨兰的亲缘关系较近， 而独占
春和兔耳兰与它们的亲缘关系较远。 而本研究显
示， 墨兰和建兰的亲缘关系最近， 这与孙彩云等[7]
的研究结果一致 ， 与梁红健等[12]人用同工酶和
RAPD标记均证实寒兰和建兰的亲缘关系最近不同；
从聚类图上看出， 兔耳兰先与墨兰和建兰聚在一
起， 而后与寒兰聚在一起， 这表明兔耳兰与它们的
距离较近； 陈心启[11]将兔耳兰归于建兰亚属的兔耳
兰组， 而吴应祥[10]将兔耳兰定为一个独立的组。 王
慧中等[13]用RAPD技术分析的结果表明， 兔耳兰与大
花亚属材料属于同一组， 但AFLP技术分析的结果则
表明， 兔耳兰与建兰亚属并在同一组。 张明永等[14]
分析了兰属27个种、 3个栽培品种的DNA-ITS区段
序列， 其中对兔耳兰的分析结果与吴应祥的一致。
本试验结果与王慧中的 AFLP结果一致， 即兔耳兰
与建兰亚属并在同一组。 由此看来， 兔耳兰的系统
分类定位还有待于采用更多样本做进一步验证。 同
属于兰亚属的冬凤兰和纹瓣兰各聚为一类， 它们在
兰亚属中分别属于带叶组和硬叶组； 属于兰亚属多
花组的多花兰与属于大花亚属腋花组的独占春聚为
一类， 而且二者表现出较近的亲缘关系， 与传统的
形态分类存在差异。 因此， 二者的分类仍有待于形
态学与分子生物学水平的进一步研究。
此外， SRAP聚类分析结果与形态学分类结果
基本一致， 说明 SRAP技术适用于兰属植物的系统
学及亲缘关系鉴定的研究。 SRAP多态性从分子水
平上揭示了基因组的差异， 这将为兰属植物的分
类、 育种和杂交亲本的选择提供重要依据。
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