全 文 ：2005年 12月
2005, 27(4):7— 12
中国油料作物学报
Chinese journa l of oil crop sciences
甘蓝型油菜与芸芥属间杂种 F1 的获得及鉴定
戴林建 , 李　 , 官春云 , 陈社员 , 钟　军
(湖南农业大学农学院 ,湖南 长沙 410128)
摘要:常规有性杂交很难获得油菜与芸芥的属间杂种。通过对早期杂种胚胎的子房培养 , 获得 128株小苗。
经形态学鉴定 , 其中 24株为真杂种。运用分子标记技术 (RAPD)进行真假杂种检测 , 87%的单株带有芸芥特异的
标记带。在培养中 , 适宜的生长素和细胞分裂素浓度以及恰当的子房离体前的发育时间能提高成胚数和成胚率。
关键词:油菜;芸芥;子房培养;RAPD
中图分类号:S565. 403. 5　文献标识码:A　 文章编号:1007— 9084(2005)04— 0007— 06
　　随着油菜育种工作的逐渐深入 ,种内 、种间的遗
传资源利用日益枯竭 ,特别是某些单 、双低油菜的遗
传基因较为单一 ,以致抗性较差 、产量较低 。因此 ,
近年来育种学家们不断地寻找新的种质资源 ,以提
高油菜育种效率 。芸芥(E ruca sativa m ill, 2n=22),
又名 Rocketsalad ,泛指中国芝麻菜属的所有种 ,芸芥
适应性强 ,具有抗旱 、耐瘠 、抗 (耐 )病 、耐盐碱等优
良性能 ,是世界上干旱 、半干旱地区的重要油料作
物 ,也是迄今为止人们发现的最为抗旱耐瘠的十字
花科油料作物。由于其抗旱 、耐瘠性能远远优于芸
薹属油料作物中最为抗旱的芥菜型油菜 ,因此是芸
薹属油料作物乃至整个十字花科植物育种的重要资
源 [ 1] 。国内外许多学者 [ 1 ～ 3]研究表明 ,芸薹属与其
他属间杂交困难 ,通过常规的有性杂交方法很难获
得真正的杂种 ,往往要借助组织培养技术 ,如子房培
养 、胚培养 、原生质体融合等 ,才能实现异源种间或
属间的基因转移 。本试验试通过属间杂交获得 F1
杂种 ,把芸芥的优良性状转移到广为栽培的甘蓝型
油菜中去 ,通过形态学观察 、细胞学鉴定和 RAPD分
析 ,区分真假杂种 ,以期建立一种新型 、准确 、快速 、
经济 、简便有效的分子生物学检测真假杂种的方法 。
1　材料与方法
1. 1　材料
供试植物材料包括柴门芸芥 、青城芸芥 、迈边芸
芥和郭城芸芥 4个芸芥 (Eruca sativa)品种 ,由甘肃
省农业科学院提供;湘油 15号 、571抗倒 、742特 、
681A和 G 851A等 5个甘蓝型油菜 (Brassica napus)
品种 (系),由湖南农业大学油菜作物研究所提供 。
1. 2　远缘杂交
上述材料秋播 ,常规栽培管理 ,次年春季配制杂
交组合 ,按常规方法进行有性杂交 。以结角率和结
籽率作为杂交亲和性的评判指标 。结角率 =收获的
角果数 /授粉花朵数 ×100%,结籽率 =饱满种子数 /
授粉花朵数 ×100%,角粒数 =饱满种子数 /结实角
果。
1. 3　子房培养
在授粉后 2、4、6、8、10、12、14、16d,分别剪取授
粉子房 ,用 70%酒精浸泡 1m in,再用 0. 1%的升汞
消毒 10m in,然后用无菌水冲洗 3次 ,接种在不同处
理的培养基中 (表 2),培养基加琼脂 0. 8%, 蔗糖
3%。接种后置于温度 (22 ±2)℃,光照 1 500 lx,日
光照 14h的环境中培养 。子房培养 4周后 ,用解剖
针轻轻划破种皮 ,取出种子中的幼胚 ,置于培养基中
培养 。 36d后 ,调查统计。待子叶伸长或长出丛生
芽 ,用 MS+0. 1mg /L NAA+1mg /L 6 -BA培养基继
代培养 ,移栽前转接到 1 /2M S或 1 /2MS +0. 5mg /L
IBA生根培养基中。
1. 4　杂种鉴定
1. 4. 1　细胞学鉴定　(1)花粉母细胞减数分裂的
观察:取以上组织培养幼苗诱 导出根尖 , 用
0. 002mo l /L 8 -羟基喹啉水溶液预处理 4h ,用卡诺
氏固定 6 ～ 12h ,压片前用 1mo l /L HC l于 60℃水解
12m in,用改良苯酚品红染色 、压片 、镜检。 (2)花粉
育性观察:在上午 10 ～ 12时 ,取将开花 F1植株的花
药用荧光素二醋酸脂 (FDA)法在荧光显微镜下鉴
收稿日期:2005— 05— 16
基金项目:国家自然科学基金项目(39830270)
作者简介:戴林建(1969— ),男 ,汉族 ,湖南永兴人 ,博士 ,副教授 ,主要从事作物遗传育种工作。
定花粉育性 。
1. 4. 2　分子标记 (RAPD)鉴定　(1)基因组 DNA
提取:子房培养获得的 24株小苗采用尿素法提取
DNA
[ 4] 。 (2)RAPD反应:将提取的 DNA配制成浓
度 20ng /μL作为模板 ,并依据 RAPD优化的参数进
行扩增反应 。在 30μL的反应体积中:10 ×buffer
3μL, 2. 0mmo lM g2+ 2. 4μL, 0. 1mmol dNTP 0. 6μL,
0. 2μmol prime r 2μL, Taq po lyme rase 0. 3μL(1. 5U),
模板 DNA 2μl, H2O 19. 7μL,最后加 22μL矿物油覆
盖 。反应程序为:预变性 94℃ 3m in;第 1 ～ 39个循
环为 94℃变性 40s、36℃复性 1m in、72℃延伸 2m in;
72℃后延伸 10m in。取 25μL RAPD扩增的反应产
物于 2%琼脂糖凝胶上电泳 ,电泳缓冲液 1×TAE ,
DNA分子量 M arker为 DNA /Hind Ⅲ ,电场强度为 2
～ 3V /㎝ ,电泳 2 ～ 3h,在凝胶成像系统中观察并照
相 。
2　结果与分析
2. 1　甘蓝型油菜与芸芥的杂交亲和性表现
甘蓝型油菜的雄性不育系的杂交亲和性最高 ,
共授粉 3 659朵花 ,获得 232个角果 , 139粒饱满种
子 ,空秕粒 66粒 ,平均结角率仅为 6. 25%,平均结
籽率为 3. 77%,平均角粒数为 0. 59。甘蓝型油菜作
母本 ,芸芥作父本的 12个正交组合的亲和性次之 ,
平均结角率为 2. 73%,平均结籽率为 1. 21%。 9个
芸芥 ×甘蓝型油菜的反交组合的亲和性最低 ,平均
结角率仅为 1. 66%,平均结籽率为 0. 70%。表 1的
结果表明甘蓝型油菜与芸芥杂交高度不亲和。
所得种子秋播 , 经形态学观察均为偏母植
株 [ 5] 。
2. 2　杂种的获得 (子房培养 )
2. 2. 1　不同激素处理对离体子房发育的影响　试
验结果 (表 2)表明 ,所有不同浓度激素组合及无激
素培养基处理 ,均获得了湘油 15号与芸芥的杂种
胚 ,以 1. 0mg /L NAA +0. 5mg /L 6 -BA组合效果最
好 。在单加生长素 (NAA)的培养基里 ,子房发育
好 ,成胚数和成苗数多 ,其中以 1. 0mg /L的浓度效
果最好 。单加细胞分裂素 (6 - BA)时 , 低浓度
(0. 5mg /L)较中 、高浓度(1. 0 ～ 1. 5mg /L)有利于提
高成胚数和成苗数 。在两种激素的不同浓度组合
中 ,在供试的生长素浓度范围内与较低浓度细胞分
裂素组合 ,能提高成胚数和成苗数 ,而与较高浓度的
细胞分裂素组合 ,成胚数和成苗数明显减少。
2. 2. 2　授粉后子房发育天数对离体子房发育的影
响　授粉后的时间对离体杂种胚的发育有很大影响
(表 3)。从表 3中可以看出:除授粉后 16d的杂种
子房在离体培养条件下未获得杂种胚外 ,其他处理
都获得了杂种胚和幼苗 ,其中以授粉后 6 ～ 8d处理
的子房生长量最大 ,成胚数和成苗数最多 ,相应的每
角平均成胚数和成苗率也是最高;授粉后超过 10d
的子房处理 ,随授粉后天数的增加 ,子房生长量逐渐
变小 ,成胚数和成苗数逐渐减少以及每角平均成胚
数和成苗率逐渐降低 ,至 16d的处理未获得杂种胚。
2. 2. 3　幼胚在培养基中的生长情况　培养 2周后 ,
待幼胚生长到一定的大小 ,切取胚轴和子叶接种到
同样的培养基上 ,再培养 2周后 ,能直接分化丛生芽
和胚状体或形成愈伤组织。芽和胚状体再转到新鲜
培养基中 ,均能形成无根苗;愈伤组织再转到分化培
养基也能分化出芽和胚状体(图 1A , C)。但不同的
杂交组合之间以及不同的激素处理对离体胚的生长
和发育有较大的影响 。分化的无根苗在 1 /2M S +
0. 5mg /L IBA中都能生根 。接种后 10 ～ 15d能形成
2 ～ 3cm长的根 , 25d后即可移栽 ,成活率 65%左右。
本实验共获得子房培养的小苗 128株。
2. 4　杂种的鉴定
2. 4. 1　细胞学鉴定　将子房培养获得的 128株小
苗移栽于大田 ,对其不同的生长发育阶段进行形态
观察 ,其中 104株的形态与双亲之一相似 ,另 24株
的形态倾向双亲之一或介于双亲之间。如:叶形介
于双亲之间 ,色泽有的倾向母本 ,有的倾向父本 ,有
的比双亲更深 (图 1 -B)。对 24株幼苗的根尖压片
观察 , 13%(3株 )与母本染色体数目相同 ,即 2n =
36;87%(21株 )幼苗染色体数目介于母本和父本之
间 ,即 2n=30, 2n=30的个体可初步定为杂种幼苗。
24株花粉育性的鉴定 ,其中 21株花粉育性降低 ,通
过 FDA鉴定 ,有活力的花粉约占 15% ～ 25%,平均
为 20. 4%。
2. 4. 2　F1杂种的 RAPD分析和杂种鉴定　本实验
用 100个随机引物对子房培养获得的 24株 F1植株
DNA进行了扩增分析 ,引物 S358、S388、S472均能
使 3种组合的 F1产生父本标记带(图 2),故被确定
为 3个组合杂种鉴定的引物。用筛选出的 RAPD标
记引物分别对 3个组合杂种一代的 DNA进行扩增
分析 ,引物 S358在湘油 15号 ×柴门芸芥组合的
RAPD反应中 , 编号为 3#、 5#、6#、 8#、 10#、 11#、 12#、
13
#、14#的 9个单株中扩增出约 900bp的父本标记
带 ,其余的均没有扩增出这一片段;引物 S472在湘
8 中国油料作物学报　2005, 27(4)
表 1　甘蓝型油菜与芸芥杂交亲和性表现
Tab le 1　　Compatib ility betw een B. napus andE. sativa
杂交组合
C ro ss combination
处理花蕾数
N o. o f buds
po llina ted
结角数
N o. of
silique
结角率 /%
Ra tio o f
silique se tting
饱满粒数
N o. o f full
seeds
秕粒数
No. o f empty
seeds
结籽率 /%
Ra tio o f
seed setting
平均角粒数
No. o f seed
pe r silique
湘油 15号 ×柴门芸芥 X iangyou 15×chaimen Rocke tsalad 825 46 5. 85 21 18 2. 55 0. 46
湘油 15号 ×青城芸芥 X iangyou 15×qingcheng Rocke tsalad 429 12 2. 80 5 6 1. 17 0. 42
湘油 15号 ×郭城芸芥 X iangyou 15×guocheng Rocketsa lad 482 11 2. 28 4 2 0. 83 0. 36
湘油 15号 ×迈边芸芥 X iangyou 15×manbian Rocketsa lad 527 9 1. 71 2 5 0. 38 0. 22
571抗倒 ×柴门芸芥 571 Kangdao×chaim en Rocke tsa lad 439 16 3. 65 8 8 1. 81 0. 50
571抗倒 ×青城芸芥 571 Kangdao×qingcheng Rocke tsalad 458 11 2. 40 5 10 1. 09 0. 46
571抗倒 ×郭城芸芥 571 Kangdao×guocheng Rocke tsalad 420 9 2. 14 5 7 1. 19 0. 56
571抗倒 ×迈边芸芥 571 Kangdao×manb ian Rocketsa lad 484 12 2. 48 4 6 0. 83 0. 34
742特 ×柴门芸芥 742 T e×cha imen Rocketsa lad 348 14 4. 02 8 10 2. 30 0. 57
742特 ×青城芸芥 742 T e×qingcheng Rocketsa lad 365 7 1. 92 4 5 1. 10 0. 57
742特 ×郭城芸芥 742 T e×guocheng Rocketsa lad 412 8 1. 94 3 4 0. 73 0. 38
742特 ×迈边芸芥 742 T e×manbian Rocke tsalad 389 6 1. 54 2 4 0. 51 0. 34
总计 To ta l 5 578 161 71 85
平均 M ean 2. 73 1. 21 0. 43
迈边芸芥 ×湘油 15号 M anbian Rocke tsa lad×Xiangyou 15 625 13 2. 08 5 8 0. 80 0. 39
迈边芸芥 ×571抗倒 M anbian Rocke tsalad×571 Kangdao 480 4 0. 83 1 5 0. 21 0. 25
青城芸芥 ×湘油 15号 Q ingcheng Rocketsa lad×X iangyou 15 664 11 1. 66 4 1 0. 60 0. 36
青城芸芥 ×571抗倒 Q ingcheng Rocke tsa lad×571 Kangdao 579 6 1. 04 4 1 0. 70 0. 67
柴门芸芥 ×湘油 15号 Cha imen Rocketsa lad×X iangyou 15 760 24 3. 16 11 21 1. 45 0. 45
柴门芸芥 ×571抗倒 Chaimen Rocketsa lad×571 K angdao 622 14 2. 25 8 12 1. 29 0. 57
柴门芸芥 ×742特 Chaimen Rocketsa lad×742 T e 680 19 2. 80 7 5 1. 03 0. 37
郭城芸芥 ×湘油 15号 G uocheng Rocketsa lad×X iangyou 15 460 2 0. 43 3 2 0. 65 1. 50
郭城芸芥 ×571抗倒 G uocheng Rocketsa lad×571 K angdao 428 3 0. 70 2 0 0. 47 0. 67
总计 To ta l 5 298 96 45 63
平均 M ean 1. 66 0. 70 0. 58
681A ×柴门芸芥 681A ×chaimen Rocke tsa lad 512 42 8. 20 28 15 5. 47 0. 67
681A ×青城芸芥 681A ×qingcheng Rocke tsalad 548 36 6. 57 21 6 3. 83 0. 58
681A ×郭城芸芥 681A ×guocheng Rocke tsa lad 482 31 6. 43 16 11 3. 32 0. 52
681A ×迈边芸芥 681A ×manbian Rocketsa lad 465 28 6. 02 11 9 2. 37 0. 39
G851A×柴门芸芥 G851A ×cha imen Rocketsa lad 442 35 7. 92 22 10 4. 98 0. 63
G851A×青城芸芥 G851A ×qingcheng Rocketsa lad 386 21 5. 44 14 8 3. 63 0. 67
G851A×郭城芸芥 G851A ×guocheng Rocke tsa lad 435 25 5. 75 16 5 3. 68 0. 64
G851A×迈边芸芥 G851A ×manbian Rocke tsalad 389 14 3. 60 8 2 2. 83 0. 57
总计 To ta l 3 659 232 139 66
平均 M ean 6. 25 3. 77 0. 59
A , C愈伤组织分化出小苗;B小苗的叶型介于双亲之间 ,色泽变浓绿
A , C:Seed lings regenerated f rom the callu s;B:The seed lings leaf sh ape w as betw eenm oth er and fathers, the colour becom e dark green
图 1　甘蓝型油菜 ×芸芥杂种胚在培养基中的生长情况
F ig. 1　　G row th and perform ance of em bryoes of hybrid s be tweenB. napus and E. sativa inm ed ia
9戴林建等:甘蓝型油菜与芸芥属间杂种 F1的获得及鉴定
表 2　激素处理对离体甘蓝型油菜 ×芸芥杂种子房发育的影响
Tab le 2　　E ffect of concentra tion and combina tion s of horm ones on the in vitro
deve lopm ent of excised ovar ies of hybrid s be tweenB. napus and E. sativa
激素处理 /(m g /L)
H ormone treatm en t
NAA 6 -BA
接种子房
数(A)
No. of
ovaries
成熟角果平均
长度 /mm ±SD
Length of
m ature siliqu es
成胚数(B)
N o. of
emb ryos
form ed
成苗数(C)
No. of
seed lings
form ed
每角果平均
成胚数(B /A)
No. of em bryos
form ed per silique
成苗率(C /B)
Ratio of
seed lings
form ed
0. 0 0. 0 16 51. 78±4. 19 2 1 0. 13 0. 50
0. 5 0. 0 16 62. 15±5. 34 8 3 0. 50 0. 38
1. 0 0. 0 16 65. 28±6. 09 11 7 0. 69 0. 64
1. 5 0. 0 16 66. 25±6. 31 10 4 0. 63 0. 40
0. 0 0. 5 16 58. 23±4. 97 6 4 0. 38 0. 67
0. 0 1. 0 16 56. 19±4. 76 4 2 0. 25 0. 50
0. 0 1. 5 16 54. 12±4. 58 3 2 0. 19 0. 67
0. 5 0. 5 16 58. 23±5. 17 6 1 0. 38 0. 17
0. 5 1. 0 16 64. 09±5. 45 8 2 0. 50 0. 25
0. 5 2. 0 16 62. 56±5. 58 2 0 0. 13 0. 00
1. 0 0. 5 16 69. 26±6. 35 14 11 0. 88 0. 79
1. 0 1. 0 16 61. 98±5. 01 3 0 0. 19 0. 00
1. 0 2. 0 16 53. 87±4. 67 6 2 0. 38 0. 33
1. 5 0. 5 16 65. 12±5. 86 9 5 0. 56 0. 56
1. 5 1. 0 16 65. 24±5. 80 3 0 0. 38 0. 00
1. 5 2. 0 16 61. 76±5. 04 2 1 0. 13 0. 50
表 3　授粉后子房发育天数对甘蓝型油菜 ×芸芥杂种离体子房发育的影响
Tab le 3　　E ffect of days after pollination on the deve lopm ent of ovary exc ised in the cross ofB. napus and E. sa tiva
授粉后天数
/d
Days after
pollian tion
接种时子房长度
/mm ±SD
M ean leng th of
ovaries inocu lated
成熟子房平均
长度 /mm ±SD
M ean length of
m atu re si liques
子房长度
生长量 /mm
M ean grow th
volum e of ovaries
成胚数(B)
No. of
emb ryos
form ed
成苗数(C)
N o. of
seed lings
form ed
每角平均成
胚数(B /A*)
N o. ofm ean em b ryos
form ed p er silique
成苗率(C /B)
Ratio of
seedlings
form ed
2 7. 61±0. 81 25. 94±2. 45 18. 33 2 1 0. 13 0. 50
4 8. 92±1. 21 34. 65±3. 55 25. 73 9 5 0. 56 0. 56
6 9. 91±1. 67 51. 62±4. 28 41. 71 18 12 1. 13 0. 67
8 10. 43±1. 38 51. 29±4. 79 40. 86 14 8 0. 88 0. 57
10 14. 65±1. 76 51. 22±4. 29 36. 57 7 3 0. 44 0. 43
12 18. 01±1. 82 50. 12±4. 54 32. 11 4 1 0. 25 0. 25
14 22. 38±1. 23 50. 08±3. 64 27. 70 2 1 0. 13 0. 50
16 24. 05±0. 85 49. 21±2. 26 25. 16 0 0 0. 00 0. 00
　　注:*各处理接种子房数(A)均为 16个 ,培养基的激素组合为:1. 0m g /L NAA+0. 5mg /L 6 -BA
　　Note:* Num ber of cu ltu red ovariesw as 16. C om b ination of horm ones inm ed ia w as 1. 0m g /L NAA+0. 5mg /L 6 -BA
1, m arker;2,母本 m oth er 3,父本 fath er 4, F1杂种 F1 hyb rids
图 2　引物 S358、S388、S472的 DNA扩增带型
F ig. 2　　D istinc tDNA band pattern am plif ied by pr im ers S358、 S388、S472
10 中国油料作物学报　2005, 27(4)
油 15号 ×郭城芸芥组合的 RAPD反应中 , 5个单株
中也全部扩增出约 600bp的父本标记带;引物 S388
在柴门湘油 15号 ×青城芸芥组合的 RAPD反应中 ,
7个单株全部扩增出约 500bp的父本标记带 (图
3)。具有父本标记带的单株是真杂种 ,所占比例为
87%。
M , m arker;1,母本 m oth er;2,父本 father
图 3　F1植株 DNA扩增带型
F ig. 3　　D istinctDNA band pa ttern ofF1 hybrid s
3　讨论
3. 1　远缘杂交
许多学者研究表明芸薹属与芸芥属间杂交属于
高度不亲和 。本研究在油菜与芸芥的正 、反交中 ,共
授粉 14 535朵花 ,获得 489个角果 , 255粒饱满种
子 。经形态学鉴定 , F1植株均为偏母植株。这种偏
母植株 , Sadao[ 6]等认为是由于假受精所致。偏母种
子形成频率因种 、变种 、甚至因同一品种的不同单株
而有较大差异 。 Enink[ 7]在芸芥与 B. oleracea的远
缘杂交中也发现类似现象 。有学者认为杂交不亲和
和自交不亲和在形态解剖上有一定相似性 ,因此 ,利
用克服自交不亲和性的化学物质处理柱头可能有助
于增进杂交亲和性。 Sadao[ 6] 等和 En ink[ 7] 的研究
认为化学物质处理柱头主要是增加了偏母种子 。作
者也曾报道赤霉素 、萘乙酸 、氨基乙酸等处理柱头所
获得的种子均为偏母种子 ,无一真杂种 [ 5] 。可见 ,
用化学物质处理柱头对增加杂交亲和性的作用是有
限的。要想获得真杂种 ,除了筛选亲和性高的杂交
亲本外 ,利用生物技术手段可能是一条有效的途径 。
本研究采用离体子房培养获得 128株小苗 ,经形态
学鉴定其中 24株为杂种 ,再通过细胞学和 RAPD分
子标记鉴定 21株为真杂种 。
3. 2　子房培养
探索高频率诱导远缘杂交子房培养的培养条
件 ,建立理想的子房高频率成苗系统是实现物种间
基因转移的有效手段 。本试验表明在油菜 ×芸芥离
体子房培养中 ,低浓度的细胞分裂素有利于生长素
作用的发挥 ,而高浓度的细胞分裂素有抑制生长素
的作用。如 1. 5mg /L NAA +2. 0mg /L 6 - BA的成
胚数和成苗数与无激素的培养基一样。远缘杂种子
房 ,由于杂种核与卵细胞质的代谢 ,或者胚胎与胚乳
发育不协调 ,往往导致杂种胚败育 [ 8] 。所以对于油
菜与芸芥的杂种子房在杂种胚败育之前尽早进行胚
挽救 ,以及加强早期子房培养条件的研究 ,有助于进
一步提高杂种种子的产量。
3. 3　真假杂种鉴定
RAPD技术由于是建立在 DNA分子的多态性
(DNA碱基序列的差异性)基础上 ,因而能反映遗传
本质 ,不受环境干扰 ,在理论上具有稳定性 [ 9] 。由
于杂种 F1的 RAPD带型可能存在不同的类型 ,用于
鉴定杂种的引物应该在以亲本指纹图谱为对照作初
步筛选的基础上 ,以两亲本和已知的真杂种为模板
做进一步的筛选 。在本研究中 ,引物 S335、S1098、
S1794能在父母本中扩增出互补型特异标记带 ,对
F1的 RAPD扩增图谱为偏父型;引物 S358、S388、
S472能在父母本中扩增出互补型特异标记带 ,而对
F1的 RAPD扩增图谱既不是双亲型又不是偏父型。
这一结果支持了吴敏生等关于杂种 F1 RAPD图谱
有多种类型的观点[ 10] 。 RAPD技术在分子图谱的
帮助下 ,对品种和杂种的比较可覆盖整个基因组 ,大
大提高了结果的可靠性 。本研究采用 RAPD技术鉴
定的杂种与细胞学鉴定的杂种基本吻合 。
11戴林建等:甘蓝型油菜与芸芥属间杂种 F1的获得及鉴定
参考文献:
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Regeneration and identification of intergeneric hybrid between Brassica napus and Eruca sativa
DA I Lin - jian, LIXun , GUAN Chun - yun, CHENG She - yuan, ZHONG Jun
(TheDepartmen t of Agronomy, Hunan Agricu ltura lUniversity , Changsha 410128, China)
Abstract:It is difficult to ob tain the in te rgeneric hybrid be tw eenB rassica napus andEruca sa tiva through the
rou tine crossing. Ovary cu lture o f hybrid emb ryosw as used at early phase and 128 seed ling sw ere obtained success-
fu lly. A ftermorpho logical observations 24 seedlingsw ere identified as po ten tia l hyb rid. The ana lysis of random am-
plified polymo rphicDNA (RAPD) showed 21 ou t of 24 F1 hybrid progenies(87%) carrying Eruca genome - spe-
cific RAPD marke rs, prov id ing furthe r evidences to suppo rt the speciation o f the se hybrids. Suitab le hormone and
cy tokin concen tration asw e ll as time for excising ovary w ere crucia l for increasing the numbe r of hybrid embryos
and the pecen tage of hybrid embryos.
Key words:B rassica napus L. ;E ruca sativa;Rocke tsalad;Ovary cu lture;RAPD markers
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《湖南农业科学》是由湖南省农科院 、湖南农业大学和湖南省科技厅星火办三家联合主办的国内外公开
发行的综合性农业技术类期刊 ,是湖南省一级期刊 , 2004年获全国优秀农业科技期刊技术类壹等奖。本刊
内容兼顾了不同层次读者的需要 ,适于农业科研 、教学 、推广 、管理人员和农民朋友阅读 。主要刊登遗传育
种 、作物栽培 、土壤肥料 、植保 、园艺 、畜牧 、生物技术 、农产品加工等能体现湖南农业科研特色的应用技术研
究方面的论文 、领先水平的科研成果以及有新意的文献综述等。本刊为双月刊 ,单月 27日出版 , 80页 ,大 16
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12 中国油料作物学报　2005, 27(4)