全 文 ：中国医院用药评价与分析　２０１６年第１６卷第０１期　　　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ－ｕｓｅ　ｉｎ　ｈｏｓｐｉｔａｌｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　２０１６Ｖｏｌ．１６Ｎｏ．０１　 ·１９　 ·
一点红属植物有效成分提取及抗菌活性的
研究
陈光孝，陈燕婷，黄锐涛，胡文海，纪敏琳，姜　涛＊（化学与药学系，吉林大学珠海学院，广东 珠海　
５１９０４１）
中图分类号　Ｒ１８１．３＋２　　　　文献标识码Ａ　　　　文章编号　１６７２－２１２４（２０１６）０１－００１９－０２
ＤＯＩ　
　　作者简介：陈光孝（１９９４－），男，汉族，本科。
通讯作者：姜涛（１９８２－），男，汉族，讲师，研究生硕士。
摘　要　为更好地阐明一点红抗菌消炎的药效物质及探讨其药学性质。本实验分别通过超声波法和索氏提取法对一点红药材中的生物碱类
物质以及黄酮类物质进行提取，并利用酸水提取法及有机溶剂萃取法对其进行分离纯化后，分别进行了抗菌活性的研究。结果表明：一点红
生物碱类化合物在最佳提取条件（８０％乙醇最为提取液）下的含量为１５．８３１７ｕｇ／ｍｌ；一点红黄酮类化合物在最佳提取条件（即震荡时间为
６０ｍｉｎ，固料比为１∶２０，乙醇浓度为６５％。）下含量为９．９４５ｍｇ／ｇ。一点红生物碱类化合物，在较高浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯
草杆菌的抑菌效果相差不大，都属于中度敏感。一点红黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌作用，抑菌圈直径达到２０ｍｍ，可媲美硫
酸链霉素的２１ｍｍ。但是对大肠杆菌及枯草杆菌的抑菌较弱。
关键词　一点红；生物碱类；黄酮类；抑菌活性
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｂｉｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ　ａｂｏｕｔ　Ｅｍｉｌｉａ　Ｓｏｎｅｈｉｆｏｌｉａ
Ｇｕａｎｇｘｉａｏ　Ｃｈｅｎ，Ｙａｎｔｉｎｇ　Ｃｈｅｎ，Ｒｕｉｔａｏ　Ｈｕａｎｇ，Ｗｅｎｈａｉ　Ｈｕ，Ｍｉｎｌｉｎ　Ｊｉ，Ｔａｏ　Ｊｉａｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｙ，ＺｈｕＨａｉ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ
ＪｉＬｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｕＨａｉ，ＧｕａｎｇＤｏｎｇ，５１９０４１）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｔｏ　ｂｅｔｔｅｒ　ｉｌｕｓｔｒａｔｅ　ａ　ｌｉｔｔｌｅ　ｒｅｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｅｆｆｉｃａｃｙ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｉｔｓ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｔｈｉｓ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｓｏｘｈｌｅｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ａ　ｌｉｔｔｌｅ　ｒｅｄ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃ－
ｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｕｓｅ　ｔｈｅ　ａｃｉｄ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｒｅｓｐｅｃ－
ｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｌｉｔｔｌｅ　ｒｅｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｓ　ｏｂｖｉｏｕｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　Ｅｍｉｌｉａ　Ｓｏｎｅｈｉｆｏｌｉａ；Ａｌｋａｌｏｉｄ；Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ；Ａｎｔｉｂｉｏｓｉｓ
　　一点红，菊科一年生或多年生草本植物；分布于我国云南、贵州、
广东、广西、湖南、山西等；味苦性凉，全草入药，具有清热解毒，散瘀消
肿的功效。临床上常用于治疗上呼吸道感染、口腔溃疡、肺炎、乳腺
炎、疖肿疮疡、皮肤湿疹等［１］。其化学成分主要有黄酮，生物碱类和挥
发油类［２］。国内外仅对一点红的种植和临床应用方面有少量研究，对
活性成分抗菌性能未见有相关报道。故实验通过分离提纯一点红总
生物碱类和黄酮类物质，进行体外抗菌活性研究，为寻找一点红抗菌
的活性成分提供一定参考。
１　材料与方法
１．１　材料　试剂：中药一点红干燥全草；苦参碱标准品；芦丁标准品；
硫酸链霉素；乙醇；盐酸；氨水；溴麝香草酚蓝；石油醚；亚硝酸钠；硝酸
铝；甲醇、丙酮、氯仿，醋酸乙酯、环己烷等试剂均为分析纯。
供试菌种：大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ，枯草芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｕｓ　ｓｕｂ－
ｔｉｌｉｓ，金黄色葡萄球菌Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ，以上菌种由吉林大学珠
海学院化学与药学系微生物实验室提供。
１．２　总生物碱的提取分离及定量分析　称取烘干后的一点红全草粗
粉０．８ｇ，置具塞锥形瓶中，加浓氨水４滴，精密加入氯仿４０ｍｌ，超声
３０ｍｉｎ，冷却补足失重，滤过，精密吸取续滤液１ｍｌ用氯仿定容至１０ｍｌ
备用。精取１０ｍｌ样液至分液漏斗，加入溴麝香草酚蓝显色剂２０ｍｌ，
密塞，剧烈振摇２ｍｉｎ提取，静置２ｈ，分取氯仿层，以未加样液的氯仿
层为空白，在４１４ｎｍ处测吸光度［３］。
１．３　总黄酮的提取分离及定量分析　称取烘干后的一点红全草粗粉
５ｇ置于索氏提取器中，加入８０ｍｌ石油醚，回流１ｈ后，放冷。倾出石
油醚，加入８０％乙醇回流４ｈ，旋转蒸发仪浓缩，过滤。滤液经石油醚
萃取直至石油醚层清澈透明后，定容１００ｍｌ备用。精密吸取３ｍｌ置于
１０ｍｌ比色管中，加质量分数为９５％的乙醇溶液至５．００ｍｌ处，加入
５％的亚硝酸钠溶液０．３０ｍｌ，混匀，放置６ｍｉｎ。加入１０％硝酸铝溶液
０．３ｍｌ，混匀，放置６ｍｉｎ，再加入４％的氢氧化钠溶液４．００ｍｌ，混匀，用
蒸馏水稀释至 １０ｍｌ，摇匀，放置 １５－２０ｍｉｎ。在 ５１０ｎｍ 处测吸
光度［４］。
１．４　体外抑菌研究　用１０％的吐温溶液将提纯的一点红生物碱类或
黄酮类化合物不同浓度的溶液作为待测液，同时用１０％吐温配制浓
度为０．２５ｍｇ／ｍｌ的硫酸链霉素溶液作为阳性对照液，用孔径为０．
４５μｍ的微孔滤膜过滤器滤过除菌。体外抗菌实验采用滤纸片法，选
择吸水性强的滤纸，用打孔器打成若干直径为６ｍｍ的滤纸片，经干
热灭菌后浸在测试溶液中备用。将配置好的３种细菌的菌悬液用无
菌移液枪分别吸取０．２ｍｌ均匀涂布在琼脂培养基上，于３７℃培养箱
中正面培养１ｈ。用无菌镊子分别夹取含有０．２５ｍｇ／ｍｌ硫酸链霉素
溶液的滤纸片，１０％吐温溶液的滤纸片、含待测液及空白的滤纸片置
于同一培养皿中，每种浓度的药物平行做两皿，１ｈ后，把培养皿倒置，
于３７℃培养２４ｈ，取出，测量抑菌圈直径的大小［５］。
２　实验的结果
２．１　生物碱的提取率与含量测定　将各待测液所测得的吸光度值代
入上述回归方程Ｙ＝０．０４１６ｘ＋０．００１４　Ｒ２＝０．９９７７，计算出各待测液
浓度，该浓度值即为生物碱含量，再根据稀释倍数换算出一点红提取
物总生物碱含量，并得出其提取率。
一点红总生物碱含量（ｍｇ／ｇ）＝（Ｃ供× Ｄ×Ｖ）／ｍ
式中，Ｃ供 为供试品浓度，Ｄ为稀释浓度，Ｖ为样品定容体积，ｍ
为样品取样重量。
取１．２中的备用待测液２ｍｌ用氯仿定容至１０ｍｌ，以未加待测液
的氯仿做空白，在４１４ｎｍ处测吸光度，每组重复三次实验算平均值，
结果如下：
表１　索式提取法中不同浓度乙醇的结果对比
乙醇的浓度 平均吸光度值（Ａｂｓ） 平均总生物碱含量（ｕｇ／ｍｌ）
６０％ ０．２５０　 ５．９７６０
７０％ ０．１７８　 ４．５４５２
８０％ ０．６６０　 １５．８３１７
９５％ ０．４５５　 １０．９０３８
　　由表１中得知，索式提取方法中最优提取工艺应为用８０％乙醇
为提取溶剂对一点红生物碱类进行提取。
２．２　总黄酮的提取率与含量测定　将１．３黄酮提取液测得吸光度代
入回归方程Ｙ＝１．２６１４Ｘ，Ｒ２＝０．９９９６即得稀释后的溶度。根据公式
10.14009/j.issn.1672-2124.2016.s1.011
·２０　 · 中国医院用药评价与分析　２０１６年第１６卷第０１期　　　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ－ｕｓｅ　ｉｎ　ｈｏｓｐｉｔａｌｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　２０１６Ｖｏｌ．１６Ｎｏ．０１
总黄酮含量（ｍｇ／ｇ）＝Ｃ×Ｄ×Ｖ／Ｍ。式中的Ｃ：供试品的浓度；Ｄ：稀
释倍数；Ｖ：样品的容量；Ｍ：一点红的取样量。
采用Ｌ９（３４）正交表进行试验，以总黄酮含量为参考指标。
表２　超声波提取法实验因素水平表
　　水平
因素　　
（Ａ）乙醇
浓度（％）
（Ｂ）震荡
时间（ｍｉｎ）
（Ｃ）固料比
１　 ６５　 ３０　 １∶１５
２　 ７５　 ４５　 １∶２０
３　 ８５　 ６０　 １∶２５
表３　超声波提取法测定结果
试验号
（Ａ）乙醇
浓度（％）
（Ｂ）震荡
时间（ｍｉｎ）
（Ｃ）固料比
含量
（ｍｇ／ｇ）
１　 １　 １　 １　 ６．２４５
２　 １　 ２　 ２　 ６．６７７
３　 １　 ３　 ３　 ９．９４５
４　 ２　 １　 ２　 ４．４４０
５　 ２　 ２　 ３　 ６．１４８
６　 ２　 ３　 １　 ６．１０４
７　 ３　 １　 ３　 ６．２８０
８　 ３　 ２　 １　 ５．０９１
９　 ３　 ３　 ２　 ６．８００
Ⅰ ７．６２２　 ５．６５５　 ５．８１４　 ６．３９８
Ⅱ ５．５６４　 ５．９７２　 ５．９７２　 ６．３５４
Ⅲ ６．０５７　 ７．６１６　 ７．４５８　 ６．４９２
Ｒ　 ２．０５８　 １．９６１　 １．６８８　 ０．１３８
　　由表３极差分析可以看出Ｒ１＞Ｒ２＞Ｒ３，所以超声波提取法影响
总黄酮提取得率的因素的主次因素为ＡＢＣ，即：乙醇浓度＞震荡时间
＞固料比。最佳搭配水平为Ａ１Ｂ３Ｃ３，即震荡时间为６０ｍｉｎ，固料比为
１∶２０，乙醇浓度为６５％。根据该条件，测得总黄酮的含量为９．
９４５ｍｇ／ｇ。
表４　一点红生物碱类化合物的抑菌效果
菌种
硫酸链霉素
（０．２５ｍｇ／ｍｌ）
生物碱类化
合物浓度
（４８０ｍｇ／ｍｌ）
生物碱类化
合物浓度
（５６０ｍｇ／ｍｌ）
生物碱类
化合物浓度
（６４０ｍｇ／ｍｌ）
金黄色葡萄球菌 ２１　 ８　 １２　 １６
大肠杆菌 ３２　 ６　 １０　 １４
枯草杆菌 ２８　 ５　 ９　 １２
２．３　一点红提取物的抑菌研究结果　采用滤纸片法［６］测定不同浓度
下的总生物碱、黄酮类化合物的抑菌效果；通过测定抑菌直径来判断
抗菌性能的强弱。分别将生物碱制备成浓度为４８０ｍｇ／ｍｌ、５６０ｍｇ／ｍｌ
及６４０ｍｇ／ｍｌ的溶液，和０．２５ｍｇ／ｍｌ的硫酸链霉素溶液进行对照实
验，结果如表４：
　　分别将黄酮类化合物制备成浓度为４８０ｍｇ／ｍｌ、５６０ｍｇ／ｍｌ及
６４０ｍｇ／ｍｌ的溶液，和０．２５ｍｇ／ｍｌ的硫酸链霉素溶液进行对照实验，
结果如表５：
表５　一点红黄酮类化合物的抑菌效果
菌种
硫酸链
霉素（０．２５
ｍｇ／ｍｌ）
生物碱类化
合物浓度
（４８０ｍｇ／ｍｌ）
生物碱类化
合物浓度
（５６０ｍｇ／ｍｌ）
生物碱类化
合物浓度
（６４０ｍｇ／ｍｌ）
金黄色葡萄球菌 ２１　 ９　 １５　 ２０
大肠杆菌 ３２　 ７　 ８　 １３
枯草杆菌 ２８　 ７　 ９　 １５
　　药敏试验判断标准以抑菌圈大小为依据，抑菌圈直径大于２０ｍｍ
为高度敏感，１０～２０ｍｍ为中度敏感，１０ｍｍ以下为低度敏感。从表４
可以看出，一点红生物碱类化合物，在较高浓度时，对金黄色葡萄球
菌、大肠杆菌及枯草杆菌的抑菌效果相差不大，都属于中度敏感。从
表５可以看出，一点红黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌
作用，而对大肠杆菌及枯草杆菌的抑菌较弱。
３　结论
一点红生物碱类化合物最佳提取条件是８０％乙醇做为提取液；
一点红黄酮类化合物在最佳提取条件为震荡时间为６０ｍｉｎ，固料比为
１∶２０，乙醇浓度为６５％。一点红生物碱类化合物的抑菌效果较差，
一点红黄酮类化合物在不同的细菌中表现出不同的抗菌效果可能与
细菌的代谢途径有关。尤其对金黄色葡萄球菌的抑菌效果明显。
致谢
感谢广 东 省 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 项 目 （项 目 编 号：
２０１４１３６８４０１４）及吉林大学珠海学院第八批百人工程项目（项目编号：
２０１４１３６８４０１４）对本实验提供资金赞助，也感谢吉林大学珠海学院所
有指导和支持的老师们。
参考文献
［１］　刘厚诚．一点红及其栽培技术［Ｊ］．长江蔬菜，２００２，１１∶１２．
［２］　高建军，程东亮．一点红化学成分的研究［Ｊ］．中国中药杂志，１９９３，１８
（２）：１０２．
［３］　周吴萍，韦媛媛，李军生，等．广西一点红总生物碱的提取和抗菌活
性研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００８，１９（８）：１８３５．
［４］　李秀信，王荣花，杨秀萍．一点红黄酮成分的分析及含量测定［Ｊ］．西
北植物学报，２００３，２３（４）：６７１．
［５］　李军生，阎柳娟，苏辉武，林帧．一点红黄酮类化合物分离及其抗菌
性能研究．中国知网，１００２－６６３０（２００７）０９－０１９６－０３．
［６］　郑钧镛，王光宝．药品微生物学及检验技术［Ｍ］．北京：人民卫生出版
社，１９８９，８９．
（上接第１８页）对比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表２。
表２　两组患者手术时间、术后下床活动时间以
及住院时间等临床指标对比（ｘ±ｓ）
组别 手术时间（ｍｉｎ） 术后下床活动时间（ｄ） 住院时间（ｄ）
观察组 ４１．３±１０．８　 ０．７±０．４　 ３．４±０．４
对照组 ６１．３±１２．７　 ２．１±０．６　 ５．２±１．５
２．３　两组患者术后并发症发生率对比　观察组患者术后切口感染１
例，并发症发生率３．７％；对照组患者术后切口感染３例、慢性疼痛２
例，并发症发生率１８．５％。两组患者并发症发生率对比差异有统计学
意义（Ｐ＜０．０５）。
３　讨论
快速康复外科理念指的是通过优化围手术期的诸多护理操作以
达到缓解患者手术创伤应激反应、减少术后并发症、缩短住院时间、
患者快速康复目的的一种护理干预［３］。快速康复理念相较于常规护
理干预措施，更加注重对患者整个围手术期的治疗护理干预，对患者
术前、术中以及术后护理均有密切的联系，并直接订立了缩短患者住
院时间、减少医疗资源浪费的目标［４］。
本次研究中给予观察组常规护理基础上快速康复外科理念的应
用，观察组患者在治疗指标、并发症发生率以及护理满意度上均优于
对照组（Ｐ＜０．０５），证明快速康复理念在外科腹外疝病人护理中的应
用有着良好效果，患者术后下床活动时间以及住院时间明显缩短，同
时患者护理满意度高、并发症发生率低，值得临床推广。
参考文献
［１］　张敏．外科腹外疝患者护理中快速康复理念的应用探析［Ｊ］．中国医
药指南，２０１５，１３（１７）：２３４－２３５．
［２］　张臻颖，邓小华，陈瑾．快康复理念在外科腹外疝病人护理中的应用
［Ｊ］．海峡科学，２０１１，１４（９）：８６．
［３］　叶春芳．外科腹外疝病人护理中快速康复理念的应用实践［Ｊ］．现代
养生Ｂ，２０１５，１４（４）：１８６．
［４］　陈正英．外科腹外疝患者护理中的快速康复理念应用评价［Ｊ］．医学
信息，２０１５，２８（５）：１４７－１４８．