全 文 ：9 1 8 6年 陕 西 农 业 科 学 第 6期
. . . . . . . . . . . . . . . .、 二 ._ 一 洛 ` 净一、
胚培在萝 卜与芸蔓属间杂交中
的 应 用 研 究 ’
柯桂兰 宋胭脂
(陕西 省蔬莱研究所)
利用胚培组织培养法克服远缘杂交不亲和
性 , 在不同作物 _仁研究证明 , 确是一条比较有
效的途径 。 西贞夫 ( 1 9 5 8一 1 9 6 8年 ) 曾利用胚
培育成 “ 白兰 ” ; 冯午等也用胚场法获得了甘
兰 x 大自菜的杂交植株 , 近年来青岛市农科所
( 1 9 7 9 )
、 沈阳市农科所 ( 1 9 7 9 ) 、 中国农科
院蔬菜所 ( 1 9 8 0 ) 等单位 , 先后通过胚培都得
到了芸蔓属的种间远缘杂种 。 但是 , 国内关于
萝 卜与自菜的属间杂交胚涪报道甚少 。
为了把萝 卜不同品种的不育胞质转移到大
白菜 、 甘兰上来 , 1 98 0一82 年我们开展了萝 卜
属与芸蔓属间的远缘杂交 , .通过胚培取得了葬
好结果 。
材抖和方法
母本萝 卜 ( R . s at iv us L . ) 的 5 个不育 系
( C M S ) 为 4 o 1A 、 7 7一 o l A 、 16一 S A 、 2 6 2 A 和
4 s A
。 父本大白菜 ( B . p e k i n e n s i s ) 是用陕 西
省蔬菜研究所选育的几个扰病系 : 34 1 1 、 5 2 5 1 、
3 4 1 1一 7 、 5 2 5 1一 7和 7 2M 7 5 2 , 甘兰 ( B . o l e r -
a c e a v a r
.
e a p i t a t a ) 为自交 不 亲 和 系 7 4 2一
6
。
用 以上材料 , 在蕾期大量授粉基础上进行
以下人工组织培养 。
1
. 子房培养 选取授粉后 4 一 6 天生长正
常的余交子房 , 无菌操作按 种 于 M S I堵 养 基
上 , 室内常温补充照明培养。
2
. 胚珠培养 选取授粉后扣一 13 天的杂交
子房 , 无菌操作音J取胚珠 , 接种在M S : 培养基
上 , 室 内常温补充照明培养 。 一周后对明显膨
· 此项工作得到西北植物所叶树茂同 志 具 体 帮助 ,
大胚珠再剥胚转接在M S : 培养基上 。
3
. 胚培养 选取杂交后 15 一30 天的种荚 ,
无菌操作剖得种胚接种于 S M , 培养基 , 室内常
温下补充照 明培养 。 后转W hi et 培养基发根 ,
长出真叶一周后陆续转接至 B 。培养基。
试验结果
(一 ) 子房培养 接种40 天内均 成 活 生
长 , 成荚率 10 0% , 但发育缓慢 , 仅相 当 于田
间同龄萝 卜果实大小的 1/ 1 0 , 绝大多数荚果基
部长出大块愈伤组织 (封 4 图 1 ) 。 40 天后果咏
逐渐向下黄枯 , 人工解剖检查 , 几 乎全 系 空
荚 。 仅从一个比较肥大 , 基部未出现愈伤组织
的果荚中剖得一粒萎缩种子 , 将其继续转接于
M S
: 培养基上 , 一周后长出胚根 , 一月后稍见
胚芽即枯死 。
(二 ) 胚珠培养 从 16 4个杂交子房 中剖
得胚珠 70 6个 , 接种于 M S : 培养基上 , 一 周 后
对明显膨大的 5 个胚 珠 ( 4 o l A x 3 4 4 1) 再 剖
胚转接于 M S : 培养基上 , 当长出真叶后又转至
W ih et 培养基上生根 , 最后在 B 。培养基 上 成
苗 2 株 。 在 48 A x 3 4 1 1中有 8 个胚珠长成愈伤
组织 , 其余胚珠绝大多数于接种后 1一 3周内陆
续生 一长停滞 , 呈黄色点状物 , 个别 长至 1月 ,
约为正常种子大小的 1 / 2 时 , 发黄变 色 , 剖
检无胚 。
( 三 ) 胚培养 一9 5 1一 1 9 8 2年从 5 6个杂交
组合中选取 80 个荚果 , 无菌操作剖 得 胚 龄15
一30 天的杂交种胚 1 89 个 , 接种于 M S : 培养基 ,
3 一 5 天子叶 一长大展开 , 10 天后转至W ih et 培
特此致谢 。
8 户
农 1萝争属与芸盆属杂文任培成苗情况
(1 0 51年 )
发达 (封 4图 6)。
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讨 论
养基发根 , 真叶长出一周后 , 陆续将生长旺盛
的大苗转接 B 。培养基 (封 4 图 2 、 3 ) 。 1 9 5 1
年 7 月中旬移放低温 室 (l 5 ℃左 右 ) 补 充 照
明 。 当年从 67 个接种胚获得 64 个 试 管 苗 , 成
苗率 9 5 . 5% (表 1 ) 。 19 8 2年高温季节因室内
无空调装置 , 室温过高 ( > 28 ℃ ) , 苗子早衰
黄化 , 接种 1 2 个胚 , 仅得 59 个 苗 , 成 苗 率
4 8
.
3%
。
从以上结果看出 , 胚培效果最好 , 只要胚
龄在 15 天 以上 , 即可培养成功 。 如果胚龄小于
15 天 , 剥胚困难 , 无法操作。 应用子房或胚珠
培养未获成功 。
(四 ) 杂种植株的形态特征 通过胚胎培
养得到从形态特征上可以明确辨认 (无需进行
细胞学鉴定 ) 的属间杂种植株 10 株 , 其形态特
征介于父母本之间 。
( 1 ) 萝 卜又 白菜 ( 4 8 A x 34 1 1 ) 叶面茸
毛少 , 有光泽 , 缺刻变小 , 裂叶对数减少 ( 由
母本 5 一 6 对减至 2 一 3 对 ) 无膨 大 肉质 根
(封 4 图 4 、 5 ) 。
( 2 ) 萝 卜x 甘 兰 ( 4 8 A x 7吐2一 6 ) 叶
色灰绿 , 叶面被腊粉 , 无茸毛 , 叶肉变厚 , 叶
顶广圆 , 但有缺裂 , 心叶内曲有成球趋势 , 无
膨大肉质根或根颈稍膨大 , 但表面粗糙 , 侧根
许多报告指出 , 采用胚培养是克服种间杂
交不亲和性的有效途径 。 本试验进一步证明 ,
采用胚培养也是克服萝 卜属与芸蔓属间杂交不
亲和性的有效途径 。 但试用杂交子房或胚珠进
行早期幼龄培养 , 未能取得满意结果 。 这两种
培养方法 , 所用的供培试材 , 是否在授粉之后
真正受精 , 人工培养前尚无法鉴别 。 同时即使
幼龄培养可行 , 、 一般在发育后期仍需剖胚 , 转
为胚胎培养 。
有些报告还指出 , 胚培的胚龄需 30 天左右
方可培养成功 。 但在我们的试验中 , 最小胚龄
只有 15 天 , 胚龄 15 一21 天的幼胚共接种 38 个 ,
全部成苗 。 这说明适当提早胚培是 完 全 可 行
的。 如果授粉后一月左右再剥胚培养 , 由于种
荚大量早期死亡 , 则所能提供的剥 胚 材 料 甚
少 , 所以在种荚大量枯死前适当提 早 剥 胚 培
养 , 是扩大试材群体的重要途径 。
胚培操作中 , 消毒技术极为重要 , _我们采
用酒精一升汞一紫外光连续消毒法 , 取得了较
好的效果 。 远缘杂种试管成苗初期 , 常表现生
长势弱 , 且易出现黄化现象 。 在培养过程中应
随时观察 , 及时转接 , 并注意调正补充培养基
中相应的附加营养成分 ; 在 7 、 8 月高温期 ,
务保持室温在 25 ℃左右 , 超过 28 ℃则应采取人
工降温措施或移至低温室 。
土培栽培技术的好坏 , 直接关系到从试管
苗能否得到成株 。 在这方面我们是有一定教训
的 。 由于移栽前未将人工培养基冲洗干净 , 即
栽入土中 , 结果招致大量腐生 菌 类 感 染 , 使
较多的移栽苗死亡 。 移栽时应须注 意 以 下 几
点 : ( 1 ) 彻底冲洗千净培养基 , ( 2 ) 最好
用无菌土 , ( 3 ) 栽植不能过深 , 土壤不宜过
湿 , 但需注意环境保湿 。