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云南含克班宁的千金藤属植物资源调查研究



全 文 :云南含克班宁的千金藤属植物资源调查研究
马云淑 , 方波 , 张壮丽
(云南中医学院中药学院 , 云南昆明 650200)
  摘 要:目的:了解含克班宁 (Crebanine , Cre)的千金藤属植物 (山乌龟)在云南的资源状况;筛选克班
宁含量高的品种。方法:对云南省的部分县 、 市进行实地调查与采集样品 , 采用形态性状鉴别 、 薄层色谱鉴别
以及提取分离等法比较克班宁含量与提取率。结果:克班宁含量高的品种集中分布于临沧及其周边地区 , 且枝
叶多有红色汁液。结论:含克班宁的千金藤属植物资源在云南中 、 南部较丰富 , 可合理开发利用。
关键词:克班宁;千金藤属植物;资源调查
中图分类号:R282.71  文献标识码:A  文章编号:1000—2723(2005)01—0018—04
  克班宁主要存在于防己科千金藤属植物中 , 该属
植物在全世界约 60 余种 , 据 《中国植物志》[ 1] , 我国
有 39种 , 分布于长江流域及其以南各省区 , 以云南
与广西种类最多 , 其部分种具有硕大的块根 , 俗称
“山乌龟” , 多数在民间药用 , 主要有解热 、 镇痛 、 抗
菌消炎 、 止血等功效。块根中含有生理活性很强的生
物碱 , 且含量较高 , 药用价值高。多年来从千金藤属
中发现了 150多种生物碱[ 2] , 开发出镇痛的 1-四氢
巴马汀;镇痛镇静 、 治疗神经衰弱的荷苞牡丹碱 (1
-Dicentrine , 痛可宁)等。但有多种山乌龟 (特别是
块根切面为白色的品种)因不含目前已开发的药物成
分而未被利用 , 如云南地不容 (Stephanina Yunnanensis
H.S.Lo)、 长柄地不容 (S.longipes)、 齿叶地不容
(S.dentifolia)等在云南资源较丰富 , 且克班宁 (Cre-
banine)含量较高 (可达 2.41%)[ 3~ 4] 。
克班宁属阿朴菲型生物碱 , 据实验研究[ 5] , 它对
多种实验性心律失常具有较强的对抗作用 , 作用迅
速。另据报道[ 6~ 8] , 它还具有镇痛 、 镇静、 解痉 、 抗
惊厥 、 与脑内多巴胺具有亲和性 、 抑制胆囊平滑肌的
收缩等作用 , 是一值得深入研究开发的生物活性物
质。为充分利用该药物资源 , 了解含克班宁的千金藤
属植物在云南的资源分布情况 , 笔者采取了实地调查
与薄层鉴别 、提取率比较等方法筛选含克班宁以及含
量较高的品种。
1 资源调查与样品 、 标本采集
根据对资料报道的分析[ 3~ 4] , 千金藤属植物特别
是含克班宁的原植物 , 在云南主要分布于中部与南
部。笔者重点选择了临沧 、 思茅 、 西双版纳 、 文山及
德宏的部分县市进行实地调查与样品采集。由于千金
藤属植物茎 、 叶 、 块根多相似 , 种的鉴别需采集雄
花 、 雌花与果 , 部分收集到的样品 (多为本调查无关
即不含克班宁的种)无花与果 , 现已留样栽培以备鉴
定种。以下主要初步考察克班宁在不同来源的山乌龟
中分布与含量情况。根据已发现的克班宁存在特征
(即多存在于枝叶含红色汁液;块根白色或红色的样
品中), 将样品按切面色泽分黄色 , 红色 , 类白色
(或间红)等三类分别收集 (一般每类 20 个样), 并
着重收集枝叶含红色汁液 (其块根色泽可能为红色;
白色或微黄间红色)的山乌龟样品。
从总体来看 , 上述地区分布的千金藤属植物多生
长于海拔1 000 ~ 2 000 m的石山灌木丛中 , 溪旁 , 山
路边 , 一般均为野生 , 栽培者多供观赏。该类植物易
于成活 , 其块根在贮存数月甚至更长时间后 , 仍能栽
培成活 , 其种子易于繁殖 , 但其生长周期慢 , 块根需
3~ 5年或更长时间才能药用。由于云南各地州地形
复杂多变 , 海拔 , 气候 , 土壤等不同 , 造成各地山乌
龟在生长环境 , 种类 , 质量及数量上的较大差异 , 各
地的基本情况如下:
1.1 临沧地区
各县均有较丰富的山乌龟分布 , 主要对耿马县
18
基金项目:云南省自然科学基金重点项目。(NO:2002C0006Z)
收稿日期:2004—11—12  修回日期:2004—12—24
作者简介:马云淑 (1966~ ), 女 , 云南文山人 , 副教授 , 研究方向中药新制剂研究开发。
第 28 卷第 1期
2005年 3月
云南中医学院学报
Journal of Yunnan College of Traditional Chinese Medicine
Vol.28 No.1
3.2005
(贺派等), 沧源县 (勐董), 云县等地进行了资源调
查与样品采集 , 其中以块根色泽鲜黄的品种最多 , 但
枝叶含红色汁液的齿叶地不容 S .dentifolia Lo.et M.
Yang 、 云南地不容 S .yunnanensis Lo.、 长柄地不容
S .longipes Lo.等分布也相对其它地区为多 , 且克班
宁含量较高。该地区收集的大量样品 (约 700Kg)中 ,
有很大一部分被认为是价值不高的品种 (块根切面白
色), 生长多年未被药用 , 多长于陡峭的石山阴湿处 ,
有的个体重达 20Kg , 块根内部为灰白间浅红色纹理 ,
此类品种多含有克班宁 , 具有较大的开发价值;当地
黄色切面山乌龟 (主要用于提取颅痛定等 , 很少含克
班宁 , 且有多个种 , 待鉴定)经多年来的大量采挖 ,
蕴藏量已下降 , 但仍具有相当数量 , 也有重达 10 余
Kg的巨大个体 , 在村旁林边均有分布。
1.2 西双版纳州
各县市均有山乌龟分布 , 主要集中在中缅与中老
边境 , 该州的黄色切面山乌龟蕴藏量已大大下降 , 且
多数为生长年限较短的较小个体 , 在主要调查的勐腊
县 (勐伦 , 易武 , 勐户)与勐海县与景洪市 (海拔
500m), 所收集的约 200Kg 样品 (种待鉴定)中 , 含
克班宁的品种未见。
1.3 红河州
有较丰富的山乌龟分布 , 主要对个旧市 (贾沙
乡 、保和乡)、 蒙自县 (期路白乡 、 西北勒乡 、 多法
勒乡 、文澜镇 、 新安所镇等)进行了资源调查与样品
采集 , 其中个旧市山乌龟以枝叶含红色汁液者分布为
多。在个旧草药市场收到的大量样品 (先后共约
400Kg , 种主要有云南地不容 S.yunnanensis Lo.与长
柄地不容 S.longipes Lo.)均是枝叶含红色汁液的 ,
且克班宁含量较高。该地其它属的混淆品种较多 , 民
间也称山乌龟或地不容的 , 仅以其块根外观难以区
分 , 须以其茎叶或花果辨认。蒙自县周边地区所采山
乌龟 (50Kg , 待鉴定)则与个旧大不相同 , 绝大部分
枝叶均无红色汁液 , 也不含克班宁 , 块根切面为黄色
或近白色 , 该二县市相距不足 50Km , 而山乌龟种的
差异较明显 , 可能与其地形地貌与生态环境差异较大
有关:个旧市为山区 , 海拔较高 (部分高山海拔超过
3 000m), 山乌龟均在崇山峻岭的林中或林缘分布 ,
以枝叶有红色汁液者居多。蒙自县地势北高南低 , 海
拔 146 ~ 2 567.8m之间。城区 (海拔1 302m)地势较
平坦 , 周边乡镇虽有山区但海拔不高 , 山势相对平
缓 , 以灌木林为主。
1.4 思茅地区
各县市均有山乌龟分布。在调查的思茅市 (海拔
1 301m), 普洱县 (把边乡)中 , 仍有较大量的各种
山乌龟贮量。思茅有栽培 , 把边乡在道路旁即能采到
约 10Kg的山乌龟 , 以断面黄色不含或含微量克班宁
者居多 , 并获得大量雌雄株正开花与结果的标本 (黄
叶地不容 , S .viridif;lavens Lo et M.Yang), 红色者
据称生长于偏远险峻山区 , 仍在收集中。
1.5 文山州
各县均有较丰富的山乌龟分布 , 以麻栗坡 , 西畴
为多 , 海拔1 100~ 1 600m , 切面不同色泽的山乌龟均
有分布 , 曾经大量收购过切面黄色的山乌龟 (提取颅
痛定)。枝叶含红色汁液的品种 (齿叶地不容 S.den-
tifolia L.et M.、 云南地不容 S.yunnanensis Lo.)有一
定量分布 , 目前也较易收集 , 且均含克班宁。
1.6 德宏州
在梁河县收集了约 80Kg的 “红山乌龟” , 切面为
均匀的红色 , 均含有克班宁。其它种类的山乌龟也有
较大贮量 , 有待进一步调查。
1.7 大理州
对下关 (三月街)、 巍山等地进行调查采集 , 均
有山乌龟分布 , 但多为断面黄色或灰白色的 (种栽培
待鉴定), 尚未收集到含克班宁的品种。
综上所述 , 千金藤属植物分布情况以及克班宁的
原植物分布情况基本与文献报道相吻合 , 在临沧等地
有着丰富的贮量;并且所采集样品中含克班宁者)齿
叶地不容 S .dentifolia Lo .et M.Yang 、 云南地不容
S .yunnanensis Lo.、 长柄地不容 S .longipes Lo)在其
枝叶或块根切面中有红色汁液或纹理 , 鲜黄色或纯白
色的样品不含克班宁 , 这为克班宁资源的收集与利用
提供了便利的识别方法。
2 实验部分
2.1 药材 , 仪器及试剂
药材:云南各地县的山乌龟鲜品。对照品:克班
宁 (为本课题组提取精制)。
仪器:(上海精科实业有限公司)、 电子天平 (上
海精科天平 FA1004)等。
试剂与材料:硅胶 G 板 (青岛海洋化工厂)。试
剂均为市售分析纯。
2.2 不同产地的山乌龟薄层色谱分析
由于植物种的不同以及采集产地 , 居群的不同
(同一种的块根切面可为白间红色或红色), 为了解各
地克班宁原植物资源分布情况 , 筛选出克班宁含量高、
杂质少的样品作为提取的原料 , 进行以下薄层鉴别。
19
第1 期 马云淑 , 等:云南含克班宁的千金藤属植物资源调查研究            
2.2.1 薄层色谱条件确定
样品溶液:山乌龟鲜品切碎 , 精密称取 5g , 20ml
甲醇浸提 24h , 过滤即得。
对照品溶液:取克班宁对照品 , 以甲醇溶解成
1mg/ml。
显色方法:在 365nm观察荧光;显色剂:碘化铋
钾试剂。
展开剂:苯-氯仿-甲醇 (7∶1∶2), 氯仿 -甲醇
(15∶1)。
2.2.2 薄层鉴别结果
(1)云县 、 耿马 、 沧源样品:茎含红色汁液但切
面为不同颜色样品 (共3 种见1.1中)共 76号;均含
Cre , 但 3 个种显示其它生物碱斑点并不一致;茎不
含红色汁液样品 (块根多黄色)共 32 份 (种待鉴
定), 均不含克班宁。
(2)勐腊 、 勐海 、 普洱样品:共 95 份样 , 均未
检出克班宁。其中勐腊县易武乡的样品 50 份中有近
20个为其它科属的误认样品 , 切面红色 , 但有粘液
汁 , 块根多近圆椎形 , 且个小 , TLC显示无生物碱反
应。有些样品在与 Cre相应的位置上有斑点 , 但该点
的荧光颜色 (淡黄绿色)与 Cre (淡紫色)不同 , 但
用改良碘化铋钾显色后颜色均为橙色。
(3)梁河 、文山、 麻栗坡、 西畴样品:共检测鲜品
90份 , 58份均含 Cre , 其切面几乎没有鲜黄色的 , 大多
是红色与白色 (或淡黄色)相间 , 也有少量为纯红色或
纯白色的 (种见1.4)。切面为纯黄色的多含颅痛定。
(4)个旧 、 蒙自样品:个旧贾沙 、 保和的样本 48
份残茎均有红色汁液 (老茎为红色纹理)且含克班
宁 , 但同一地区的另一批 37 份样本 (老茎显褐色。
无红色汁液)经薄层检查在克班宁相同位置上有同样
淡紫色荧光 , 改良碘化铋钾显色后也为橙色 , 但经空
气中放置一夜后 , 斑点均变为黑绿色 (克班宁对照品
橙色不变), 用与克班宁相同的提取分离方法进行提
取 , 所得粗晶熔点为 145 ~ 150℃ (克班宁为 119 ~
121℃), 证明该批样主含的生物碱系与克班宁极性
(或结构)相近的物质 , 不含克班宁。
蒙自的 25 个样品均未检出克班宁。
2.3 不同产地的山乌龟中克班宁提取率比较
在提取 Cre时发现 , 以相同方法提取同种不同产
地的山乌龟 , 其 Cre得率差异较大。故选定云南地不
容 S .yunnanensis Lo.不同产地的山乌龟 , 用下述提
取工艺 , 比较 Cre的得率与除杂情况 , 结果见表 2。
提取工艺:山乌龟的粗粉150g乙醇回流 , 回收乙醇
得残渣1;残渣酸溶 , 氯仿萃取回收氯仿得残渣2 , 再经
酸热溶 , 碱调PH 8~ 9 , 沉淀以某有机溶剂重结晶。
表 1 不同产地山乌龟 Cre除杂情况与提取率比较
产地 残渣 1(%) 残渣 2(%) 沉淀(%) 结晶得率(%)
耿马 1 20.27 3.53 2.47 0.51
耿马 2 20.33 3.20 2.67 0.28
耿马 3 12.20 3.67 2.67 0.80
耿马 4 15.87 2.67 2.67 0.42
耿马 5 18.87 4.00 2.47 —
耿马 6 22.73 3.53 3.00 0.27
耿马 7 16.93 2.67 1.67 0.99
梁河 1 14.67 2.73 2.13 0.63
梁河 2 17.33 2.27 1.47 0.33
云县 1 22.67 3.93 2.00 0.10
云县 2 20.70 4.70 2.50 0.37
云县 3 26.33 2.53 1.33 0.67
云县 4 26.87 4.20 2.33 0.28
麻栗坡 1 21.20 5.10 2.30 0.39
  一:无结晶 。
其中 , 梁河和云县 1 、 2的样品在用氯仿萃取时
乳化较为严重 , 云县 3 、 4 有一定的乳化现象 , 其余
样品的乳化现象较弱或无。样品耿马 2 提得的结晶表
面有一定的黄色粘性物质黏附 , 样品耿马 5未能得到
结晶;各样品结晶均为针晶密集蘑菇状或小粒状。
3 小结与讨论
根据资源调查结果 , 含克班宁的千金藤属植物 ,
在云南主要分布于滇中与滇南 , 其中以临沧地区 , 红
河州 , 文山州 , 德宏州等地州分布较多 , 克班宁含量
高的品种集中分布于临沧地区的数个县及其周边地
区。种主要有云南地不容 (Stephanina Yunnanensis H.
So.Lo)、 长柄地不容 (S .longipes)、 齿叶地不容
(S .dentifolia)等
对样品的薄层检测可知 , 含克班宁者在其枝叶或
块根切面中多存在红色汁液或纹理 , 鲜黄色的样品均
不含克班宁 , 这为克班宁资源的收集与利用提供了便
利的识别方法。
实验发现 , 山乌龟的块根在甲醇或乙醇中浸泡 ,
若浸泡时间较短 (如 24h 以内), TLC结果显示斑点
较少 , 若浸泡时间较长 (如 24h 以上), TLC结果显
示较多的斑点 , 提示可能存在不稳定成分的分解破
坏 , 鉴别应在较短时间内完成。
提取实验表明 , 同种不同产地山乌龟中克班宁的含
量 、其它生物碱成分与杂质不相同 , 导致半成品得率 ,
萃取时的乳化程度、 成品得率与结晶性状均有所不同 ,
提示在规模生产时要注意筛选品种的来源与质量。
20
2005年 云南中医学院学报 第 28 卷
[ 参考文献]
[ 1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 (第三十
卷第一分册)[M] .北京:科学出版社 , 1996.40-70.
[ 2] 黄建明 , 郭济贤.中国千金藤属 (Stephania)植物中的
生物碱类化学成分的研究进展 [ J] .华西药学杂志 ,
1998 , 13 (2):97-99.
[ 3] 黄建明 , 郭济贤 , 段更利.RP-HPLC法测定千金藤属
植物中 7 种生物活性生物碱 [ J] .药学学报 , 1998 , 33
(7):528-533.
[ 4] 马云淑 , 王方材.云南地不容有效成分的分离与鉴定
[ J] .中草药 , 1993 , 24 (11):610.
[ 5] 淤泽溥 , 马云淑 , 赵子仙 , 等.克班宁的抗心律失常
作用 [ J] .中国中药杂志 , 1992 , (11):658-687.
[ 6] 李淑仪 , 杨秀英 , 王方材.克班宁药理活性的初步研
究 [ J] .中草药 , 1989 , 20 (9):38.
[ 7] 赵春景 , 贾伟 , 梁明达 , 等.13 种异喹啉类生物碱对
体外 GLC 和 Hela细胞增殖的影响 [ J] .中国药理学通
报 , 1992 , 8 (5):398-399.
[ 8] 李惠兰 , 苏沧 , 王方材.克班宁对豚鼠胆囊和胆道口
括约肌的作用研究 [ J] .中国中药杂志 , 1996 , 21
(7):434-436.
Resources Investigation of stephania containing crebanine in Yunnan
MA Yun-shu , FANG Bo , ZHANG Zhuang-li
(Department of Pharmacy , Yunnan college of TCM , Kunming 650200 , China)
ABSTRACT:Objective:To investigate the resources of Stephania (Shanwugui)containing Crebanine (Cre)in yun-
nan province;and to selec the samples with high content of Cre.Method:Preliminary investigation in partial areas of
Yunnan was made and samples were collected.The content of Cre and the extraction rate were compared by discrimina-
tion of morphological properties , means of TLC and extraction and separation.Results:Samples came from Lincang and
its adjoining areas had high content of Cre and had red juice in their stems and leaves;Conclution:the resources of
Stephania containing Cre in middle and south of Yunnan is rich , and can be exploited and used reasonably.
KEYWORDS:Crebanine;Stephania;Resources Investigation
(上接第 15 页)
[ 13] 刘永隆 , 李乃文 , 宋万志 , 等.滇黄芩中黄酮类成分
的研究 [ J] .中草药 , 1980 , 11 (8):337-340.
[ 14] 胡碧煌 , 刘永隆.滇黄芩中新黄酮成分的结构研究
[ J] .药学学报 , 1989 , 24 (3):200-206.
[ 15] 胡碧煌 , 刘永隆 , 章天 , 等.滇黄芩中滇黄芩新素的
结构研究 [ J] .药学学报 , 1990 , 25 (4):302-306.
[ 16] 刘美兰 , 杨立新 , 万元浩 , 等.RP-HPLC 法测定 7
种药用黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量 [ J] .药物分
析杂志 , 2002 , 22 (2):99-102.
[ 17] 郭朝民 , 郭秀丽.黄芩与滇黄芩的鉴别 [ J] .河南中
医 , 2003 , 23 (9):71-72.
[ 18] 陈善信 , 张宏伟.黄芩与滇黄芩紫外光谱鉴别 [ J] .
时珍国医国药 , 2001 , 12 (3):230.
[ 19] 傅平 , 刘尔广 , 罗聪颖.黄芩与滇黄芩的紫外光谱和
薄层色谱鉴别 [ J] .中药材 , 1996 , 19 (11):559.
[ 20] 肖丽和 , 王红燕 , 李发美 , 等.不同来源黄芩药材
HPLC 指纹图谱比较 [ J] .沈阳药科大学学报 , 2004 ,
21 (1):28-31.
[ 21] 齐美玲 , 罗旭 , 王玺.黄芩品种及代用品的模糊聚类
分析 [ J] .沈阳药学院学报 , 1992 , 9 (2):127 -
129.
Textual Research of Herbalism of Scutellaria Amoena C.H.Wright
LI Ya-qiong , YOU Chun , YANG Yao-wen , QIAN Zi-gang , WANG Xiao-jia
(Department of Pharmacy , Yunnan College of TCM , Kunming 650200 , China)
ABSTRACT:Through textual research of Herbalism and research of contemporaneity chemistry , pharmacological func-
tion , clinic of Scutellaria amoena , the recordation in the Herbalism Literature of Scutellaria amoena is accordant with
contemporaneity research result.The quality goods of Scutellaria amoena C.H.Wright is the root of Scutellaria amoena
C.H.Wright , Scutellaria , Labiatae.In addition , the status of resource , the measure of planting and the intimating
species are expatiated.
KEYWORDS:Scutellaria Amoena;Herbalism;Textual Research
21
第1 期 马云淑 , 等:云南含克班宁的千金藤属植物资源调查研究