全 文 ：国外医学药学分册
撷草属植物化学和药理学研究进展
军事医学科学院 袁珊琴综述 顾国明审校
摘要 本文 全面 综述 了撷草属植物的生物活性成 分和 药理研究进展 ; 对镇静活性成 分 的
分析方 法和植物组 织培 养作 了概述 。
全 世 界 约 有 败 酱 科 撷 草 属 ( aV el r ia n a
L
,
) 植物 20 种 , 主要分布于温带地区 ; 我国
约 有 24 种 , 产于我国西 南 、 西北和 东北地
区 。 绿草属植物的许多品种在医药上早已有应
用 。 撷 草 ( V . o拼亡in al is L . ) 根用作镇静药 ,
在国外已有很久历史 , 并正式列入许多国家的
药典 中。 在我国 , 缘草则作为传统的安神宁心
药 , 用于镇静 、 驱风和解痉 。 缘草属植物作为
缓和的镇静药得到长期应用 , 引起了国内外学
者的重视 。 近十年来 , 对缘草属植物的研究也
愈加广泛深入 , 包括分离镇静活性成分 , 建立
测定镇静活性成分的分析方法 , 进行植物组织
培养 , 提高镇静成分的含量 , 进一步探讨镇静
机理以及开发研究撷草 中其他生物活性成分
等 。 现将该属植物生物活性成分的化学和药理
学研究进展综述如下。
化学成分
撷草属植物化学成分中最重要的是挥发油
和环烯醚砧类 。 这两大类具有镇静活性的成分
大多含有异戊酸基 。 植物采集后 , 因酶解作用
产生异戊酸而使植物产生强烈气味 。 撷草根 中
的少量生物碱成分以及叶 中丰富的黄酮成分 ,
也具有一定的生物活性 。 此外 , 该属植物还含
丰富的有机酸 、 氨基酸和脂肪酸等成分 。
挥发油
撷草属植物均含挥发油 。 其总含量在 同一
品种 以及不 同品种植物间差别较大 , 一般为
0
.
5% 一 3气 , , 少数 高达 6% 一 8% , 个别 只有
.0 03 %
。 油 中主要成分为单菇及倍半菇类 , 但
其组成因生长地区不同而有很大差别 〔 ’ 〕 。 一
般为两者混合组成 , 有些则几乎全是倍半菇类
成分 。 从十多种植物中分离并鉴定的挥发性成
分有 4 0 多种 , 多数为已知成分 〔 2〕 , 重要的
新成分有 9 个 : 环野绷草乙酸醋 ( c yc fo ke s sy l
a e at et )
, 具叔二环结构的倍半 菇烯醇 〔 ( 一 )
一 p ia if g or ig ol 〕 以及 7 种撷草菇烷倍半菇烯化
合物 〔 3〕 。 在挥发性成分中 , 倍半菇类成分为
镇静活性成分 , 其主要结构类型有三种 : 缘草
烷 ( k e s s a n e ) , 撷草菇烷 ( v a l e r e n a n e ) 以及
缘草酮 ( v a 一e r a n o n e ) 〔 4〕 。 表 l fIJ 出了三种结
构类型以及重要的倍半砧类成分 。
环烯醚菇类
环烯醚惦 ( ir d io ds ) 或通称为缘草环氧
三醋 ( v a le p o t r i e t e s ) 是撷草 中具镇静和抗肿
瘤等生物活性的重要成分 。 该属植物 中所含的
环烯醚 菇类成分很 多 , 至今已分离鉴定出 30
多种 〔 4, ’ 〕 (表 2) 。 结构分析表明 ,其分子为
多元醇的环戊并毗喃与各种有机酸形成的醋 。
不同环烯醚菇结构间的差异是由母核本身带有
的双键以及醋基的不同、 有无环氧基以及糖基
等因素造成的 。
环烯醚菇的含量在不同品种甚至同种植物
间相差很大 。 一般范围为 0 . 5% 一 9% , 秘鲁
产 的 撷 草 ( F . ht a ilc t or ids )鲜 根 含 量 可 达
14
. 巧% 。 季节不同 , 含量也有所差别 。 印度
撷 草 (蜘蛛 香 ) ( V . w a l i e h ii D C )在 7一 1 1 月份
中 , 以 9 月份含量最高 。 缘草叶中也含此类成
分 , 有的可达 5% 。 品种不同 , 组成成分也不
相 同 。 缘草 ( v . 口丈万` in a ils L )根 中主要含缘草
素 ( v a l t r a t e )和异撷 草素 (i s o v a l t r a t e ) , 其 次为
乙 酞 缘 草 素 (a e e v a l t r a t e )和 异 戊 酸 基
DOI : 10. 13220 /j . cnki . ji pr . 1992. 06. 007
12 9 9 年 第9 1 卷 第6 期7 3 4
表1 撷草属植物中重要的倍半菇类成分
R , R Z R , R Z
HH
0 H
H
0 H
H
O A C
O A C
H
O H
O H
H
O A C
H
O A C
缘草烷
缘草二醇
缘草一 8一醇
缘草一 2一醇
撷草一 8一乙酸醋
撷草 一 2一乙酸醋
绷草二乙酸醋
C HO
C O O H
C 0 0 H
C O O H
O H
O A C
缘草醛
缘草菇酸
经基缘草菇酸
乙酸氧基缘草菇酸
侧七厂、丫以
戈RHA C
e o e H Z C H (M e ) 2
C O C 4 H g
C O C S H I -
戊烯醇
E一戊烯乙酸酷
E一戊烯异戊筋
E一戊烯正戊酷
E一戊烯己醋
R
A C
e o e H ZC H (M e )
2
C O C ; H ,
C O C S H 一
Z 一戊烯乙酸醋
Z 一戊烯异戊醋
Z 一戊烯正戊醋
Z 一戊烯己醋
R
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缘草酮
H
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1 H Y
环野撷 草乙酸醋 (一 ) p a if g or ig ol
表 2 缴草属中环烯醚砧类成分
R I R Z R 3
cAvI
C l l
,
( ) R
l A a v 乙酞氧基撷草素
撷草素
7 一表去乙酸基异绷草素
1一声一乙酸缘草素
异撷草素
二乙酸基撷草素
高绷草素 l
高缘草素 2
1 1一乙酸缘草素
经基撷草素
异高乙酸缘草素
千里光缘草素
CA
V
vIiAl
M iV
CA
A a V
Iv
H
Iv
A c
A C
Iv
A c
A C
H iv
A i e
Iv
M iv
A a V
R’HR 3
I V
I iv
A c
I v
A a v
O H
二氢异缘草素
异戊酸基羚基二氢缘草素
二氢撷草素
高二氢缘草素
A H D 绷草素
扩cAvIh卜
vIhCrRIcA
,
R
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,沁2(|吸门川H、’lDO
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3 4 8 国外医学药学分册
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C r I v
A a V I V
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绷草素醉 Bl
乙疏级墓绷草素醉
绷草素醉 B ,
异戊酸基绷草素醉
缘草素醉 B ,
绷草素醇 B 6
绷草亲醉 B 7
缘草素醉 B :
v a le P o t r ia t h y d r i n e
扩hvl
ZCAR
R , R I
IV
R b
M iv
,
1卜去氧二氢绷草素
,
1 1一去氧高二氢缘草素
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夕侧o]盯勺刃,O玛l,QC火、丈已资./
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:浦C H z 0 R ’ R 〕 R t R 3 R 4葡萄糖 O H龙胆二糖 O HA C C I k a n o e o s i d e Ck a n o CO Si d e D氯化绷草素V.且了.,且
R 4
葡萄糖
龙胆二搪
k a n o e o s i d e A
k a n o e o s i d e B
RIvIh
七H : o H
I v : 一 C O C H ZC H (M e ) 2
A ,一 C o C H Zf`M e , ,
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H `一 C o C H ,斤(M “ ),
A e : 一 C O M e M iv : 一 C o C H ZC (M e ) 3 C r : 一 C O C H 二 C (M e )2
A a v : 一 C o气H C H (M “ ) ,
O C O M e
B`v : 一 C o C H Z斤(M e ) ,
A `c : 一 C o C H , C H ,
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M e、 “ v : 一 C o写H C H`M e ,,
O C O M e o C o C H
ZC H ( M e )2
0 H O C O M e
撷草素 ( i s o v a le r o x y v a l t r a t e h y d ir n ) , 从欧亚
撷草 ( V . a l ia r ia e户ila ) 中分得的环烯醚菇类
成 分撷草碱 (va le ir ne )是 由 1 种成分组成的 ,
主要成分有四种 : 撷草素 , 异戊酸基绷草素 ,
乙酞氧基撷草素 ( a e e t o x y v a l t r a t e h y d r i n ) 及
异 戊 酸 基 经 基 二 氢 撷 草 素 ( iso va le r -
o x y h y d r o x y h y d r o v a l t r a t e ) 〔 5〕 。
生物碱类
撷草属植物中所含的生物碱成分具有抗菌
活性 , 主要存茬于根和根茎中。 生物碱含量较
19 9 2年 第 19 卷 第 6期
上述两类成分明显低 , 约 1% 左右。 至今从撷
草根中分得的生物碱单体有 7 个 , 即撷草碱
( v a l e r i n e )
, 绷草恰碱 ( e h a t i n i n e ) , 缘草碱 A
和 B , 撷 草胺 碱 ( v a l e r i a m i n e ) , 本 天要 碱
一汤。一刊毛H-cI H ; 一公 o H撷草碱
R . H
R 二 O H
( a e t i n id i n e ) 及乙酞蔡咤 。 其中缘草碱 A 和 B
的结构类型较为重要 。
黄酮类
撷草属植物地上部分含丰富的黄酮 〔 6〕 ,
有些品种如 V . er ot 砷夕la 和 v . ca r da m in se 在
双向纸层析 中至少显示 出 20 种以上的成分 。
近年来 , 从 巧 种植物中分得的黄酮和黄酮贰
共 13 种 , 主要有 6 种 , 均为 已知黄酮 (表
3 )
。 黄酮贰中贰元所连接的糖 多数为 刀一 D 一葡
表 3
萄糖 。
绷草属植物中分离鉴定的黄酮
植 物 学 名 芹菜素 洋黄葵黄素 木犀素 姗皮素 金合欢素 山蔡酚 类鲸蜡素
a P i g e n i n d io s m
e t in lu t e o li n q u e r e e t in a e a ce t in k a e m P fe r o l e k a ce t in
蒙花贰
lin a r i n
+十+
十+
十+
++十
犷加 c ic “ la at
.V
a户n e n s is
V
.
e a声 r a r a 刃 1
犷.户dst e h e n k o l (新班缘草 )
.V hc ot n 口砷iaI
.V 那细` tr is
卜 g r口 .” 八e im i
叭 口 J ` in a ils L
.
(绷草 )
V
.
r o s ic a
卜 t u r c z an in o v i i g r u b
.
V
.
t u r k e s t a ic a
V
.
t u b e r o s a L
.
V
.
er io 砷 y la
F
.
e a r dU m讯 e s
犷. 户 t a , a n s i J o n e s (马蹄香 )
其他成分
从绷草根 中还分得酪氨酸 、 丙氨酸 、 谷氨
酞胺 、 下一氨基丁 酸和天门冬 酞胺等 。 此外 ,
撷草属植物含丰富的有机酸 , 除缘草酸 、 异撷
草酸 、 异 阿魏酸 、 咖啡酸和绿原酸外 , 另含
20 多种常见的游离酸 闭 。
缘草种子油 中还发现近 20 种脂肪酸 , 其
中亚油酸 占一半以上 。 其他含量较多的有芥
酸 、 棕搁酸 、 油酸 、 13 , 16 一廿二烯酸等 。
分析方法和植物组 织培养
分析方法
薄层 色谱 法 为最简便 、 快速的定性分析
方法 。 采用硅胶薄层板为支持刺, ,正己烷 一甲
乙酮 (4 : l) 为展开剂 , 以 3% 硝基苯毗喧酮
液 ( N B P ) 为显色剂 , 将喷洒显色剂 的板于
40 ℃加热 90 m in , 浸到 10 % 四甲撑五胺的丙
酮溶液 中 , 根据显示不 同的颜色 , 可区分单
烯 、 二烯和醇等不同类型的环烯醚菇 。 利用两
者形成的蓝色物质 , 还可在 5 6 0 n m 进行比色
测定 。 鉴定撷草菇酸类可选用硅胶 H F 25 ; 薄层
板 , 以 正 己烷 一 乙酸 乙醋 一醋 酸 ( 65 : 35 :
0
.
5) 为展开剂 , 刀一茵香醛为显色剂 , 并结合
U V 25 ; 观察荧光斑点 。
H p L C 法 色 谱柱 为 L i e h r o s o r p R p l s ,
柱温 3 0 aC , 以 p H Z 的乙睛 一 磷酸 ( 6 5 : 3 5 )
为流动相 , 检测波 长 2 25 n m 。 本法标 准差为
1
.
2 %
。 除检测环烯醚菇类外 , 还可检测环戊
、
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烷 、 倍半菇烯 、 经基倍半砧烯 、 乙烯氧基撷草
菇酸 、 缘草醛和缘草酸等 。 H P L C 法还可用
作 粗 制 剂 的 定 性 分 析 〔 8〕 D os sa ij 采 用
拼B o n d a p a k C l : 为色谱柱 , 以 甲醇 一水为流动
相 。 检测波长 : 异缘草素 、 乙酞缘草素为 254
n m
,
15 m in 出峰 ; 二氢缘草素和异戊氧基撷
草素为 2 0 8 n m , 10 m i n 出峰 。 本法标淮差为
1
.
5%
。
P a s h a n k o v 等 提 出用 弓!噪 美 辛 为 内
标 , 定量检测单烯和二烯类环烯醚菇含量的方
法 。 系 采 用 P e r k i n E lm e r C f s 柱 ( 2 5 0 x 4
n m )
,
10 拜m , 柱 温 4 0℃ , 以 含 有 0 . 0 5
m ol / L 磷酸的 甲醇 一水混合液为流动相 , 流
速 1 . 5 m l / m i n , U V 检 测 波长 单 烯为 2 10
n m
, 二烯类为 2 5 4 n m 。 本法快速 、 准确 , 并
适于连续分析 。 用 含 0 . 5% 磷 酸的 甲醇 一 水
( 8 0 : 2 0 ) 为流动相 , 本法也可检测撷草菇酸
类化合物。
此 外 , 快 速 、 简 便 的 滴 定 法 和 以
N H Zo H 一 eF cl
: 稀盐酸溶液为试剂的光电比色
法 , 也可用于测定环烯醚菇类成分的总含量 。
植物组织培养
近年来 , 为迅速繁殖撷草属植物并提高环
烯醚砧类活性成分的含量 , 许多学者对印度撷
草 (蜘蛛香 )进行 了植物组织培养 。 M at h ur 等
建立了移植嫩枝尖和叶腋芽体迅速繁殖印度撷
草的方法 〔9〕 。 vi ol o n 等证明 , 人工培养物中
缄草环氧三醋类含量 比野生植物 高 。 B e k er
等发现 , 用秋水仙碱处理的印度缘草培养物与
未处理的样品相比 , 不仅能产生高含量的缘草
环氧三醋类物质 , 还可增加新成分 。 其从培养
物中分离的 14 个化合物中 , 有 6 个仅存在于
培养的植物组织 中。 近年来的研究进 ` 步发
现 , 4 种植物生长调节剂有增加培养物中撷草
环氧三醋类含量的作用 。 其中二 甲基澳化吗琳
( 4 p p m ) 和二甲基氯化眠咤 ( 3 p p m ) 能使撷
草环氧三醋类含量提高 23 % , 并能使单烯 明
显转化为二烯化合物 ; 2一 ( 3 , 4一二氯苯氧
基 ) 三乙胺 ( 6 p pm ) 和 2一 ( 3 , 5一二异丙基
苯氧基 ) 三乙胺 (6 . 4 p pm ) 能将撷草环氧三
醋类的含量提高至 40 % 。 这些生长调节剂均
可用于增加植物组织培养物中菇类次级代谢产
物的含量 〔’ o〕 。 M i一k o v a 等还发现 , 促进愈伤
组织生长的最好生长调节剂是在基质中补充一
定量的蔡乙酸和动力精等 〔 ’ ` , , ’ 〕 。
药理 作用
对 C N S 的抑制作用
撷草属植物中的许多成分对中枢神经均有
抑制作用 。 缘草挥发油 中的撷草醛 、 撷草菇
烯 、 缘草酮等均有镇静 、 解痉作用 , 异撷草酸
有 镇痛作用 。 缘 草二醇 类为镇 静有效 成分 ,
SA R 分析证 明镇静作用按下列顺序递降 : 8一
乙酸醋 > 2 , 8一双 乙酸醋 > 2一乙酸醋 一 8一酮基
> 2一 经基 一 8一酮基 > 2一乙酸 醋 > 缘草 二醇 。
撷草环氧三醋对小鼠和大鼠均显示出很强的镇
静 、 安定活性 , 能抑制敞箱实验 (o p en 一 ife ld)
的定向反射 , 增强和延长巴比妥的睡眠作用及
时间 , 并具有改善适应能力的作用 〔” 〕 , 对猫
也显示安定作用 。 撷草醚醋的镇静 、 安定作用
还 体现 在 能降 低大 鼠脑 对 葡萄糖 的 利用 率
上 〔 14〕 。
近年来 , 对撷草中起镇静作用的活性成分
提出了一些新的看法 , 并对镇静机制进行了探
讨 。 K ir ge lst ie n 等研究了撷草的二氯甲烷提取
物对大鼠中枢神经的抑制活性 , 认为撷草对中
枢神经的抑制作用不是缘草醚醋等引起的 , 而
是一些低含量的其他成分所致 〔” 〕 。 M ed in a
等采 用单克隆 抗体法检测苯 二氮草 ( B D z )
类 , 发现绷 草等植物 中含有类似 B D Z 的物
质 , 并 能 与 中枢 B D z 受 体 相 结 合 〔 l6j 。
B al d ul in 等则用放射受体结合法研究撷草粗制
剂与 C N S 中参与调节镇静作用的受体间的相
互作用 , 认为撷草提取物含有一种或多种成分
能与腺普酸相互作用 , 而不是与 B D Z 受体作
用 〔 1 7〕 。
细胞毒和抗肿瘤作用
缘草环氧三醋类成分不但有镇静作用 , 而
且有细胞毒和抗癌活性 。 B o u nt h a n h 等发现
19 9 2年 第19 卷 第6 期
缘草醚醋(V T) 、 二氢撷草醚醋( DV ) 以及
撷草 醛(B D) 三 种缘 草三 醋在 3拜 g/m l
时 , 对培养的 H T C 系肝细胞有明显的细胞毒
作用 , 用雌 性 K er sb n 腹水癌小鼠试验 D V
的抗 癌活性 表 明 , 1 . 25 m g / 只单 剂治疗 瘤
鼠 , 4 8 h 腹水 消退 。 张人伟则进一步证实 了
V T 对宫颈鳞癌细胞 、 胃腺癌细胞 、 肺腺癌细
胞均有杀伤作用 〔’ 8〕 。
对心 、 血管系统的作用
缘草乙醇提取物在麻醉猫及离体家兔实验
中能明显扩张冠状血管并降低心肌的氧耗量 。
绷草氯仿提取物不仅可抑制 中枢 , 而且有预防
心肌缺血和改善心肌循环的作用 。 缘草中挥发
性成分有抗心率失常及降压作用 。
抗菌及抗病毒作用
缘草总生物碱有抗菌作用 , 尤其对 G + 菌
效果较好 , 生物碱单体撷草碱和撷草恰碱也有
一定的抗菌作用 。
马静等将马蹄香 ( F . 户 tam an is oJ ne s) 水
煎剂用于临床治疗 4 63 例婴幼儿轮状病毒性腹
泻 , 并用云南树翎作实验动物 。 结果表明 , 动
物及患儿 治疗 组 止泻 时 间明显 短 于对照 组
( p < .0 01 )
, 而且治疗组动物小肠病变轻 、 修
复快 , 说明缘草是治疗小儿轮状病毒性腹泻的
有效药物 〔’ 9 〕 。
应 用
目前 , 该属植物已有 7 个品种供药用 , 有
的已制成一定剂型市售 , 如缘草配早已用于神
经 衰 弱 、 失 眠 等 症 ; 撷 草 环 氧 三 醋
( va ltr at u m ) 已作为镇静药用于临床 。 鉴于该
属植物中类似结构的生物活性成分较多 , 并且
毒副作用小 , 作用缓和 , 可长期应用 , 因此该
属植物在药物开发 中趋向于采用含有活性的撷
草粗制剂 , 配 以其他辅助药物来治疗各种疾
病。 如作为缓和镇静剂的剂型有 : 撷草配制成
口香糖用来抗焦虑 〔20 〕 ; 或制成糖浆用于治疗
成人和儿童的失眠症 2lt 〕 ; 也有缘草加上去咖
啡因的咖啡茶 , 晚上饮用 , 不但可镇静 , 又可
防止龋齿 〔2 2〕 。 近年来 , I hs 记 a等则把缘草水
剂或酒剂配以各种维生素用于治疗妇女经前综
合征 〔 2 , 〕等 。 随着缘草属植物的化学和药理学
研究的深人开展 , 该属植物必将得到广泛的开
发和应用 。
参 考 文 献
1 L o k a r L C e t a l
`
B io
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一 567
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3 B o s R e t a l
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P h y t o c h e m i s t r y
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1 98 6 : 25 ( l ) :
13 3一 13 5
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J E t h n o p h a rm
a e o l
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19 88 : 22 (2 ) :
12 1一 14 2
5 T r z h e t s in k i i S D
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K h im F a rm Z h
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1 9 87 ; 2 1 ( 1 1 ) :
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29 5
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一
83
10 F o e r s te r W
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2 N a t u r F o r se h
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C B i o s e i
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1 98 7 :
4 2 ( l / 2 ) : 3 3一 4 0 ; C A 19 87 ; 106 : 194 74 5 X
1 1 M il k o v a E
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A e t a B i o t e c h n o l
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19 88 : 8 (5 ) :
4 27一 4 33
12 M il k o
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B i o l F a r
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19 86 (P u b 1 99 0 ) : 7 8
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7 9
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9 6一 10 2 ; C A ] 99 1 ; 1 14 : 13 796 7 n
1 3 D u n a e v V V
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F a rm
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19 87 : 50 (6 ) :
33一 37
14 G ru s l a D
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(4 1) : 22 49
一
22 53
1 5 K r i e g ls te i n J
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D t s c h A p o t h 上 z t g , 19 88 , 1 28 (4 0 ) :
204 1一 20 4 6
16 M e d in a J H e t a l
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B i o e h e m B io p h y s R e s C o m m u n
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一 64 0
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107一 108
19 马 静等 . 云南中医杂志 , 198 7 : 8 (4 ) : l 一 3
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,
4 ; C A 19 89 ; 1 1 1 : 20 164 3w
J P 6 1 4 7
198 8 ; 11 :
o o s a w a H
.
J Pn K o k a i T o kk y o K o h o J P 0 1 196
,
2 58
,
1989 ; 8 : 8 ; C A 199 0 ; 112 : 6 50 19
I s h id a K J
.
K o k a i T o k k y o K o h o J P 0 2 2 50 8 30
,
19 90 ; 10 : 8 ; C A 19 9 1 ; 1 14 : 184 08 6 )
细胞内 C a +2 的测定方法及评价
河北医学院 周保军综述 李蕴 山 傅绍置审校
摘要 C a +2 在细胞的信 息传递 中起着重要 的作用 , 测 定细胞 内 C a +2 浓度是研究 c a +2 功
能 的重要 手段 。 为 了能选择适 当 的方 法测 定 多种细胞内游 离 C a +2 浓度 , 本文对钙荧 光
指示 剂 、 C a +2 选择性微 电极刚 定法 , 放射性示踪等方 法及其 优缺 点进行综述及评价 。
C a +2 可以激发 、 调节及影响细胞的多种功
能 , 被认为是细胞内重要的信使之一 。 要彻底
了解 c a +2 完成 这些功能及调 节的详尽过程 ,
必须依赖细胞内 C a +2 浓度的测定 , 并监测在
细胞的功能调节过程 中 C a +2 浓度的变化 。
荧光指示剂
在钙荧光指示剂 中 , F u r a 一 2①得到广泛应
用 , 目前已成为测定细胞内 C a +2 浓度的最佳
荧光指示剂 。
导入细胞的方式
1
. 用微注 射法 将 F ur a 一 2 直接注 入细 胞
内 〔` 〕 。
.2 膜片钳位微量吸移管法 〔’ 〕 。
3
. 用 F ur a 一 2 / A M ② 同 细 胞 温 孵 ,
F u ar 一 2 / A M 进入细胞后水解为 F ur a 一 2 , 滞
留于胞浆 中。 此方法对细胞无损伤 川 。
细胞内 c a +2 浓度的计算方法
1
.比率法 〔3〕
〔e a Z + 〕 (R 一 R _ 、 )K D瓦霖瑞劝( 5 f Z / S b Z
以消除仪器不稳定及细胞内染料含量变化而引
起的误差 。
2
.用已知 C a Z+浓度的溶液做标准曲线进行
测定 。
3
.用数字成像荧光显微镜 , 但仪器昂贵而
复杂 。
评 价
F ur
a 一 2 与 c a +2 结合后有很高的荧光强度
( F u
r a 一 2 的 量 子 产 率 比 Q u i n 一 2③ 高 3 0
倍 〔 ’ 〕 ) 。 这不仅提 高了测量敏感度 , 也减少
了细胞所需要的荧光指示剂的负荷量 。 使其对
胞浆 中 c a +2 的缓冲作用减小以至消失 , 适宜于
测定 细胞 内 e a Z+的 “ 实际 ” 浓度 。 F u r a 一 2 同
C a +2 结合后 , 激发光 谱高峰从 380 n m 移至
3 4 0 n m
, 有较大漂移 , 两者的荧光比率 ( R )
有利于校正胞浆内 C a Z+ 浓度 。 F ur a 一 2 的测定
范围为 10 ’ “一 10 ’ sm ol / L , 能测定短暂而快
速的 c a +2 浓度的变化 〔’ 〕 , 并容易应用于显微
镜及 流式 细胞 仪测 定细 胞及组 织 中 C a Z+ 浓
度 。 F ur a 一 2 比 Q u in 一 2 能更好地测定单个细
其 中 K D 为 F ur a 一 2 对 c a +2 的解离平衡常
数 , R 为 F u r a 一 2 的荧光比率 , R m 、 n , R m a 、 分
别是 C a +2 浓度 为零 及饱和 浓度 时的荧 光 比
率 , S r Z , S b Z 分别是游离型染料和 C a Z + 饱和
型染料在第二激动波处的测定值。 用此方法可
① F ur a 一 :2 2一2[ 一 (5 一翔基卜呀吐基卜5一 2[ 一 2[ 一 (双狡甲墓 )氨
基一 5一 甲基卜苯氧基】乙氧基一 6一 (双狡 甲基 )氨基苯并吠喃
② F盯 a 一 2 / A M : F盯a 一 2一乙酸氧基甲醋
③ Q iu n 一 :2 2一2I[ 一仪双翔 甲基 )氨基卜 5一甲基卜苯氧基 ]甲基
一 6 一甲氧墓一 8二仪双矮甲基 )氮基 l唆琳