全 文 ：HPLC法测定滇西产金丝桃属植物中金丝桃素的含量
贺建国1　赵　晶1　王金委2
1.成都军区昆明总医院 (昆明　650032) 　2.贵阳医学院 97 级实习生
摘　要　目的:测定生长于云南西部的 7 种金丝桃属植物中金丝桃素 (hypericin)的含量 , 并考察其分布。方法:采用
HPLC 法 , 使用ODS 色谱柱 , 流动相 B:甲醇-乙腈-乙酸 (50∶50∶0.5), A:乙腈 (B∶A=6∶4)检测波长 590mm。 结果:
回归方程:C=0.5211S-0.04988 , r=0.99998 , 加样回收率 102.7%, 7 种滇西产金丝桃属植物中有 3 种含金丝桃素。
结论:本实验建立的方法适用于分析金丝桃属植物中金丝桃素含量 , 具有良好的重现性及精密度。
关键词　HPLC　金丝桃素　金丝桃属
中国图书资料分类法分类号　R927/286
DETERMINATION OF HYPERICIN IN HYPERICUM PLANTS FROM THEWESTERN YUNNAN WITH HPLC
He Jianguo , Zhao Jing , Wang Jinwei
Abstract Objective:To assay hypericin in 7 kinds of hypericum plants collected in western Yunnan and to investigate their distribution.
Methods:HPLC method has been developed with ODS column.The mobile phase B:methanol-acetonitrile-acetic acid , (50∶50∶0.5),
A:acetonitrile (B∶A=6∶4).The wave length of UV Detectorwas set at 590nm.Results:The recovery ratewas 102.7%.The hypericin
was detected in 3 of the 7 kinds of hypericum plants.Conclution This method possesses a high accuracy and precision in determination of
hypericin in plants.
Key words:HPLC , Hypericin , Hypericum
　　金丝桃属 (Hypericum L.)植物属于藤黄科
(Clusiaceae)。该属植物全世界约 400 余种 , 我国有
55种 , 8亚种。在该属植物中 , 约有 17种被记载为
民间草药 , 具有解毒消炎 、 止血生肌 、 调经活血等
疗效〔1〕 。近年来的研究发现 , 该属植物中含的金丝
桃素 (hypericin)具有抗病毒 、抗抑郁 、 镇静 、 抗菌
消炎 、 创伤收敛等作用 , 能抑制 DNA 、 RNA 病毒 ,
对肿瘤细胞等也有一定的抑制作用〔2 ～ 6〕 。金丝桃属
植物资源的合理开发利用成为继人参 、 银杏 、 红豆
杉之后的又一国际研究开发热点 。含金丝桃素的金
丝桃属植物成为近年世界畅销的中草药之一 。本文
从滇产金丝桃植物中寻找金丝桃素 、 采用 HPLC 法
测定金丝桃属植物中金丝桃素的含量 , 并考察了滇
西金丝桃属植物中Hypericin的分布情况。
1　材料与方法
1.1　仪器　高效液相色谱仪 (美国 Beckman):紫外
分光光度计 (日本岛津);分析天平 (湘仪天平仪器
厂)
1.2　试药　金丝桃素对照品 (由美国 sigma 公司提
供);甲醇 (上海化学试剂研究所);乙腈 (北京化
工厂);乙酸 (上海试剂一厂)。
1.3　色谱条件　色谱柱:HYPERSIL ODS (250×4.
6mm 10um);流动相 B:甲醇-乙腈-乙酸 (50∶50∶
0.5);A:乙腈 (B∶A=6∶4);流速:0.6ml/min;
检测波长:590nm;柱温:室温;进样量:20μl;色
普图见图 1 , 保留时间 T=5.114min。
图 1　金丝桃素色谱图
2　结果
2.1　标准曲线的制备　
精密称取金丝桃素对照
品0.86mg , 置于 200ml
容量瓶中 , 加甲醇溶解
并稀释至刻度 , 摇匀备
用。精密吸取上述溶液
0 , 1 , 2 , 4 , 8 , 12 ,
16ml 置于 25ml 容量瓶
中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀。分别进样 20μl 测
定 , 结果见表 1 , 以进样浓度 (mg/L)为横坐标 ,
峰面积 (S)为纵坐标 , 求得回归方程为:Y =0.
5211X-0.04988 r=0.99998
表 1　标准曲线测定结果
编号 浓度 (mg/ L) 峰值面积 (S)
1 0.0000 0.08728
2 0.1720 0.4299
3 0.3440 0.7533
4 0.6880 1.4319
5 1.3760 2.7363
6 2.0640 4.0358
7 2.7520 5.3879
·23·西南国防医药 2002年第 12卷第 1期
2.2　精密度试验　取同一浓度的金丝桃素对照品甲
醇溶液5份 , 在上述色谱条件下测定 , 金丝桃素的
RSD为 1.5%, 结果见表 2。
表2　精密度试验结果
编号 理论值(mg/L)
峰面积
(S)
实测值
(mg/L)
RSD
(%)
1 　 2.8852 1.4535
2 2.9466 1.4855
3 1.3760 2.9635 1.4943 1.5
4 3.0013 1.5140
5 2.9661 1.4957
2.3　重现性实验 　精密称取遍地金 (Hypericum
wightianum)提取物 2.74mg 溶于 2ml甲醇中 , 摇匀 ,
在上述色谱条件下 , 测定该溶液中金丝桃素含量 ,
重复测定 6次 , 结果 RSD为 1.0%, 见表 3。
表3　重现性实验结果
编号 峰面积 (S) 实测值 (mg/L) RSD (%)
1 4.8250 2.4644
2 4.8954 2.5011
3 4.8714 2.4886 1.0
4 4.9228 2.5153
5 4.9466 2.5277
6 4.9538 2.5315
2.4　加样回收试验　取浓度为2.5049mg/L的遍地金
(Hypericum wightianum)样品 3 份 , 体积为 30 、 40 、
50μl , 分别加入 50μl浓度为 2.7520mg/L 标准品溶
液中 , 摇匀 , 在上述色谱条件下测定 , 其回收率为
102.7%, RSD为 1.1%, 见表 4。
表 4　加样回收试验结果
编号 理论值(mg/ L)
峰面积
(S)
实测值
(mg/ L)
回收率
(%)
RSD
(%)
1 2.6593 5.3562 2.7412 103.1
2 2.6421 5.3207 2.7227 103.1 1.1
3 2.6284 5.2451 2.6833 102.1
3　滇西产金丝桃属植物中Hypericin的分布
3.1　样品采集见表5。
3.2　供试液的制备　分别取上述采集的干燥样品10
g , 均以甲醇提取 , 浓缩 , 除去叶绿素 , 定容于 50ml
甲醇 , 过滤 , 分别进样 20μl , 在上述色谱条件下测
定。计算原植物中 Hypericin的含量 。
3.3　测定结果见表6。
表 5　滇西金丝桃属药用植物名录
编号 种名 产地 样品采集地
1 尖萼金丝桃 (Hypericum acmosepalum) 洱源　大理　丽江 鹤庆县 , 海拔 2250m
2 西南金丝桃 (Hypericum henryi) 昆明　大理　禄劝 中旬 , 海拔 3050m
3 美丽金丝桃 (Hypericum bellum) 大理　丽江 丽江白水台 , 海拔 3000m
4 川滇金丝桃 (Hypericum forristii) 大理　丽江　贡山　滕冲 大理苍山 , 海拔 2500m
5 山栀子 (Hypericum pseudohenryi) 大理　中旬　丽江 鹤庆县 , 海拔 2150m
6 黄花香 (Hypericum beanii) 昆明　路南 羊老哨 , 海拔 2050m
7 遍地金 (Hypericum wightianum) 云南省大部地区 鹤庆县 , 海拔 2150m
表 6　滇西产金丝桃属植物中金丝桃素 (HP)含量
样品编号 供试样品峰面积 (S)
供试样品HP
含量 (mg/ L)
原植物中 HP
含量 (mg/kg)
1 0.0176 / /
2 0.0267 0.2347 /
3 0.5445 0.1186 1.174
4 0.3226 / 0.593
5 0.01631 / /
6 0.0149 2.5049 /
7 4.9026 / 12.525
4　讨论
4.1　检测波长的选择 　据文献报道 , 金丝桃素在
84.0 、 331.0 、 375.0 、 473.0 、 508.5 、 548.0 、
590.0nm处均有吸收 , 其中 590nm 处为最大吸收 ,
经试验结果证明金丝桃素在 590nm 处测得的样品干
扰较少 , 故选用此波长作为测定波长 。
4.2　金丝桃素易溶于吡啶 、丙酮 、甲醇等有有机溶
剂 , 但吡啶 、丙酮在金丝桃素峰时 , 存在溶剂峰的
干扰 , 而甲醇没有溶剂峰的干扰 , 故选用甲醇作为
溶剂 , 并用 0浓度作为第一点做标准曲线以排除干
扰。
·24· 西南国防医药 2002年第 12卷第 1期
4.3　流动相的选择　曾试用乙腈 -乙酸 (0.5%)
2∶8 , 醋酸乙酯-甲醇-1.56%磷酸二氢钠 (pH =
2.1)1∶4∶1作为流动相。结果发现与杂质峰分离较
差 , 后试用流动相 B 甲醇-乙腈-乙酸 (50∶50∶0.
5), A:乙腈 (B∶A=6∶4)样品得到了很好的分离 。
4.4　本方法能有效地分离金丝桃素及其它杂质峰 ,
回收率高 , 线性好 , 灵敏度高 , 可作为原料药及制
剂的质量检测方法。
4.5　样品测定结果表明所采7种滇西金丝桃属植物
中有3种含有金丝桃素 , 仅遍地金中含量较高 , 美丽
金丝桃和川滇金丝桃中含量甚微。
参考文献
〔1〕 　中草药大辞典:5052
〔2〕 　De Smet et al.bri medi J , 1996;313:241
〔3〕 　Vlietinck AJ , De Bruyne Apers S , et al.Plant-derived
leading compounds for chemotherapy of human
immunodeficiency virus (HIV) infection.Planta Med.
1998 , 64 (2):97
〔4〕 　赵晶 , 张致平 , 陈鸿珊.金丝桃素的全合成及对人免
疫缺陷逆转录酶的抑制活动.药学学报 , 1998;33
(1):67
〔5〕 　Vander Werf QM , Saxton RE , Chang A , et al.Hypericin:a
new laser phototargeting agent for human cancer cells.
Laryngoscope , 1996 , 106 (4):479
〔6〕 　Kartin Th and Gobe I.Determination of hypericin and
pseudohypericin by thin layer chromatograpl densitometry.J
Chromatogr , 1992;(609):423
〔7〕 　Ginseppe Micali , Francesco Lanuzza, Paolina Cume.High
Performance liquid chromatographic determination of the
biologically active principle Hypericin phytotherapeatic
vegetable extracts and alcoholic berages. J Chromotogr ,
1996;(731):336
收稿日期:2001-11-10
利福平药动学对药物性肝损害的影响研究
缪士平1　胡天祥1　杜飒英1
1.西藏军区总医院药剂科 (拉萨　850003)
摘　要　目的:本文通过对利福平导致药物性肝损害机理的研究 , 寻找治疗结核病而不致造成药物性肝损害的合理给药方
案。方法:采用药动学和免疫学对利福平导致药物性肝损害机理进行研究。结果与结论:药物性肝损害可能是由于利福平
代谢物引起 , 减少用量 , 提高血药浓度 , 减少代谢物形成是预防药物肝损害的有效途径。
关键词　利福平　药动学　肝损害
中国图书资料分类法分类号　R52
Study of influence of Rifompicin pharmacokinetics in liver damage
Miao Shiping , Hu Tianxiang , Du Saying
General Hospital of Tibet Military Command , Lhasa , 850003.
Abstract Objective:To study the mechanism of the cholestatic hepatitis caused by rifompicin (rifompicin hepatitis)
and seek the rational regimen.Methods:To use some ways of pharmacokinetics and immunology.Results:The study
demonstrated that the rifompicin hepatitis may be caused by rifompicin metabolites.Reducing the dose , increasing
rifompicin concentration in the blood and decreasing the production of the metabolites were effective methods to prevent
the rifompicin hepatitis.
Key words:rifompicin , pharmacokinetics , immunology , hepatitis
　　利福平治疗结核病导致药物肝损害屡报不鲜 ,
为阐明作用机理并企图通过研究利福平药动学来治
疗结核病而不致造成药物肝损害的有效途径 , 我们
进行了利福平的药动学 、代谢物 、 免疫学和给药方
案的研究 。报告如下:
1　药动学研究
1.1　实验方法　标准曲线:取利福平自制精品配制
成 40μg/ml 、 6μg/ml、 10μg/ml 、 12μg/ml , 用 53-W
紫外分光光度计测定 , 得标准曲线:A-C 。
　　健康成年自愿者 6名 , 一次口服利福平 600mg ,
·25·西南国防医药 2002年第 12卷第 1期