全 文 ：书北方园艺２０１５（１３）：１～５ ·试验研究·
第一作者简介：梁婷婷（１９８９－），女，硕士研究生，研究方向为园林
植物种质资源及遗传育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｔｉｎｇ２００９２１０８＠１２６．ｃｏｍ．
责任作者：臧德奎（１９６６－），男，博士，教授，现主要从事植物分类和
种质资源等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚａｎｇｄｋ＠ｓｄａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０９７２４０６）；山东省农业良
种工程重大课题资助项目（鲁农良字［２０１０］６号）。
收稿日期：２０１５－０１－１９
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５１３００１
梨属野生资源遗传多样性的ＳＲＡＰ分析
梁 婷 婷，马 燕，臧 德 奎
（山东农业大学 林学院，山东 泰安２７１０１８）
摘 要：以不同地区的梨属６个野生种和１份西洋梨对照种质为试材，运用ＳＲＡＰ技术研究
了梨属部分野生种的遗传多样性。结果表明：用１４对ＳＲＡＰ引物共检测到位点１９９个，其中１９４
个多态性位点，多态位点百分率（ＰＰＬ）为９７．２９％，Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈ）为０．２９６ １，
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ信息指数（Ｉ）为０．４５１ ９，表明梨属野生种质具有较高的遗传多样性水平。种间遗传分
化系数（Ｇｓｔ）为０．６４６ ２，种间遗传一致度（ＧＳ）和遗传距离（ＧＤ）分别为０．５１２ ６～０．９２０ １和
０．０８３ ２～０．６６８ ３，其中河北梨、秋子梨和褐梨两两间的遗传距离均小于与其它种间的遗传距离，
表明三者间亲缘关系密切；崂山梨与褐梨近缘，杜梨与褐梨近缘，而豆梨与国产其它物种的亲缘
关系较远。主坐标分析与聚类分析结果相吻合，且所显示的种质间关系更加直观。
关键词：梨属；遗传多样性；河北梨；崂山梨；ＳＲＡＰ
中图分类号：Ｓ ６６１．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）１３－０００１－０５
我国是梨属（Ｐｙｒｕｓ）植物的分布中心，丰富的野生
种质资源是重要的育种材料，对品种改良具有特殊价
值［１］。在野生种中，河北梨（Ｐ．ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ）被列为我国
１２０种极小种群物种之一，俞德浚［２］根据外部形态推测它
可能起源于秋子梨（Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ）和褐梨（Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ）
的自然杂交；崂山梨（Ｐ．ｔｒｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ）也是一个狭域分布
的濒危物种，仅见于山东崂山［３－４］，在生物多样性保护领
域具有重要价值。在该属植物的遗传多样性研究方面，
蒲富慎等［５］根据核型分析过５个种的进化关系，黄礼森
等［６］观察了部分种类的花粉形态，李秀根等［７］根据花粉
性状研究了７个野生种的亲缘关系，Ｔｅｎｇ等［８］利用
ＲＡＰＤ技术对东亚梨属原产种的亲缘关系进行了研究，
范太伟等［９］对甘肃中部部分梨资源进行了ＳＳＲ分析，杨
军［１０］分析了豆梨（Ｐ．ｃａｌｅｒｙａｎａ）和杜梨（Ｐ．ｂｅｔｕｌａｅｆｏｌｉａ）
及其杂交后代的遗传多样性，刘晶［１１］结合ｃｐＤＮＡ单倍
型和ｎＳＳＲ分析方法，对野生豆梨和川梨（Ｐ．ｐａｓｈｉａ）的
群体遗传多样性和遗传结构进行过评价。但至今尚鲜
见基于分子标记的河北梨和崂山梨等遗传多样性研究。
作为一种成熟的标记手段，ＳＲＡＰ分子标记［１２］在野生或
珍稀植物资源遗传多样性评价方面已获得广泛应用，如
张安世等［１３］对濒危物种太行菊的遗传多样性研究，彭方
仁等［１４］对油茶种质的遗传多样性分析，郭大勇等［１５］对
湖北海棠种内遗传变异的研究。该研究采用ＳＲＡＰ技
术对包括河北梨和崂山梨在内的６个野生种３０份种质
和１份西洋梨（Ｐ．ｃｏｍｍｕｎｉｓ）对照种质的遗传多样性进
行了分析，以期了解河北梨和崂山梨的遗传多样性特点
及其与近缘种的亲缘关系。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试梨属样品涵盖７个种，即河北梨、崂山梨、秋子
梨、褐梨、豆梨、杜梨、西洋梨，于２０１３—２０１４年采自山东
崂山、蒙山、大珠山以及河北昌黎（表１）。凭证标本存山
东农业大学标本室（ＳＤＡＵ）。采样间距在１００ｍ以上，
采集新鲜幼嫩叶片放入密封袋中，用变色硅胶干燥，同
时记录所采样品的地点、海拔、经纬度并编号。
１．２ 试验方法
１．２．１ ＤＮＡ提取 基因组ＤＮＡ提取采用改良ＣＴＡＢ
法［１６］。ＤＮＡ质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和核酸蛋
白分析仪分析法［１７－１８］。
１．２．２ ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系 ＳＲＡＰ引物设计参照Ｌｉ
等［１２］方法，从２４７对引物组合中筛选出了１４对可用于
后续扩增的引物（表２），所选引物均能扩增出数量稳定、
清晰的条带。经正交实验优化，最终反应体系定为２５μＬ，
其中含有１０×ＰＣＲ ｂｕｆｅｒ ２．５μＬ，２．０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｇ２＋，
２００μｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰｓ，０．４μｍｏｌ／Ｌ引物，１．５ＵＴａｑ酶，６０ｎｇ
模板ＤＮＡ，用ｄｄＨ２Ｏ调整使终体积为２５μＬ。ＰＣＲ扩
增程序为：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性１ｍｉｎ，３５℃退火
１
·试验研究· 北方园艺２０１５（１３）：１～５
表１ 供试梨属样品概况
Ｔａｂｌｅ １ Ｇｅｎｅｒａｌ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｙｒｕｓ ｓａｍｐｌｅｓ
编号
Ｎｏ．
种类
Ｓｐｅｃｉｅｓ
学名
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｎａｍｅｓ
采集地
Ｏｒｉｇｉｎ
地理位置
Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎ／（°）
海拔
Ａｌｔｉｔｕｄｅ／ｍ
１ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东大珠山 北纬３５．７７６ １８、东经１１９．９９３ ９０ １５０
２ 杜梨 Ｐ．ｂｅｔｕｌａｅｆｏｌｉａ 山东大珠山 北纬３５．９７６ ２６、东经１２０．０６８ ４９ ２２４
３ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东大珠山 北纬３５．７８０ ４２、东经１１９．９９４ ４３ １０６
４ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东大珠山 北纬３５．７７５ ６３、东经１２０．００６ ２５ ５０
５ 西洋梨 Ｐ．ｃｏｍｍｕｎｉｓ 山东蒙山 北纬３５．５４４ ４０、东经１１７．８７７ ０１ ４３８
６ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东蒙山 北纬３５．５４４ ３９、东经１１７．８４８ ５０ ７１２
７ 豆梨 Ｐ．ｃａｌｌｅｒｙａｎａ 山东蒙山 北纬３５．５４８ ０１、东经１１７．８５１ ９２ ９８２
８ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．２０４ ９２、东经１２０．１０５ ０７ ４２９
９ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１７２ ９０、东经１２０．６２６ ４２ １ ０１３
１０ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东崂山 北纬３６．２０６ ５３、东经１２０．６７２ ２２ １８１
１１ 河北梨 Ｐ．ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１８１ ３２、东经１２０．６２８ ２５ ９４０
１２ 崂山梨 Ｐ．ｔｒｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ 山东崂山 北纬３６．１５９ ７１、东经１２０．６６２ ６０ ５２０
１３ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１８７ ９０、东经１２０．１０１ ６７ ７３２
１４ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．２０４ ９２、东经１２０．６３５ ８０ ８４４
１５ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１４７ ４５、东经１２０．６７２ ５５ ２９３
１６ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东崂山 北纬３６．１５８ ００、东经１２０．６６４ ５０ ２２４
１７ 褐梨 Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ 山东崂山 北纬３６．２０６ ５３、东经１２０．６７２ ２２ １８１
１８ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１８６ ３９、东经１２０．６１２ ５０ ８０２
１９ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１５１ ５０、东经１２０．６６７ ３７ ３５８
２０ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１５７ ０７、东经１２０．６６３ ５７ ４５３
２１ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１７４ ８１、东经１２０．６２２ ６３ ９５６
２２ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１９８ ５１、东经１２０．６５４ ０１ ６０６
２３ 河北梨 Ｐ．ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１８１ ４５、东经１２０．６２５ ７０ ９４６
２４ 崂山梨 Ｐ．ｔｒｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ 山东崂山 北纬３６．１４３ １２、东经１２０．６５９ ３１ １６３
２５ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１８６ ２７、东经１２０．６１４ ５６ ７９４
２６ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．２０５ ０３、东经１２０．６４２ ９４ ７９９
２７ 河北梨 Ｐ．ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１８１ ０１、东经１２０．６２８ １４ ９５３
２８ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１４１ ７９、东经１２０．６６０ ４５ ２２３
２９ 秋子梨 Ｐ．ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 山东崂山 北纬３６．１６９ ５５、东经１２０．６２４ １６ ８０９
３０ 河北梨 Ｐ．ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ 河北昌黎 北纬３９．７６４ ２１、东经１１９．１６９ ５２ １５２
３１ 河北梨 Ｐ．ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ 河北昌黎 北纬３９．６９５ ７４、东经１１９．１６９ ４３ １６１
表２ ＳＲＡＰ扩增引物组合序列
Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ＳＲＡＰ ａｎａｌｙｓｉｓ
引物组合
Ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
引物组合序列Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ
正向引物Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ 反向引物Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ
ＭＥ１－ＥＭ３ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ －３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＣＡ －３′
ＭＥ２－ＥＭ３ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＣＡ －３′
ＭＥ２－ＥＭ１０ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ －３′
ＭＥ３－ＥＭ１０ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ －３′
ＭＥ４－ＥＭ１ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ －３′
ＭＥ５－ＥＭ１０ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＡＡ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ －３′
ＭＥ５－ＥＭ１１ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＡＡ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣ －３′
ＭＥ６－ＥＭ１０ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ －３′
ＭＥ６－ＥＭ１３ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＣＣ －３′
ＭＥ６－ＥＭ１６ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＣＡ －３′
ＭＥ７－ＥＭ３ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＣＡ －３′
ＭＥ７－ＥＭ１０ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ －３′
ＭＥ９－ＥＭ１４ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＧＣ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＧ －３′
ＭＥ１３－ＥＭ６ ５′－ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＣＧＴ－３′ ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＧ －３′
２
北方园艺２０１５（１３）：１～５ ·试验研究·
１ｍｉｎ，７２℃延伸１ｍｉｎ，进行５个循环；９４℃变性１ｍｉｎ，
５０℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸１ｍｉｎ，进行３０个循环；７２℃延
伸７ｍｉｎ，４℃保存。
１．３ 数据分析
根据扩增条带结果，在相同迁移率位置上，有记为
１，无记为０，得到原始数据矩阵。采用ＰＯＰＧＥＮＥ １．３２
软件统计：ＮＰＬ、ＰＰＬ、Ｎａ、Ｎｅ、Ｈ、Ｉ、ＧＳ、ＧＤ、Ｈｔ、Ｈｓ等信
息指数；采用Ｎｅｉ’ｓ基因多度法计算种间遗传分化系数
Ｇｓｔ＝Ｄｓｔ／Ｈｔ，其中Ｈｔ＝Ｈｓ＋Ｄｓｔ，Ｄｓｔ为种间遗传多样性。
采用ＮＴＳＹＳ ｐｃ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１０ｅ软件，利用ＵＰＧＭＡ
方法进行样品遗传相似性聚类，并绘聚类图，利用
Ｄｃｅｎｔｅｒ程序进行Ｎｅｉ’ｓ标准遗传距离的矩阵转换，并用
Ｅｉｇｅｎ程序和３Ｄｐｌｏｔ生成主坐标［１９］。
２ 结果与分析
２．１ ＳＲＡＰ引物扩增多态性分析
经筛选出的１４对引物扩增，３１份样品共扩增出１９９
个位点，其中多态性位点１９４个，多态性位点百分率
（ＰＰＬ）９７．２９％（表３），表明梨属野生种质资源的遗传多
样性较高。每对引物扩增的位点数最小为８，最大为１６；
平均每对引物可扩增１４．２１个位点，其中多态性位点
１３．８６个。共有１０对引物的ＰＰＬ为１００％，其Ｎｅｉ’ｓ基
因多样性指数Ｈ和Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ信息指数Ｉ均较高。
表３ １４对ＳＲＡＰ引物组合的扩增结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｙ １４ｐａｉｒｓ ｏｆ ＳＲＡＰ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ
引物组合
Ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
总位点Ｔｏｔａｌ
ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｌｏｃｉ
多态位点数（ＮＰＬ）
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ
多态比率（ＰＰＬ）
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ／％
Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈ）
Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ信息指数（Ｉ）
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ
ＭＥ１－ＥＭ３ １３ １３ １００．００ ０．３５０ ２ ０．５２３ ２
ＭＥ２－ＥＭ３ １０ ９ ９０．００ ０．３０２ ２ ０．４５５ ８
ＭＥ２－ＥＭ１０ １６ １６ １００．００ ０．３１９ ４ ０．４８３ ９
ＭＥ３－ＥＭ１０ １６ １５ ９３．７５ ０．２８９ ０ ０．４４３ ９
ＭＥ４－ＥＭ１ １８ １８ １００．００ ０．２８４ ４ ０．４４３ ３
ＭＥ５－ＥＭ１０ ８ ８ １００．００ ０．３０８ ９ ０．４７８ ４
ＭＥ５－ＥＭ１１ １４ １４ １００．００ ０．２５２ ５ ０．４０２ ９
ＭＥ６－ＥＭ１０ １６ １５ ９３．７５ ０．３６９ ３ ０．５３９ ４
ＭＥ６－ＥＭ１３ １４ １４ １００．００ ０．３６５ ３ ０．５３６ ６
ＭＥ６－ＥＭ１６ １９ １９ １００．００ ０．３１１ ４ ０．４７７ ４
ＭＥ７－ＥＭ３ １２ １２ １００．００ ０．２２０ ４ ０．３５４ ７
ＭＥ７－ＥＭ１０ １４ １４ １００．００ ０．２８５ ２ ０．４４１ ３
ＭＥ９－ＥＭ１４ １６ １６ １００．００ ０．２７３ ９ ０．４１７ ５
ＭＥ１３－ＥＭ６ １３ １１ ８４．６２ ０．１９４ ９ ０．３０４ １
Ａｖｅｒａｇｅ １４．２１ １３．８６ ９７．２９ ０．２９４ ８ ０．４５０ ２
２．２ 种间遗传距离与遗传一致度分析
遗传结构分析表明，总遗传多样性（Ｈｔ）高达
０．３０５ ３，其中种内遗传多样性（Ｈｓ）０．１０８ ０，种间遗传多
样性（Ｄｓｔ）０．１９７ ３；种间遗传分化系数（Ｇｓｔ）０．６４６ ２，即
种间遗传变异占６４．６２％。Ｎｅｉ’ｓ遗传距离（ＧＤ）和遗传
一致度（ＧＳ）分析表明，种间遗传距离差异较大，ＧＤ最小
值０．０８３ ２，最大值０．６６８ ３，遗传一致度变化范围
０．５１２ ６～０．９２０ １（表４），说明梨属野生种在分子水平上
遗传多样性丰富。
表４ 种间遗传一致度和遗传距离
Ｔａｂｌｅ ４ Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ａｎｄ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｐｙｒｕｓ
物种 秋子梨 褐梨 河北梨 崂山梨 杜梨 豆梨 西洋梨
秋子梨 － ０．９１８ ０ ０．９２０ １ ０．８５７ ２ ０．７０２ ７ ０．６８９ ４ ０．８０７ ７
褐梨 ０．０８５ ６ － ０．８９２ ８ ０．８７６ １ ０．７３３ １ ０．７３２ ７ ０．７８０ １
河北梨 ０．０８３ ２ ０．１１３ ４ － ０．８５４ ９ ０．６９９ ０ ０．６８１ ０ ０．７７５ ８
崂山梨 ０．１５４ ０ ０．１３２ ３ ０．１５６ ７ － ０．６１８ １ ０．６７４ ７ ０．８１７ ７
杜梨 ０．３５２ ８ ０．３１０ ５ ０．３５８ １ ０．４８１ １ － ０．５７２ ９ ０．５１２ ６
豆梨 ０．３７２ ０ ０．３１１ ０ ０．３８４ ２ ０．３９３ ５ ０．５５７ １ － ０．６８８ ４
西洋梨 ０．２１３ ５ ０．２４８ ３ ０．２５３ ９ ０．２０１ ３ ０．６６８ ３ ０．３７３ ３ －
注：对角线上方为遗传一致度，对角线下方为遗传距离。
Ｎｏｔｅ：Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ａｂｏｖｅ ｄｉａｇｏｎａｌ）ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏ－
ｎａｌ）．
河北梨与秋子梨的遗传距离最小，遗传一致度最
高，表明二者间亲缘关系最近；而西洋梨与杜梨的遗传
距离最大。同时，河北梨、秋子梨、褐梨３个野生种两两
间的遗传距离均较小，由小到大分别为０．０８３ ２、
０．０８５ ６、０．１１３ ４，表明三者彼此间的亲缘关系最近。崂
山梨与褐梨和秋子梨的遗传距离亦较低，分别为０．１３２ ３
和０．１５４ ０，其中崂山梨与褐梨的遗传一致度略高于与秋
子梨的遗传一致度。豆梨与其它国产梨的遗传距离均
较大，亲缘关系较远。
２．３ 聚类分析
为了阐明梨属野生种间的亲缘关系，采用 ＵＰＧＭＡ
方法构建聚类图（图１）。以遗传相似系数０．５９作为划
分类群的标准，３１份种质可分为４类。第一类为崂山梨
和褐梨，第二类包括河北梨、杜梨以及大部分秋子梨和
褐梨，第三类为豆梨，第四类为西洋梨，表明豆梨、西洋
梨与其它种类亲缘关系均较疏远。第二类在遗传相似
系数０．６７左右又可分为５个亚类。第１亚类全部为秋
子梨，以１５号和８号遗传相似系数最高；第２亚类为５
个河北梨样品先后相聚，其中来自河北昌黎的２个样品
３
·试验研究· 北方园艺２０１５（１３）：１～５
并没有优先相聚，而是和崂山的样品交叉相聚；第３亚
类中５个褐梨样品优先相聚后与杜梨相聚；第４和第５
亚类分别为秋子梨和褐梨。
图１ ３１份梨属种质资源的Ｎｅｉ遗传相似
系数ＵＰＧＭＡ聚类图
Ｆｉｇ．１ ＵＰＧＭＡ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ３１ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ
Ｐｙｒｕｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
２．４ 主坐标分析
对原始矩阵的主坐标分析（图２）表明，所有样品可
被分为４类：Ａ类为全部秋子梨和河北梨，部分褐梨、杜
梨样品；Ｂ类为全部崂山梨和２个褐梨样品；Ｃ类为豆
梨；Ｄ类为西洋梨。聚类图和主坐标分析结果一致，且
主坐标分析能从不同方向、不同层面更加直观地显示各
种质资源的关系。
３ 讨论
ＳＲＡＰ分析表明，梨属野生资源遗传多样性较高，
而且整体上同一种类的不同种质优先相聚，表明该标记
能较好地揭示梨属植物的亲缘关系。因采样地点和物
种成年个体数量的限制（如河北梨仅在山东崂山和河北
昌黎分布，崂山梨仅在山东崂山发现２个分布点，植株
有限），不同种的采样数量并不统一，但样品数量并没有
影响亲缘关系的展现；同时西洋梨样品的扩增条带较少
可能与ＳＲＡＰ引物有关，但对遗传距离分析未产生影
响，西洋梨与杜梨和豆梨亲缘关系疏远的结果与传统观
点基本一致。
在所有供试种类中，河北梨与秋子梨和褐梨的遗传
一致度最高，因此俞德浚［２］对三者关系的推测获得了分
子水平的支持，且进一步明确河北梨与秋子梨的亲缘最
近。虽然蒲富慎等［２０］根据染色体着丝点位置认为，河北
图２ 梨属材料的主坐标分析图
Ｆｉｇ．２ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ３１ Ｐｙｒｕｓ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ
梨与麻梨和新疆梨亲缘关系较近而与秋子梨相对较远，
但结合这些物种的地理分布及表型性状（叶形、果实等）
来看，河北梨与秋子梨近缘的结论更合理。聚类分析表
明，来自河北昌黎和山东崂山的河北梨样品相互交叉相
聚，表明河北梨居群间的遗传距离和地理位置无直接相
关性，亦表明河北梨居群间存在较频繁的基因交流。
从形态上看，崂山梨因果实花萼宿存、子房３室、叶
缘具有圆钝锯齿而与豆梨和木梨相近［４］，但遗传多样性
分析表明本种与褐梨和秋子梨近缘，而与豆梨亲缘关系
疏远。杜梨与褐梨的遗传距离均小于与其它样品的遗
传距离，说明二者亲缘关系最近，与滕元文等［２１］、蒲富慎
等［５］分别通过ＲＡＰＤ分子标记以及核型分析得出结论
一致。豆梨与其它国产种类的遗传距离较大，亲缘关系
较远，黄礼森等［６］通过花粉形态和蒲富慎等［５］根据核型
研究也得出相似的结论，且认为豆梨是国产种类中原始
的类型。西洋梨与其它供试种类最晚聚类，亲缘关系最
远，也与前人的研究结果一致［８，２２－２３］。
不同野生种的居群大小差别很大，物种多态性的丰
富度与此密切相关，居群较大的秋子梨和褐梨聚类并不
集中，推测部分样品可能为未知的自然杂交组合，但尚
有待于结合形态学标记等进行进一步研究。曹玉芬
等［２４］根据ＳＳＲ分析得出的结论也认为，梨属种类自然
演化过程中存在广泛的杂交现象。
遗传多样性是物种稳定生存的重要因素，也是物种
能维持繁殖活力、适应多变环境的根本原因。近年来由
于人类活动频繁，梨属野生资源被破坏殆尽，河北梨因
数量锐减已被列为极小种群野生物种，崂山梨生境也因
旅游开发受到了极大破坏。因此，基于分子水平的河北
４
北方园艺２０１５（１３）：１～５ ·试验研究·
梨、崂山梨及其近缘种的遗传多样性分析为种质资源鉴
定、保护及亲缘关系研究提供了更丰富的理论依据。
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ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｓｍａｌｅｒ ｔｈａｎ ａｎｙ ｏｔｈｅｒ ｐａｉｒｓ，ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｃｌｏｓｅｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ａｌｓｏ，ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ
Ｐ．ｔｒｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ，Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａ，ａｎｄ ｏｆ Ｐ．ｂｅｔｕｌａｅｆｏｌｉａ，Ｐ．ｐｈａｅｏｃａｒｐａｗｅｒｅ ｃｌｏｓｅ，ｗｈｉｌｅ Ｐ．ｃａｌｅｒｙａｎａ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｄｉｓｔａｎｔ
ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＰＣＯＡ ｗａｓ ｓｉｍｉｌａｒ ｗｉｔｈ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｆｏｒｍｅｒ ｄｉｒｅｃｔｌｙ
ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｌ ｇｒｏｕｐｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｙｒｕｓ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｐｙｒｕｓ ｈｏｐｅｉｅｎｓｉｓ；Ｐｙｒｕｓ ｔｒｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ；ＳＲＡＰ
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