全 文 ：收稿日期:2009-11-03;　修订日期:2009-12-20
基金项目:广东省自然科学基金(No.8152402301000019);
广东省科技计划项目(No.2009B030801336);
广东省东莞市高等院校科研机构科技计划项目(No.2008108101050)
作者简介:龚先玲(1975-),女(汉族),湖北天门人 ,现任广东医学院讲师 ,
硕士学位 ,主要从事天然药物抗肿瘤药效成分的筛选研究工作.
＊通讯作者简介:苟占平(1970-), 男(汉族),甘肃临洮人 , 现任广东医学
院副教授 ,博士学位 ,主要从事中药的品种品质研究工作.
凤尾蕨属 6种药用植物抗肿瘤有效部位筛选
龚先玲 1, 2 ,苟占平1, 2＊ ,梁念慈 2 ,刘　义2 ,李　立 2
(1.广东医学院 ·药学院 ,广东 东莞　523808;
2.广东医学院广东天然药物研究开发重点实验室 ,广东 湛江　524023)
摘要:目的 对凤尾蕨属 6种药用植物抗肿瘤有效部位进行筛选。方法 采用 MTT法对凤尾蕨属 6种药用植物不同溶剂
萃取物进行体外抗肿瘤活性测试。结果 半边旗的醋酸乙酯萃取物 、正丁醇萃取物;刺齿半边旗的石油醚萃取物 、醋酸乙
酯萃取物 、正丁醇萃取物;井栏边草的醋酸乙酯萃取物 、正丁醇萃取物;剑叶凤尾蕨的醋酸乙酯萃取物;线羽凤尾蕨的正
丁醇萃取物对人肺癌细胞 A549增殖均有明显的抑制作用。结论 上述凤尾蕨属几种药用植物的萃取物具有较好的体外
抗肿瘤活性 , 是其抗肿瘤作用的有效部位。
关键词:凤尾蕨属;　抗肿瘤作用;　有效部位
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.07.011
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)07-1599-02
ScreeningoftheAntitumorActiveFractionsfrom 6MedicinalPlantsofPterisL.
GONGXian-ling1, 2 , GOUZhan-ping1, 2＊ , LIANGNian-ci2 , LIUYi2 , LILi2
(1.ColegeofPharmacology, GuangdongMedicalColege, Dongguan523808 , China;2.GuangdongKeyLa-
boratoryofResearchandDevelopmentofNaturalDrugs, GuangdongMedicalColege, Zhanjiang524023, Chi-
na)
Abstract:ObjectiveToscreentheactivefractionwithantitumorefectfrom6 medicinalplantsofPterisL..MethodsThesam-
plesofthe6 plantswereextractedwithethanolatfirst, andthentheethanolextractswereseparatedwithpetroleumether, ethyl
acetate, n-Butylalcoholinturntogetthreefractions.ThentheantitumoreffectoftheextractsweretestedwithMTTmethod.Re-
sultsEthylacetateandn-BuOHextractsofPterissemipinntaL., petroleumether, ethylacetateandn-BuOHextractsofP.
disparKze., ethylacetateandn-BuOHextractsofP.multifidaPoir., ethylacetateextractofP.ensiformisBurm., andn-
BuOHextractofP.linearisL.wereshowntohavesignificantinhibitoryefectagainsthumanlungcancercellA549.Conclusion
TheextractsoftheplantsfromPterisareprovedtobetheantitumoractivefractionsinvitro.
Keywords:Pteris;　Antitumorefect;　Activefraction
　　半边旗药材为来源于凤尾蕨属植物半边旗 Pterissemipinnta
L.的干燥全草 [ 1] 。从中分离到的二萜类化合物 5F、6F和 A具有
抗肿瘤作用 [ 2, 3] , 其中 5F含量较高 , 但活性不是很强 , 6F和 A活
性很强 , 但其在原植物中的含量太低而不能开发利用。 2006年
由我们申报 , 半边旗药材被广东省食品药品监督管理局批准为广
东省地方药材标准品种。根据药用植物亲缘学的原理 ,亲缘关系
相近的植物其所含化学成分相似 ,而化学结构相似的化合物其生
理活性多相似 [ 4] , 因此 , 我们在研究半边旗抗肿瘤作用的基础
上 , 对与半边旗同属的其他 5种药用植物的抗肿瘤药效部位进行
了筛选 , 以期发现抗肿瘤活性强的含量较高的二萜类化合物。
1　仪器与材料
1.1　仪器 旋转蒸发仪 , AE-240天平;NAPCOseries5400 CO2
培养箱 , Elx酶标仪(Bio-TEK-INSTUMENTSINC产品);96孔
培养板(美国 Costar)。
1.2　材料 乙醇 、醋酸乙酯 、正丁醇(分析纯);小牛血清(杭州四
季青生物材料有限公司);RPMI1640培养基(GIBCO);二甲基亚
砜(DMSO)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、胰蛋白酶 、甲基噻唑蓝(MTT)
(美国 Sigma公司)。半边旗 PterissemipinntaL.采于广州市郊 ,
刺齿半边旗 P.disparKze.、井栏边草 P.multifidaPoir.、剑叶凤
尾蕨 P.ensiformisBurm.、蜈蚣草 P.vittataL.采于广东湛江 , 线
羽凤尾蕨 P.linearisL.采于广东东莞 ,由广东医学院生药学副教
授苟占平博士鉴定。人肺癌 A549细胞株 , 由本实验室传代培
养。
2　方法
2.1　实验药品的制备 将采集的 6种新鲜样品半边旗 、刺齿半边
旗 、井栏边草 、剑叶凤尾蕨 、蜈蚣草 、线羽凤尾蕨放于阴凉处晾干 ,
粉碎。取上述 6种粉碎的样品各 50 g, 加乙醇 500 ml,水浴回流
提取 2次 , 3 h/次 , 合并滤液 ,滤液减压浓缩至干 , 浸膏加水溶解 ,
依次用石油醚(60 ～ 90℃)、醋酸乙酯 、正丁醇萃取 , 将萃取物减
压浓缩至干 , 得到上述 6种样品的石油醚 、醋酸乙酯 、正丁醇干
膏。以上 18种干膏先用 DMSO溶解 ,再加 PBS溶解 , 精确配制成
2400 μg· ml-1的储存液(DMSO的体积分数 =1%), 过滤除菌 ,
放 4℃冰箱备用。
2.2　细胞培养 人肺癌 A549细胞培养于含 10%小牛血清 、100
kU· L-1青霉素 、100mg· L-1链霉素的 RPMI-1640培养液中 ,
在 37℃、 5% CO2培养箱中培养 , 取对数生长期的细胞用于实验。
2.3　细胞增殖抑制试验(MTT法) 取对数生长期的人肺癌细
胞 A549,用 0.25%的胰蛋白酶消化 , 10%新生小牛血清的 RPMI
-1640培养液调制成 5×104个· ml-1的细胞悬液 , 接种于 96孔
板中 , 每孔接种 100μl。在 37℃、5%、CO
2
条件下培养过夜后 , 吸
出培养液 ,加入新培养液 180μl及药液 20μl。待测样品中 DMSO
终体积分数 =0.1%, 干膏样品的终浓度分别为 30, 60, 120, 240
μg· ml-1 , 每个浓度平行 6孔;培养 72 h后 , 每孔加入 5 mg·
·1599·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.7 时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期
ml-1的 MTT20 μl, 37℃, 5% CO2条件下温育 4 ～ 6h,弃去上清
液 , 每孔加入 150μlDMSO,在微型振荡器上摇匀 15 min, 结晶溶
解后 , 立即比色 ,在酶标仪主波长为 570 nm, 参比波长为 630 nm
处测量 OD值 ,比色以空白孔调零。抑制率(%)=(1-实验组 6
孔 OD值平均值 /对照组 6孔 OD值平均值)×100%。
2.4　统计分析 采用 SPSS11.0。
3　结果
3.1　凤尾蕨属同一植物不同提取部位对 A549肿瘤细胞生长增
殖的影响
3.1.1　半边旗各提取部位对体外培养的 A549肿瘤细胞生长增
殖的影响 半边旗各提取部位的体外抗肿瘤活性显示(表 1),其
石油醚提取物 、醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物在各个质量浓度
范围对肿瘤细胞均有抑制作用;石油醚提取物对 A549肿瘤细胞
的增殖抑制有一定的剂量依赖性;而醋酸乙酯提取物和正丁醇提
取物对 A549肿瘤细胞的增殖抑制呈明显的剂量依赖性 , 在 240
μg· ml-1时抑制作用非常明显 , 抑制率分别为 88.55%,
61.72%。
表 1　半边旗各提取部位对体外培养的
A549肿瘤细胞生长增殖的影响
浓度
C/μg· ml-1
抑制率(%)
石油醚萃取物 醋酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物
30 12.32 7.62 3.85
60 13.49 19.92 5.13
120 14.45 35.67 27.83
240 15.20 88.55 61.72
3.1.2　刺齿半边旗各提取部位对体外培养的 A549肿瘤细胞生
长增殖的影响 刺齿半边旗各提取部位的体外抗肿瘤活性显示
(表 2),石油醚提取物 、醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物在各个
质量浓度范围对 A549肿瘤细胞都有较强的抑制作用 , 在 240 μg
· ml-1时的抑制率分别为 57.87%, 77.15%, 84.61%;且有明显
的剂量依赖性。
3.1.3　井栏边草各提取部位对体外培养的 A549肿瘤细胞生长
增殖的影响 井栏边草各提取部位的体外抗肿瘤活性显示(表
3),石油醚提取物 、醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物在各个质量
浓度范围对肿瘤细胞均有抑制作用;醋酸乙酯提取物和正丁醇提
取物在浓度为 240 μg· ml-1时 , 对 A549肿瘤细胞有明显的抑制
作用 , 抑制率分别为 65.06%和 82.13%。
表 2　刺齿半边旗各提取部位对体外培养的
A549肿瘤细胞生长增殖的影响
浓度
C/μg· ml-1
抑制率(%)
石油醚萃取物 醋酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物
30 3.92 14.48 22.17
60 4.11 51.91 72.80
120 28.65 68.96 78.26
240 57.87 77.15 84.61
表 3　井栏边草各提取部位对体外培养的
A549肿瘤细胞生长增殖的影响
浓度
C/μg· ml-1
抑制率(%)
石油醚萃取物 醋酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物
30 8.47 9.11 3.99
60 8.69 11.01 35.84
120 8.81 11.84 77.11
240 11.45 65.06 82.13
3.1.4　剑叶凤尾蕨各提取部位对体外培养的 A549肿瘤细胞生
长增殖的影响 剑叶凤尾蕨各提取部位的体外抗肿瘤活性显示
(表 4), 240 μg· ml-1的醋酸乙酯提取物对 A549肿瘤细胞有较
强的抑制作用 , 而此浓度的正丁醇提取物对 A549肿瘤细胞的抑
制率为 15.25%, 该浓度的石油醚提取物对 A549肿瘤细胞的抑
制作用仅为 8.74%。
表 4　剑叶凤尾蕨各提取部位对体外培养的
A549肿瘤细胞生长增殖的影响
浓度
C/μg· ml-1
抑制率(%)
石油醚萃取物 醋酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物
30 -0.57 13.33 -9.23
60 -0.13 30.72 -5.81
120 2.61 39.84 2.21
240 8.74 51.47 15.25
3.1.5　蜈蚣草各提取部位对体外培养的 A549肿瘤细胞生长增
殖的影响 蜈蚣草各提取部位的体外抗肿瘤活性显示(表 5), 各
提取部位对 A549肿瘤细胞的抑制作用都较弱 , 石油醚提取物 、
醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物在 240 μg· ml-1时 ,对 A549肿
瘤细胞的抑制率分别为 24.60%, 22.76%, 14.29%。
表 5　蜈蚣草各提取部位对体外培养的
A549肿瘤细胞生长增殖的影响
浓度
C/μg· ml-1
抑制率(%)
石油醚萃取物 醋酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物
30 7.78 17.02 1.33
60 10.54 18.45 2.18
120 13.92 21.29 12.67
240 24.60 22.76 14.29
3.1.6　线羽凤尾蕨各提取部位对体外培养的 A549肿瘤细胞生
长增殖的影响 线羽凤尾蕨各提取部位的体外抗肿瘤活性显示
(表 6),其正丁醇萃取物对 A549肿瘤细胞有较强的抑制作用 , 且
呈一定的剂量依赖性;醋酸乙酯提取物对 A549肿瘤细胞的抑制
作用较弱 ,而石油醚提取物对 A549肿瘤细胞的增殖在低浓度时
有一定的促进作用 ,在 240μg· ml-1时的抑制率仅为 2.49%。
表 6　线羽凤尾蕨各提取部位对体外培养的
A549肿瘤细胞生长增殖的影响
浓度
C/μg· ml-1
抑制率(%)
石油醚萃取物 醋酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物
30 -3.02 1.07 14.61
60 -0.79 4.65 46.67
120 0.87 14.06 47.96
240 2.49 18.05 62.95
20 83.08
3.2　凤尾蕨属 6种植物同一提取部位对 A549细胞增殖影响的
比较 见图 1 ～ 3。
图 1　凤尾蕨属 6种植物石油醚萃取部位对 A549细胞增殖的影响
从图 1可以看出 , 当药物浓度为 240μg· ml-1时刺齿半边旗
石油醚萃取物对 A549细胞的增殖抑制作用最强 , 超过 55%, 依
次为蜈蚣草石油醚萃取物(抑制率近 25%), 半边旗石油醚萃取
物(抑制率 15%左右), 其余 3种植物的该部位萃取物 A549细胞
的抑制作用更低 ,几乎都在 10%以下。
从图 2可以看出 , 当药物浓度为 240μg· ml-1时 , 半边旗醋
酸乙酯萃取物对 A549细胞的增殖抑制作用最强 , 其次为刺齿半
边旗醋酸乙酯萃取物 ,井栏边草醋酸乙酯萃取物 , 剑叶凤尾蕨醋
酸乙酯萃取物 , 蜈蚣草醋酸乙酯萃取物 , 线羽凤尾蕨醋酸乙酯萃
取物 , 最后两种的醋酸乙酯萃取部位对 A549细胞的抑制作用较
低 , 在 20%左右 ,其余几种的该部位对 A549细胞的抑制率均高·1600·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.7
于 50%。
图 2　凤尾蕨属 6种植物醋酸乙酯萃取部位对A549细胞增殖的影响
图 3　凤尾蕨属 6种植物正丁醇萃取部位对A549细胞增殖的影响
从图 3可以看出 , 当药物浓度为 240μg· ml-1时刺齿半边旗
正丁醇萃取物对 A549细胞的增殖抑制作用最强 , 其次为井栏边
草正丁醇萃取物 , 线羽凤尾蕨正丁醇萃取物和半边旗正丁醇萃取
物 , 它们对 A549细胞的抑制率均高于 60%, 而剑叶凤尾蕨正丁
醇萃取物和蜈蚣草正丁醇萃取物在该浓度时对 A549细胞的抑
制率均在 15%左右。
4　讨论
半边旗具有较强的抗肿瘤作用 ,本实验在研究半边旗抗肿瘤
作用的基础上 , 以人肺癌细胞 A549为筛选模型 , 以抗肿瘤活性
为指标 , 较系统地对凤尾蕨属 6种药用植物不同提取部位进行了
抗肿瘤活性的初步筛选。结果表明 ,半边旗中抗肿瘤作用的物质
存在于醋酸乙酯部位 、正丁醇部位 , 这与我们前面的筛选研究结
果一致 [ 5];刺齿半边旗的抗肿瘤作用部位存在于石油醚部位 、醋
酸乙酯部位 、正丁醇部位;井栏边草中抗肿瘤作用的物质存在于
醋酸乙酯部位 、正丁醇部位;剑叶凤尾蕨中抗肿瘤作用的物质存
在于醋酸乙酯部位;线羽凤尾蕨中抗肿瘤作用的物质存在于正丁
醇部位;其他部位对 A549细胞增殖抑制作用不明显。值得注意
的是 , 刺齿半边旗石油醚萃取物在浓度为 240μg· ml-1时其抑制
率接近 60%,而半边旗石油醚萃取物在相应浓度时其抑制率仅
为 15.12%;刺齿半边旗醋酸乙酯萃取物在浓度为 60μg· ml-1时
其抑制率已超过 50%,在浓度为 120μg· ml-1时其抑制率已接近
70%, 而半边旗醋酸乙酯萃取物在相应浓度时其抑制率仅分别为
19.92%和 35.67%;刺齿半边旗正丁醇萃取物在浓度为 60μg·
ml-1时其抑制率已超过 70%,井栏边草正丁醇萃取物在浓度为
120μg· ml-1时其抑制率已超过 75%, 而半边旗正丁醇萃取物在
相应浓度时其抑制率仅分别为 5.13%和 27.83%。
本课题组虽然对半边旗中的抗肿瘤二萜类活性成分 5F进行
了深入的研究 , 但对其所含抗肿瘤活性比 5F更强的 6F和 A却
由于含量低的原因未能进一步开发研究。本实验的目的是确定
与半边旗同属的其他植物的抗肿瘤活性部位 ,为下一步在活性作
用的指导下 ,进一步发现抗肿瘤作用比 5F更强的含量较高的二
萜类化合物提供研究基础。
参考文献:
[ 1 ] 　王玉生 ,蔡乐文.南方药用植物图鉴 [ M] .汕头:汕头大学出版社 ,
2005:18.
[ 2 ] 　张　晓 ,李金华 ,何承伟 ,等.半边旗中二萜类化合物的植化及抗肿
瘤活性初步研究 [ J] .中国药学杂志 , 1999, 34(8):512.
[ 3 ] 　戴　滨 ,崔　燎 ,吴　铁 , 等.半边旗提取物 5F抗肿瘤作用的实验
研究 [ J] .四川中医 , 2006, 24(2):10.
[ 4 ] 　彭四保 ,彭　勇 ,陈士林 ,等.药用植物亲缘学 [ J] .世界科学技术 -
中医药现代化 , 2005, 7(6):97.
[ 5 ] 　龚先玲 ,陈志红 ,梁念慈.半边旗提取物及化学成分抗肿瘤作用的
研究 [ J] .四川中医 , 2008, 27(7):51.
收稿日期:2009-08-17;　修订日期:2009-12-09
基金项目:河南省杰出青年基金项目(No.06120012000)
作者简介:孙宏新(1969-),男(汉族),河南焦作人 ,现任河南省中医医院
副主任医师 ,硕士研究生导师 ,博士学位 , 主要从事中西医结合肿瘤临床
和科研及中医药对肿瘤侵袭与转移影响的研究工作.
消瘤保肺丸对人肺癌 PG细胞上皮细胞钙粘蛋白 、α-Catenin、及 β -catenin表达水平的影响及意义
孙宏新1 , 段　铮 2 , 蒋艳玲1 , 王玲玲 1 , 周世繁1
(1.河南省中医医院 ,河南 郑州　450002;　2.河南中医学院 2007级研究生 ,河南 郑州　450002)
摘要:目的 研究消瘤保肺丸对上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、α-catenin及 β -catenin在人肺癌 PG细胞株中表达的
影响及其意义。方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化物酶法(SP法)检测人肺癌 PG细胞 E-cadherin、α-
catenin及 β -catenin在消瘤保肺丸干预作用下的表达情况。随机分为 4组即消瘤保肺丸高剂量组 、消瘤保肺丸低剂量
组 、清肺化痰丸组和空白组。结果 E-cadherin与 α-catenin、β -catenin在消瘤保肺丸作用下阳性表达率不同 ,其中 E-
cadherin在消瘤保肺丸的影响下阳性表达率较低 , 明显低于清肺化痰丸组和空白(P<0.01);而 α-catenin、β -catenin在
消瘤保肺丸干预作用下阳性表达率较高 ,且高于清肺化痰丸组和空白组(P<0.01)。结论 消瘤保肺丸对 E-cadherin、α
-catenin及 β -catenin的表达影响显著 ,提示其对肺癌的侵袭转移有一定抑制作用 , 从而表明 E-cadherin、α-catenin及
β -catenin的表达与肺癌的进展和转移密切相关。
关键词:消瘤保肺丸;　上皮细胞钙粘蛋白;　α-连接素;　β -catenin;　人肺癌 PG细胞;　免疫组化法
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.07.012
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)07-1601-02
　　肺癌患者的肿瘤转移是导致其死亡的重要原因之一。粘附 是肿瘤转移过程中的一个关键环节 ,粘附因子在其中发挥着不可
或缺的作用。上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)是一类细胞粘附
的跨膜糖蛋白 , 是维持上皮细胞形态及同种细胞间粘附连接的主
要粘附分子 , E-cadherin借助于 α-连接素(α-catenin)连接在
E-cadherin与 β -catenin之间 ,大量的实验证实 E-cad/catenins
复合物介导的细胞同质粘附具有抑制肿瘤侵袭 、转移的作
·1601·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.7 时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期