全 文 ：荔枝、龙眼属间远缘杂种的获得及分子鉴定
赵玉辉，胡又厘，郭印山，周 佳，傅嘉欣，刘成明 *，朱 江，张明君
（华南农业大学园艺学院，广州 510642）
摘 要： 以荔枝品种紫娘喜为父本，龙眼品种石硖、早熟龙眼、古山二号为母本，以及以紫娘喜为母本，石硖龙眼为父
本，进行了远缘杂交研究。 通过混合授粉和多组合杂交的方式，改善了属间杂交组合的不亲和性。 结果表明，在紫娘
喜×石硖、石硖×紫娘喜、早熟龙眼×紫娘喜以及古山二号×紫娘喜 4 个杂交组合中共获得杂交苗 35 株，经 SRAP-PCR
分析，在紫娘喜×石硖组合中鉴定出 2 株真杂种苗，杂种苗生长健壮，叶片宽大。 研究的形态学和分子标记分析均显
示获得了荔枝和龙眼的属间远缘杂种。
关键词： 荔枝； 龙眼； 远缘杂交； 分子鉴定
中图分类号：S667．1 S667．2 文献标识码：A 文章编号：1009－9980(2008)06－950－03
Inter-generic hybrids obtained from cross between litchi and longan cul-
tivars and their molecular identification
ZHAO Yu-hui， HU You-li， GUO Yin-shan， ZHOU Jia， FU Jia-xin， LIU Cheng-ming*， ZHU Jiang，
ZHANG Ming-jun
（College of Horticulture，South China Agricultural University，Guangzhou，Guangdong 510642 China）
Abstract: Distant hybridization between litchi and longan cultivars was made by using mixed pollens for conquering the cross
barrier between genera. Shixia, Zaoshulongyan and Gushan 2 longan cultivars were used as female crossed by lichi cultivar
Ziniangxi, and Ziniangxi was used as female crossed by Shixia longan cultivar. Total of 35 seedlings were obtained from the 4
crossed combinations, including Ziniangxi × Shixia，Shixia × Ziniangxi，Zaoshulongyan × Ziniangxi and Gushan-2 × Zini-
angxi. Identification of hybrid seedlings by SRAP-PCR showed two seedlings were real hybrid of Ziniangxi × Shixia. They are
stalwart and have spacious leaf blade, indicating the real distant hybrid of litchi and longan.
Key words: Litchi； Longan； Distant hybridization； Molecular identification
果 树 学 报 2008，25（6）: 950～952
Journal of Fruit Science
远缘杂交是创造植物新种质及新品种的重要途
径，通过远缘杂交可望获得丰产、抗病虫害、抗逆性
强、风味独特的新物种或新品种，但由于不同物种间
存在生殖隔离， 导致种属间的远缘杂交常表现出杂
交不亲和性和杂种不育性。 果树的远缘杂交育种在
国内外已经取得了一些进展， 如在桃和李间杂交[1]，
李和杏间杂交[2]，四季秋海棠与球根秋海棠间杂交[3]，
樱桃 [4-5]、猕猴桃 [6]以及柑橘类的种间杂交 [7]等，都成
功获得了远缘杂种后代， 并获得了一些很有价值的
优异种质。 荔枝和龙眼是无患子科 2种最重要的果
树，虽然属于不同的属，但在生物学习性上具有许多
相似之处，具有实现远缘杂交的可能性，并可望通过
远缘杂交改进其果实大小、果实颜色、成熟期、耐贮
性或者提高对一些病虫害的抵抗性[8]。 有鉴于此，我
们开展了荔枝与龙眼间的人工杂交， 并对获得的杂
交苗进行了鉴定， 为进一步的育种及相关研究奠定
基础。
1 材料和方法
1.1 材料
试验于 2007-2008年在华南农业大学果树种质
圃进行。试材为荔枝品种紫娘喜和龙眼品种石硖、早
熟龙眼、古山二号。配置了 4个杂交组合，即紫娘喜×
石硖、石硖×紫娘喜、早熟龙眼×紫娘喜、古山二号×
紫娘喜。
1.2 花粉的采集与处理
收稿日期： 2008－05－12 接受日期: 2008－08－21
基金项目： 国家自然科学基金（30771498，30270922）；中国博士后科学基金（20070410837）；广东省科技计划项目（2KM03001N）；华南农
业大学校长基金（2007K055）
作者简介： 赵玉辉，女，讲师，博士，Tel: 020-85286615，E-mail:zhaoyuhui76@126.com
觹 通讯作者。 Author for correspondence． Tel: 020-85288276，E-mail: cmliu@scau.edu.cn
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2008.06.035
图 1 杂种苗的 SRAP 分子鉴定（箭头标示父本特征带）
M. λDNA/ HindⅢ＋EcoRⅠ；P1. 紫娘喜； P2. 石硖； 1～10. 杂交苗
Fig. 1 Molecular identification of hybrid seedlings with
SRAP（The arrows indicate the specific markers belong to
male parent）
M. λDNA/ HindⅢ＋EcoRⅠ；P1. Ziniangxi； P2. Shixia； 1-10. Seedlings
of hybridization
图 2 杂种苗的 SRAP 分子鉴定（箭头标示父本特征带）
M. 200 bp DNA marker； P1. 紫娘喜； P2. 石硖； 1～10. 杂交苗； L. 龙荔
Fig. 2 Molecular identification of hybrid seedlings with
SRAP（The arrows indicate the specific markers
belong to male parent）
M. 200 bp DNA marker； P1. Ziniangxi； P2. Shixia； 1-10. Seedlings of
hybridization； L. Longli
于盛花期之前采集刚开放的父本及母本的雄
花，在实验室内剪取花药置于干燥器中充分干燥，待
花药开裂后用 400 目不锈钢筛筛出纯净花粉并于 4
℃保存。 将用于混合授粉的母本花粉置于紫外灯下
照射 12 h 以上，待其完全失去发芽力后与父本花粉
混合，用于对母本植株的授粉。
1.3 杂交授粉
对母本植株于花穗期套袋， 去除即将开放的雄
花，于雌花的始花期至谢花期进行多次人工授粉，并
分别在谢花后 7、30 和 50 d 喷 2，4-D（4 mg/L）进行
保果，待果实成熟后取出种子播种。
1.4 杂种实生苗的鉴定
采用 CTAB法提取杂交苗及亲本幼叶的基因组
DNA，经电泳检测 DNA 的质量和浓度后，用 SRAP
分析方法对杂交苗进行真假杂种鉴定，SRAP 扩增
的体系和及程序参照 Li等[9]。
2 结果与分析
2.1 荔枝与龙眼属间杂交的亲和性
荔枝与龙眼虽然是分类学上不同的属， 但在生
物学习性上比较相似。本试验中，经过混合授粉和保
果处理后，初期的坐果情况还比较好，但最终只获得
了少量成熟果实，说明两个属间（特别是某些杂交组
合间）的杂交亲和性尚可，但杂种胚的发育可能存在
问题。 本研究共获得杂交种子 90粒，播种后得到杂
交苗 35 株。 其中紫娘喜×石硖组合 10 株，石硖×紫
娘喜组合 9 株，早熟龙眼×紫娘喜组合 15株，古山二
号×紫娘喜组合 1株。
2.2 杂种苗的 SRAP分子标记鉴定
对 40对引物进行筛选， 获得 12对能够在双亲
间扩增出父本特异带的引物组合，用这 12 对引物对
4 个杂交组合的杂交苗进行 SRAP 扩增，其中，引物
me3 （5’TGAGTCCAAACCGGAAT3’） -em13 （5’
GACTGCGTACGAATTGGT3’） （图 1） 和引物 me1
（5’TGAGTCCAAACCGGATA3’） -em1 （5’GACT-
GCGTACGAATTATT3’）（图 2） 在紫娘喜×石硖组合
的杂交苗中有 2个单株出现稳定、 清晰的父本特异
带，表明这 2个单株是紫娘喜×石硖的真杂种。 另外
在 2 个真杂种单株中都出现了部分双亲没有的条
带， 说明在杂种的产生过程中双亲基因组发生了渐
渗作用。
2.3 属间杂种苗的叶片形态观察
田间观察 2株真杂种苗， 发现它们较其它同批
杂交苗生长旺盛，植株高大，叶片宽大。 与亲本叶形
对比，杂种苗的叶尖、叶背和叶脉等性状偏向母本紫
娘喜，但平均叶长、叶宽则显著大于紫娘喜。 叶形指
数较双亲小（表 1，图版 A～C）。
3 讨 论
荔枝和龙眼均为华南地区重要的果树种类，分
属于无患子科的荔枝属和龙眼属。 它们在果实成熟
杂种及亲本
Hybrid and its parents
叶片长
Length (cm)
叶片宽
Width (cm)
长度/宽度
Length/ width
紫娘喜 Ziniangxi
石硖 Shixia
杂交苗 A Hybrid A
杂交苗 B Hybrid B
8.24
15.33
10.91
13.42
2.26
4.31
3.31
4.52
3.65
3.56
3.30
2.97
表 1 杂种与其亲本的叶形比较
Table 1 Comparison of leaf shape between hybrid
and its parents
6 期 赵玉辉等: 荔枝、龙眼属间远缘杂种的获得及分子鉴定 951
期、果实大小、抗逆性等方面带有很多互补的有利基
因，如果能将荔枝与龙眼的基因进行相互交流，将对
荔枝和龙眼的种质改良与创新产生深远的影响 。
Mcconchie等[8]曾经进行过荔枝与龙眼的属间杂交研
究，对比了荔枝和龙眼分别作为父本时，花粉在雌蕊
柱头的萌发情况。结果表明荔枝作为母本，龙眼作为
父本，授粉后花粉能够萌发并生长到雌蕊子房内，而
以龙眼作母本，荔枝为父本时，花粉管极少能生长到
雌蕊子房内。最终在荔枝为母本，龙眼为父本组合中
获得了 6株实生苗， 并通过同工酶鉴定出了荔枝与
龙眼的属间真杂种。 我们的研究也得到了相似的结
果，在以荔枝为母本，龙眼为父本的组合获得了较多
的后代实生苗， 并通过 SRAP 分子标记鉴定出其中
的 2株为属间真杂种，对于龙眼为母本，荔枝为父本
的杂交，我们正在加大力量进行研究，已进行了大量
的杂交授粉，争取能够获得属间杂交后代。目前我们
获得的杂种实生苗已经移栽到大田，生长状态良好，
应具有较好的育种利用价值。
不同亲本组合的杂交亲和性有较大差异， 对比
4 个组合， 只有紫娘喜荔枝和石硖龙眼的亲和性较
好，真杂种苗的获得率较高，因此，2008 年我们已扩
大了该双亲正反杂交的数量。
在远缘杂交工作中， 除了交配不亲和性的影响
之外，杂种的不育性，特别是杂种胚的早期败育也是
导致难以获得杂种苗的重要原因。本试验中，混合授
粉对改善交配亲和性有较好的效果， 初期的坐果较
多，但最终的成果率却相当低，说明杂种胚存在早期
夭亡的情况，基于这一事实，在荔枝龙眼属间杂交工
作中应积极开展胚挽救工作， 更好地克服远缘杂种
胚的不育性[1，2，4-6]。
远缘杂种的早期鉴定与选择是远缘杂交育种的
重要环节，特别是荔枝和龙眼都具有花性复杂、多批
次开花的特点， 很容易发生自交而产生假杂种，因
此，对杂交苗进行早期鉴定是十分必要的。本研究采
用 SRAP 分子标记对杂交苗进行了鉴定， 很好地解
决了这一问题，结合田间形态学观察，我们基本上
能够确认目前已获得了 2 株属间杂种。 （本文图版
见封 3）
参考文献 References:
[1] MA Rui-juan， DU Ping， HU Jin-liang， XU Jian-lan， YU Ming-
liang. Studies on the hybridization compatibility between peach and
plum[J]. Journal of Fruit Science， 2005，22（3）: 283-285.
马瑞娟，杜平，胡金良，许建兰，俞明亮. 桃、李种间远缘杂交亲和
性研究[J]. 果树学报，2005，22（3）: 283-285.
[2] YANG Hong-hua， CHEN Xue-sen， FENG Bao-chun， LIU Huan-
fang， ZHEN Zhou. Creating new germplasm by distant hybridization
in stone fruits [J]. Scientia Agricultura Sinica， 2004，37 （8）:1203-
1207.
杨红花，陈学森，冯宝春，刘焕芳，郑洲. 利用远缘杂交创造核果
类果树新种质的研究[J].中国农业科学，2004，37（8）: 1203-1207.
[3] ZHANG Cheng-min， SUN Wei-bang， ZHANG Shi-bao， GUO Rui-
xian， WEI Zhao-xiang， ZHENG Ruo-xian. F1 Cherry begonia se-
ries from interspecif ic hybridization of begonia semperflorens ×Be-
gonia tuberhybrida[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2001，28 （1）:83-
85.
张成敏，孙卫邦，张石宝，郭瑞贤，魏兆祥，郑若仙. 四季秋海棠与
球根秋海棠远缘杂种—樱桃海棠[J].园艺学报，2001，28 （1）: 83-
85.
[4] WANG Hong -xia， YE Nai -hao， LI Wen -sheng， ZHANG Kai -
chun， SHU Huai-rui. Molecular pre-identification of interspecies
hybrids in Prunus[J]. Journal of the Graduate School of the Chinese
Academy of Sciences，2006，23（5）: 671-675.
王鸿霞，叶乃好，李文生，张开春，束怀瑞. 樱桃属种间杂种的早
期分子鉴定[J].中国科学院研究生院学报，2006，23（5）: 671-675.
[5] LIANG Qing，CHEN Xue-sen，ZHANG Li-jie， WU Chuan-jin， LI-
U Chong-qi. Effects of parental cultivars on cross compatibility and
embryo rescue in interspecific crosses between Prunus avium and
Prunus pseudocerasus[J]. Journal of Fruit Science， 2006，23（3） :
388-391.
梁青，陈学森，张立杰，吴传金，刘崇琪. 亲本品种对樱桃远缘杂
交亲和性及胚抢救的影响[J]. 果树学报，2006，23（3）:388-391.
[6] CHEN Xu-zhong，LI Li，ZHANG Zhong-hui，CHENG Zhong-ping，
HUANG Hong -wen，JIANG Zheng -wang， WANG Yan -chang，
WANG Sheng-mei. Study on ovule culture from inter-specific hy-
brids in Actinidia[J]. Journal of Fruit Science， 2006，23（4）: 620-
622.
陈绪中，李丽，张忠慧，程中平，黄宏文，姜正旺，王彦昌，王圣梅.
猕猴桃种间远缘杂交胚珠培养 [J]. 果树学报，2006，23（4）:620-
622.
[7] LI Yu-hui，CHEN Xue-sen， ZHENG Zhou. Recent progress in the
studies of distant hybridization breeding in fruit crops[J]. Journal of
Shandong Agricultural University: Natural Science， 2003，34 （1）:
139-143.
李玉晖，陈学森，郑洲. 果树远缘杂交育种研究进展[J]. 山东农业
大学学报: 自然科学版， 2003 ， 34 （1）: 139-143.
[8] MCCONCHIE C A，VITHANAGE V，BATTEN D J. Intergeneric hy-
bridization between litchi （litchi chinensis Sonn.） and longan （Dimo-
carpus longan Lour.）[J]. Annals of Botany， 1994， 74: 111-118.
[9] LI G，QUIROSCF.Sequence-relatedamplifiedpolymorphism （SRAP），
a new marker system based on a simple PCR reaction: its application
to mapping and gene tagging in Brassica[J]. Theor Appl Genet，2001，
103: 455-461.
果 树 学 报 25 卷952