全 文 ：江西农业学报 2011，23(11) :43 ～ 47
Acta Agriculturae Jiangxi
棉属 GhPEPC1同源基因的克隆与进化分析
彭苗苗1，2，喻树迅1* ，田绍仁2，于霁雯1
收稿日期:2011 －08 －31
基金项目:转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08005 －025B)。
作者简介:彭苗苗(1987─) ，女，安徽合肥人，研究实习员，研究生，主要从事棉花栽培研究。* 通讯作者:喻树迅。
(1．中国农业科学院 棉花研究所，河南 安阳 455000;2．江西省棉花研究所，江西 九江 332105)
摘 要:根据 GenBank中的 GhPEPC1(登陆号:AF008939)的开放阅读框设计引物，运用 PCR技术分别得到棉属 16 个种
的 PEPC同源基因全长序列。序列比对结果表明，核苷酸和氨基酸的序列差异除长萼棉外分别是 0． 3% ～ 9． 8%和 0． 2% ～
18． 8%。利用核苷酸序列构建的 NJ和 ME系统进化树对它们的亲缘进化关系进行了分析，其中陆地棉和海岛棉、草棉和亚洲
棉、瑟伯氏棉与雷蒙德氏棉等分别聚为一类，结果与前人按染色体组型对棉花的分类结果基本一致，并且从本结果可推测出
四倍体棉种可能由草棉和瑟伯氏棉的染色体组复合而成。
关键词:棉属植物;PEPC;克隆;进化分析
中图分类号:Q949． 757． 3 文献标识码:A 文章编号:1001 －8581(2011)11 －0043 －05
Cloning and Evolution Analysis of Homologous Sequences of GhPEPC1 Gene in Gossypium
PENG Miao － miao1，2，YU Shu － xun1* ，TIAN Shao － ren2，YU Ji － wen1
(1． Cotton Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Anyang 455000，China;
2． Cotton Research Institute of Jiangxi Province，Jiujiang 332105，China)
Abstract:According to the open reading frame of GhPEPC1 (GenBank Accession:AF008939)from GenBank，the complete se-
quences of PEPC homologous genes from 16 species in Gossypium were obtained by PCR technology． The comparison of PEPC homolo-
gous sequences indicated that the differences between the genes at nucleotide and amino acid levels were from 0． 3% to 9． 8% and from
0． 2% to 18． 8% respectively，except for G． longicalyx． The evolutionary relationship was studied by using neighbor － joining (NJ)
and minimum － evolution(ME)trees which were structured by nucleotide sequence，the upland cotton and G． barbadense，Levant cot-
ton and Asian cotton，G． thurberi and G． raimondii were respectively clustered into the same class，which were consistent with the pre-
vious classification results of karyotype in Gossypium，and the results also indicated that the tetraploid cotton species might origin from
G． herbaceum and G． thurberi．
Key words:Gossypium;PEPC;Cloning;Evolution analysis
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate car-
boxylase，PEPC)是参与植物光合作用和脂肪酸代谢的一
个关键酶［1 －2］。拟南芥、水稻、玉米、油菜、大豆等植物的
PEPC基因相继克隆成功，并且其序列信息和结构也得
到了详尽的解析［3 －4］。PEPC 由多基因家族编码组成，家
族成员之间的一级结构基本相似，基因保守性较好，但是
在序列上还是存在一定的差异(表 1)。因此本研究期望
利用 PEPC基因在棉属各个物种中的序列差异，从分子
水平上阐明棉属种间的亲缘进化关系。棉花中已得到两
条 PEPC基因全长序列。Vojdani 等［5］从陆地棉中克隆
出棉花中的第一个 PEPC 基因，命名为 GhPEPC1。Qiao
等［6］从陆地棉中克隆出 GhPEPC2，对其分析表明，是一
类 C3型 PEPC，与其它物种 PEPC 具有很高的相似性。
Cronn等［7］根据 DNA 序列比较分析等方法对四倍体棉
种的起源进行了探讨研究，证实了四倍体棉种是异源多
倍体起源的理论。本研究根据 GhPEPC1 开放阅读框设
计引物，运用 PCR 技术从基因组中扩增出 16 条 PEPC
基因全长序列，并对其进行生物信息学分析。验证
PEPC基因在棉花中的结构和功能，为物种间的亲缘进
化关系提出证据。
表 1 棉花 PEPC基因与其它植物 PEPC基因相似性比较
Arabidopsis
(AF071788)
Zea mays
(NM001111948)
Glycine
(AY374445)
Oryza
(AY187619)
Brassica
(DQ328614)
Ricinus
(EF634317)
Gossypium(AF008939) 95． 5% 92． 3% 96． 2% 94． 8% 94． 9% 97． 2%
1 材料与方法
1． 1 材料 本研究所用的不同棉属材料由中国农业科
学院棉花研究所野生棉研究课题组提供(表 2) ，取 5 d
左右的幼嫩叶片为实验材料;LA Taq 购自 TAKARA 公
司;PCR回收试剂盒、大肠杆菌DH5α购自天根生物技术
有限公司;topo载体克隆试剂盒购自 Promega公司。
表 2 不同棉属材料
亚属 种 染色体组 基因名称 编号
Sturtia Todaro 斯特提棉(G． sturtianum J． H． Willis) C G． sturtianumPEPC1 p13
鲁滨逊氏棉(G． robinsonii F． von Mueller) C G． robinsoniiPEPC1 p8
纳尔逊氏棉(G． nelsonii Fryxell) G G． nelsoniiPEPC1 p1
比克氏棉(G． bickii Prokhanov) G G． bickiiPEPC1 p12
Houzingenia Fryxell 瑟伯氏棉(G． thurberi Todaro) D G． thurberiPEPC1 p7
戴维逊氏棉(G． davidsonii Kellogg) D G． davidsoniiPEPC1 p5
旱地棉(G． aridum Skovsted) D G． aridumPEPC1 p10
雷蒙德氏棉(G． raimondii Ulbrich) D G． raimondiiPEPC1 p9
拟似棉(G． gossypioides Standley) D G． gossypioidesPEPC1 p6
三裂棉(G． trilobum Skovsted) D G． trilobumPEPC1 p11
Gossypium L． 草棉(G． herbaceum L．) A G． herbaceumPEPC1 p14
亚洲棉(G． arboreum L．) A G． arboreumPEPC1 p15
索马里棉(G． somalense J． B． Hutchinson) E G． somalensePEPC1 p4
长萼棉(G． longicalyx J． B． Hutchinson) F G． longicalyxPEPC1 p3
绿顶棉(G． capitis Mauer) B G． capitisPEPC1 p2
Karpas Razenesque 陆地棉(G． hirsutum L．) (AD)1 G． hirsutumPEPC1 p17
海岛棉(G． barbadense L．) (AD)2 G． barbadensePEPC1 p18
1． 2 方法
1． 2． 1 DNA 提取 采用 CTAB 法提取棉花基因组
DNA［8 －10］。1%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 浓度，测定
DNA在260和280 nm下的吸光值以确定其纯度，并于 －
20 ℃保存备用［11］。
1． 2． 2 引物设计和 PCR扩增 根据 GhPEPC1基因 cD-
NA开放阅读框，在起始密码子和终止密码子的外侧分
别设计引物，扩增棉属植物 GhPEPC1的同源基因。上游
引物 P1:5 － AAGTTTTGGCTTTGGTAGTCAAGTA －3，下
游引物 P2:5 － AGCCAAATATGAAATTAACCCAACC －
3。PCR反应体系为:PCR总体积50 μL，包括DNA模板
5 ng，1 × PCR buffer，0． 2 mmol /L dNTP Mixture，上下游引
物各 0． 25 mmol /L，Taq DNA聚合酶 0． 5 U。PCR反应条
件为:94 ℃变性 4 min，30个扩增循环(94 ℃ 60 s;58 ℃
60 s;72 ℃ 60 s)后，72 ℃延伸 10 min。
1． 2． 3 PCR产物的克隆、测序和序列比较 利用凝胶回
收试剂盒将 PCR产物回收纯化后，分别克隆到 topo克隆
载体上，转入 DH5α 大肠杆菌中，蓝白斑筛选出阳性克
隆，PCR鉴定后将菌液送上海英俊生物工程有限公司测
序。片段经过双向测序然后拼接，并根据目的基因进行
人工校正与酶切位点分析，去除载体序列，获得同源基因
序列。利用 DNAMAN软件比较分析同源基因在核苷酸
和氨基酸水平的相似性。
1． 2． 4 PEPC蛋白生物信息学分析 利用 Spidy 软件分
析基因结构，并推导出氨基酸序列。用 Protparam 进行
PEPC编码蛋白的理化性质预测，包括等电点、亲水性
等;用 Pfam22． 0 分析 PEPC 氨基酸序列的功能域;SOP-
MA和 Predictprotein预测其二级结构和疏水性;Psort 进
行亚细胞定位;Protfun分析蛋白质功能。
1． 2． 5 系统树的构建 根据分离的 PEPC 基因的核苷
酸序列，采用 DNASTAR软件中的 MegAlign 进行多序列
对齐比较，用 GenDOC软件检测输出同源比对结果。对
MegAlign的结果用 MEGA4． 1 软件构建 NJ(Nighbouring
－ joining，NJ法)和 ME(Minimum － Evolution)［12 －13］系统
进化树，采用 BootStrap 1000 检验分子系统树各处的置
信度。
2 结果与分析
2． 1 PEPC同源基因的扩增 利用设计的引物，最终成
功从 17个材料中得到 16个材料的大小约为 5500 bp 的
条带(图 1)。
M:MarkerⅢ;1 ～17:纳尔逊氏棉、绿顶棉、长萼棉、索马里氏棉、拟似棉、戴维逊氏棉、瑟伯氏棉、鲁滨逊氏棉、雷蒙德氏棉、
旱地棉、三裂棉、比克氏棉、斯特提棉、草棉、亚洲棉、陆地棉、海岛棉的 PCR扩增结果
图 1 PEPC同源基因的扩增结果
44 江 西 农 业 学 报 23 卷
2． 2 PEPC 基因同源序列比对分析 测序结果表明，
PEPC基因的 DNA序列长度为 5388 ～5662 bp。用 Spidy
软件分析其基因结构(图 2) ，并推导出完整的氨基酸序
列，分别编码 675 ～848个氨基酸。对所得到的核苷酸和
氨基酸序列进行同源序列比对发现(图略) :在棉花中
PEPC基因同源基因保守性强，在核苷酸水平上相似性
为 90． 2% ～ 99． 7%，氨基酸序列相似性为 69． 4% ～
99． 8%(表 3)。有些物种对应的核苷酸和氨基酸序列表
现出很高的相似性，如 G． nelsoniiPEPC1 和 G． barba-
densePEPC1(98． 4%、98． 3%) ，G． sturtianumPEPC1 和 G．
hirsutumPEPC1(97． 0%、99． 7%) ，G． raimondiiPEPC1 和
G． davidsoniiPEPC1 (99． 7%、97． 8%) ，G． gossypi-
oidesPEPC1 和 G． aridumPEPC1(95． 4%、99． 8%) ，说明
它们在进化过程中，碱基替代少，核苷酸和氨基酸变化不
大，因此可能在不同的物种中仍执行着相近的功能。但
G． longicalyxPEPC1和其它基因在氨基酸水平上差异较
大，说明该基因可能在环境压力下向着不同的方向变异，
从而造成氨基酸水平变化较大，在进化后该基因的功能
发生改变。
红色部分:CDSf;灰色部分:CDSi;蓝色部分:CDSl;绿色部分:PloyA
图 2 PEPC基因结构示意图
表 3 棉属 PEPC同源基因核苷酸和氨基酸相似性比较
P1 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 P11 P12 P13 P14 P15 P17 P18
P1 * 78． 7 98． 1 97． 8 88． 7 86． 2 99． 4 95． 9 88． 7 86． 8 98． 2 98． 6 99． 4 94． 2 98． 3 98． 3
P3 93． 0 * 79． 5 79． 1 79． 8 88． 7 78． 8 77． 3 79． 8 69． 4 79． 3 79． 7 78． 7 74． 2 79． 5 79． 5
P4 92． 2 97． 2 * 99． 1 89． 6 87． 2 98． 2 97． 1 89． 6 87． 9 99． 1 99． 5 98． 2 93． 3 99． 2 99． 2
P5 95． 6 91． 1 90． 3 * 90． 1 87． 7 97． 9 97． 8 90． 1 88． 3 98． 8 99． 2 97． 9 93． 0 99． 0 99． 0
P6 95． 0 93． 7 93． 0 93． 9 * 79． 2 88． 8 88． 3 99． 8 81． 7 89． 5 89． 9 88． 9 84． 3 89． 6 89． 6
P7 92． 7 97． 8 96． 9 91． 8 95． 1 * 86． 3 85． 8 79． 2 76． 7 87． 0 87． 4 86． 1 81． 2 87． 1 87． 1
P8 98． 4 93． 2 92． 5 95． 7 95． 1 92． 9 * 96． 0 88． 8 86． 8 98． 3 98． 7 99． 2 94． 3 98． 5 98． 5
P9 95． 4 91． 0 90． 2 99． 7 93． 8 91． 7 95． 6 * 88． 3 86． 3 96． 9 97． 3 96． 0 91． 1 97． 0 97． 0
P10 97． 5 92． 5 91． 8 96． 1 95． 4 93． 1 97． 6 96 * 81． 8 89． 5 89． 9 88． 8 84． 3 89． 6 89． 6
P11 97． 3 92． 5 91． 8 96． 0 96． 3 94． 6 97． 6 96． 1 97． 8 * 87． 6 88 87． 0 82． 3 87． 7 87． 7
P12 97． 6 92． 3 91． 6 95． 0 94． 3 92． 1 97． 5 94． 9 96． 4 96． 4 * 99． 6 98． 1 93． 2 99． 3 99． 3
P13 95． 8 93． 1 92． 4 93． 3 93． 9 92． 9 96． 1 93． 2 94． 9 94． 9 95 * 98． 5 93． 5 99． 7 99． 7
P14 97． 1 93． 1 91． 5 94． 9 94． 3 92． 0 97． 2 94． 7 96． 6 96． 6 96． 1 94． 6 * 94． 3 98． 2 98． 2
P15 96． 6 93． 1 91． 6 94． 7 94． 3 92． 0 96． 8 94． 6 96． 1 96． 2 96． 0 94． 4 99． 1 * 93． 3 93． 3
P17 98． 2 93． 4 92． 6 95． 9 95． 2 93． 1 98． 5 95． 8 97． 3 97． 4 97． 6 97． 0 97． 1 97． 0 * 99． 5
P18 98． 4 93． 0 92． 2 95． 6 95． 0 92． 8 98． 6 95． 6 97． 7 97． 4 97． 2 96． 9 97． 1 96． 2 98． 8 *
注:上三角表示氨基酸相似百分比;下三角表示核苷酸相似百分比。
2． 3 对推导的 PEPC蛋白的生物信息学分析 用 prot-
param对推导的 PEPC蛋白进行理化性质分析，结果表明
这些推导蛋白的分子量大小为 76 ～ 96 kDa，等电点为
5． 74 ～6． 63;结构域分析表明，这些蛋白都属于 PEP羧化
5411 期 彭苗苗等:棉属 GhPEPC1 同源基因的克隆与进化分析
酶家族;α螺旋和不规则卷曲是 PEPC 蛋白质二级结构
的主要结构元件，两者约占 90%;溶解性分析表明，它们
亲水性很高，很可能为水溶性蛋白;亚细胞定位分析表
明，这些蛋白定位于过氧化物酶体和线粒体基质的可能
性较大;用 ProtFun 预测其功能表明，PEPC 具有氨基酸
合成、翻译和脂肪酸代谢等功能;在酶分类预测中，这些
PEPC为连接酶的可能性最高。
2． 4 PEPC 基因同源序列的演化关系分析 利用
MEGA4． 1 系统发育分析软件，对棉属 16 条 PEPC 基因
同源序列比对分析的结果再进行分析，构建其 NJ和 ME
进化树(图 3)。从图中可以看出，利用 NJ与 ME法分析
结果基本一致，为进化树的可靠性提供依据。从图中可
以看出，16个棉种可以分为 3 大分支:四倍体棉种陆地
棉和海岛棉的 PEPC基因首先聚为一类，且自举置信值
(BCL)为 100%;A染色体组中草棉的 G． arboreumPEPC1
和亚洲棉的 G． herbaceumPEPC1 聚为一类(BCL 100%) ;
D染色体组的棉种聚为一类，且每级分类均获得很高的
BootStrap支持，BCL 多为 100%。该分类结果与棉属依
据染色体组的分类结果基本一致，因此可作为分类的依
据。并且四倍体棉种分别和 A、D 染色体组中的草棉和
瑟伯氏棉亲缘关系较近，为研究棉属的进化提供了一条
新的途径。
图中数字为自举检验置信值(1000个复制序列)
图 3 基于 PEPC基因序列构建的棉属植物 NJ和ME系统进化树
3 讨论
大量研究资料表明，棉花中所有的种都来自于同一
祖先，但是共同起源的棉种在各不相同的环境条件的作
用下，经历了不同的进化历程，形成了遗传上隔离的不同
棉种。随着研究手段的创新，生物学家们从形态学水平、
解剖学水平、分子水平等各个方面来研究棉花物种的起
源、演化和分类信息，在棉花物种的起源与进化方面已形
成共识。但是，在四倍体棉种的起源、染色体组之间或组
内各棉种的同源程度等问题上仍有分歧。DNA 序列携
带的是物种的遗传信息，直接反映物种的基因型，含有丰
富可靠的进化信息，为鉴定亲缘关系、研究系统发育和演
化提供可靠的分子生物学证据。
本实验根据已知的 GhPEPC1 基因开放阅读框设计
特异引物，从棉属植物 17个物种中扩得 16 条同源序列，
均可推导出完整的氨基酸序列，说明该基因在棉属植物
中广泛存在。而在绿顶棉中没有扩增出同源序列，说明
绿顶棉中的该基因可能在环境压力存在的情况下发生碱
基替代，从而在核苷酸序列上发生差异，有可能在分化后
执行不同的功能。这与 JMCD． Stewart 的《最新棉属分
类》中的观点一致:他提出绿顶棉是异常棉的变异种，异
常棉分布独特，形成地理上的隔离。前人研究表明长萼
棉的基因型未确定，不属于任何已确定的基因组，这与本
实验的研究结果是相符合的。在分析 16 条同源序列时
发现，G． longicalyxPEPC1与其它物种中的 PEPC 的氨基
酸序列差异较大，同源性低。但在系统进化树中可以看
出长萼棉与 A染色体组的物种亲缘关系近，可以推断出
长萼棉的染色体组型可能为 A组，或者长萼棉和 A染色
体组的棉种是由共同的祖先进化而来的，在进化过程中
由于环境的影响从而序列发生变化。这对于确定长萼棉
的染色体组型有重要的意义。序列分析表明:除长萼棉
外，其它物种在核苷酸水平上的差异为 0． 3% ～ 9． 8%，
而在氨基酸水平上的差异为 0． 2% ～ 18． 8%，根据田欣
等［14］的序列在系统发育过程中的研究标准，可以得出该
基因序列差异较适中，适合做系统发育方面的研究。
四倍棉种的起源途径曾是棉属系统发育中的中心
问题之一。多数科学家接受了四倍体棉种是由染色体组
A和染色体组 D 结合而成的异源多倍体起源理论。而
关于这两组棉种如何相遇并结合的问题，又有不同假说。
科学家们采用不同的方法来验证四倍体棉种为异源多倍
体起源的理论。Gerstel［15］和 Phillips［16］观察杂交后的多
倍体在减数分裂时的染色体配对情况，Brubader［17］进行
遗传作图，王坤波等［18］对海岛棉体细胞染色体进行荧光
原位杂交都验证了四倍体棉种为异源多倍体起源的理
论。而从本研究构建的系统进化树可以看出四倍体棉
64 江 西 农 业 学 报 23 卷
种、A染色体组的棉种、D染色体组的棉种分别聚为不同
的类，说明杂交后形成的异源四倍体可能在在不同的环
境压力的选择条件下向着不同的方向进行演化发育，从
而导致 PEPC核苷酸序列发生变化，当然也有可能是因
为基因型的差异或者是单个基因的进化受生境的影响程
度存在差异所致。同时，本研究中 A染色体组的草棉较
亚洲棉来说，与四倍体棉种的亲缘关系近。说明四倍体
棉种中的 A 染色体组的供体种可能是草棉。Gerstel［15］
检查了亚洲棉 ×草棉、陆地棉 ×草棉以及陆地棉 ×亚洲
棉之间的杂种的染色体配对，最后认为草棉的染色体组
的分化程度距异源四倍体最近。宋国立［19］运用 RAPD
技术分析表明，四倍体棉种是由于草棉类似的棉种作母
本供体种。异源四倍体的两个栽培种 A 染色体组的供
体种为草棉的观点被大多数科学家接受，但也有研究表
明，草棉不论从染色体和分子水平上都和异源四倍体棉
种的 A染色体组存在着较大的差异，即草棉不是真正的
异源四倍体 A染色体组的供体种，真正的供体种已经灭
绝。而在异源四倍体 D组的来源问题上，不同的科学家
看法不同，至今仍有很多争议。本研究从分析的 6 种 D
染色体组的棉种来看，瑟伯氏棉与四倍体棉种特别是与
海岛棉的亲缘关系最近，可能为异源四倍体的 D染色体
组的供体。这一研究结果与前人的结果也有相似之处。
早在 50年代，Beasley［20］通过种间杂交，得到瑟伯氏棉是
异源四倍体棉种 D 染色体组供体种的结论。而聂汝芝
等［21］棉种的核型分析，也指出瑟伯氏棉可能是海岛棉的
供体种。
此外在 D组染色体的聚类分支中可以看出，瑟伯氏
棉与其它几个 D组棉种的亲缘关系较近，可能为 D组基
因组的中心，对研究 D 组棉种的遗传进化有重要的
意义。
本研究 PEPC基因虽然普遍存在于各种生物中，但
是利用该基因家族分析物种的起源与进化国内外还鲜有
报道。尽管本研究克隆得到 16 个物种的 PEPC 全长基
因，但是由于数量有限，可能会存在一定的片面性。准确
的划分棉属各个物种和研究它们的亲缘关系，有赖于获
得更多材料的基因克隆以及棉属基因组全序列的比较
分析。
参考文献:
［1］ Fontaine V．，Hartwell J．，Jenkins G． I． ． Arabidopsis thaliana
contains two phosphoenolpyruvate carboxylase kinase genes with
different expression patterns［J］． Plant Cell Environ，2002，25:
115 －122．
［2］张彬，马建军，贾栋，等． 小麦导入磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶
(PEPCase)基因的初步研究［J］．安徽农业科学，2009，37(11) :
4900 －4901．
［3］Hartwell J．，Gill A．，Nimmo G． A． ． Phosphoenolpyruvate carbox-
ylase kinase is a novel protein kinase regulated at the level of ex-
pression［J］． Plant J，1999，20(3) :333 －342．
［4］ Fukayama H．，Tamai T．，Taniguchi Y． et al． Characterization
and functional analysis of phosphoenolpyruvate carboxylase kinase
genes in rice［J］． Plant Journal，2006，47(2) :258 －268．
［5］Vojdani F．，Kim W．，Wilkins T． A． Phosphoenolpyruvate carbox-
ylase cDNA from developing cotton fibers［J］． Plant Physiol，
1997，24(3) :200 －207．
［6］Qiao Z． X．，Liu J． Y． ． Molecular cloning and characterization of
a cotton phosphonolpyruvate carboxylase gene［J］． Natural Sci-
ence，2008，18:539 －545．
［7］Cronn R． C．，Small R． L．，Haselborn T． ． Rapid diversification of
the cotton genus revaled by analysis of sixteen nuclear and chloro
－ plast genes［J］． American J Botany，2002，89:707 －725．
［8］Sahai M． A．，Soliman K． M．，Gorgensen R A． ． Ribosomal DNA
spacer － length polymorphism in barley［J］． PNAS，1984，81:
8014 －8018．
［9］HE DH，XING HY，ZHAO JX，et al． Genetic diversity analysis
and constructing core collection based on phenotypes in cotton
［J］． Agricultural Science ＆ Technology，2010，11(6) :57 －60，
174．
［10］王晟，杜雄明．几个棉花纤维突变体及纤维发育相关基因的
初步分析［J］．西南农业学报，2009，37(1) :32 －35．
［11］刘梦培，田敏，傅大立，等．一种新的微卫星 PAGE的 DNA显
带方法［J］．湖南农业科学，2010，49(17) :145 －148．
［12］Chang Q．，Zhou K． Y． ． Phylogeny reconstruction instudy of mo-
lecular evolution［J］，Chinese Biodiversity［J］． 1998，6(1) :55
－62．
［13］Tan Y． F．，Jin R． C． ． The efficient algorithm forreconstructing
phylogenetic tree based on neibor － joining method［J］． Comput-
er Engineering and Applications，2004，40(21) :84 －85．
［14］田欣，李德铢． DNA序列在植物系统学研究中的应用［J］．云
南植物研究，2002，24(2) :170 －184．
［15］Gerstel D． U．，Phillips L． L． ． Segregation of synthetic amphip-
loids in Gossypium and Nicotiana［J］． Quantity Biology，1958，
23:225 －237．
［16］Phillips L． L． Segregation in new allopolyloide of Gossypium． V．
Multivalent formation in New World × Asiatic and New World ×
wild American hexaploids［J］． American J Botany，1964，51:
324 －329．
［17］Brubaker C． L．，Paterson A． H．，Wendel J． F． ． Comparative ge-
netic mapping of allotetraploid cotton and its diploid progenitors
［J］． Genome，1999，2:84 －203．
［18］王坤波，王文奎．海岛棉原位杂交及核型比较［J］．遗传学报，
2001，28(1) :69 －75，T004．
［19］ Song G． L． ． Analysis of the relative relationship of different
speices in Gossypium by RAPD［D］． Wuhan:Huazhong Agri-
cultural University，1998．
［20］Beasley J． O． ． Gent［M］． 1942，27:25 －54．
［21］Nie R． Z．，Li M． X． ． rative study on the karyotypes in three
wild species and four cultivated species in Gossypium［J］． Acta
Botanica Sinica，1999，27(2) :113 －121．
7411 期 彭苗苗等:棉属 GhPEPC1 同源基因的克隆与进化分析