全 文 ：· 综述·
RAPD技术及其在葡萄属植物研究上的应用
徐 炎 (西北农业大学 ,陕西杨凌 712100)
扈惠灵 (河南职业技术师范学院 ,河南新乡 453003)
李桂荣 (西北农业大学 ,陕西杨凌 712100)
摘 要: 对 RAPD技术、原理及其在基因组研究方面所具有的特点和优势进行讨论 ,综述了 RAPD
技术在葡萄上的研究进展 ,并展望了 RAPD技术在葡萄属植物研究上的应用前景。
关键词: RAPD;葡萄属 ;遗传 ;育种
中图分类号: S663. 103 文献标识码: A 文章编号: 1001-2117( 1999) 04-0064-07
RAPD Techniques and its Applications in Vit is Plant Study
XU Yan (Northwest Agriculture University , Yangl ing , Shaanx i 712100)
HU Huiling ( Henan Vocat ional Technical TeachersCollege , X inx iang , Henan 453003)
Abstract: The principle and techniquse of RAPD not only were int roduced, but i ts
characteristic and predominance w ere discussed in genomic research. The prog ress
o f RAPD in Vitis plant w as evaluted.
Key words: RAPD; Vit is; genetics; breeding
RAPD技术是 1990年由 Williams J. G.
K
[1 ]和 Welsh J. [ 2]两个研究小组同时发展起
来的。 由于其独特的检测 DNA多态性的方
式 ,该技术一诞生就受到广泛的重视和应用 ,
被广泛用于基因组研究的各个方面。 在葡萄
上 ,国内外学者利用 RAPD进行了葡萄分类
学研究、亲缘关系的鉴定、品种的识别、特定
性状分子标记及基因定位、遗传图谱的构建
等研究。所有这些对葡萄种质资源的开发利
用和新品种选育提供了理论依据和分子标记
辅助育种选择的新方法。
1 RAPD技术、原理及特点
RAPD( Random Ampli fied Po lymorphic
DN A)称为随机扩增多态性 DNA,是一种新
的在分子水平上的遗传标记。 RAPD技术建
立于 PCR技术基础上 ,它是利用一系列不同
的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链为引
物 ,对所研究基因组 DNA进行 PCR扩增 ,
扩增产物通过聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳
分离 ,经 EB染色来检测扩增产物 DNA片段
的多态性 ,这些扩增产物 DNA片段的多态
性反映了基因组相应区域的 DNA多态性。
RAPD所用的一系列引物 DNA序列各
不相同 ,但对于任一特定的引物 ,定同基因组
DNA序列有其特定的结合位点。这些特定的
结合位点在基因组某些区域的分布如符合
PCR扩增反应的条件 ,即引物在模板的两条
Shaanxi For est Science and Techno log y
陕西林业科技 No . 4 1999, pp. 64～ 70
收稿日期: 1999-10-09
作者简介:徐炎 ( 1972— ) ,男 ,河南潢川人 ,在读硕士生 ,现从事中国野生葡萄抗病基因的 RAPD标记研究
链上有互补位置 ,且引物 3 端相距在一定的
长度范围内 ,就可以扩增出 DNA片段。 因
此 ,如果基因组在这些区域发生 DNA片段
插入、缺失或碱基突变就可能导致这些特定
结合位点分布发生相应变化 ,而使 PCR产物
增加、缺少或发生分子量的改变。 通过 PCR
产物的检测即可测出基因组 DNA在这些区
域的多态性。由于进行 RAPD分析时可用引
物量很大 ,虽然对每一个引物而言其检测基
因 DNA多态性的区域是有限的 ,但是利用
一系列引物可以检测区域则几乎覆盖整个基
因组。因此 , RAPD可以对整个基因组 DNA
进行多态性检测 ,这就是 RAPD检测多态性
DNA的原理。
RAPD在基因组研究方面表现出其独到
的特点和优势。首先 ,它在基因定位上可以快速
定向寻找同所定位基因相连锁的 DNA标记 ,
进而快速完成基因定位。这是利用 RFLP等方
法进行基因定位所不能做到的 ,并且它还可以
有效地定向增加 RFLP某一区域 DNA标记。
第二 , RAPD可以在对物种没有任何分子生物
学研究的情况下 ,对这个物种进行基因组指纹
图谱的构建。并且通过统计分析为物种进化和
分类研究提供 DNA分子水平的证据 ,这是利
用其它方法 (如: V N TR等方法 )进行此类研究
所不能做到的。第三 , RAPD可直接对基因组
进行连锁标记作图。它避开了 RFLP和重复序
列基因组作图必须首先要进行 DNA标记克
隆、多态性筛选或测序分析等一系列准备工作。
第四 , RAPD由于其引物为人工定序合成的 ,
并且这些引物对任何基因组研究是通用的 ,因
此 ,适合于大规模生产和商品化 ,这大大降低了
研究费用。
RAPD建立于 PCR基础上 ,它继承了
PCR的优点 ,即样品用量少、灵敏度高、检测
容易等 ,但同时也保留了 PCR所固有的缺
陷 ,即易产生假带。虽然这些假带可以通过重
复试验加以排除 ,但对于大量样品的检测 ,重
复试验则带来一定的麻烦。另外由于 RAPD
所用引物通常比一般 PCR反应引物短 ,这进
一步增加了重复试验的难度。但是通过严格
控制实验条件 ,还是能够得到可靠的重复结
果。另外 , RAPD所用引物短 ,有时产生的多
态性 DNA电泳图谱比较复杂 ,会给实验分
析结果带来一定的困难。但尽管如此 , RAPD
检测快速、简便的特点仍将使它在基因组研
究中发挥重大的作用。
2 RAPD技术在葡萄属植物研
究上的应用前景
2. 1 进行葡萄品种鉴定
葡萄寿命长 ,且主要采用无性繁殖 ,不同
地域间经常交换品种 ,导致同名异物和同物
异名现象十分普遍 ,对葡萄品种进行可靠的
鉴定 ,对于推广优良品种 ,保护育种者的权益
都有重要意义。 葡萄专家利用常规技术进行
形态性状鉴定至少经历 3～ 5年。且由于形态
特征易受环境条件的影响 ,在结果之前或未
挂果时难以准确鉴定。利用 RAPD技术 ,对
葡萄品种进行 DNA多态性鉴定能克服环境
条件的影响 ,方便、省时。寻找葡萄品种的遗
传标记及其特征 ,为葡萄品种提供 DNA分
子标记和鉴定区分其假品种。 Tessier. C[3 ]
等 ,利用 分子标记分析和统计学相结合的方
法进行欧洲葡萄品种识别的研究。结果表明:
使用该方法用 21个 RAPD引物和 2个微卫
星位点对 224个欧洲葡萄品种进行筛选 ,其
中 ,这些引物的区分效果不仅依赖它产生的
带型的多少 ,而且依靠不同带型出现的频率
的大小。有 8个组合引物 (包括 6个 RAPD
和 2个微卫星 )对区分这 224个欧洲葡萄品
种是最佳的。 欧洲葡萄` Albarino’ 是西班牙
的一个重要的栽培品种 ,由于形态的多样性
而造成许多错误的品种名。 为了纠正与` Al-
barino’ 有关的错误名称以及评估这个栽培
品种内的遗传多样性 , Lourei ro. M. d. [4 ]等 ,
65 1999年第 4期 陕西林业科技
对 18个来自不同地区的` Albarino’ , 4个和
` Albarino’ 有亲缘关系的品种 ( Alva riho,
Caino blanco, Canio branco , Lourei ro ) ,两个
错误命名的品种 ( Savaghin blanc, Gewurz-
tramier) ,用 20个 RAPD引物和 6个微卫星
位点进行分析 ,结果证明了来自 E1 Encin,
Alv arinho, Rancho de la merced, Savagnin
blanc和 Gewurzt ra miner的` Alba rino’以及
Canio blanco , Cainho brano和 16个来自
Galicia的` Alba rino’ 没有多态性 ,从而阐明
了 这 些 异 名 的 栽 培 葡 萄 品 种 都 是
` Alba rino’ 。 This. P. [5 ]仅用 2个引物可将 30
个葡萄 ( Viti s Spp. )砧木品种的 23个分开 ,
接着又用 O PA20将所有的供试品种分开。
Xu等 [6 ]利用 SCAR标记将 10个葡萄砧木品
种一一区分。 王跃进等 [7 ] ,用 RAPD技术在
幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的
杂种 ,表明用随机引物 UBC- 250, UBC-
266和 UBC- 272可以分别扩增出 1400,
1440, 350和 500 bp的多态性片段 ,作为来
自无核亲本的分子标记。
2. 2 系谱解析与分类
葡萄属植物起源历史悠久 ,分布广泛 ,属
内种间易杂交 ,中间型、过渡型相当普遍 ,这就
为系谱解析和分类工作造成较大困难。近年来 ,
人们利用 RAPD技术对葡萄属植物进行种的
分类和系谱分析 ,从 DNA水平上取得了较大
的进展。This. P等 [ 5]对夏葡萄、西班牙葡萄、圆
叶葡萄等 12个种用 RAPD分析方法进行分类
和亲缘关系的探讨 ;并用同样方法对欧洲品种 ,
常用砧木 SO4、 5C、 5BB、 125AA、 Eorne进行
了区分 ,还弄清了某些有争议的品种来源 ,这些
结果可用于分子标记辅助选择。 Vidal. J. R.
等 [8 ]用 RAPD技术对起源于西班牙不同地区
和法国、德国的古代栽培欧洲葡萄进行 UPG-
M A聚类分析 ,并认为自从古代就在西班牙
Galicia栽培的“ Galician”品种不完全一样 ,可
能由于从不同的葡萄栽培地引入 Galicia而造
成的。Stav rakakis. M. W.等 [9 ]用 11个 RAPD
引物对 14个欧洲葡萄进行了遗传相似程度的
计算 ,并建立了它们的系统进化树 ,认为玫瑰香
家系 ( Muscat fami ly)内存在遗传变异 ,其遗传
相似值范围为 0. 67～ 1. 00。 除了 Moscha-
toaspro和 Moscudi不能被区分开 ,其它的所
有栽培玫瑰香品种都被区分开。 Sefc. K. M.
等 [10 ]根据 RAPD微卫星技术分析结果 ,重建
了一种葡萄的系谱关系 ,认为古代栽培品种
Silvaner 是 Traminer 和 Oster reichisch
Weiss 的 杂 交 后 代; Rotgipfler 来 源 于
Traminer× Roter Vel tliner, 而 Fruhroter
V el tliner又是 Ro ter V el tliner× Si lv aner的
后代 , Jubilaumsrebe来自于 Fruhro ter Velt-
liner× Po rtugieser Granelo。 Maria Stela
等 [11 ]对意大利的葡萄种质资源及品种进行了
RAPD分析 ,他们用 40个随机引物对不同的
种和品种进行了 RAPD分类 ,表现出高度的多
态性 ,往往用一种引物就能提供区分不同种的
识别特征带型。董继新等 [12 ]对来自不同种群的
33个葡萄种、变种、杂种和品种进行 RAPD分
析 ,仅用一个引物 682即可将供试 33个材料都
区分开。 张立平等 [13 ]对葡萄属 33个种及品种
材料进行 RAPD分析。结果表明 , RAPD能较
好地用于种及品种鉴定 ,供试的 33个材料可分
为 9类和 1个特殊型。美洲葡萄类群聚为一个
类型 ,起源于我国的东亚类群分属于 8个类型 ,
圆叶葡萄单独为一个类型。罗素兰 [ 14]对起源于
我国的 83个葡萄种质的 22个变种或杂种进行
RAPD分析 ,用 20个随机引物 ,根据聚类分析
的结果认为菱叶葡萄和秦岭葡萄是中国野生葡
萄中起源最古老的类型之一 ,并认为中国野葡
萄种内的亲缘关系受花型、地理起源的影响。地
理起源相近的同花型的株系间遗传距离最小 ,
不同花型间的株系遗传距离较大。且不同花型
间的遗传距离大于株系间的距离。雄花与雌花
株系间遗传距离最大 ,两性花与雄花遗传距离
次之 ,两性花与雌能花的遗传距离最小。
66 陕西林业科技 1999年第 4期
2. 3 进行葡萄遗传多样性研究和特定性状
连锁基因标记
葡萄属植物的千姿百态是由其遗传物质
的多样性造成的。 通常葡萄学家借助于一些
直观的形态特征来识别物种 ,随着科学的发
展 ,传统的形态学知识很难适应现代葡萄学
研究 ,人们开始应用分子标记来反应葡萄属
植物的遗传多样性。 RAPD标记能直观、准
确地描述它的遗传多样性 ,不仅能够检测种
内遗传多样性 ,比较种间遗传多样性 ,而且能
对葡萄属植物重要农艺性状和抗虫、抗病、抗
逆境等重要的特定性状的连锁基因进行标
记 ,进行分子辅助选择 ( MAS) ,能提高葡萄
育种效率 ,缩短育种年限 ,加速葡萄育种进
程 ,早日实现高产优质兼抗性的葡萄育种总
目标。 Grando. M. S.等 [15 ]利用 RAPD与
ST R( Shor t tandem repea ts)相结合的技术 ,
分析了意大利 Trentino本地的 40个欧洲葡
萄的基因型变异。 Momo l. E. A.等 [16 ]根据
RAPD和 23 rRN A 5 末端基因分析了来源
于美国和欧洲不同地区的 69个农秆菌葡萄
株系的遗传多样性 ,结果认为 ,在所有的农杆
菌葡萄株系中 , 2个位点的 rRN A操纵子 ,由
RAPDs决定的总基因组 DNA和它们所携
带的 Ti质粒之间有很高的相关性。 Vidal. J.
R.等 [17 ]用同工酶 ( Iso zyme)和 RAPD技术
分析了生长在西班牙 Galicia地区的欧洲葡
萄` Albarino’ 的遗传多样性 ,认为栽培在
Galicia的` Alba rino’ 存在着遗传的均一性 ,
` Alba rino’在形态上的轻微差异是由外界因
素引起的 ,而不是基因型的差异。 Reyner. F.
等 [18 ]使用 RAPD标记对不同类型的比黑葡
萄的无性系 [ Pino t noi r Clones ]进行了农艺
学性状和基因型的评价。 认为 Pinot是几个
其它栽培品种的亲本 ,而 Bouvier和 St. Lan-
rent这两个品种都有 Pino t的一个等位基
位。 Simon- Herrera. R.等 [19 ]利用 RAPD技
术对智利中心的 Talca地区的欧洲葡萄和法
国栽培葡萄品种进行了遗传多样性的比较 ,
所用 20个随机引物中有 6个可以识别所有
的品种并认为智利和法国的 Merlo t和栽培
品种 Cabernet Sauvighon有差异。欧洲葡萄
Sultanine在土质肥沃的情况下 ,表现出无核类
型 , Lahogue. F. 等 [20 ]利用 RAPD标记和
SCAR( Sequence Cha racterized amplified re-
gion)标记对这一特性进行了研究分析 ,认为这
一无核性状是由一个主效的显性基因和三个互
补的隐性基因控制的 ,用 140个随机引物进行
RAPD分析得到了 RAPD标记和主效的显性
基因紧密连锁 ,遗传距离分别为 0. 7和 3. 5
cM。 并把最近的标记转化为共显性的 SCAR
标记 ,命名为 SCC8。 所有有核的后代表现为
SCC8
-
/SCC8
-
,所有无核的后代表现为
SCC8
+
/SCC8
+
,这种标记能成功地检测其它
共显性的无核品种。Wang等 [21 , 22]用 BSA法对
葡萄 B72- 216× B45- 187杂交后代进行了 RAPD
分析 ,获得的 U BC269- 500片段与葡萄无核
基因有一定的连锁关系 ,并对该标记测序转化
为 SCAR标记 ,他认为葡萄的无核性状是多基
因控制的该片段与主效基因之一有连锁关系。
王军等 [23 ]利用山葡萄品种 (品系 )及山欧杂交
后代寻找到与山葡萄雄性性状及白色果皮性状
的 RAPD标记 ( OPA18 - 700, O PY02 -
750)。罗素兰 [14 ]利用毛葡萄 ( 83- 4- 96)×粉
红玫瑰的杂交后代寻找到了中国野葡萄抗霜霉
病基因的 RAPD标记 ( O PO06- 1500) ,并将
其转化为 SCAR标记 ,对其进行了基因标记的
定位作图 ,定位在 83- 4- 96(毛葡萄 )的第 5
连锁群上。张剑侠 [24 ]利用华东葡萄 (白河- 35
- 1)×佳利酿的杂交后代找到了中国野葡萄
抗白粉病的基因的 RAPD标记 ( O PV03-
1300)。
目前与目的基因紧密连锁的稳定的标记
正在不断挖掘 ,这将有力地促进葡萄品种改
良 ,加速育种进程。
2. 4 构建葡萄属植物的遗传图谱
67 1999年第 4期 陕西林业科技
Morgan的遗传连锁理论为遗传图谱的
建立奠定了理论基础 ;基因在同一染色体上
距离近到一定程度时 ,便不发生重组 (或重组
率很低 )地遗传给后代 ,使子代与亲本表现出
一致的表型性状。 目前的遗传图谱通常用
DNA标记来作图。 它是根据对某一多态性
DNA片段分离情况的直接观察而获得。遗传
图谱只显示基因间染色体上的相对位置 ,并
不反映 DNA的实际长度。 几乎所有重要农
作物 ,包括番茄、玉米、水稻、甜菜等的 RFLP
图谱均已构成 , RAPD标记进一步饱和了各
自的图谱。果树由于生长周期长 ,得到分离的
后代不易 ,同时又表现出高度的品种间差异。
而在果树育种中 ,由于双亲均为杂合体 ,杂合
位点会在 F1代中分离 ,其分离现象与测交试
验一样为 1∶ 1。因此这种双亲均为杂交体的
现象为 “双假测交” ( Pseudo test Cross)。
Weeden. N. F.
[25 ]发展了用“双假测交”群体
建立遗传图的方法 ,并以此在苹果中构建了
分别拥有 233个和 156个分子位点的连锁
图。前者包括 24个连锁群 ,共计 950 cM ,后
者共 21个连锁群 ,其中 5个位点与控制枝条
生长习性、萌芽期、花芽萌发、吸收根生长、果
皮颜色等性状的相关基因有连锁关系。 Lod-
hi. M. A.等 [26 ]在葡萄上利用两个组合 (` Au-
ro re’ ×` Cayuga White’ 和 Horizon×Ⅲ 547
- 1)的后代构建了葡萄的连锁图。品种` Au-
ro re’ 299个位点分布在 24个连锁群中 ,品种
` Cayuga White’ 276个位点分布在 20个连
锁群中 ,品种` Horrizon’ 276个位点分布在
20个连锁群中 ,而Ⅲ 547- 1的 290个位点分
布在 25个连锁群中。 Daly. M. J.等 [27 ]利用
` Cayuga White’ ×` Aurove’ 的 60个杂交后
代群体 ,使用 422个 RAPD标记和 16个
RFLP和同工酶标记构建了葡萄 ( 2n= 38)的
遗传连锁图。根据“双假杂交”理论 ,标记间的
平均遗传距离为 6. 1 cM ,` Cayugawhi te’ 图
谱有 214个标记覆盖 1 196 cM ,` Auro re’ 图
谱有 225个标记覆盖 1 477 cM , ` Cayu-
gawhite’由 20个连锁群组成 ,而` Auro re’ 图
谱由 22个连锁群组成。` Aurore’的每个连锁
群大小为 14至 135 cM ,` Cayugawhi te’的每
个连锁群大小为 14到 124 cM。用 RAPD技
术与其它分子标记技术相结合构建葡萄属植
物遗传图谱 ,能更好地进行数量性状位点分
析和进行图谱位点上的基因克隆 ,来分离重
要的质量性状或数量性状基因。
总之 , RAPD技术进入葡萄属植物研究
是一个良好开端 ,为葡萄育种学开辟了新的
研究和应用领域 ,它使葡萄育种家能直接从
分子水平了解种间的差异 ,也使育种过程更
直观 ,目的性更强。 目前 RAPD最有价值的
应用领域可能是分子辅助早期选择 ,在幼苗
期就能进行 ,在育种过程中利用 RAPD标记
跟踪目的性状在后代中的分离情况 ,并选择
合适的配种方式以保持或获得更好的重组优
良品种就显得格外有效、准确。 另外 ,葡萄育
种的一个重要方面便是将外源种质的优良性
状引入栽培品种 ,而 RAPD标记可用于有效
筛选栽培品种与野生型品种的杂交后代 ,节
省大量的人力、物力。
随着生物学的发展 ,新的分子标记技术
不断出现 , RAPD与其它分子标记技术相结
合 ,能更准确地对葡萄属植物特定性状的基
因标记定位和构建遗传图谱。在育种过程中 ,
利用遗传图谱 ,育种者能掌握个体及群体相
对遗传距离 ,有机地组织种质资源 ,这样便于
选择最佳的配种组合以获得具有优良性状的
新品种。②
参 考 文 献
1 Williams J. G. K , Kubelik A. R. , Liv ak K. J. et
a l. DNA polymo rphisms amplified by a rbi trar y
primer s a re useful as g enetic marker s. Nucleic
Acids Research, 1990, 18( 22): 6531～ 6535
68 陕西林业科技 1999年第 4期
2 Welsh. J. , M. Mcclelland. Finge rprinting
genomes using PCR w ith a rbitr ary prime rs.
Nucleic Acids Resea rch, 1990, 18( 24): 7213～
7218
3 Tessie r C. , Daivd. J. , This. P. et a l. Opti-
mi zation of th e choice o f molecular markers fo r
va rieta l identifica tion in v itis v iniferal L. Theo-
re tical and Applied Genetics, 1999, 98( 1): 171
～ 177, 16ref
4 Loureir o. M . D. , Mar tinez. M. C. , Bour
Siquot. J. M. . Molecula r marker analy sis of
V itis V inifera Acbar ino and some simila r
g rapevine cultiva rs. Journa l o f th e Americam
Society for Ho rticaltura l Science, 1998, 125
( 5): 842～ 848, 14ref
5 This. P. , Cuisset. C. , Boursiquo t. M . . Devel-
opment of stable RAPD marker s fo r the identifi-
cation o f g rapev ine roo tstocks and the analysis
o f g ene tic r ela tionships. Ame rican journa l of
Enolog y and v iticultur e, 1997, 48 ( 4 ): 492～
501, 40r ef
6 Xu Hong , Dianewilson. Seqnence - specific
po lymera se chain reaction ma rker s deriv ed
from randomly amplified polymo rphic DNA
marke rs fo r fing erprinting g rape ( V itis) r oo t-
sto cks. J. Amer. Soc. Hor t. Sci, 1995, 120
( 5): 714～ 720
7 王 跃进 , Lamikanra. O. , Schell. L. 等 . 用
RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种 .西北农业大
学学报 , 1997, Vol. 25( 3): 16～ 20
8 Vidal. J. R. , Mo reno. S. , Gogo rcena. Y. et al.
On the genetic r ela tionships and o rigins o f six
g rape cultiva rs of Galicia ( Spain) using RAPD
marker s. Amer J. of Enolog y and V iticultur e,
1999, 50( 1): 69～ 75, 411ref
9 Stav rakakis. M . N. , Binia ri. K. . Genetic study
of g rape cultiv ar s belonging to musca t family by
random amplified po lymo rphic DN A marke rs.
V itis, 1998, 37( 3): 119～ 122, 17ref
10 Sefc. K. M . , Steinkellner. H. , Glo ss. J. et
al. Reconstruction o f a g rapevine pedig ree by
micro satellite analysis. Th eor etical and Ap-
plied Genetics, 1998, 97 ( 1 - 2): 227～ 231,
12ref
11 Grando, Maria Stella, et al. The RAPD analy-
sis of v itis, g ermpla sm V lth Interna tional Sym-
posium on Grape Breeding Yalta, Crimea ,
Ukraine o ral presentation, 4- 10 Sept. 67～ 68
12 董继新 ,林伯年 ,何祖华 .葡萄属植物基因组
DNA的多态性分析 .浙江农业大学学报 , 1998,
24( 2): 219～ 220
13 张立平 ,林伯年 ,沈德绪等 ,葡萄属 RAPD分类
研究 .园艺学报 , 1998, 25( 2): 191～ 193
14 罗素兰 .中国野葡萄资源的 RAPD标记及其应
用研究 [博士论文 ].杨凌:西北农业大学 , 1999
15 Grando. M . S, Frisinghelli. C. , Scanne rini. S
( ed) , et a l. Biodiv er sity o f the ancient T rienti-
no gr apev ine germpla sm. Proceeding s of the
symposium on plant bio techno log y as a too l fo r
the exploitation of mountain lands, Turin,
lta ly , 25～ 17 may 1997, Acta Ho r ticultur e,
1998, No. 457: 143～ 148, 5ref
16 Momo l EA , Bur r T J, Recid CL, et al. Genetic
div ersity o f Ag robacterium V itis as determined
by DN A fingerprints o f th e 5 - end of the 23
r RN A gene and random amplified polymo rphic
DN A. Journal o f Applied M icr obio lo gy , 1998,
85( 4): 685～ 692
17 Vidal. J. R. , Mo reno. S. , Masa. A. , et al.
Study o f th e genetic homogeneity o f Albarino
( V itis V iniferal L. ) g r owing in Galicai
( Spain) using Iso zyme and RAPD marke rs.
V itis, 1998, 37( 3): 145～ 146
18 Regner. F. , Stadlbauer. A. , Kaser er. H. , et
al. Eva luation of pinot clones w ith r ega rd to a-
g ronomical and genetic aspec ts. Mit tei lungen
klo sterneuburg , Rebe Und wein, Obstban Und
Fruch tever Wertung , 1998, 48( 6): 193～ 202
19 Simon Herera. R. , Bruns. S. , Mantell. S. ,
et a l. Study of g enetic div e rsity in vitis
V inife ra using RAPDs. Recent advances in
bio tech no lo gy o fr tree conserv a tion and man-
agement, pro ceeding s of an IFS Workshop,
Flo rianopolis, Br azil, 15 ～ 19 September ,
69 1999年第 4期 陕西林业科技
1997, 1998, 112～ 121, 3pp. o f ref
20 Lahogue. F. , This. P. , Bouguet. A. . Identi-
fica tion of a codominant scar marker linked to
the seedlessness char acter in g rapev ine. Theo-
retical and Applied Gene tics 1998, 97( 5～ 6):
950～ 959
21 Wang. Y. J. , et al. Identifica tion o f g enetic
ma rker linked to seedless g ene in g rape using
RAPD. Ac ta Univ , Agric 130reali - occiden-
ta lis, 1997, ( 5): 1～ 19
22 Wang Y. J. , Lamikanra. O . . Analysis of se-
quceecing th e RAPD marker linked to seedless
g ene in g rape. Acta , Univ , Ag ric 130reali -
occidentalis, 1997, 25( 4): 1～ 5
23 王军 .山葡萄雄性 性状及山欧杂种果色的
RPAD标记 [博士论文 ].杨凌:西北农业大学 ,
1998
24 张剑侠 .中国野葡萄抗白粉病基因的 RAPD标
记研究 [硕士论文 ].西北农业大学 , 1999
25 Weeden. N . F. Approaches to w apping in ho r-
ticultural c rops. In: Gressholf PMed. Plant
Genome Analysis. Boca Raton: CPC press,
1994, 57～ 68
26 Lodhi. M . A. , Reisch BJ. , et a l. Mo lecula r
g enetic mapping and genome size o f v itis.
Plant g enome I, 1992, Sam Diego NOV. 9～
11, 37
27 Lodhi. M . A. , Daly. M . J. , Ye. G. N. , et al,
A molecular ma rker based linkage map of v itis.
Genome, O ttaw a, Onta rio, Canada: Nationa l
Resea rch Council o f canada Aug 1995, V . 38
( 4): 786～ 794
(上接第 63页 )
2. 3. 1 水平梯田整地 适于坡度较缓的坡
面。根据地形沿等高线放线 ,修筑梯田 ,要做
到地面平整。梯田的长短宽窄应依地形而定。
2. 3. 2 水平沟整地 对于坡度稍大的坡面
一般采用水平沟整地 ,这应是黄土丘陵区主
要采用的整地方式。沿等高线挖沟 ,沟上口宽
1. 0～ 1. 5 m,沟底宽 0. 8～ 1. 0 m,沟深 0. 6
～ 0. 8 m,沟与沟之间的水平距离即为栽植
杏园的行距。 挖沟时地表熟土与下面生土分
开放置 ,熟土置于沟上沿 ,生土置于沟下沿。
栽植时先回填熟土并分层压青以改善土壤。
2. 3. 3 鱼鳞坑整地 对于坡度较大 (如大于
25°)并且坡面不整齐的地方 ,一般采用鱼鳞
坑整地。具体方法是沿等高线挖长方形坑。用
心土或石块垒成外埂 ,埂高 0. 4～ 0. 5 m;坑
长边与等高线平行 ,长 1. 3～ 1. 5 m;宽边与
等高线垂直 ,为 0. 8～ 1. 0 m;坑深 0. 4～ 0. 6
m。 沿相临两条等高线挖的坑在垂直线上相
互错开 ,形成鱼鳞状 ,以利保持水土。
2. 4 栽植形式与品种搭配
黄土丘陵区栽植仁用杏时 ,株行距以 3
m× 4 m较适宜 ,每公顷栽植 825株。在地面
较平整、水肥条件较好的地方 ,可栽成 2 m×
4 m或 2 m× 3 m ,每公顷 1 245株或 1 665
株。栽植品种要根据当地气候而定。 年平均
气温在 8°C以上 ,尤其是春季霜冻轻的地区 ,
以龙王帽和一窝蜂为主栽品种 ;年平均气温
7°C左右的地方 ,以北山大扁和串铃扁较好 ;
对于春季霜冻较重的地方 ,应以抗寒性良好
的优一、三杆旗和新四号为主栽品种。龙王帽
和一窝蜂用白玉扁为授粉树 ;北山大扁和串
铃扁可互相授粉 ;优一可用龙王帽为授粉树 ,
也可与三杆旗、新四号互为授粉。授粉树所占
比例应达到 20%以上。栽植时在定植穴内先
回填熟土 ,有条件的地方最好在每个定植穴
内施入农家肥 20～ 30 kg ,放入仁用杏苗 ,埋
土踏实 ,并灌水 10～ 15 kg ,以保证成活。
建好杏园后 ,应加强杏园管理 ,以保证丰
产丰收 ,取得良好的效益。 ②
70 陕西林业科技 1999年第 4期