全 文 ：HPLC法测定不同产地与采收期
虎耳草中岩白菜素的含量
丁家欣1 , 张秋海1 , 张 玲1 , 王遂生2
(1.中国中医研究院 基础理论研究所 , 北京 100700;
2.江苏省南通市中西医结合医院 , 江苏 南通 226000)
虎耳草系虎耳草科植物虎耳草的全草 。具有
消炎 、解毒之功能。用于治疗急性中耳炎 、风热咳嗽
等疾病;外治大泡性鼓膜炎 ,风疹瘙痒[ 1] 。其主要
成分有岩白菜素(bergenin)、槲皮素-3-鼠李糖苷
(querci trin)、槲皮素 、原儿茶酸 、没食子酸 、琥珀酸 、
反甲基丁烯二酸等[ 2] 。我们参照文献[ 3 ,4]对其主
要成分之一的岩白菜素建立高效液相色谱法 ,对不
同产地及不同采收季节的虎耳草进行考察 ,为虎耳
草的进一步开发研究提供依据 。
1 仪器与试药
美国惠普公司 HP1100 高效液相色谱仪 ,紫外
检测器 ,HP ChemStat ion系统软件。
岩白菜素对照品(新疆制药厂),经检查纯度为
98%以上 。甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其余为分析
纯。
样品:虎耳草采自湖北洪山(6月),浙江莫干山
(6月)和安徽广德 ,不同季节的虎耳草均采自安徽
省广德县 ,洗净 ,阴干 。经中国中医研究院中药研究
所谢宗万研究员鉴定为虎耳草科植物虎耳草 Sax-
if raga Stoloni fera Meerb.的全草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱 Waters Symmetry C18(5
μm 4.6 mm×150 mm);流动相甲醇-醋酸-水(12∶
0.5∶88);流速 0.8 mL·min-1;检测波长 275 nm;柱
温 30 ℃。理论板数按岩白菜素计应不低于 3000。
2.2 标准曲线的绘制 精密称定干燥至恒重的
岩白菜素对照品 4.970 mg ,加甲醇溶解 ,定容于 25
mL 容量瓶中 。浓度为 0.1988 mg·mL-1 。分别吸
取上述对照品溶液 0.5 ,1 , 2 , 3 , 5 μL , 注入高效液
[ 收稿日期] 2002-03-14
[通讯作者 ] 电话:(010)64014411-2503 传真:(010)
64013896 E-mail:dingjiaxin@yahoo.com
相色谱仪 ,以峰面积积分值 Y 为纵坐标 ,进样量 X
为横 坐标 , 做 标 准曲 线 , 得 回归 方 程 Y =
1700.9125X +9.1348 ,相关系数 r =0.9999。进样
量在 0.0994-0.994μg 之间呈线性关系。
2.3 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液 ,按
上述色谱条件进行分析 ,每次进样 5μL ,连续进样 5
次 ,其峰面积值分别为 1016.8 , 1023.2 , 1032.0 ,
1021.1 ,1024.6。RSD为 0.27%。
2.4 稳定性试验 精密吸取样品供试液 ,分别于
0 ,4 , 7 , 10 , 24 h 重复进样 ,测得样品中岩白菜素峰
面积积分平均值为 259.1 ,其 RSD为 0.85%,证明
在 24小时内岩白菜素稳定 。
2.5 样品的测定 取不同产地和不同采收季节
的虎耳草药粉(过 3号筛)约 1 g ,精密称定 ,置锥形
瓶中 ,精密加入 30%甲醇 25 mL ,称定重量 ,超声提
取 60 min ,放至室温 ,用 30%甲醇补足减失的重量 ,
摇匀 ,上清液高速离心(10 000转/分)10 min ,按拟
定的分析条件测定样品 ,进样量 5 μL ,按外标法以
峰面积积分值计算岩白菜素的含量 ,结果见表 1 、表
2。
表 1 不同产地虎耳草中岩白菜素的含量(n=3)
采集地 岩白菜素含量/ % RSD/%
安徽 0.39 1.1
湖北 0.58 2.2
浙江 0.41 1.8
表 2 安徽产虎耳草中岩白菜素的含量(n =2)
采收时间/月 岩白菜素含量/ % RSD/%
5 0.30 2.0
6 0.40 1.8
7 0.36 1.8
8 0.48 2.5
9 0.30 2.8
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第 27卷第 10期
2002年 10月 中 国 中 药 杂 志China Journal of Chinese Materia Medica
Vol.27 , No.10
October., 2002
2.6 重现性试验 精密称定已知含量的安徽虎
耳草约1 g ,按供试品的制备的步骤处理并测定。该
批样品中岩白菜素的含量为0 .3 7 % , RSD为
1.2%。
2.7 回收率试验 精密称定已知含量的虎耳草
约0.50 g ,加入适量的岩白菜素对照品 ,按供试品的
制备的步骤提取 。结果见表 3。
表 3 岩白菜素加样回收率
称样量
/ g
样品中岩白
菜素量/mg
测出岩白菜
素量/mg
回收率
/ %
x
/ %
RSD
/ %
0.5176 1.922 2.148 100.3
0.5122 1.902 2.135 99.7
0.5056 1.878 1.878 90.6 96.3 4.1
0.5151 1.913 2.035 95.0
0.5005 1.859 2.054 95.9
注:岩白菜素添加量均为 2.142 mg
3 讨论
3.1 试验了甲醇-醋酸-水为流动相的不同配比 ,考
察了虎耳草中各成分的分离情况 ,结果表明 ,采用甲
醇-醋酸-水(12∶0.5∶88)的比例时 ,分离情况良好。
3.2 进行了不同溶剂的提取对比的研究 ,选用水 、
30%乙醇 、60%乙醇 、95%乙醇 、30%甲醇 、60%甲
醇 、甲醇为提取溶剂 ,实验结果表明 ,以 30%甲醇为
溶剂提取的岩白菜素的含量最高 。
3.3 产地不同虎耳草中岩白菜素含量不同 ,由表1
可见 ,湖北洪山所产虎耳草含量最高 。由表 2可见 ,
采收季节不同虎耳草中岩白菜素含量也不同 ,以 8
月份采收的虎耳草含量较高。经 3次测定 , 7月份
含量都低 ,原因待查。
3.4 本文建立的测定方法简便 、快速 、干扰少 ,结
果准确 ,适用于虎耳草中岩白菜素的分析测定。
[参考文献]
[ 1] 中国药典.一部.1977.339.
[ 2] 罗厚蔚 ,吴葆金 ,陈节庵 , 等.虎耳草有效成分的研究.中国药
科大学学报 , 1988 , 19(1):1.
[ 3] 陈文斗.岩白菜素的偶合比色测定法.药物分析杂志 , 1982 , 2
(6):350.
[ 4] 陈文斗 ,聂明华.落新妇和岩菖蒲中岩白菜素的高效液相色谱
测定法.药学学报 , 1988 , 23(7):606.
[ 责任编辑 袁桂京]
从三七中分离微量成分三七皂苷 R2的方法
董阿玲1 , 郑俊华1 , 果德安1 , 段誉萍2 , 秦 晨2 , 范国强2
(1.北京大学药学院 天然药物及仿生药物国家重点实验室 ,北京 100083;
2.北京市中药科学研究所 ,北京 100011)
中药三七为五加科植物三七 Panax notogin-
seng(Burk)F.H .Chen的干燥根 ,是我国传统名贵中
药。具有滋补强壮 ,止血化瘀 ,消肿止痛等多种功
效[ 1] 。三七皂苷 R2 在三七中含量极微 ,运用纤维
素薄膜透析 ,正相硅胶柱与反相硅胶柱反复层析 ,乙
酰化后再用硅胶柱反复层析 ,HPLC 分离得到三七
皂苷 R2 ,报告得率为 0.004%[ 2] 。运用正相硅胶柱
与反相硅胶柱反复层析 , HPLC 分离得到三七皂苷
R2 ,得率仅为 0.0011%[ 3] 。笔者运用大孔吸附树脂
[ 收稿日期] 2001-02-20
[ 基金项目] 国家杰出青年基金资助项目(39925040)
[ 作者通讯] 果德安 电话:(010)62091516 传真:(010)
62092700 E-mail:gda@bjmu.edu.cn
S-038分离得到三七皂苷 R2 ,操作方法简便 ,成本
低 ,且得率比文献报道方法还略高(0.0045%)。
1 材料与试药
1.1 仪器 XT4A型数字显示双目显微熔点测定
仪 JOELα-500 型核磁共振仪 , TMS 内标 , MALDI
TOF-MS质谱仪 。
1.2 材料与试剂 三七药材购于云南文山 ,经果德
安教授鉴定 。大孔吸附树脂 S-038为南开大学高分
子化学大孔吸附树脂国家重点实验室史作青教授提
供 , 其他所有化学试剂为北京化工厂生产 ,分析纯 。
2 方法与结果
2.1 大孔树脂的预处理
大孔吸附树脂 S-038用 95%乙醇 30 ℃温浸 1
h ,加水洗至中性 ,即可装柱 。
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第 27卷第 10期
2002年 10月 中 国 中 药 杂 志China Journal of Chinese Materia Medica
Vol.27 , No.10
October., 2002