全 文 ：[中药指纹图谱]
HPLC法建立新疆雪莲指纹图谱研究
苗爱东1 , 　孙殿甲2 , 　彭　燕1 , 　王本富1 , 　胡　辉1 , 　朱国强3
(1.中国人民解放军第 474医院 ,新疆 乌鲁木齐 830011;2.新疆医科大学 ,新疆 乌鲁木齐 830054;3.新疆中
药厂 ,新疆 乌鲁木齐 830054)
收稿日期:2002-06-02
基金项目:国家科技部西部开发专项 ,(2000-K01-05-02)
作者简介:苗爱东(1969～ ),男 ,四川自贡人 ,博士 ,主要从事药物分析及质量标准研究。电话:0991-6632883。
关键词:新疆雪莲;HPLC-FPS;HPLC
摘要:目的:对 7种不同产地的新疆雪莲药材进行指纹谱比较研究。方法:以乌鲁木齐南山产新疆雪莲药材为分析对象 ,
选择适宜的色谱条件 ,建立了 7 个不同产地的新疆雪莲药材样品的指纹图谱。结果:方法学考察表明 , 本研究建立的分
析方法有比较好的重现性;不同产地的新疆雪莲药材共有峰相对保留时间基本一致 ,但其相对面积存在一定的差异。结
论:指纹谱分析方法可简便 、快速的鉴别和区分不同产地的新疆雪莲药材。
中图分类号:R917　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2003)09-0691-03
Analysis of Saussurea involucrata Kar.et Kir.from different sources by HPLC-
FPS
M IAO Ai-dong1 , 　SUN Dian-jia2 , 　PEN Yan1 , 　WANG Ben-fu1 , 　HU Hui1 , 　ZHOU Guo-qiang3
(1.The PLA 474 Hospi tal , Urumqi 830011 , China;2.Xinjiang Medical University , Urumqi 830054 , China;3.X ingj iang Company of TCM)
Key words:Saussurea involucrata Kar.et Kir.;HPLC-FPS;HPLC
Abstract:Objective:To study comparatively HPLC-FPS of seven kinds of snow lotus , Saussurea involucrata
Kar.et Kir.f rom different sources of Xinjian area.Methods:HPLC fingerprint analy tical method of Snow lo-
tus , f rom Urumqi w as developed , and the HPLC-FPS of seven samples were established.Results:The method-
ological evaluation showed that this method had a good repeatability , and the ratio of common peaks area of dif-
ferent samples were different.Conclusion:The method can be used to distinguish Snowlotus f rom dif ferent
sources convenient ly .
　　新疆雪莲(Saussurea involucrata kar.et kir.)是菊科凤
毛菊属多年生草本植物 ,属国家三类珍稀植物 。民间多用于
治疗风湿性关节炎 、月经不调 、宫寒腹痛等症 ,近年来雪莲作
为民族药和民间药在抗炎 、镇痛 、抗早孕 、抗衰老及抑制癌细
胞增生等方面备受关注。被收载于《新疆药品标准》(1992
年)。新疆雪莲含有多种化学成分 , 如黄酮类 、生物碱 、内酯 、
甾醇 、多糖及挥发油等 , 对其药理作用也有较多探讨。目前 ,
新疆雪莲药材被《卫生部药品标准》收载的制剂有雪莲注射
液和复方雪莲胶囊[ 1] 。本文主要介绍新疆雪莲药材指纹谱
方法的建立以及应用该方法快速 、简便地鉴别不同产地新疆
雪莲药材。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪 L-7000 型 , 包括 L-7100 双泵 , L-7400
紫外可见检测器 , L-7300 柱温箱(日本日立公司):HW-2000
色谱工作站(南京千谱软件公司);TDL-4 型离心机(上海安
亭科学仪器厂);超声波清洗器(济宁超声电子仪器厂)。 乙
腈 、甲醇为色谱纯 , 其余试剂为分析纯。雪莲药材样品 1 ～
样品 7:分别采自新疆乌鲁木齐南山 、新源 、和静 、阜康 、奇
台 、焉耆 、巩留等 7 个不同主要产地 , 经鉴定均为正品 , 低温
干燥后 , 粉碎成粗粉。对照品:紫丁香苷(美国阿尔法实验室
提供)。
2　实验方法
2.1　试验条件
色谱柱:DiamonsilTM C18(250mm ×4.6mm , 5μm)(北京
迪马公司),检测波长 270nm , 柱温 30℃, 甲醇-1%醋酸(梯
度洗脱),流速 1mL·min-1 ,进样量 20μL 。
2.2　供试溶液的制备
精密称取雪莲药材粗粉 4g , 置具塞锥形瓶中 , 加 85%乙
醇 100mL , 放置 24h , 滤过 ,精密吸取续滤液 10mL , 水浴浓缩
至干 ,加水 4mL , 超声 60min 使其溶解 , 离心(4000r·min-1)
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10min , 取上清液 0.45μm 微孔滤膜过滤 ,摇匀作为供试品。
2.3　对照品溶液制备
精密称取紫丁香苷适量 , 以甲醇定容为对照品溶液
25μg。
2.4　稳定性及精密度考察[ 2 , 3 , 4]
取乌鲁木齐南山产雪莲药材 , 制备成供试品溶液 , 分别
于 0 , 2 , 4 , 8 , 12h 进样 20μL 测定。以紫丁香苷为对照 , 计算
各共有峰的相对保留时间和峰面积比值。结果表明本方法
稳定。
取上述同一供试品 , 连续测定 6 次 , 对测定结果中各色
谱峰的相对保留时间和峰面积百分比值进行了比较 , 占总峰
面积 5%以上峰的 RSD <3%。
2.5　重复性试验
取上述同一供试品 , 同法制备 6 个供试品溶液 , 依法进
行测定。对测定结果中各色谱峰的相对保留时间和峰面积
比值进行了比较 ,结果占总峰面积 5%以上峰的 RSD<3%。
3　雪莲药材的 HPLC 指纹图谱及技术参数
3.1　指纹图谱及共有指纹峰的标定
对 7 个不同产地的雪莲药材制成供试液进行测定。 雪
莲药材所有成分的色谱峰在 60min之内出完 , 比较不同产地
样品的色谱图 , 其中有 13 个色谱峰是共有的 , 确定为共有指
纹峰(见图 1),不同产地雪莲药材指纹谱比较见图 2。
图 1　雪莲药材指纹谱(产地:乌鲁木齐)
3.2　共有指纹峰面积及保留时间的比值确定
比较 7 个不同产地样品的色谱图 , 以紫丁香苷色谱峰作
为参照 , 计算各指纹峰的峰面积及保留时间的比值。见表
1 ,表 2。
图 2　不同产地雪莲药材指纹谱比较
1.新源　2.和静　3.阜康　4.奇台　5.焉耆　6.巩留
Tab.1　 Relative retention times of common peaks for seven samples
Batch 1 2 3 4 5 6 7 Average
peak 1 0.065 0.065 0.068 0.066 0.066 0.066 0.067 0.066
peak 2 0.093 0.092 0.093 0.092 0.093 0.093 0.093 0.093
peak 3 0.123 0.127 0.128 0.122 0.122 0.123 0.121 0.124
peak 4 0.153 0.152 0.152 0.152 0.154 0.153 0.152 0.153
peak 5 0.286 0.286 0.286 0.286 0.288 0.288 0.287 0.287
peak 6 0.368 0.366 0.367 0.366 0.369 0.369 0.368 0.368
peak 7 0.432 0.428 0.430 0.427 0.431 0.431 0.431 0.430
peak 8 0.570 0.567 0.568 0.565 0.569 0.568 0.569 0.568
peak 9(S) 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
peak 10 1.036 1.034 1.035 1.035 1.036 1.035 1.034 1.035
peak 11 1.359 1.359 1.359 1.357 1.368 1.361 1.362 1.361
peak 12 1.376 1.377 1.377 1.376 1.386 1.380 1.380 1.379
peak 13 1.466 1.464 1.465 1.464 1.470 1.467 1.468 1.466
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Tab.2　 Relative areas of common peaks for seven samples
Batch 1 2 3 4 5 6 7 Average
peak 1 0.602 2.114 0.398 0.789 3.115 0.597 0.356 1.139
peak2 1.742 4.096 1.338 1.412 5.767 1.903 0.609 2.410
peak 3 0.462 1.331 0.236 1.086 2.570 0.615 0.525 0.975
peak4 3.574 21.378 3.809 6.423 13.413 3.689 2.646 7.847
peak 5 1.600 1.667 0.526 1.120 3.761 1.000 0.660 1.476
peak 6 0.263 1.464 0.466 0.568 1.438 0.317 0.235 0.679
peak7 1.069 1.960 0.360 0.656 7.217 1.121 0.428 1.830
peak8 1.684 2.129 0.371 0.884 7.450 0.700 0.906 2.018
peak 9(S) 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
peak 10 3.616 11.530 2.934 5.356 26.463 6.023 4.660 8.655
peak 11 0.761 1.383 0.552 0.893 2.662 1.305 0.926 1.212
peak 12 7.808 20.631 9.304 10.852 35.877 8.388 8.189 14.436
peak 13 1.077 1.907 0.749 1.530 2.778 2.232 1.315 1.655
　　技术参数:
根据研究结果 , 制定了雪莲药材标准指纹图谱技术参
数 ,其共有峰的峰号(相对保留时间):1(0.066), 2(0.093),
3(0.124), 4(0.153), 5(0.287), 6(0.368), 7(0.430),
8(0.568), 9(1.000), 10(1.035), 11(1.361), 12(1.379), 13
(1.466)。
4　讨论
4.1　雪莲药材中含有多种化学成分 , 如黄酮类 、生物碱 、内
酯 、甾醇 、多糖等多种活性物质 , 成分较为复杂 ,很难找到较
为理想的等度洗脱条件。 研究中也分别采用了乙腈-磷酸 、
乙腈-水 、乙腈-醋酸 、甲醇-磷酸 、甲醇-水 、甲醇-醋酸等的不
同浓度 、比例的等度和梯度洗脱条件进行了试验 , 并记录了
220nm , 254nm , 270nm , 300nm , 344nm , 360nm 等不同波长条
件下的色谱图。结果发现采用甲醇-1%醋酸进行梯度洗
脱 ,流速为 1mL·min-1 ,测定波长 270nm 的条件为佳。在此
条件下 ,雪莲药材中的各组分可以得到较好的分离。
4.2　供试品的制备方法主要是依据雪莲注射液提取工艺中
确定的方法进行的 , 目的是为了最大限度的保留有效成分 ,
同时也确保分析的顺利进行。
4.3　本研究采用 HPLC 法测定了不同产地的雪莲药材指纹
图谱 ,试验结果显示:由于受产地 、气候和生态环境等的影
响 ,不同产地的雪莲药材所含主要成分差异较大 ,虽然 7 个
不同产地的雪莲药材指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本
一致。但各成分含量的相对比值有所不同 , 可据此评价和控
制雪莲药材及其制剂的质量。
参考文献:
[ 1] 　卫生部药品标准[ S] .3334-98.
[ 2] 　任德权.中药指纹图谱质控技术的意义与作用[ J] .中药材 ,
2001 , 24(4):235.
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(暂行)[ S] .中成药 , 2000 , 22(10):391.
[ 4] 　刘丽娟 ,张清波 ,张树杰.刺五加药材指纹谱(HPLC-FPS)分析
方法研究及不同产地药材谱比较[ J] .中成药 , 2001 , 23(11):
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