全 文 ：·54· Chinese Journal of Information on TCM Sep.2010 Vol.17 No.9
新疆紫草羟基萘醌有效部位制备工艺研究
于黎鑫 1,刘军锋 2,刘 珂 1,2
(1.烟台大学药学院,山东 烟台 264005；2.山东靶点药物研究有限公司,山东 烟台 264006)
摘要：目的 以β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量为指标,研究新疆紫草抗炎有效部位的制备工艺。方法 采
用高效液相色谱法测定羟基萘醌中β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,通过正交设计法优选提取工艺,再经硅胶柱
色谱得到羟基萘醌有效部位。结果 最佳提取工艺为 55 ℃,15 倍量石油醚浸提 2 h,浸提 2 次,得到的浸膏经 10 倍
量硅胶柱色谱得到羟基萘醌有效部位。结论 此工艺路线成本低,重复性较好,可用于工业化生产,获得较高纯度的羟
基萘醌。
关键词：新疆紫草；羟基萘醌；β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2010.09.024
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2010)09-0054-03
Study on the Preparation Process of Hydroxy-naphthoquinones in Arnebia euchroma (Royle)
Johnst. YU Li-xin1, LIU Jun-feng2, LIU Ke1,2 (1.Pharmacy School of Yantai University, Yantai 264005, China；
2.Shandong Target Drug Research Co.Ltd., Yantai 264006, China)
Abstract：Objective To validate the separation technology of effective parts in Arnebia euchroma (Royle)
Johnst., β, β’-dimethylacryalkannin was taken as marker compound in validation process. Method The
content of β, β’-dimethylacryalkannin was determine by HPLC. The optimal extraction condition was
investigated by orthogonal design, and after silica gel column chromatography, the hydroxy-
naphthoquinones effective parts was gained. Rusult The optimal extracting condition was 55 ℃, extracted
2 times with 15 times of petroleum ether for 2 h, and then with 10 times amount of silica gel column
chromatography, the effective parts was gained. Conclusion The separation process is relative practical for
industrialization to get hydroxy-naphthoquinones in low cost, and the reproducibility is well.
Key words：Arnebia euchroma (Royle) Johnst.；hydroxy-naphthoquinones；β, β’- dimethylacryalkannin；
HPLC

总酸是国家标准中控制食用醋品质的主要理化指标,国家食
品标准中要求食醋中总酸含量(以乙酸计)不得低于3.5 g/100 mL
(GB/T5009.39-2003),而《中药炮制学词典》中“辅料与工具”
项下亦规定,食醋中总酸含量不得低于 3.5%[4]。本试验所测的
市售 12 个样品醋中总酸(以乙酸计)含量均符合要求。
乳酸是食醋中主要的不挥发性酸,也是判断醋的酿制工艺
的重要指标。研究表明,固态发酵米醋中均含有乳酸,少数液态
发酵醋及配制食醋中不含乳酸[5],故醋中乳酸的含量高低可以
从一定程度上说明醋的品质优劣。本试验在 HPLC 法测定乳酸
含量[6]的方法基础上进行了改进,在样品的前处理上,本实验
对洗脱液 NaOH 溶液的浓度、体积及洗脱速度进行了详细考察,
结果表明,以 50 mL 1 mol/L 的 NaOH 溶液冲洗为宜,洗脱液快
滴(6 mL/min)和慢滴(1 mL/min)对醋中乳酸含量没有显著影响,
为节约时间,选用 6 mL/min 的滴速。另外,我们对乳酸测定实
验中的对照品溶液进行了紫外全波长扫描,得乳酸的最大吸收
波长为 206 nm,以此作为检测波长。
试验结果表明,不同企业生产的食醋中总酸和乳酸含量差
异较大,总酸含量最高为 71.30 mg/mL,最低为 41.55 mg/mL,
相差 42%；乳酸含量最高为 37.60 mg/mL,最低为 6.92 mg/mL,
相差82%。另据文献报道,目前我国食醋生产企业约5 000多家,
生产规模及销售量最大的为江苏镇江恒顺醋业股份有限公司,
其次为拥有 100 多家醋厂的山西陈醋,再有北京龙门、山东玉
兔、上海宝鼎及福建永春等[3]。结合供货源的稳定性及市售价
等其他因素,认为 2 号供试醋样“镇江恒顺香醋”综合评分较
高,可用作中药炮制辅料。
参考文献：
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(收稿日期：2010-02-03,编辑：陈静)
2010 年 9 月第 17 卷第 9期 中国中医药信息杂志 ·55·
新疆紫草为紫草科植物新疆紫草(软紫草)[Arnebia
euchroma (Royle) Johnst.]的干燥根[1],收载于 2005 年版《中
华人民共和国药典》(一部)。相比药典收录的其他种属,新
疆紫草质量最佳,羟基萘醌含量最高[2]。新疆紫草具有抗炎、
抗菌、抗病毒、抗肿瘤及抗生育等作用[3]。研究表明,新疆
紫草中的羟基萘醌衍生物主要包括乙酰阿卡宁、去氧阿卡宁、
β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁等。研究表明,新疆紫草羟基萘醌
具有抑制肿瘤坏死因子-α的作用,对大鼠佐剂关节炎具有明
显的治疗作用[4-5]。本试验采用正交设计法,以β,β’-二甲基丙
烯酰阿卡宁的得率为指标,优选出新疆紫草羟基萘醌有效部位
的制备工艺。
1 仪器与试药
AL204 型万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有
限公司),Agilent1200 型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有
限公司),DK-S22 型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限
公 司 ),N-1001 型 旋 转 蒸 发 仪 ( 上 海 爱 朗 仪 器 有 限 公
司),KQ-250B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司),GM32-1 型超临界 CO2萃取实验装置(大连光明化工研究设
计院),TU-1810 型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有
限责任公司)。
新疆紫草中药饮片购于山东烟台医药商城,烟台大学药学
院赵燕燕博士鉴定为 Arnebia euchroma (Royle) Johnst.,按
《中华人民共和国药典》方法测得β,β’-二甲基丙烯酰阿卡
宁含量为 0.69%。β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁对照品由中国药
品生物制品检定所提供,批号 111689-200501。
2 方法与结果
2.1 提取溶剂的选择
有文献报道,通过对石油醚(60～90℃)、乙醇、丙酮、乙
酸乙酯、氯仿等溶剂对羟基萘醌提取能力的比较,石油醚提取
效果优于其他溶剂[6],因此选用石油醚作为提取溶剂。
2.2 β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的测定
采用高效液相色谱法。色谱柱：DiamonsilTM C18 (250 mm×
4.6 mm,5 µm),流速：1.0 mL/min,检测波长：275 nm,柱温：30 ℃,
流动相为乙腈-水-甲酸(700︰300︰0.5)。
2.3 提取方法的考察
精密称取 2 份粉碎过筛的药材,一份置于超临界 CO2萃取
装置萃取 2 h；另一份浸于石油醚中,浸提 2 h。将所得样品蒸
干,称重,取适量,用流动相溶解定容后注入液相色谱仪,按
“2.2”项下方法进行测定并计算。β,β’-二甲基丙烯酰阿卡
宁含量(mg/g)＝β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的量/药材质量。
结果见表 1。
表 1 提取方法考察结果
提取方法 浸膏收率(%) β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量(mg/g)
超临界萃取 3.26 3.37
溶剂提取法 3.41 4.89
相对于石油醚浸提技术,超临界 CO2萃取技术所得β,β’-

通讯作者：刘珂,E-mail：liuke@ytu.edu.cn
二甲基丙烯酰阿卡宁含量较低,因此,本试验选用常用的溶剂
浸提方式。
2.4 提取工艺的选择
影响浸提的主要因素有浸提温度、时间、次数及石油醚的
用量等。据报道,紫草中的成分在温度高于 60 ℃时不稳定[7],
因此,本试验对温度条件进行了优选。采用四因素三水平 L9(34)
正交设计(见表 2),并以β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量为
指标,进行工艺筛选。
表 2 工艺因素水平表
水平
温度(℃)
A
溶剂用量(倍)
B
时间(h)
C
浸提次数
D
1 25 10 1 1
2 40 15 2 2
3 55 20 3 3
精密称取粉碎过筛的紫草药材 50 g,置于具塞锥形瓶中,
精密量取一定体积的石油醚浸提,放冷,滤过,测定滤液体积。
精密量取滤液 2 mL,蒸干,残渣用流动相溶解并转移至 10 mL
量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得。
分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 10 µL,注入液
相色谱仪,按“2.2”项下方法进行测定。结果见表 3,方差分
析见表 4。
表 3 L9(34)正交试验结果
序号 A B C D
β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁含量(mg/g)
1 25 10 1 1 3.58
2 25 15 2 2 4.32
3 25 20 3 3 4.36
4 40 10 2 3 4.95
5 40 15 3 1 4.60
6 40 20 1 2 4.86
7 55 10 3 2 4.92
8 55 15 1 3 5.05
9 55 20 2 1 4.67
K1 4.087 4.483 4.497 4.283
K2 4.803 4.657 4.647 4.700
K3 4.880 4.630 4.627 4.787
S 0.793 0.174 0.150 0.504
表 4 方差分析表
方差分析 偏差平方和 ν F F 临界值 P
A 1.149 2 28.725 19.000
B 0.052 2 1.300 19.000
C 0.040 2 1.000 19.000
＜0.05
D 0.434 2 10.850 19.000
由羟基萘醌得率极差及方差分析表明,各因素影响顺序为
A＞D＞B＞C,其中 A因素具有统计学意义。以β,β’-二甲基丙
烯酰阿卡宁的含量为指标,直观分析结果表明,最佳工艺条件
为 A3B2C2D3,提取 2 次与 3 次结果相差不大,考虑到工业化生产
的成本问题,因此,拟定最佳工艺条件为 A3B2C2D2,即 55 ℃,15
倍量溶剂,浸提 2 h,浸提 2次。
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2.5 验证试验
为了考察本品制备工艺的稳定性及成熟程度,进行了放大
试验。紫草药材的投料量为 20 kg。按照优化的工艺条件,中
试放大的 3 批样品及结果见表 5。可见,紫草提取工艺工业化
生产适应性较好,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的得率较为稳
定。
表 5 提取工艺放大试验结果
批号 投料量(kg) 浸膏收率(%) β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量(mg/g)
1 20.2 3.34 5.21
2 20.6 3.54 5.48
3 20.3 3.21 5.39
2.6 硅胶柱色谱纯化条件的选择
石油醚浸提的紫草浸膏中含有大量的蜡质成分和其他杂
质,影响紫草羟基萘醌的质量,需经硅胶柱色谱除去。
2.6.1 洗脱剂的选择 取浸提得到的紫草浸膏和β,β’-二
甲基丙烯酰阿卡宁对照品点于同一硅胶 GF254 薄层板上,用不
同溶剂体系展开,结果石油醚-乙酸乙酯(8︰1)体系薄层色谱
结果最好,基本能达到各点之间的分离。
2.6.2 硅胶用量的选择 称取适量紫草浸膏,加入 1 倍量硅
胶(80～120 目)拌样。另按紫草浸膏与硅胶(200～300 目)1︰
20、1︰10、1︰5 不同比例进行柱色谱,以石油醚作为起始洗
脱溶剂,石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱,经薄层色谱检测,
合并富含羟基萘醌部分,HPLC 法测定羟基萘醌中β,β’-二
甲基丙烯酰阿卡宁含量。β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含
量(%)＝柱色谱后β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的量/羟基萘
醌质量×100%。β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁转移率(%)＝柱
色谱后β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的量/柱色谱前β,β’-二
甲基丙烯酰阿卡宁的量×100%。结果见表 6。
表 6 硅胶用量试验结果
试验号
硅胶
配比
上样量
(g)
上样中含β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁的量(g)
羟基萘醌
得量(g)
羟基萘醌中β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁含量(%)
β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁转移率(%)
1 1︰20 6.608 8 0.955 3 3.822 4 22.70 90.83
2 1︰10 5.081 3 0.734 5 3.247 6 20.82 92.06
3 1︰ 5 5.178 6 0.748 6 3.958 7 17.90 94.66
表 6可见,试验3的羟基萘醌中β,β’-二甲基丙烯酰阿卡
宁转移率较高,但含量较低,究其原因,是羟基萘醌与蜡质未能
达到完全分离。而试验 1 和试验 2 的羟基萘醌中β,β’-二甲
基丙烯酰阿卡宁转移率和含量都相差不大,但随着硅胶用量的
增加,死吸附量也会增加,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁转移率
会有所下降,且增加生产成本,因此,选择 10 倍量硅胶柱色谱
条件为生产工艺条件。
2.7 柱色谱技术验证试验
分别称取 3 份 200～300 目硅胶各 2.5 kg,装入已加入石
油醚的 3 个色谱柱,搅拌均匀。分别称取 250 g 紫草浸膏,与
80～120 目硅胶 1︰1混匀,干法上样。以石油醚作为起始洗脱
溶剂,石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱,合并富含羟基萘醌部
分。紫外分光光度法测定羟基萘醌含量,HPLC 法测定羟基萘醌
中β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量。结果见表 7。
表 7 硅胶柱色谱放大试验结果
试验号
上样量
(g)
上样中含β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁的量(g)
羟基萘醌
得量(g)
羟基萘醌中β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁含量(%)
β,β’-二甲基丙烯酰
阿卡宁转移率(%)
羟基萘醌
含量(%)
1 250.3 37.3 160.9 20.20 87.13 89.43
2 251.2 37.4 160.6 20.74 89.04 88.72
3 250.4 37.3 158.1 19.94 84.45 90.55
中试放大试验结果表明,该制备工艺条件适宜于工业化生
产,且工艺条件可控、稳定、可操作,成品的收率高、质量稳定
可控。
3 讨论
目前,常用的紫草提取方式主要有超临界 CO2 萃取和溶剂
浸提两种方式。对于超临界 CO2萃取技术,因其提取率较低,设
备价格较昂贵,国内未普及,并且紫草着色强,不利于清洗,故
选用常用的溶剂浸提方式。
以β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量为指标,对新疆紫草
中羟基萘醌制备工艺进行优选,并进行中试放大试验,试验结
果重复性较好,工艺条件稳定可控,可用于工业化生产。
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(收稿日期：2010-02-26,编辑：陈静)