全 文 ：基金项目：天然药物及仿生药物国家重点实验室（北京大学）开放研究课题（２０１３０２１５）
作者简介：古力扎努·阿合买提（１９８９－），女（维吾尔族），在读硕士，研究方向：中药民族药基础研究。
通信作者：买尔旦·马合木提，男（维吾尔族），主任药师，教授，硕士生导师，研究方向：中药民族药开发；Ｅ－ｍａｉｌ：ｍａｉｅｒｄａｎ６０＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
ＨＰＬＣ法测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草３种
萘醌类色素的含量
古力扎努·阿合买提１，买尔旦·马合木提２
（新疆医科大学１药学院；２附属肿瘤医院，乌鲁木齐　８３００１１）
摘要：目的　建立测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草３种萘醌类成分含量的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ法）。方
法　采用ＣＯＳＭＯＩＬ　Ｃ１８－ＡＲ－Ⅱ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱，流动相Ａ乙腈（Ａ）－０．１５％甲酸（Ｂ）（ｖ／ｖ）溶液，
进行洗脱，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２７５ｎｍ，柱温２５℃，检测时间３５ｍｉｎ。结果　血浆中左旋紫草素在０．４０～
６．４０μｇ、乙酰紫草素在２５．０～６００．０μｇ、β，β′－二甲基丙烯酰紫草素在２５．０～６００．０μｇ范围内均与峰面积呈线性关
系，左旋紫草素回收率为９７．７８％～１００．１％、乙酰紫草素为１００．１％～１００．２％、β－β′－二甲基丙烯酰紫草素为９７．７８％
～１００．１％，日间、日内ＲＳＤ均＜１．５％。粪便中各组分在１０～４００μｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率
分别为（７８．２±２．５）％、（８２．０±２．９）％和（７９．５±３．５）％。０～１２、１２～２４、２４～４８ｈ粪便中左旋紫草素绝对回收量分
别为２３．６１、３８．２８、４．１３ｍｇ；乙酰紫草素分别为７．２０、７０．７８、１１．５３ｍｇ；β－β′二甲基丙烯酰紫草素分别为４６．３２、６０．１５、
１６．８８ｍｇ。结论　ＨＰＬＣ法准确可靠，重复性好，适用于测定血浆及粪便中新疆紫草萘醌类成分含量。
关键词：新疆紫草；左旋紫草素；乙酰紫草素；β，β′－二甲基丙烯酰紫草素；ＨＰＬＣ；大鼠血浆；大鼠粪便
中图分类号：Ｒ９１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１６）０８－１０１２－０５
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－５５５１．２０１６．０８．０１９
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｎａｐｈｔｈａｑｕｉｎｏｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍＡｒｎｅｂｉａ
ｅｕｃｈｒｏｍａ（Ｒｏｙｌｅ）Ｊｏｈｎｓｔ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　ｆａｅｃｅｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｇｕｌｉｚｈａｎｕ　Ａｈｅｍａｉｔｉ　１，Ｍａｉｅｒｄａｎ　Ｍａｈｅｍｕｔｉ　２
（１　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｔｕｍｏｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ
Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｎａｐｈｔｈａｑｕｉｎｏｎｅ　ｆｒｏｍ
Ａｒｎｅｂｉａ　ｅｕｃｈｒｏｍａ（Ｒｏｙｌｅ）Ｊｏｈｎｓｔ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　ｆａｅｃｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＣＯＳＭＯＩＬ　Ｃ１８－ＡＲ－Ⅱ （４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（Ａ）－０．１５％ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ（Ｂ）（ｖ／ｖ）ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｂｙ
ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ　ｆｏｒ　３５ｍｉｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ
ａｔ　２５℃，ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　２７４ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｏｆ　ｓｈｉｋｏｎｉｎ，ａｃｅｔｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ
ａｎｄβ－β，－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．４０ｔｏ　６．４０μｇ，２５．０ｔｏ　６００．０μｇ　ａｎｄ　２５．０ｔｏ　６００．０μｇ，ｒｅ－
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｌｙ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　９７．７８ｔｏ　１００．１％，１００．１
ｔｏ１００．２％ａｎｄ　９７．７８ｔｏ１００．１％．Ｔｈｅ　ＲＳＤ　ｏｆ　ｉｎｔｒａ－ｄａｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ－ｄａｙ　ｗｅｒｅ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　１．５％．Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ
ｉｎ　ｆａｅｃｅｓ　ｏｆ　ｓｈｉｋｏｎｉｎ，ａｃｅｔｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ　ａｎｄβ－β，－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　１０－４００μｇ／ｍＬ　ｗｉｔｈ
ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ（７８．２±２．５）％，（８２．０±２．９）％ ａｎｄ（７９．５±３．５）％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｂｓｏｌｕｔｅ
ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ　ｉｎ　ｆｅｃｅｓ　ａｓ：ｓｈｉｋｏｎｉｎ　０－１２ｈ：２３．６１ｍｇ，１２－２４ｈ：３８．２８ｍｇ，２４－４８
ｈ：４．１３ｍｇ；ａｃｅｔｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ　０－１２ｈ：７．２０ｍｇ，１２－２４ｈ：７０．７８ｍｇ，２４－４８ｈ：１１．５３ｍｇ　ａｎｄβ－β，－ｄｉｍｅｔｈ－
　第３９卷　第８期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３９　Ｎｏ．８
　２０１６年８月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｕｇ．２０１６
ｙｌａｃｒｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ　０－１２ｈ：４６．３２ｍｇ，１２－２４ｈ：６０．１５ｍｇ，２４－４８ｈ：１６．８８ｍｇ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ
ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｐｈｔｈａｑｕｉｎｏｎｅ　ｆｒｏｍＡｒｎｅｂｉａ
ｅｕｃｈｒｏｍａ（Ｒｏｙｌｅ）Ｊｏｈｎｓｔ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　ｆａｅｃｅｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｒｎｅｂｉａ　ｅｕｃｈｒｏｍａ （Ｒｏｙｌｅ）Ｊｏｈｎｓｔ；ｓｈｉｋｏｎｉｎ；ａｃｅｔｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ；β－β，－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ；
ＨＰＬＣ；ｒａｔ　ｐｌａｓｍａ；ｒａｔ　ｆａｅｃｅ
　 　 新 疆 紫 草 ［Ａｒｎｅｂｉａ　ｅｕｃｈｒｏｍａ （Ｒｏｙｌｅ）
Ｊｏｈｎｓｔ］习称软紫草，又名假紫草、新疆软紫草、新疆
假紫草，为紫草科多年生草本植物新疆紫草的根，
分布于我国新疆、甘肃及西藏西部地区，是药材紫
草的主要来源［１］。其具有凉血、活血、解毒透疹的功
效，被临床广泛应用 ［２］。新疆紫草中含有多种化学
成分，包括萘醌类、苯醌类、生物碱类、苯酚、酚酸类、
三萜酸、甾醇类、黄酮类以及多糖类等物质。目前研
究较多的是脂溶性很强的萘醌类化合物。萘醌类化
合物主要有去氧紫草素（ｄｅｏｘｙｓｈｉｋｏｎｉｎ）、β，β－甲基
丙烯酰紫草素（β，β－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ，ＤＳ）、β－
羟基异戊酰紫草素（β－ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｖａｌｅｒｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ）、
乙酰紫草素 （ａｃｅｔｙｌｓｈｉｋｏｎｉｎ，ＡＳ）、左旋 紫 草 素
（ｓｈｉｋｏｎｉｎ，ＳＫ）、去氢阿卡宁（ｄｅｈｙｄｒｏａｌｋａｎｉｎ）和β－
羟基异戊酰阿卡宁（β－ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｖａｌｅｒｙｌａｌｋａｎｉｎ）等
物质［３］，其具有抗菌抗病毒、抗炎、镇痛、免疫调节、
抗肿瘤、保肝、止血等作用［４－６］。本研究旨在建立
ＨＰＬＣ法测定大鼠生物样品血浆及粪便中新疆紫
草３种萘醌类成分含量，现报道如下。
１　仪器与试药
１．１　实验仪器　ＬＣ－２０１０Ｃ高效液相色谱仪（日本
岛津），ＣＬＡＳＳ－ＶＰ　Ｖ６．１４ＳＰ１数据工作站（日本岛
津），ＢＰ２１１Ｄ 型 十 万 分 之 一 电 子 天 平 （德 国
Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司），ＳＫ３３００Ｈ 型超声波清洗仪（上海
科导超声仪器有限公司），ＤＴ－５００Ａ型电子天平（常
熟市金羊砝码仪器有限公司），ＴＤＬ－４型台式离心
机（上海安亭科学仪器厂），ＥＤＴＡ　ｋ２抗凝真空采血
管（奥地利ＶＡＣＵＥＴＴＥ）。
１．２　试药　新疆紫草对照药材（中国食品药品检定
研究院，批号：１２１４３０－２０１１０３），左旋紫草素对照品（中
国药品生物制品检定所，批号：１１０７６９－２００４０５），乙酰
紫草素对照品（德瑞试剂公司，批号：２０１３０５０７－２），β，
β′－二甲基丙烯酰紫草素对照品（中国药品生物制品检
定所，批号：１１１６８９－２００５０３）。新疆紫草药材（购自新
疆参茸中药饮片公司批号：１５０７２４０２），经新疆医科大
学药学院天然药物化学／生药学教研室帕丽达·阿布
力孜教授鉴定为拟紫草属植物新疆紫草 （Ａｒｎｅｂｉａ
ｅｕｃｈｒｏｍａ（Ｒｏｙｌｅ）Ｊｏｈｎｓｔ）的根。乙腈为色谱纯（美国
Ｆｉｓｈｅｒ公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
１．３　实验动物　ＳＤ大鼠由新疆医科大学实验动物
中心提供，许可证号ＳＣＸＫ（新）２０１１－０００４，ＳＰＦ级，
体质量１８０～２２０ｇ。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液的制备　分别精密称取左旋紫草
素、乙酰紫草素、β，β′－二甲基丙烯酰紫草素对照品
适量，分别溶于甲醇中，制成１００ｍｇ／ｍＬ的对照品
储备液。再分别量取储备液适量，用甲醇稀释制成
含左旋紫草素、乙酰紫草素和β．β′－二甲基丙烯酰紫草
素分别为１．００、６０．０和６０．０ｍｇ／ｍＬ的混合对照品溶
液，备用。取本品适量，按递减法，分别用流动相稀释
制成含左旋紫草素０．０１、０．０２、０．０４、０．０８、０．１６、０．３２、
０．６４ｍｇ／ｍＬ，乙酰紫草素０．１２５、２．５０、５．００、１０．０、
２０．０、４０．０、６０．０ｍｇ／ｍＬ，β，β′－二甲基丙烯酰紫草素
０．１２５、２．５０、５．００、１０．０、２０．０、４０．０、６０．０ｍｇ／ｍＬ的混合
对照品系列溶液，－２０℃保存备用。
２．２　供试品溶液的制备　分别称取对照药材和供
试品药材粉末各５．０ｇ，各加入１２倍量（Ｖ／Ｖ）的
９５％乙醇溶液，置于１５０ｍＬ具塞锥形瓶中，混匀，
室温放置，密封遮光，冷浸８ｈ后，过滤并收集滤液，
旋转蒸发仪减压浓缩至约５．０ｍＬ，用５．０ｍＬ　９５％
乙醇润洗，合并浓缩液和润洗液，置于真空干燥箱
４０℃干燥１２ｈ，得干浸膏。分别称取干浸膏粉末
０．１ｇ，加入１．０ｍＬ甲醇，称重，超声使其完全溶解，
冷却至室温，补足重量，过（０．４５μｍ）微孔滤膜，作为
对照药材和样品的供试品溶液，备用。
２．３　色谱条件　ＣＯＳＭＯＩＬＣ１８－ＡＲ－Ⅱ色谱柱（４．６ｍｍ
×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈（Ａ）－０．１５％甲酸（Ｂ）
（ｖ／ｖ）溶液，洗脱流程０～１０ｍｉｎ，Ａ（％）＝６０％；１０
～１５ｍｉｎ，Ａ（％）＝６０％～７０％；１５～３０ｍｉｎ，Ａ（％）
＝７０％；３０～３５ｍｉｎ，Ａ（％）＝７０％～６０％，流速
１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温２５℃，检测波长２７５ｎｍ ，检测时
间３５ｍｉｎ，进样量２０μＬ。
２．４　血浆样品的处理　取ＳＤ大鼠血浆４８μＬ于离
心管中，加入对照品药材溶液２．０μＬ，涡旋混合
１ｍｉｎ，加入等体积的稀盐酸酸化，１０　０００ｒ／ｍｉｎ离
心２ｍｉｎ，取上清液５０μＬ于另一离心管中，加入乙
腈５０μＬ涡旋混合１ｍｉｎ，１０　０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上
清液，氮气吹干，加入５０μＬ乙腈复溶，１０　０００ｒ／ｍｉｎ
３１０１　第８期 古力扎努·阿合买提，等：ＨＰＬＣ法测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草３种萘醌类色素的含量
离心１０ｍｉｎ，取上清液备用。
２．４．１　专属性考察　精密量取１ｍｇ／ｍＬ的对照药
材储备液０．２ｍＬ于离心管中，挥干溶剂，加入空白
血浆５０μＬ混匀。另取空白血浆、对照药材和供试
品溶液各５０μＬ与不同的离心管中，按“２．４”项下方
法处理，按“２．３”项下色谱条件检测，记录色谱峰。
在该色谱条件下，左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′－二
甲基丙烯酰紫草素分离效果好，空白血浆中的内源
性物质不干扰测定，结果见图１～４。
　　　
１：左旋紫草素；２：乙酰紫草素；３：β，β－二甲基丙烯酰紫草素
图１　空白血浆ＨＰＬＣ图 图２　含药血浆ＨＰＬＣ图
　　　
１：左旋紫草素；２：乙酰紫草素；３：β，β－二甲基丙烯酰紫草素
图３　药材提取物ＨＰＬＣ图 图４　标准品ＨＰＬＣ图
２．４．２　标准曲线与最低检测限　取空白血浆７份，
每份５０μＬ，分别加入混合对照品系列溶液１０μＬ，
使浓度分别成为：左旋紫草素０．１０、０．２０、０．４０、０．８０、
１．６０、３．２０、６．４０ｍｇ／ｍＬ，乙酰紫草素和β，β′－二甲基
丙烯酰紫草素成为：１．２５、２５．０、５０．０、１００．０、２００．０、
４００．０、６００．０μｇ／ｍＬ，按“２．４”项下方法处理，按“２．３”
项下的色谱条件检测，记录色谱峰，以归一化法计算
处理。以各组分相应峰面积为纵坐标 （Ｙ），各组分加
入量为横坐标（Ｘ），进行线性回归，左旋紫草素在
０．４０～６．４０ｍｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈线性关系，线
性方程为：Ｙ＝１５４．７５Ｘ＋８９６．７５，Ｒ ＝０．９９７　０，最低
检测限为０．４０ｍｇ／ｍＬ；乙酰紫草素在２５．０～６００．０μｇ
范围内与峰面积呈线性关系，线性方程为：Ｙ＝３７８．０９
Ｘ＋９　６１１．３，Ｒ＝０．９９４　３；最低检测限为２５μｇ／ｍＬ；
β，β′－二甲基丙烯酰紫草素在２５．０～６００．０μｇ范围内
与峰面积呈线性关系，线性方程为：Ｙ＝１　００５．９　Ｘ－
１　８３２，Ｒ ＝０．９９２　１，最低检测限为２５μｇ／ｍＬ。
２．４．３　精密度试验　取空白血浆，按“２．４”项下方法
分别制备左旋紫草素、乙酰紫草素和β，β′－二甲基丙
烯酰紫草素低、中、高３个浓度（含左旋紫草素０．１０、
０．８０、６．４０μｇ／ｍＬ；含乙酰紫草素和β，β′－二甲基丙
烯酰紫草素均为１．２５、１００．００、６００．００μｇ／ｍＬ）溶液
各６份，每个浓度的样品分别每天测定１次，连续测
定３ｄ，以当日标准曲线计算测定样品的浓度，分别
计算日内精密度与日间精密度，见表１。
２．４．４　回收率试验　取“２．４．３”项下低、中、高３个
浓度的样品，以空白血浆加混合标准品溶液提取处
理样品与直接测定的对照品的峰面积比值计算提取
回收率，左旋紫草素低、中、高３个样品的回收率分
别为（９７．７８±２．５０）％、（９９．２０±２．５０）％和（１００．１０±
２．５１）％；乙酰紫草素为（１００．１０±２．１２）％、（１００．００±
３．１２）％和（１００．２±３．０１）％；β，β′－二甲基丙烯酰紫草
素为（９７．７８±２．５０）％、（９９．９０±２．１２）％和（１００．１０
±３．２０）％。
２．４．５　稳定性试验　取精“２．４．３”项下低、中、高３
个浓度的血浆样品，室温放置６ｈ，反复冻融３次，
－２０℃冰冻保存２０ｄ，按“２．３”项下方法处理后进
样，结果，本实验条件下，血浆样品中左旋紫草素、乙
酰紫草素和β，β′－二甲基丙烯酰紫草素反复冻融３
次仍保持稳定，见表２。
４１０１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷　
表１　精密度试验
加入量／（μｇ／ｍＬ）
日内精密度
检出浓度／（μｇ／ｍＬ） ＲＳＤ／％
日间精密度
检出浓度／（μｇ／ｍＬ） ＲＳＤ／％
左旋紫草素
　　０．１０　 ０．０９±０．０１　 １１．１０　 ０．１１±０．０１　 ９．０１
　　０．８０　 ０．８１±０．０７　 ８．４３　 ０．８１±０．０９　 １１．１０
　　６．４０　 ６．４１±０．３９　 ６．０８　 ６．３９±０．３７　 ５．７９
乙酰紫草素
　　１．２５　 １．２７±０．１１　 ８．６７　 １．２５±０．０３　 ２．４１
　　１００．００　 ９９．９０±２．１２　 ２．１２　 ９９．７０±３．１２　 ３．１３
　　６００．００　 ６０１．１０±２１．５０　 ３．５６　 ６０１．３０±２１．９０　 ３．６２
β，β′－二甲基丙烯酰紫草素
　　１．２５　 １．２４±０．１２　 ９．６６　 １．２６±０．０９　 ７．３８
　　１００．００　 １００．２０±２．１４　 ２．１３　 １００．００±３．１４　 ３．１５
　　６００．００　 ６０１．１０±１９．８０　 ３．３０　 ５９９．８±２０．０１　 ３．３４
表２　稳定性试验结果
加入量／（μｇ／ｍＬ）
室温
检出浓度／（μｇ／ｍＬ） ＲＳＤ／％
冻融３次
检出浓度／（μｇ／ｍＬ） ＲＳＤ／％
冷冻２０ｄ
检出浓度／（μｇ／ｍＬ） ＲＳＤ／％
左旋紫草素
　　０．１０　 ０．１１±０．０１　 １１．００　 ０．０９±０．０１　 １４．４５　 ０．１１±０．０１　 １２．１０
　　０．８０　 ０．８１±０．０７　 ８．４４　 ０．７９±０．０７　 ８．８１　 ０．８２±０．０９　 １０．９０
　　６．４０　 ６．４０±０．３９　 ６．０９　 ６．４１±０．４７　 ７．３６　 ６．４１±０．５１　 ７．９７
乙酰紫草素
　　１．２５　 １．２７±０．１１　 ８．６１　 １．２５±０．１３　 １０．４０　 １．２４±０．１２　 ９．９４
　　１００．００　 １００．１０±２．１２　 ２．１２　 ９９．９０±７．１５　 ７．１６　 ９８．７０±６．５６　 ６．６７
　　６００．００　 ６０１．２０±２１．７０　 ３．６１　 ６００．２０±２１．９０　 ３．６５　 ５９９．００±３３．２０　 ５．５４
β，β′－二甲基丙烯酰紫草素
　　１．２５　 １．２４±０．１０　 ８．０５　 １．２５±０．１２　 ９．６１　 １．２４±０．１０　 ８．１６
　　１００．００　 １００．２０±２．１４　 ２．１３　 １００．００±２．００　 ２．０１　 ９８．９０±５．０２　 ５．０７
　　６００．００　 ６０１．１０±１９．８０　 ３．３０　 ５９７．００±２０．００　 ３．３７　 ６０１．００±２３．００　 ３．８５
２．５　粪便样品的处理
２．５．１　粪便样品的处理　称取空白大鼠粪便３０ｍｇ
于离心管中，加入乙酸乙酯 ２００μＬ，涡旋混合
１ｍｉｎ，１０　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，分离上清液，残渣
再次加入上述溶剂２００μＬ重复上述操作，萃取３
次，合并上清液，用氮气吹干，用５０μＬ乙腈复溶，离
心１ｍｉｎ，取上清液。
２．５．２　标准曲线与回收率　称取空白大鼠粪便约
４０ｍｇ于７个离心管中，分别加入混合对照品系列
溶液适量，使各组分的浓度为１０～４００μｇ／ｍＬ，混
匀后，各加入１　２００μＬ水匀浆，吸取匀浆１００μＬ于
另一离心管中，加入２００μＬ乙酸乙酯，涡旋混合
５ｍｉｎ，１０　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，分离上清液，残渣
再次加入乙酸乙酯２００μＬ重复萃取３次，合并上清
液，用氮气吹干，５０μＬ乙腈复溶，取上清液，按“２．３”
项下色谱条件检测。结果，各组分在１０～４００μｇ／ｍＬ
浓度范围内与峰面积呈线性关系，左旋紫草素标准
曲线方程Ｙ＝９１．７６８　Ｘ＋７５９．６６６（Ｒ２＝０．９９７　６），乙
酰紫草素标准曲线方程Ｙ＝３８３．９９Ｘ－１　４８８．３（Ｒ２＝
０．９９３　７），β，β′－二甲基丙烯酰紫草素：Ｙ＝７２５．１３Ｘ－
１　５３６．４（Ｒ２＝０．９９３　２），最低检测浓度为６μｇ／ｍＬ。
经测定左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′－二甲基丙烯
酰紫草素的平均提取回收率分别为（７８．２±２．５）％、
（８２．０±２．９）％和（７９．５±３．５）％。
２．６　大鼠血浆及粪便中３种萘醌类成分的含量
测定
２．６．１　收集血浆及粪便　取正常ＳＤ大鼠２０只，随
机分为给药组和空白对照组，每组１０只，同一条件
饲养，两组动物均禁食不禁水１２ｈ。给药组按
０．０２４ｇ／ｋｇ体质量灌胃给予新疆紫草药提取物
５１０１　第８期 古力扎努·阿合买提，等：ＨＰＬＣ法测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草３种萘醌类色素的含量
０．５％ＣＭＣ－Ｎａ溶液混悬，对照组给予０．５％ ＣＭＣ－
Ｎａ溶液混悬，分别于给药前及给药后１５、３０ｍｉｎ及
１、２、３、４、６、８、１２、２４、３６、４８ｈ从眼底静脉取血，分
离血浆。同时收集给药前及给药后０～１２、１２～３６、
３６～４８、４８～７２ｈ的粪便，－２０℃冰箱冷冻保存。
２．６．２　血浆样品中药物含量的测定　血浆样品按
“２．４”项下方法处理，按照“２．３”项下色谱条件检测。
结果大鼠灌胃后０～４８ｈ内，血浆样品中均未检测
到紫草萘醌类成分的特有峰。
２．６．３　粪便样品中药物含量的测定　称取收集的
粪便样品４０ｍｇ，各加入１　２００μＬ水匀浆，吸取匀
浆１００μＬ于另一离心管中，加入２００μＬ乙酸乙酯，
涡旋混合５ｍｉｎ，１０　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，分离上
清液，残渣再次加入乙酸乙酯２００μＬ重复萃取３
次，合并上清液，用氮气吹干，５０μＬ乙腈复溶，取上
清液，按“２．３”项下色谱条件检测，由标准曲线计算各
组分的浓度。结果０～１２、１２～２４、２４～２８ｈ粪便中左
旋紫草素绝对回收量分别为２３．６１、３８．２８、４．１３ｍｇ；乙
酰紫草素分别为７．２０、７０．７８、１１．５３ｍｇ；β－β′二甲基
丙烯酰紫草素分别为４６．３２、６０．１５、１６．８８ｍｇ。
３　讨论
关于紫草萘醌类成分的体内药物浓度测定，主
要采用单一成分的测定方法。孙东晓等［７］采用衍生
化高效液相色谱法研究了静脉注射乙酰紫草素在大
鼠体内的药动学；李慧义等［８］给予大鼠腹腔注射左
旋紫草素，收集到的胆汁和血样分别经β－葡萄糖醛
酸酶水解后，采用 ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＤＡＤ方法初步考察
了紫草素的体内分布，初步检测到大鼠的胆汁和尿
样中分别有１０种代谢物。Ｚｈｏｕ等［９］采用氧化燃烧
炉技术处理小鼠灌胃给予３Ｈ－β，β－二甲基丙烯酰紫
草素后的组织、粪样（尿样直接加闪烁液测定），用
ＨＰＬＣ法分离后用液闪计数仪测定其放射性水平，
研究了小鼠体内的组织分布与排泄情况。结果显
示，３Ｈ－β，β－二甲基丙烯酰紫草素在胃肠道放射性浓
度最高，肝脏、肺、肾脏、心脏等组织内放射性浓度次
之，骨骼肌、脊髓、脑中分布较少。小鼠灌服３Ｈ－β，
β－二甲基丙烯酰紫草素后３６ｈ从粪中收集到给药
总放射剂量的７２．８７％，从尿液中回收到６．８１％，粪、
尿液中回收到（７９．６８±０．１８）％，血浆中未检测到原
形药物。说明３Ｈ－β，β－二甲基丙烯酰紫草素在小鼠
体内分布广，排泄较完全，主要以原形药物经粪便排
泄为主，经肾排泄为辅。在本研究建立的色谱条件
下，给予大鼠灌胃紫草提取物后０～４８ｈ，大鼠血浆
和尿液中未检测到紫草萘醌类成分，而粪便检测到
了紫草萘醌类的３个主要成分，该结果与田慧芳
等［１０］报告的结果基本一致。说明紫草萘醌类成分
在体内分布广，与内源性物质结合呈结合状态，以游
离状态分布在血液中的量相对较少，结合态的萘醌
类很快被代谢后经粪便排泄。
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紫草素的组织分布与排泄研究［Ｊ］．同位素，２００８，２１（４）：
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［收稿日期：２０１６－０４－０５］
（本文编辑　施洋）
６１０１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷