全 文 ：新疆紫草的乙醇提取物抗肝窦阻塞综合征作用的实验研究
赵停 ,吴形 , 陆道培 (北京大学人民医院 北京大学血液病研究所 ,北京 l仪” “
摘要 : 目的 研究新疆紫草的乙 醉提取物 ( A E )E 抗大鼠肝窦阻塞综合征 ( 50 5 )作用 。 方法 采用野百合碱 ( Mct) 灌胃方法制备
以:)S 大鼠模型 。 将 50 只 SD 大鼠随机分为 5 组 ,每组 or 只 : A 组 (正常时照组 ) 、 B 组 ( M clt 印 模型组 ) 、 C 组 ( Mc lt 协 AE E 给药
组 ) 、 D 组 (Mc lt o 模型组 )和 E组 ( M clt 价AE E给药组 ) 。 在实验第。 天 , B , c 组和 D , E 组分别予 M ct l印 mg · 掩一 ’和 Mct lo mg ·
吨一 ’灌胃 , 得到不同程度的 5 0 5 大鼠模型 。 其中 c , E Z 个 AE E 给药组从应用 M d 前 2 天开始灌胃 A E E l g’ 吨一 ’ · d 一 ’ ,持续给药
7 d 后处死动物 , 测定腹水量 、肝 /体比 、 白细胞计数 (W B )C 、红细胞压积 ( H叮 ) 、 血清总胆红素水平 、 血清 NT -F a 水平 ,并进行肝
脏病理检查 , 以 了解 A EE 杭 5 0 5 的效果 。 结果 C 组与 B 组相比 ,腹水生成明显减少 、 血胆红素降低 、 Hcr 增高 , 且 TN-F a 水平
有下降趋势 ; E 组与 D 组相比 , 肝脏病理损害明显减轻 , 与正常对照组相近 。 结论 口服新疆紫草的 乙醉提取物可以在一定程
度上预防大鼠的 以) 5 0
关键词 :新脸紫草 ;肝窦阻塞综合征 /肝静脉闭塞病 ;药物疗法 ;野百合碱
中图分类号 : 几汤5 文献标识码 : A 文章编号 : 1伪 1 一 2平辫 (以刃5 )21 一 1626 一 03
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肝窦阻塞综合征 ( s inu so idal obs utr ct io 。 syn d or n l e , t二 t8 , A E)E 具有明显抗 50 5 的作用 。
5 0 5 )曾称为肝静脉闭塞病 ( h e atP i c ve on 一 oc lus ive id s 一 1 实验材料
e
ase
,
v o )D 〔’ 〕 ,是以肝脏肿大 、水储留 、腹水和黄疽为 1 . 1 药物及试剂
主要表现的临床综合征 。 该病损伤最早发生在肝 新疆紫草 (新疆产软紫草 ,购自北京同仁堂药店
窦 ,多种炎症因子参与反应 ,是造血干细胞移植后早 经北京市药品检验所鉴定 , 经北京市志诚堂药业有
期的严重合并症之一 ,病死率高 , 目前还没有特异性 限公司炮制 ) ;野百合碱 (mo ocn or 以 in e , M ct ,美国 51 9 -
的预防及治疗药物 lz[ 。 新疆紫草 ( Aaer b记 。砚人功刀砚 ) anI 公司 ) ;大鼠 NT F 一。 EU` A试剂盒 (晶美生物工程
为多年生草本植物 ,抗炎作用明显 [ , 一 4 J ,对肝脏也有 有限公司 ) 。
一定的保护作用图 。 新疆紫草有效成分用于预防和 1 . 2 主要仪器
治疗 5 0 5 笔者尚未见报道 。 本实验采用 5 0 5 大鼠 RE 一 52 A旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂 ) ;
模型 ,通过检测临床和病理指标 , 证实了大鼠口服新 x 一 21 血细胞分析仪 (日本 s ys m e 、 公司 ) ; 7 170 A 自
疆紫草乙醇提取物 ( A欣 6衍 。huc ~ oID t 欲co ho h
C e x 一 动生化分析仪旧本 iH act hi 公司 ) 。
作者简介 : 赵婷 , 女 ,博士研究生 eT l : (0 10) 6 87 92 7 85 D 、 l : hz ao tZ仪岭@ 16 3 . ~
16 2 6
·
hC 认 户刁姐 r7n J , 2仪万 从洲硬, 刁加 r , 1勺之. 40 肠 . 21 中国药学杂志 2《x巧 年 1 月第 4o 卷第 21 期
1
.
3 实验动物
SD大鼠 ,雄性 , 23 0 一 2 5 0 9「北京维通利华实验
动物技术有 限公 司 , 合格证 号 sc 状 (京 ) 20 2 ·
(联 )3 J。
2 方 法
2
.
1 AE E 的制备
改进传统新疆紫草的乙醇提取方法困 , 将新疆
紫草粉碎 , 体积分数为 95 % 乙醇浸泡 , 用旋转蒸发
仪浓缩回收乙醇 。 再用酸碱沉淀法精制 ,干燥提取
物得紫红色粉末状结晶 , 总收率为 4 . 84 % 。 经中国
药品生物制品鉴定所检测主要含有 召, 召一二 甲基丙
烯酞紫草素和紫草素等蔡酿类有效成分 。
2
.
2 动物模型及分组
雄性 SD 大鼠 50 只 ,随机分为 A , B , C , D , E 共 5
组 ,每组 10 只 ,采用 D e场 e 等 7[] 提出用 M d 灌胃的
方法建立 50 5 大鼠模型 ,具体分组及给药情况见表
l
,其中 M ct 用磷酸盐缓冲液 ( BP )S 配成溶液灌胃 ;
AE E用 5% 聚山梨醋 80 溶液配制成混悬液灌胃。
表 1 实验设计
J知b 1 E x 祀`石
~ 园 d es ign
A B C D F
正常
对照组
Me t l印
模型组
服 1日工
AEE给药组
cM lt o
模型组
Me t l (》
A EE 给药组
给药方案( 19 )
腌 t( O d) 】1` J田 叱 ·枯一 1 1印嗯· 掩一 1 10 咪 · 墉一 ’ ,印叱 · 掩 一 1
人班: 聚山梨醋 聚山梨醋 1 g’ 掩一 1· d 一 l 聚山梨醋 1 g’ 吨 一 ’ · d一 1
〔一 Zd 一 + 叼 ) 刁 ) 一田 一劝
2
.
3 取材及测定
疗程结束后 , 经眶周静脉取血后用颈椎脱位法
处死大鼠。 ①测腹水量 ;②称体重 、肝重 ,计算肝 /体
表 2 AE E 对 50 5 大鼠临床指标的影响 . 无 土 :
T a b Z E任况 st of AE E on is gsn of so s in art s
. 无 士 s
比 ;③检测 白细胞计数 (W B C ) 、 红细胞压积 ( HCT ) ;
④测血清胆红素 : ⑤用 E L ISA 方法测血清 NT F 一。 水
平 ;⑥新鲜肝脏用 10 % 甲醛固定 , 常规石蜡包埋后
切片 , H E 染色和 M as s on tir hc
~
染色 。
.2 4 肝脏病理严 重度计分标准
根据 D e玫 v e 等提出的计分办法 ,对肝脏中央静
脉内皮损伤 、凝固性坏死 、 内皮下出血 、肝窦出血 、 中
央静脉内皮下纤维化 、 中央静脉外膜纤维化 、 中央静
脉炎症和小叶炎症等方面评估 , 综合各项得分将病
变程度分为无 、 轻度 、 中度和重度 4 级川 。
.2 5 统计方法
应用 s咫 51 0 . 0 软件进行统计分析 ,计量资料用
均数 士标准差 (无 土 、 )表示 。 两组间的 比较采用独
立样本 t 检验 , 多组数据间的比较采用方差分析 。
两组间肝脏病理的比较采用卡方检验 。
3 结 果
3
.
1 A EE 对 5 0 5 大鼠临床指标的影响
在本实验中 ,成功复制出不同程度的 5 0 5 动物
模型 。 M ct 160 模 型组 病变程度重 , 与正 常组 及
M ct l o 模型组相 比 , 腹水量 、 肝 /体比 、 CH T 、 总胆红
素水平都有 显著性差异 ( 尸 < 0 . 01 ) 。 M ct l o 模型
组 ,病变程度相对轻 ,但是肝 /体比 、总胆红素也都明
显高于正常组 ( 尸 < 0 . 05 ) 。 用 妞 E 的各组 ,各项指
标均好于其相应模型组 。 其中 C 组与 B 组相比 ,腹
水减少 、 HCT 增高 、 总胆红素降低 , 两组差异具有显
著性 ( P < 0 . 05 ) ; E 组 的肝 /体 比低于 D 组 ( P <
0
.
05 )
,总胆红素低于 D 组 ( P = 0 . 06 8 ) ,接近正常水
平 。 但各组之间白细胞计数无显著性差异 。 见表
2
。
组别 例数 腹水量八证
0
3
.
9 士 2
.
6 1)
1
.
5 士 2 43 )
1
.
1 土 1
.
8
0
肝 /体比 / %
2
.
7 8 土 0
.
1 3
5
.
3 士 D
.
s l )
5 0 士 1
.
2
3 7 士 0
.
6 , )
3
.
3士 0
.
3 3 )
研旧 C 厂 又 l沪 · L 一 l 总胆红素介价幻卜 L 一 l
8
.
4 士 2
.
0
8
.
4土 6
.
5
10
.
2士 6
.
7
11
.
1士 3
.
1
11
.
6 士 3
.
3
0涛 11士 0 019
0
.
25 士 0
.
07
1 )
0
.
32 士 0呼 )
0
.
4 1士 0
.
03
庄 43 士 0
.
05
0 47 士 0
.
13
30
户
6 士 12 81 )
18
.
4 土 12
2
.
7 士 3
.厂,
0
.
7 士 0鸿
注 : 与正常对照组比较 , l) 尸 < 。 . 0] ; 与正常对照组 比较 , 2) p < 0 . 05 ; 与相应模型组比较 , 3 ) p < 0 . 05
N o te :酬 p B or D vs 卿p ^ , 1 ) 尸 < o 刀 l ; , 川 p n 铭 印习 L甲 ^ , 2 )尸 < 0 . 仿 ;酬 p e v , g 旧 Lll〕 B & 即阳 P E v s 即 , 11〕 。 , 3 ) 尸 < 0 . 仿
.3 2 EA E 对 50 5 大鼠肝脏病变的影响 有个体差 异 , 但大部分为中重度改变 ( 6l/ 0) , 而
实验结果表明 , M ct 160 模型组肝脏损害严重 , M ct lo 一AE E 给药组中 7 例没有肝脏损害 , 2 例仅轻
主要表现为中央静脉内皮损伤 、凝固性坏死 、 内皮下 度改变 , D , E 两组间差异有显著性 ( 尸 < 0 . 05 ) , 见表
或肝窦出血 。 该组大鼠模型重复性好 ,全部为重度 3 , 4 和图 1。 根据 M as son 染色结果分析 , 各组均未
5 0 5
。
M ct l60
一
AE E 给药组中有 2 只大 鼠仅出现肝脏 出现明显纤维化表现 。
轻度的中央静脉内皮损伤和肝窦出血的病理改变 , 3 . 3 胧E 对 5 0 5 大鼠 NT F一 a 的影响
但另外 8 例仍为重度 。 M clt o 模型组肝脏病理损害 cM d 60 模型组 ( B 组 )与 M ct 160 一A E E 给药组 ( c
中国药学杂志 2 0 5 年 1 月第 40 卷第 21 期 。 切 月如加 J , 2仪万 从 刀竹刀灰, , vol . 4o No . ZI · 16 27 ·
表 3 A E对 0 5 5大鼠肝脏病变的影响
口肠自 3班 Cr es tf oA E E o ni lv r ei hs tl o哈回 e a h吧咫 f o义巧 i n砒
病理改变
中央静脉内皮损伤
B C D E
+ + + + + +/ + + + +/ + + +/
注 :一指无病变 ;+指轻度病变 ;十 十指中度病变 ;十 + +指重度病变
洲川 : e一 m巴双胡 司
~
t;十 n班 田旧 mi l d;十 十 n班笼盯灼 n侧司 e阳 t e;+ 十 十 n, 改切日 湘 v e r e
表 4 各组大鼠肝脏病变严 重程度 (例数 )
1知b 4 G耐 n g of liv e r h isolt iog e al c h a n g e s in al g or u声 ( n ul 川祀 r
of art )
分组 无 轻度 中度 重度
A 10 0 0 0
B 0 0 0 10
C 0 2 0 8
D l ) 2 2 4 2
E I ) 7 2 1 0
注 : 菩)经 卡方检验 , D , E 两组有显著差异 ( 尸 ( 众仿 ) , 分度标准 : 根据中央静脉
内皮损伤 、 凝固性坏死 、内皮下 出血或肝窦出 血 3 方面评估 , 每项 0 一 3 分计
分 , 累计总分为 0 一 1 分无损害 、 2 一 3 分轻度 、 4 一 6 分中度 、 7 一 9分重度
No 协 : 盆卜仆 e阳 ~
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s u l x , x知t h e li a l o r 5 1、 , i翻 坛侧州哪 e , ( ,洲 , l丽 ve cne ~
,渭衅 it v e lr y 忍 to 3 即 i n匕
a8 而ld , 4 10 6 画 nls 助 例司e m te , an d 7 ot g 沪in st 朋 卿e 化
图 1 AEE 对 50 5 大 鼠肝脏病变的影响 (EH 染色 , x ZX() 倍 )
A一 正常对照 ; B 一械 tl o 模型组中 l 例重度 , 〕 S ,可 见严重的中央青年脉内皮
损伤 、凝固性坏死 、 中央青年脉内皮下及肝窦出血 ; c 一枷 l o- A亚 给药组中 l
例轻度 以万 ,仅有轻度中央青年脉内皮损伤和肝窦出血
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组 )NT F 。 分别为 (% 土 64 ) n g · L一 ’ , ( 42 土 47 ) gn · L 一 ’ ,
提示用 屁E 组 NT F一 a 有下降的趋势 ,但由于样本量
少 , 尚缺乏统计学差异 ( P = 0 . 07 8 , n = s) 。 余 3 组
测量值均小于 巧 gn · L 一 ’ ,无统计学差异 。
4 讨 论
厌污 最初报道是 由饮用植物药 (如野百合碱等 )
引起 ,该病也是造血干细胞移植后早期严重合并症之
一 ,重症患者病死率高达 21 % 一 67 % 闭 。 目前该病缺
乏明确有效的预防和治疗药物。 由于 505 模型与造
血干细胞移植后 S O S f陆床表现和病理改变一致 7[] , 因
而在此基础上进行造血干细胞移植后 505 发病机制 、
16 2 8
·
:bt 认 户叭往mr 了 , 2伙巧 从〕矛聊瀚 r , 不祝 . 4 0 No . 2了
药物治疗等方面的研究已经得到广泛认可回 。 本研
究结果显示 , 口服 AE E 对于不同程度 的大鼠 5 0 6 都
有一定预防作用 ,明显改善了重度 505 临床指标 (腹
水量 、胆红素水平 、 H rC ) , 明显预防了中度 3 0 5 肝脏
病变 ,这些结果均提示新疆紫草具有抗 5 0 5 的作用 ,
有可能成为预防人类造血干细胞移植后 50 5 的药物 ,
但其确切疗效还需要临床研究证实 。
实验中也曾应用过 屁 E so mg · k g 一 ’ · d 一 ’ 及
2 g’ 吨一 ’ · d 一 ’灌 胃预防大鼠 505 , 前者没有看出抗
50 5 的明显效果 , 而 后者的预防作用与本实验中
1 g’ k g 一 ’ · d 一 ’ 剂量相似 ,但大鼠出现了较明显 的胃
肠道不 良反应 。 在本实验中 , 大部分大鼠对 妞E 耐
受性良好 ,但也有个别存在腹泻 、 腹胀的症状 , 这可
能与紫草提取物不溶于水而影响吸收有关 , 因此在
制剂方面还需要进一步改进 。
紫草是多年生草本植物 ,药典记载有凉血 、 活
血 、 解毒透疹的作用 ,新疆紫草在紫草中蔡酿含量最
高 ,被认为是质量最好的一种 [’ 0] 。 近年来关于紫草
抗炎作用得到广泛研究 ,其提取物可 以抑制小鼠腹
腔渗出性炎症 [ ” 〕 ;体内实验表明 , 紫草素及其衍生
物可以抑制炎症因子 rNr -F a 启动子转录活性 , 从而
显著抑制 T’N F 一。 n lR NA 的表达和蛋白质合成〔’ 2」。 在
5 0 5 中肝窦内皮细胞损伤 ,包括 NT F a 在内的多种
炎症因子释放 t ’ 3」,成为加重病变程度的重要 因素 。
在本实验中 , M ct l印一 A E E 给药组 NT F 一 a 水平低于
M ct l o 模型组 ,支持紫草对炎症 因子可能有抑制作
用 ,但还需要增大样本量以证实其差异 的显著性 。
由此推测 ,规E 抗 50 5 的作用机制可能部分与抑制
炎症因子有关 ,但还需要进行深人研究 。
综上所述 ,本研究通过预防性应用 AE E 对 50 5
影响的动物实验 ,证实口服旭E 对于大鼠 5 0 5 具有
一定程度的预防作用 , 值得进一步研究应用 。 本实
验首先报告 了紫草体内抗 50 5 的作用 , 为 50 5 的临
床防治提供了新思路 。
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参茂扶心 口服液对心肌梗死后左心衰大鼠血浆利钾尿肤与心脏重塑的
影响
马路 ’ ,刘剑刚 ’ , 陈可冀 ’ , 史大卓 ’ , 薛桥 2 , 李决 “ , 高伟 2 (l . 中国中医研究院西苑医院 ,北京 l姗 l ; 2 . 解放军总医院老年心血管
病研究所 , 北京 l X拐53 )
摘要 : 目的 观察参茂扶心 口 服液对实验性心肌梗死 (心梗 )后心力衰竭 (心衰 )大鼠血装利钾尿肤 ( KP ) 、 左室舒缩功能及左 室
重塑的影响 。 方法 结扎大鼠左冠状动脉前降支制作急性心肌梗死后心衰模型 , 左心 室插管术测 定血液动力 学指标 ; 放免法
测定血装 KP , 心钠素 ( ANP ) , 血管紧张素 n ( A ng l )及内皮素 一 l( 界 l) 浓度 , 并观察心脏形 态学结构及胶原成分 、 心脏质量 / 体
质量 ( Hw B M ) 、 左心腔面积 ( vL )A 、 单位面积 内心肌细胞核数 ( M N N )的 变化 。 结果 与模型组相比 , 高剂量 (巧 g’ k g 一 ’ )组等容
收缩末期心肌缩短最大速度 ( v~ ) 、 左心室舒张期压力下 降最大 变化速率 ( 一 d p d/ t~ )及左心 室内压峰值 ( vL SP )增加 ;左心 室
舒张末压 ( vL E D )P 降低 ;血浆 KP , A n g n 及界 1浓度降低 , 均有显著性差异 ( 尸 < 0 . 05 或 尸 < 0 . 01 ) 。 心肌细胞周 围胶原组织明
显减少 , 心脏质量 / 体质量心脏比值变小 、 单位 面积内 MN N 明显增多、 LvA 明显 缩小 ( 尸 < 。
.
05 或 尸 < 0 .创 ) 。 中剂量组 ( l0 g’
吨一 ’ ) 、 低剂量组 (5 9 · k-g ’ )血桨 NA P 水平 下降明显 ( 尸 < 0 . 0 1 ) 。 结论 参茂扶心 口服液能 改善心梗后 心 衰大鼠左 室舒缩功
能 , 降低 KP , nA g l , E r~ l 浓度 , 影响 NA P 分泌 ,有一定抑制 左室重塑的作用 。
关键词 : 参茂扶心 口 服液 ;心肌梗死 ; 心力衰竭 ; 心室重塑 ;利钾尿肤
中图分类号 : 2B 85 . 5 ; 3R 64 . l 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1一 2 4 94 (2X() 5 ) 21 一 16 29 一 04
E伟eC st of S h e n q i F斌对 n o 川日 Uq u i d on P l
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k目 i u er t i c pe P t ide , m y仪别闭 i a】伪 n t r a c Uil yt a n d r e 】a x a it on of 】e ft
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撇 玩 , , 哪 Jian 一脚g , , e H EN K e 一 ji , ,
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「10 」 傅善林 , 尚天民 , 肖培根 . 几种国产药用紫草中蔡醒色素的分 (收稿日期 : 2X() 5一03 一巧 )
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作者简介 : 马路 ,男 ,博士后 T e l / axF : ( 0 10 ) 628 7粼刃 3 E 一~ l : M习u 目 2X( 乃 @ y ah o
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中国药学杂志 2仪 )5 年 1 月第 如卷第 21 期 hC 认 产平汉飞n 了, 2更x巧 从滩℃斤么犷 , Vol . 4O No . ZI · 16 29 ·