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第 21 卷 第 4 期 湖 南 文 理 学 院 学 报(自 然 科 学 版) Vol. 21 No. 4
2009 年 12 月 Journal of Hunan University of Arts and Science(Natural Science Edition) Dec. 2009
doi:10.3969/j.issn.1672-6146.2009.04.013
天冬块根药用成分对小鼠抗氧化延缓衰老的影响
熊大胜, 许云香, 郭春秋
(湖南文理学院 生命科学学院, 湖南 常德, 415000)
摘 要: 通过天冬块根氨基酸、多糖、皂甙总量、浸提物含
量测定和块根水提液饲养小鼠血浆以及肝脑组织中超氧化
物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和蛋白质含量测定,探
讨天冬块根药用成分对小鼠血浆和肝脑组织抗氧化延缓衰
老的影响. 结果表明:天冬块根多糖是提高小鼠血浆和肝脑
组织 SOD 活性,降低 MDA 含量的主要因素,是抗氧化延
缓衰老的第一要素. 天冬块根氨基酸和浸提物的综合作用
是导致小鼠血浆蛋白质含量增加,皂甙和浸提物的综合作用
是导致小鼠肝、脑组织 MDA 积累的第二位影响要素.
关键词:天冬块根;药用成分;抗氧化延缓衰老
中图分类号:R 282.7 文献标识码:A
文章编号:1672-6146(2009)04-0040-04
天冬(Asparagus cochinchinensis Lour. Merr.)系
百合科(Liliaceae)天冬属(Asparagus.)植物,为传统中
药[1-3]. 有养阴润燥,清肺生津之功效,被视为养阴
益肺、清火生津、延年益寿之佳品,有提高机体免
疫力、延缓衰老、延长寿命,清除超氧自由基等药
理活性[4-7];天冬块根含有天冬酰胺、苏氨酸、赖氨
酸等 l9 种氨基酸,多种多糖和丰富的皂苷元[8-10],
天冬块根药用成分与药用效果之间的内在联系目前
报道较少. 本实验通过天冬块根氨基酸、多糖、皂
甙总量和浸提物含量测定和块根水提液饲养小鼠血
浆和肝脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二
醛(MDA)和蛋白质含量测定,探讨天冬块根药用成
分对小鼠血浆和肝脑组织抗氧化延缓衰老的影响.
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料及动物
湖南省石门县雁池乡天冬块根,60 ℃烘干、磨
碎,60 目筛样品.
小白鼠 72 只,1~2 月龄,体重(20±2) g,由中
南大学实验动物学部提供.
1.1.2 试验仪器及试剂
氨基酸分析系统,AccQ-Tag 氨基酸衍生试剂、
硼酸盐缓冲液和 17 种氨基酸标准品购自 DIONEX
公司;722S 分光光度计购自上海精密科学仪器有限
公司,超声波仪购自 BRANSON ULTRSONICS 公
司;D-半乳糖为 sigma 产品;MDA、SOD、总蛋白
质试剂盒,薯蓣皂甙元、葡萄糖标准品等试剂购自
万伯生物试剂有限公司.
1.2 实验方法
1.2.1 天冬块根药用成分及浸提物含量测定
(1) 氨基酸提取及测定. 称 60 目筛天冬块根粉
末 1.0 g,6 mol·L-1 盐酸,80 ℃下水解 24 h,45 μm
滤膜过滤,−40 ℃下冷冻干燥 48 h;水解后加入 70
μL 硼酸缓冲液和 20 μL AccQ-Tag 衍生 10 min 后上
机测定,重复 6 次,直接打印样品和氨基酸含量,
用质量分数%表示.
(2) 多糖提取及测定. 称 60 目筛天冬块根粉末
5.0 g,蒸馏水 200 mL,用透气膜封口,微波低火下
提取时间 l8 min,过滤;残渣用蒸馏水 200 mL,同
样条件下浸提 l8 min,过滤;合并 2 次提取液,浓
缩至 50 mL,95%乙醇使其含醇量达到 70%静置过
夜;去上清液浓缩;再用乙醇使其含醇量达 85%静
置过夜;去上清干燥获得多糖样品,定溶 50 mL 备
用. 称取干燥至恒重的葡萄糖标准品 50 mg,定溶
100 mL. 分别配制每百毫升含 0.0、0.5、1.0、1.5、
2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mg 系列浓度的溶液;分别
取 2 mL 加 5%苯酚试剂 l.0 mL,摇匀加浓硫酸 5.0
mL,沸水浴 15 min;冷却,在分光光度计 490 nm
处测定吸收度 A,建葡萄糖标准曲线;用同样方法
分别获得 6 次重复样品 490 nm 处吸光度 A,标准曲
线计算品多糖总量,用质量分数%表示.
(3) 总皂甙提取及测定. 称 60 目筛天冬样品
4.0 g,氯仿 60 mL 脱脂 2 h;残渣挥去溶剂,加甲
醇 80 mL, 在 59 kHz 超声波条件下提取 30 min;干
燥提取液,定溶 20 mL;用饱和正丁醇萃取 3 次,
每次 20 mL,合并萃取液;沸水浴蒸干获得皂甙样
品,定溶 20 mL 备用. 称取薯蓣皂甙元标准品 5.0
mg,甲醇定溶至 50 mL;分别吸取 0.0、0.4、0.8、
第 4 期 熊大胜, 许云香, 郭春秋 天冬块根药用成分对小鼠抗氧化延缓衰老的影响 41
1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL 于试管内干燥;分别加
5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2 mL,高氯酸 0.8 mL,混
匀,密塞,60 ℃下显色 15 min;冷却后加冰醋酸
5.0 mL,蒸馏水 1.0 mL,摇匀,静置 10 min,用
UV-756 型分光光度计于 560 nm 处测定 A 值,建薯
蓣皂甙元标准品的标准曲线;用同样方法分别测定
6 次重复样品 560 nm 处 A,标准曲线计算样品薯蓣
皂甙元总量,用质量分数%表示.
(4) 浸提物含量测定. 采用中国药典附录Ⅹ A
醇溶热提法[11],浸提物质量分数%=样品浸提液干
燥品质量恒重/样品质量重×100;用同样方法分别获
得 6 次重复样品浸提物质量分数%.
1.2.2 试验及样品制备
《中国药典》中天冬用药剂量为 6~12 g[8],按
成人 12g 生药标准推算生药 0.2 g·kg-1 体重. 小鼠高
剂量实验按 20 倍成人用药剂量 4.0 g·kg-1设计,12
只小鼠 240 g,用天冬生药 9.6 g. 称取天冬茎藤粉末
12.00 g,用蒸馏水 200 mL 煮提 3 次,1 h/次,合并
3 次提取液,浓缩至 75 mL,获得天冬块根水提液,
分别装 15 瓶,每瓶 4 mL,130 ℃灭菌后备用.
72 只小白鼠,雌雄兼用,随机分成 7 组,每组
10~12 只. 给药组每日腹腔皮下注射天冬块根水提
液 0.015 mL·g-1,正常对照组注射等量生理盐水,连
续注射 15 d, 1 次/d.
匀浆样品制备. 末次给药 24 小时后,摘去小鼠
眼球取血,3 000 r/min 离心 15min,获得小鼠血浆
样品. 小鼠取血后,冰上取脑组织称重,加入 5 倍
体积冰生理盐水,冰上研磨匀浆,12 000 r/min 离心
15 min,取上清液获得脑组织匀浆样品. 用同样方
法获得肝脏匀浆样品,−80 ℃下保存备用.
1.3 试验样品测定
按试剂盒说明测定小鼠脑、肝组织和血浆 SOD
活性,MDA 和蛋白质总量,即 SOD 活性,MDA
和蛋白质总量分别采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比
妥酸法和考马斯亮蓝法测定,分别用 U·g-1(FW).h,
nmol·g-1(FW).h,mg·g-1 表示.
1.4 统计分析方法
天冬块根氨基酸、多糖、皂甙、浸提物含量分
别用 X1、X2、X3、X4 构成 X 变量组,饲养小鼠血浆
SOD 活性、丙二醛及蛋白质含量分别用 Y1、Y2、Y3
构成 Y 变量组,用 SAS 9.1.3 软件 corr 和 cancorr 过
程,进行组间相关和典型相关分析.
2 结果与分析
2.1 天冬块根水提液对小鼠血浆抗氧化延缓衰老的
影响
天冬块根药用成分变量组 X1、X2、X3、X4 与饲
养小鼠血浆药用效果 Y1、Y2、Y3 间 corr 过程均值和
cancorr 过程典型相关系数,列入见表 1.
表 1 天冬块根药用成分与小鼠血浆 SOD、MDA、蛋白质含量均值及其典型相关系数
药用成分 药用效果
种类 含量/(g/100g) 种类 含量 典型相关向量 典型相关系数 近似 F 值 特征值 累积贡献率
X1 3.34±0.06 Y1* 11.74±1.01 1 0.999 3 563.05** 713.3 0.648
X2 10.17±0.02 Y2* 2.89±0.04 2 0.998 7 212.43** 384.1 0.997
X3 1.72±0.01 Y3* 158.73±2.04 3 0.837 1 8.51** 2.4 1.000
X4 86.00±0.19
*Y1:SOD 活性(U·g-1(FW).h), *Y2:MDA 含量(nmol·g-1(FW).h), *Y3:蛋白质含量(mg·g-1), ** : P<0.01.
表 1 表明:天冬块根药用成分变量与饲养小鼠
血浆 SOD 活性、MDA 及蛋白质含量之间,第Ⅰ、
Ⅱ对典型变量的相关系数经似然比法检验,达极显
著差异水平,说明天冬块根药用成分与饲养小鼠药
用效果之间确实存在密切的典型相关关系. 第Ⅰ、
Ⅱ对典型相关变量的方差累计贡献率达 99.8%,说
明用第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变量上各原始变量的相关
系数就能反应两组间变量的内在联系.
将天冬块根药用成分与小鼠血浆 SOD 活性、
MDA 及蛋白质含量之间第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变量
的标准化构成结果,列于表 2.
表 2 表明:第Ⅰ对典型变量中,天冬块根药用
成分组绝对载荷最大的原变量是多糖,小鼠血浆药
用效果组绝对载荷最大的原变量是 SOD 和 MDA;
多糖与SOD活性符号相同,与MDA含量符号相反;
说明天冬块根多糖能提高小鼠血浆 SOD 活性、降
低 MDA 含量,多糖是影响小鼠血浆抗氧化延缓衰
老的第一要素. 第Ⅱ对典型变量中,块根药用成分
组绝对载荷最大的原变量是氨基酸和浸提物,药用
效果组绝对载荷最大的原变量是蛋白质,且这 3 个
原变量的符号相同;说明天冬块根氨基酸和浸提物
的综合作用是提高小鼠血浆蛋白质含量的主要因
42 湖 南 文 理 学 院 学 报(自 然 科 学 版) 2009 年
素,可能与小鼠抗氧化延缓衰老有关,为第二要素.
2.2 天冬块根水提液对小鼠脑组织抗氧化延缓衰老
的影响
天冬块根药用成分变量组 X1、X2、X3、X4 与饲
养小鼠脑组织药用效果 Y1、Y2、Y3 间 corr 过程均值
和 cancorr 过程典型相关系数,列入表 3.
表 3 表明:天冬块根药用成分与饲养小鼠脑组
织 SOD 活性、MDA 及蛋白质含量之间,第Ⅰ、Ⅱ
对典型变量的相关系数经似然比法检验,达极显著
差异水平,说明天冬块根药用成分与小鼠脑组织
SOD 活性、MDA 及蛋白质含量之间确实存在密切
的典型相关关系. 第Ⅰ、Ⅱ对典型变量的方差累计
贡献率 99.9%,说明用第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变量上
各原始变量的相关系数就能反应两组变量间的内
在联系.
将天冬块根药用成分与小鼠脑组织 SOD活性、
MDA 及蛋白质含量之间第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变量
的标准化构成结果,列于表 4.
表 2 天冬块根药用成分对小鼠血浆的影响
天冬块根有效成分 小鼠血浆药用效果 原始变量 第Ⅰ变量 V1 第Ⅱ变量 V2
原始变量 第Ⅰ变量 W1 第Ⅱ变量 W2
氨基酸含量 0.384 2 0.686 2 SOD 活性 0.976 3 0.197 8
多糖含量 0.908 6 0.268 3 MDA 含量 −0.871 0 −0.176 0
皂甙含量 −0.139 3 −0.058 9 蛋白质总量 −0.109 9 0.977 4
浸提物量 −0.2632 0.5317
表 3 天冬块根药用成分与小鼠脑组织 SOD、MDA、蛋白质含量均值及其典型相关系数
药用成分 药用效果
种类 含量/(g/100g) 种类 含量 典型相关向量 典型相关系数 近似 F 值 特征值 累积贡献率
X1 3.34±0.06 Y1* 11.45±1.22 1 0.999 7 653.6** 1 615.6 0.846
X2 10.17±0.02 Y2* 1.21±0.08 2 0.998 3 210.1** 293.1 0.999
X3 1.72±0.01 Y3* 229.64±0.39 3 0.268 1 0.3 0.1 1.000
X4 86.00±0.19
*Y1:SOD 活性/U·g-1(FW).h,*Y2:MDA 含量/nmol·g-1(FW).h,*Y3:蛋白质含量/mg·g-1, ** : P<0.01.
表 4 天冬块根药用成分对小鼠脑组织的影响
天冬块根有效成分 饲养小鼠脑组织药用效果 原始变量 第Ⅰ变量 V1 第Ⅱ变量 V2
原始变量 第Ⅰ变量 W1 第Ⅱ变量 W2
氨基酸含量 0.589 0 0.537 4 SOD 活性 0.993 7 0.097 0
多糖含量 0.972 4 0.084 1 MDA 含量 −0.467 0 0.774 5
皂甙含量 0.054 4 0.703 3 蛋白质总量 0.881 4 0.133 8
浸提物量 0.019 3 0.963 8
表 4 表明:第Ⅰ对典型变量中,天冬块根药用
成分组绝对载荷最大的原变量是多糖,小鼠脑组织
药用效果组绝对载荷最大的原变量是 SOD、蛋白质
和 MDA;且多糖与 SOD 符号相同,与 MDA 符号
相反. 说明天冬块根多糖能提高小鼠脑组织 SOD
活性、降低 MDA 含量,多糖是影响小鼠脑组织抗
氧化延缓衰老的第一要素. 第Ⅱ对典型变量中,块
根药用成分组绝对载荷最大的原变量是皂甙和浸提
物,药用效果组绝对载荷最大的原变量是 MDA,
且这 3 个变量的符号相同;说明天冬块根皂甙和浸
提物的综合作用是导致小鼠脑组织 MDA 积累的主
要因素,为第二位影响要素.
2.3 天冬块根水提液对小鼠肝脏抗氧化延缓衰老的
影响
天冬块根药用成分变量组 X1、X2、X3、X4 与小
鼠肝脏药用效果Y1、Y2、Y3间 corr过程均值和cancorr
过程典型相关系数,列入表表 5.
表 5 表明:天冬块根药用成分与小鼠肝脏 SOD
活性、MDA 及蛋白质含量之间,第Ⅰ、Ⅱ对典型
相关变量的相关系数经似然比法检验,达极显著差
异水平,说明天冬块根药用成分与饲养小鼠肝脏
SOD 活性、MDA 及蛋白质含量之间确实存在密切
的典型相关关系. 第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变量的方差
累计贡献率 99.2%,说明用第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变
量上各原始变量的相关系数就能反应两组变量间的
内在联系.
将天冬块根药用成分与小鼠肝脏 SOD 活性、
MDA 及蛋白质含量之间第Ⅰ、Ⅱ对典型相关变量
的标准化构成结果,列于表 6.
第 4 期 熊大胜, 许云香, 郭春秋 天冬块根药用成分对小鼠抗氧化延缓衰老的影响 43
表 5 天冬块根药用成分与小鼠肝脏 SOD、MDA、蛋白质含量均值及其典型相关系数
药用成分 药用效果
种类 含量/(g/100g) 种类 含量 典型相关向量 典型相关系数 近似 F 值 特征值 累积贡献率
X1 3.34±0.06 Y1* 6.48±0.06 1 0.999 5 653.6** 999.0 0.821
X2 10.17±0.02 Y2* 0.83±0.03 2 0.997 6 210.1** 207.3 0.992
X3 1.72±0.01 Y3* 673.30±21.49 3 0.950 4 32.6 9.3 1.000
X4 86.00±0.19
*Y1:SOD 活性/U·g-1(FW).h,*Y2:MDA 含量/nmol·g-1(FW).h,*Y3:蛋白质含量/mg·g-1, ** : P<0.01.
表 6 天冬块根药用成分与饲养小鼠肝脏药用变化间的典型变量构成
天冬块根有效成分 饲养小鼠脑组织药用效果 原始变量 第Ⅰ变量 V1 第Ⅱ变量 V2
原始变量 第Ⅰ变量 W1 第Ⅱ变量 W2
氨基酸含量 0.516 4 0.368 6 SOD 活性 0.996 6 −0.000 1
多糖含量 0.923 9 −0.338 5 MDA 含量 −0.885 0 0.445 2
皂甙含量 0.356 0 0.575 6 蛋白质总量 0.443 9 −0.110 1
浸提物量 0.412 1 0.858 5
表 6 表明:第Ⅰ对典型变量中,天冬块根药用
成分组绝对载荷最大的原变量是多糖,小鼠肝组织
药用效果组绝对载荷最大的原变量是 SOD 和
MDA;天冬多糖与 SOD 活性符号相同,与 MDA
符号相反;说明天冬块根多糖能提高小鼠肝组织
SOD 活性、降低 MDA 含量,多糖是影响肝组织抗
氧化延缓衰老的第一要素. 第Ⅱ对典型变量中,块
根药用成分组绝对载荷最大的原变量是皂甙和浸提
物,肝组织药用效果组绝对载荷最大的原变量是
MDA,且这 3 个变量的符号相同;说明天冬块根皂
甙和浸提物的综合作用是导致小鼠肝脏 MDA 积累
的主要因素,为第二位影响要素.
3 结论与讨论
许多研究表明,自由基及诱导脂质过氧化反应
是生物衰老的重要原因. 超氧化物歧化酶(SOD)活
性降低,自由基代谢产物 MDA 含量增加,会导致
组织损害和器官退行性变化,进而加速衰老[2-8]. 本
试验结果表明,天冬块根药用成分与小鼠血浆和肝、
脑组织 SOD 活性、MDA 及蛋白质含量之间,第Ⅰ、
Ⅱ对典型相关变量的相关系数经似然比法检验,达
极显著差异水平;说明天冬块根药用成分与小鼠血
浆和肝、脑组织 SOD 活性、MDA 及蛋白质含量之
间确实存在密切的典型相关关系.
天冬块根多糖是提高小鼠血浆和肝、脑组织
SOD 活性、降低 MDA 含量的主要因素,为抗氧化
延缓衰老的第一主导影响因素. 该试验结果与李
敏、费曜等人研究结果一致[6]. 本试验结果证明,
天冬块根氨基酸和浸提物的综合作用是增加小鼠血
浆蛋白质含量的主要因素,皂甙和浸提物的综合作
用是导致小鼠肝、脑组织 MDA 积累的主要因素. 该
试验结果与李敏等人的研究结果不同,他们用天冬
皂甙饲养小鼠,证明皂甙对小鼠脑组织 SOD 活性
作用不明显,对小鼠肝、脑组织和血浆 MDA 含量
作用也不明显[6],本试验获得的天冬块根皂甙和浸
提物的综合作用导致小鼠肝、脑组织 MDA 积累,
氨基酸和浸提物的综合作用导致小鼠血浆蛋白质含
量增加,还有进一步深入研究的必要.
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Influence of feeding astragalus on
electrocardiogram of domestic rabbit
LI Shu-Hong, WANG Jing-ren
(Department of Life Science, Hunan University of Arts and
Science, Changde, Hunan, 415000)
Abstract: 16 rabbits were randomly divided into group I, II, III
group and the control group IV group, each group had four.
Each rabbit of experimental group was fed 10 g, 20 g, 30 g
daily feeding. The experimental time was 30 days. The results
showed : In the electrocardiogram influence, the experimental
group and the control group had significant differences . Heart
rate was significant difference between the groups I, Ⅲ(P
<0.01) and there was significant difference between the groups
II, III (P <0.05). Time of the QT was significant difference
between the groups I, II (P < 0.05), and there was significant
difference between the groups I, Ⅲ(P<0.05). RR- time: was
significant difference between the groups I, Ⅲ(P<0.05)and
there was significant difference between the groups II, III (P<
0.05). T-wave voltage was significant difference between the
groups I, IV (P<0.05). P-wave voltage was significant differen-
ce between the groups II, Ⅳ(P<0.05).
Key words: astragalus; rabbits; electrocardiogram
收稿日期:2009-09-28
基金项目:湖南省“十一五”重点建设学科(动物学)资助
作者简介:李淑红(1964-), 女, 教授, 硕士, 从事动物生理与
动物保健研究.
(责任编校:谭长贵)
(上接第 43 页)
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Effect of the anti-aging of oxidation in mouse
by the medicinal components of asparagus
cochinchinensis root
XIONG Da-sheng, XU Yun-xiang, GUO Chun-qiu
(Department of Life Science, Hunan University of Arts and
Scicences, Changde, Hunan, 415000)
Abstract: The total content of amino acids, polysac- charides,
saponins, and extracts of Asparagus cochinchinensis root, and
the brain tissue of mice feeded with the asparagus root in
plasma and liver superoxide dismutase (SOD) activity, and the
malondialdehyde (MDA) content and the protein content in the
plasma from the brain tissue and liver are determined to explore
the effect of antioxidant anti-aging in mice by medicinal
components of asparagus cochinchinensis root. The results
showed that: the polysaccharide in roots of asparagus
cochinchinensis is to increase SOD activity in plasma,liver and
brain tissue of mice, reduced its MDA content,is the first
factor of the antioxidant anti-aging. The joint action from the
amino acid and the extract content in root of asparagus
cochinchinensis is leading to the protein content increase in
plasma of mice, but which is leading to accumulating of MDA
content in the liver and brain tissue of mice, are elements of the
second factor.
Key words: asparagus root; medicinal components; oxida- tion
resistance postpone senility
基金项目:天冬药用植物种质资源标准化整理、整合及共享
试点国家科技基础平台项目(2005DKA21004)
作者简介:熊大胜(1951-), 男, 教授, 主要研究方向:植物
遗传育种.
(责任编校:谭长贵)