全 文 ：Science and Technology of Food Industry 营养与保健
2013年第20期
黑牛肝菌多糖对小鼠酒精性
肾损伤保护作用的研究
赵云霞1，陶眀煊1，*，程光宇2，郭永月1，邢 佳1，彭 婕1
（1.南京师范大学金陵女子学院，江苏南京 210097；
2.南京师范大学生命科学学院，江苏南京 210046）
摘 要：目的：研究黑牛肝菌多糖（RPBA）对酒精所致急性肝损伤小鼠肾损伤的保护作用。方法：小鼠被随机分为空白对
照组、模型组、药物组（联苯双酯组，150mg/kg bw）、RPBA各剂量组（100、200、400mg/kg bw），连续灌胃30d，空白对照组按
等量生理盐水灌胃。第31d给予50%乙醇（12mL/kg）建立动物急性肝损伤模型。小鼠处死后取肾脏测定各项抗氧化指标。
结果：与模型组相比，RPBA各剂量组均能降低肾脏MDA含量（p＜0.01），提高肾脏SOD活性、CAT活性、GSH-Px活性及GSH
含量（p＜0.01）。结论：RPBA能明显提高肾脏中抗氧化酶活性，减少脂质过氧化，对小鼠酒精性肾损伤具有明显保护作用。
关键词：黑牛肝菌多糖，酒精性肾损伤，保护作用，抗氧化
Protective effect of polysaccharides from Boletus aereus on
alcoholic kidney injury of mice
ZHAO Yun-xia1，TAO Ming-xuan1，*，CHENG Guang-yu2，GUO Yong-yue1，XING Jia1，PENG Jie1
（1.Ginling College，Nanjing Normal University，Nanjing 210097，China；
2.College of Life Science，Nanjing University，Nanjing 210046，China）
Abstract：Objective ：The protective effect of refined polysaccharide from Boletus aereus （RPBA ） on acute
alcoholic hepatic injury of kidney in mice was investigated. Methods：Mice were randomly divided into blank
control group，alcoholic model groups，Bifendate （150mg/kgbw） groups and RPBA （100，200，400mg/kg bw）
groups. All mice were administered for 30d prior to the administration with dose of 50% alcohol（12mL/kg bw）
except blank control group. 12h after alcohol treament，all mice were dislocation death to assay activities of
antioxidant capabilities in kidney. Results：Contents of MDA in kidney revealed an obvious decrease（p＜0.01） in
the RPBA treament groups when compared to the model group，while the contents of GSH and the activities of
SOD，CAT，GSH-Px in the kidney exhibited an obvious increase（p＜0.01）. Conclusion：RPBA could protect kidney
from injury induced by alcohol in mice.
Key words：Boletus aereus polysaccharides；alcohol kidney injury；protective effect；antioxidation
中图分类号：TS201.4 文献标识码：A 文 章 编 号：1002-0306（2013）20-0368-04
收稿日期：2013－04－01 * 通讯联系人
作者简介：赵云霞（1989-），女，硕士研究生，研究方向：生物活性物质
与保健功能因子。
过量饮酒是当今世界范围内一个重要的公共卫
生问题，长期大量饮酒会导致许多脏器系统的损害[1]。
肝脏是酒精代谢的主要器官，也是最容易受损的器官。
肾脏是仅次于肝脏的乙醇排泄器官。机体摄入酒精
后约10%在肾脏代谢，这些水溶性外源物质在肾脏细
胞和间质内积聚、浓缩，对肾脏可能造成一定程度的
损害[2]。目前，国内外有关酒精性肝损害的研究已较为
深入，但对酒精性肾损害研究报道较少[3-6]。有研究表
明，乙醇可导致以肾小管-间质损害为主的病理改变，
进而可进展至肾间质纤维化、慢性肾功能衰竭[7-10]。
黑牛肝菌（Boletus aereus，BA）是云南省资源较
丰富的一种野生食用菌，其味道鲜美，具有很高的食
用和药用价值。研究表明[11-13]，黑牛肝菌富含蛋白质、
维生素、多糖、氨基酸和各种矿物质元素，对高血压，
高胆固醇和高血脂等疾病均有较好的功效。本研究
以黑牛肝菌为原材料，探讨了黑牛肝菌多糖对酒精
所致小鼠肾损伤的保护作用，旨在为保健食品或天
然药物的研制和开发提供理论和实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
黑牛肝菌子实体干品 购自云南丽江市古城区
喜玛拉雅贸易有限责任公司，经去杂质，剪去含培养
基的根部，于60℃低温烘干后粉碎，过60目筛。将细
粉经热水提取、浓缩、乙醇沉淀（1∶4，m/v）、低温干燥
等步骤后，得到粗多糖，粗多糖经Sevage法脱蛋白、透
析、乙醇沉淀、低温干燥后得黑牛肝菌精多糖，经测
定多糖含量约为75.02%，蛋白含量为2.11%；ICR雄
性小鼠 6周龄左右，体重（25.75±1.65）g，动物实验
368
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2013.20.015
营养与保健
2013年第20期
Vol . 34 , No . 20 , 2013
在江苏省中医院动物饲养中心进行，动物饲养许可证
号（SYXK（苏）2012-0047）；四乙氧基丙烷 Fluka公
司；谷胱甘肽（GSH）、牛血清白蛋白（BSA） Sigma公
司；NBT、DTNB 南京卓尔生化有限公司；硫代巴比
妥酸（TBA）、过氧化氢等生化试剂 为国产分析纯。
GL-22M型高速冷冻离心机 湖南赛特湘仪离
心机仪器有限公司；722型可见分光光度计 上海精
密科学仪器有限公司；恒温水浴锅 金坛市杰瑞尔
电器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 造模 小鼠适应性喂养3d，每组10只，随机分
为模型组、药物组（联苯双酯组，150mg/kg bw）、
RPBA各剂量组（100、200、400mg/kg bw），另取10只
健康小鼠为空白对照组。受试样品用蒸馏水配制，
每天灌胃一次，连续灌胃30d，实验期间供给全价颗
粒饲料，不限制饮食饮水，空白对照组和模型组每天
灌等体积的生理盐水。实验至第31d，各组动物禁食
不禁水12h后，模型组、药物组及RPBA各剂量组以
12mL/kg的量，灌以50%的乙醇溶液，建立动物急性
肝损伤模型，空白组灌予等体积的生理盐水。各组小
鼠均在灌胃12h后取肾脏测定各项抗氧化指标。
1.2.2 肾匀浆的制备 准确称取0.1g肾脏，用生理
盐水洗去污血后拭干，剪碎并加入0.9mL预冷的
50mmol/L磷酸缓冲液（pH7.8），于冰水浴中进行超声
破碎（400W，20s×3）制成10%肾匀浆。肾匀浆于4℃条
件下10000r/min离心10min，一部分上清液用于测定
MDA、GSH含量，另一部分上清液以3∶1的比例加饱和
硫酸铵溶液，同样条件下离心上清液即为粗酶液，用
于测定SOD、CAT、GSH-Px活性。
1.2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定 测定方
法在Stewert和Bewly[14]NBT光还原法的基础上，略有
改进。取1mL的缓冲液（空白组）、组织粗酶液（样品
组）加入4mL NBT反应液中，照光3~5min，以加入缓
冲液的避光的反应液作为空白对照，在722分光光度
计上，于560nm波长测定各组的吸光度值。
1.2.4 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的测定 测
定方法在Yao Ping等[15]DTNB法的基础上，略有改进。
测定时取0.4mL 1.0mmol/L GSH+0.4mL 10%组织匀
浆液作为样品管，取0.4mL 1.0mmol/L GSH+0.4mL双
蒸水作为非酶管，37℃水浴预温5min，分别加入0.2mL
预热的H2O2，3min后加4mL偏磷酸沉淀液，3000r/min
离心10min，分别取上清液2mL+2.5mL 0.32mol/L
Na2HPO4+0.5mL DTNB显色液；另取0.4mL双蒸水+
1.6mL+2.5mL 0.32mol/L Na2HPO4+0.5mL DTNB显色
液作空白管。混匀，室温放置10min后，以蒸馏水为空
白对照，于420nm处测定吸光度。
1.2.5 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 CAT活性的
测定采用改进的紫外分光光度法[16]。
1.2.6 还原性谷胱甘肽（GSH）含量的测定 GSH含
量按文献[17]测定，略有改进。取10%肝匀浆0.5mL加
4%磺基水杨酸0.5mL混匀，室温下3500r/min离心
10min。取0.5mL上清液+4.5mL DTNB做测定管；另取
0.5mL 4%磺基水杨酸+4.5mL DTNB做空白管。混匀，
室温放置10min后，以空白管为空白对照，于420nm处
测定吸光度。
1.2.7 过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）含量的测
定 MDA含量的测定采用改进的硫代巴比妥酸
（TBA）法[18]。
1.2.8 数据分析 实验数据用DPS 13.5统计软件进
行统计学分析，单因素方差分析检验组间显著性差
异，数据用x±s表示。
2 结果与分析
2.1 RPBA对小鼠体重增长的影响及对酒精损伤小
鼠一般情况的观察
由表1可知，造模前后各组小鼠体重没有显著性
差异，说明酒精对其生长没有显著地影响。观察期造
模后的表现，发现给予50%的乙醇后，小鼠先表现出
兴奋状态，继而行走不稳，摇摆，四肢瘫软，转身困
难，半小时后重者嗜睡、醉倒，呼吸急促，此状态一直
持续1h左右。空白组小鼠精神良好，食欲旺盛，毛色
光滑有光泽；12h后模型组小鼠状态普遍较差，精神
萎靡不振，毛色粗糙无光泽，活动减少。与模型组相
比，阳性对照组、RPBA各剂量组小鼠精神状态、毛色
和光泽有着显著改善，这说明RPBA对酒精性损伤有
一定的保护作用。
2.2 RPBA对小鼠肾损伤后SOD、GSH-Px、CAT的
活性影响
由表2可见，造模后肾组织中SOD、GSH-Px、CAT
的活性均明显低于空白对照组（p＜0.01），给予RPBA
后，SOD、CAT活性呈剂量-效应关系增加，其中中、高
剂量组SOD活性已与空白对照组基本相当，高剂量组
组别 1d 14d 30d 31d
空白对照组 24.25±2.24aA 29.77±2.31aA 39.07±2.61aA 38.72±2.56aA
模型组 25.99±1.13aA 29.94±1.88aA 37.30±5.06aA 36.53±3.88aA
药物组 25.96±1.41aA 31.65±1.33aA 39.20±3.70aA 38.91±2.32aA
低剂量组 26.10±1.46aA 31.10±2.16aA 39.57±3.41aA 39.13±5.72aA
中剂量组 26.25±1.27aA 31.25±1.83aA 39.83±4.88aA 39.64±3.55aA
高剂量组 25.95±1.65aA 30.88±1.99aA 38.47±3.65aA 38.22±2.69aA
表1 RPBA对小鼠体重的影响（x±s，n=10）
Table 1 Effect of RPBA on weight of mice（x±s，n=10）
注：小写字母表示p<0.05水平，大写字母表示p<0.01水平，不同字母表示同列数据差异显著，相同字母表示同列数据差异不显著；
表2、表3同。
369
Science and Technology of Food Industry 营养与保健
2013年第20期
CAT活性已与药物组水平相当；GSH-Px活性虽未达到
药物组水平，但随着多糖剂量的上升，GSH-Px的活性
逐渐上升，呈一定的量效关系。说明RPBA能显著提
高小鼠肾脏SOD、GSH-Px、CAT活性，增强机体清除自
由基、H2O2的能力，减轻其对小鼠肾脏的损害作用。
2.3 RPBA对小鼠肾损伤后GSH和MDA含量的影响
由表3可见，造模后小鼠肾脏GSH水平显著低于
空白对照组（p＜0.01），给予RPBA后，虽未达到药物
组水平，但低、中、高剂量组GSH水平均有所增加，并
呈一定剂量关系，说明RPBA能一定程度地提高肾损
伤小鼠非酶体系的抗氧化能力；造模后模型组MDA水
平高于空白组，呈显著性差异（p＜0.01），给予RPBA
后，多糖各剂量组MDA水平均有显著降低，其中高剂
量组达到空白对照组水平，说明RPAB能有效改善肾
损伤小鼠体内的脂质过氧化水平。
3 讨论
自由基学说认为，自由基的增多是产生衰老和
死亡的重要因素。在正常的生物代谢过程中，细胞会
产生O2-·等自由基，它们可以迅速地被细胞内的防御
系统所消除，不造成危害。但在某些异常因素如放射
性物质、药物、酒精等的影响下均会引发正常代谢外
的异常自由基反应，这些异常自由基反应产生的大
量自由基不能完全被防御系统所清除，因而就会在
细胞内积累并扩散至细胞外，氧化蛋白质、核酸和脂
肪，从而损害细胞的结构和功能。近期研究[19-21]认为，
自由基与造成肾脏损伤的机制有关，深入研究食用
菌多糖对体内自由基清除活性，将有助于开发天然
高效抗氧化物质。
机体内的自由基清除率防御体系主要由抗氧化
酶体系和非酶体系组成。SOD、GSH-Px、CAT三种酶
组成生物体最主要的抗氧化酶防御体系。它们能有
效清除活性氧自由基，终止自由基链式反应，在抗氧
化方面起了重要作用。当这些酶活性降低时，会导致
自由基积累，破坏细胞膜的完整性，并引起功能的丧
失[22]。GSH是非酶体系中重要的还原产物，它能迅速
清除细胞内的氧自由基，有效地防止脂质过氧化[23]。
MDA是体内自由基攻击脂质产生脂质过氧化物的代
谢最终产物，可间接反映出细胞损伤的程度[24]。
食用菌多糖能从整体上提高机体免疫力，尤其是
抗氧化，保护生物膜和延缓衰老作用。国内外关于食
用菌多糖抗氧化活性方面的报道已经很多，如有平菇
多糖、云芝多糖、金顶侧耳多糖、香菇多糖、茶树菇多
糖、双孢菇多糖、姬菇多糖、猴头菇多糖等等[25-32]，其
中金顶侧耳多糖能显著提高肾损伤小鼠的SOD等抗
氧化酶活性和GSH含量，姬菇多糖在降低肾损伤小鼠
MDA水平方面有很好的作用。与上述研究结果一致，
本实验显示黑牛肝菌多糖能提高SOD、CAT、GSH-Px
的活性，增加肾组织GSH含量，降低肾匀浆MDA含
量。其机制可能是RPBA预处理可以提前增强机体的
自由基清除防御体系，可以有效地拮抗急性酒精所
导致的抗氧化酶活性降低及GSH耗竭，抑制自由基
介导的脂质过氧化反应，增强脂肪酸在细胞内代谢，
保护细胞膜，促进细胞的再生和修复。实验结果说明
黑牛肝菌多糖在预防自由基诱发氧化肾脏组织损伤
方面，是具有开发前景的一种天然的高效抗氧化剂。
4 结论
从小鼠一般情况观察，模型组小鼠精神萎靡不
振，毛色粗糙无光泽，活动减少，状态普遍较差；而饲
喂RPBA各剂量组的小鼠精神状态、毛色和光泽有着
显著改善。
从体内抗氧化方面分析，模型组小鼠肾脏抗氧
化酶SOD、GSH-Px和CAT酶活性下降，抗氧化物质
GSH含量减少，脂质过氧化终产物MDA含量增加；而
饲喂RPBA各剂量组的小鼠肾脏抗氧化酶SOD、GSH-
Px和CAT酶活性显著升高（p＜0.01），且存在一定的剂
量关系，GSH含量随RPBA剂量的增加逐步恢复到正
常水平；MDA含量显著降低（p＜0.01）。说明RPBA能
显著提高肾脏中抗氧化酶活性，减少脂质过氧化，对
小鼠酒精性肾损伤具有明显的保护作用。
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表2 RPBA对小鼠肾SOD、GSH-Px、CAT活性的影响（x±s，n=10）
Table 2 Effect of RPBA on SOD、GSH-Px、CAT activity inkidney of mice（x±s，n=10）
组别 SOD活性（U/mgPro） GSH-Px活性（U/mgPro） CAT活性（U/mgPro）
空白对照组 26.253±0.228bB 12.79±0.38aA 137.347±7.31aA
模型组 5.731±1.506dD 6.274±0.614dC 90.234±1.889cC
药物组 29.123±0.174aA 12.451±0.119aA 110.566±2.752bB
低剂量组 11.987±0.073cC 7.902±0.608cB 96.471±8.634cBC
中剂量组 26.271±0.541bB 8.66±0.513bcB 100.622±4.149bcBC
高剂量组 26.408±0.039bB 9.472±0.916bB 111.51±9.691bB
组别 GSH含量（nmol/mgPro）MDA含量（nmol/mgPro）
空白对照组 33.778±3.51aA 8.327±0.093cC
模型组 16.868±2.363dC 12.624±0.093aA
药物组 33.646±4.117aA 8.903±1.035cC
低剂量组 21.808±2.036cBC 11.503±0.43bAB
中剂量组 24.593±2.769bcB 11.028±0.078bB
高剂量组 27.352±2.439bAB 8.178±0.69cC
表3 RPBA对小鼠肾GSH和MDA含量的影响（x±s，n=10）
Table 3 Effect of RPBA on GSH and MDA contents in kidney
of mice（x±s，n=10）
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营养与保健
2013年第20期
Vol . 34 , No . 20 , 2013
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