全 文 :营养与保健
2015年第24期
Vol . 36 , No . 24 , 2015
黑牛肝菌多糖对小鼠酒精性肝损伤的
改善作用
郭永月,徐 杰,邢 佳,王美菊,陶明煊*
(南京师范大学金陵女子学院,江苏南京 210097)
摘 要:目的:旨在研究黑牛肝菌多糖(refined polysaccharide from Boletus aereus,RPBA)对小鼠酒精性肝损伤的保护
作用。方法:将60只小鼠适应性喂养3 d后,随机分为空白对照组、阳性对照组(联苯双酯滴丸,150 mg/kg·bw)、模型
组、RPBA各剂量组(100、200、400 mg/kg·bw),连续灌胃30 d,第31 d禁食不禁水12 h,除空白组外的其余各组灌胃50%
乙醇溶液(12 mL/kg·bw),建立动物急性肝损伤模型。结果:小鼠酒精灌胃后,模型组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶
(AST)、甘油三酯(TG)水平及丙二醛(MDA)含量与空白对照组相比显著(p<0.05)升高,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧
化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著(p<0.05)低于空白对照组,
RPBA各剂量组ALT、AST、TG水平及MDA含量与模型组相比明显降低,而以上各抗氧化酶活性明显提高。结论:RPBA
能明显降低小鼠血清中AST、ALT及TG水平,提高血清中抗氧化酶活性,减少脂质过氧化,对小鼠酒精性肝损伤具有
明显的保护作用。
关键词:黑牛肝菌多糖,酒精性肝损伤,血清,抗氧化
Improvement effect of polysaccharides from Boletus aereus
on alcoholic liver injury in mice serum
GUO Yong-yue,XU Jie,XING Jia,WANG Mei-ju,TAO Ming-xuan*
(Ginling College,Nanjing Normal University,Nanjing 210097,China)
Abstract:Objective : The improvement effect of refined polysaccharide from Boletus aereus (RPBA ) on
acutealcoholic hepatic injury in mice was investigated. Methods:The 60 mice were fed adaptively for 3 days,
then were randomly divided into six groups,including blank control group,alcoholic model group,positive
control group(administered with 150 mg/kg·bw bifendate by gavage),and RPBA(100,200,400 mg/kg·bw)
group. After housing for 30 days,the mice were kept fasting but retained water for 12 hours,then 50% alcohol
(12 mL/kg·bw) were administered orally into animals of all groups except blank control group to induce
hepatotoxicity. Results:The results showed that the levels of ALT,AST,TG and MDA of mice in model group
were incereased obviously(p<0.05),while the levels of SOD,CAT,GSH-Px,and GSH were lower (p<0.05)
compared with the control group. After BAP administration,the levels of AST,ALT and MDA were decreased
while the levels of SOD,CAT,GSH-Px,and GSH were increased. Conclusion:RPBA could significantly reduce
the levels of AST,ALT and TG in serum of mice,increase the activities of antioxidant enzymes in serum,and
reduce lipid peroxidation.RPBA could protect liver from injury induced by alcohol in mice.
Key words:Boletus aereus polysaccharides;alcohol liver injury;serum;antioxidation
中图分类号:TS201.4 文献标识码:A 文 章 编 号:1002-0306(2015)24-0325-04
doi:10.13386/j.issn1002-0306.2015.24.062
收稿日期:2015-05-04
作者简介:郭永月(1988-),女,硕士研究生,研究方向:生物活性物质与保健功能因子,E-mail:xy4z@sina.com。
* 通讯作者:陶眀煊(1970-),男,硕士,副教授,研究方向:生物活性物质与保健功能因子,E-mail:45017@njnu.com。
基金项目:江苏省高校自然科学基础研究项目(10KJD550003)。
长期大量饮酒,将导致酒精性脂肪肝、肝炎、肝
纤维化、肝硬化甚至发展成为肝癌[1-2]。日益严重的酒
精性肝损伤(Alcoholic liver disease,ALD),需找出一
种天然有效无毒的药物来治疗,现在市场上虽有针
对酒精所致肝损伤的药物,如糖皮质类固醇、多烯磷
脂酰胆碱、美他多辛等,但这些药却不能改善酒精性
脂肪肝[3-4]。据报道食用菌多糖具有清除自由基、抗氧
化、保护生物细胞膜、延缓衰老及提高机体免疫等作
用[5-7],因此考虑从食用菌中寻找出舒肝解毒的天然
产品。黑牛肝菌学名枣铜色牛肝菌(Boletus aereus),
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Science and Technology of Food Industry 营养与保健
2015年第24期
是一种世界性珍稀食用菌,在我国云南等地分布广
泛,在欧洲及非洲也有分布[8-9]。它不但味道鲜美营养
丰富,还具有清热消暑、解烦、舒筋活血、抗癌、抗肿
瘤、抗病毒等功效[10-13]。此外,黑牛肝菌中富含多糖类
物质,具有补血、养发、抗癌等功效[14]。
本实验通过研究黑牛肝菌多糖(RPBA)对急性
酒精性肝损伤模型小鼠血清生化指标及体内抗氧化
能力的影响,评价其对急性酒精性肝损伤的改善作
用,旨在为黑牛肝菌功能性保健食品的研制和开发
提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
ICR雄性小鼠 6周龄左右,体重(20±2)g,在江
苏省中医院动物饲养中心饲养,实验动物许可证编
号SYXK(苏)2014-0047;全价颗粒饲料 江苏省中
医院动物饲养中心;黑牛肝菌 云南丽江市古城区
喜玛拉雅贸易有限责任公司;AST、ALT和TG试剂
盒 南京建成生物技术工程研究所;氯化硝基四氮
唑蓝(NBT) 上海恒星应用化学研究所;5′-二硫
双-2-硝基苯甲酸(DTNB) 南京卓尔有限公司;乙
二胺四乙酸(EDTA) 南京宁试化学试剂有限公司;
联苯双酯滴丸 浙江医药有限公司新昌制药厂;四
乙氧基丙烷(TEP) FLUKA公司;谷胱甘肽(GSH)
美国Sigma公司;磺基水杨酸 上海久亿化学试剂公
司南京分公司。
722可见分光光度计 上海精密科学仪器有限
公司;GL-22M高速冷冻离心机 湖南赛特湘仪离心
机厂;超声破碎仪 宁波新芝生物科技有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 黑牛肝菌多糖的制备 取黑牛肝菌子实体经
烘干粉碎过60目筛,取其细粉10 g,按料液比1 ∶20
加入蒸馏水,在90 ℃恒温水浴中浸提3 h,冷却后
5000 r/min离心10 min,滤渣再反复提取2次,分别收
集上清液,旋转蒸发浓缩至原体积的1/4,加入3倍体
积95%乙醇沉淀多糖,于4 ℃冰箱内静置12 h。然后
5000 r/min离心10 min,回收上清液,沉淀依次用无
水乙醇、丙酮、乙醚抽滤洗涤除去小分子物质,65 ℃
低温烘干后即得黑牛肝菌粗多糖[15-17]。
取适量黑牛肝菌粗多糖粉末溶解于少量蒸馏水
中。按Sevag法[18](多糖溶液∶Sevag试剂=5∶1)脱蛋白5
至6次,直至无变性蛋白质出现为止,将脱蛋白后的
溶液装入透析袋中流水透析48 h,再用蒸馏水透析
24 h,透析液用3倍体积95%乙醇沉淀多糖,离心后将
沉淀低温干燥,即得到精制黑牛肝菌多糖(RPBA)。
1.2.2 酒精诱导肝损伤动物模型的建立 60只小鼠
适应性喂养3 d后,随机分为6组,每组10只,分别为
空白对照组、模型组、联苯双酯阳性对照组和RPBA
高、中、低剂量处理组。RPBA样品及联苯双酯用蒸馏
水配制,每天灌胃一次,灌胃剂量分别为100、200、
400、150 mg/kg·bw,连续灌胃30 d,实验期间供给全
价颗粒饲料,不限制饮食饮水。空白组和模型组前
30 d灌胃等剂量蒸馏水。每周称量两次小鼠体重,及
时根据体重变化调整药物供给量,并观察小鼠状态。
实验至第31 d,各组小鼠禁食不禁水12 h后,阳性对
照组、多糖组及模型组以12 mL/kg·bw的量,用50%
浓度的乙醇溶液灌胃,建立小鼠急性肝损伤模型,空
白对照组灌胃等体积的蒸馏水。12 h后,小鼠摘眼球
取血并分离血清,用于测定谷丙转氨酶(ALT)、谷
草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)及谷胱甘肽过氧
化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化
氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)
水平[19-20]。
1.2.3 指标测定 ALT、AST活性及TG含量测定:将
血样静置2 h,3000×g离心10 min后取上清,分别按照
ALT、AST和TG试剂盒说明书提供的方法测定。
SOD活性:按Stewert等采用的NBT光化还原法测
定 [21];CAT活性:采用紫外吸收法测定 [22];GSH-Px活
性:采用DTNB法测定 [23];MDA含量:采用TBA法测
定[24];GSH含量:按文献[25]方法测定。
1.3 统计方法
结果以x±s表示,采用DPS 13.50统计软件进行单
因素方差分析,以p<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果与分析
2.1 RPBA对酒精所致急性损伤小鼠血清AST、ALT
和TG水平的影响
由表1可以看出,模型组中AST、ALT和TG水平显
著高于空白对照组(p<0.05),说明造模成功。多糖各
剂量组的AST、ALT和TG水平随着多糖剂量的增大而
逐渐降低,且均与模型组存在显著性差异。多糖高剂
量组的AST和TG水平与阳性对照组无显著性差异,
ALT水平虽高于阳性对照,但与模型组相比仍大大
降低,提示RPBA可改善急性酒精性肝损伤造成的小
鼠血清转氨酶(AST和ALT)升高及TG含量升高,且存
在一定的剂量-效应关系。
2.2 RPBA对酒精所致急性损伤小鼠血清中SOD、
CAT和GSH-Px活力的影响
由表2可知,模型组血清中SOD、CAT和GSH-Px
活力均显著低于空白对照组(p<0.05),表明造模成
功。给予RPBA灌胃处理后,SOD、CAT和GSH-Px活力
逐渐提高,且有一定的剂量-效应关系。高剂量RPBA
灌胃组SOD、CAT和GSH-Px活力与阳性对照组处在
同一水平,说明RPBA可改善酒精所致小鼠体内以上
组别 AST(U/L) ALT(U/L) TG(mmol/L)
空白对照组 32.64±5.43d 27.96±6.03e 1.26±0.081c
模型组 74.93±6.76a 330.16±23.97a 1.66±0.036a
多糖低剂量组 67.01±5.44b 256.97±5.26b 1.51±0.030b
多糖中剂量组 62.92±8.21b 227.53±29.46bc 1.38±0.021c
多糖高剂量组 47.49±1.77c 197.71±17.38c 1.27±0.042c
阳性对照组 46.55±1.32c 169.47±11.05d 1.31±0.027c
注:同列不同小写字母表示在5%水平差异显著,相同字母表
示差异不显著,表2、表3同。
表1 RPBA对血清中AST、ALT和TG含量的影响(x±s,n=10)
Table 1 Effects of RPBA on AST,ALT activities and TG
content in serum of mice(x±s,n=10)
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营养与保健
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各抗氧化酶的活力。
2.3 RPBA对小鼠血清MDA和GSH含量的影响
MDA是机体受到氧自由基的攻击而产生的脂质
过氧化产物,测定MDA的含量可反映机体内脂质过
氧化的程度。GSH是非酶抗氧化体系中重要的自由
基清除剂,对于维持生物体内的氧化还原平衡具有
重要的意义。由表3可知,正常小鼠中,MDA含量比较
低,但用大量酒精灌胃(模型组)后,血清中MDA含量
显著(p<0.05)增加,是空白对照组的2.44倍,表明酒
精代谢引发了小鼠体内的氧化应激。与空白对照组
相比,模型组GSH含量显著降低(p<0.05)。RPBA各剂
量组可显著(p<0.05)降低酒精肝损伤小鼠血清MDA
含量,并提高GSH含量,表明RPBA能够通过升高小
鼠体内GSH含量等途径增强机体的抗氧化能力,并
降低酒精引发的小鼠体内脂质过氧化水平。
3 讨论
乙醇在体内代谢过程中会产生氧化应激作用,
氧化应激产生的活性氧自由基,可作用于肝细胞损
伤细胞膜,导致AST和ALT释放入血[25-27]。另外,酒精
代谢还将导致烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)/烟酰
胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)降低,使细胞内的氧化还
原状态改变,同时乙醇还动员周围的脂肪组织,增加
脂肪合成原料,使得细胞内形成大量脂滴,导致肝细
胞内TG的升高[28-29]。因此,通过AST、ALT和TG的测定
来反映酒精对肝细胞的损坏程度及RPBA对ALD的
保护作用。本研究结果表明,灌胃RPBA可显著抑制
酒精引发的小鼠血清中ALT、AST和TG水平的升高,
间接反映出RPBA对肝损伤的保护作用。
自由基是人体氧化作用过程中的副产物,过多
的自由基将会导致机体发生病变,引起生物细胞氧
化损伤,而肝细胞是活性氧攻击的主要对象[30]。脂质
过氧化也是造成酒精性肝损伤的重要发病因素,乙
醇代谢过程中产生大量自由基可激活磷脂酶,并进一
步促发过氧化反应,导致细胞磷脂双层膜通透性改
变,从而改变与膜结合的酶、受体和离子通道等[31-32],
SOD、CAT、GSH-Px和GSH构成了生物体内最主要的
抗氧化酶及非酶体系,能够有效抑制自由基引发的
氧化损伤[33-35],而MDA是膜脂质过氧化的终端产物,
可引起细胞代谢及功能障碍甚至死亡 [36],因此通过
测定上述指标可以间接反映出RPBA对ALD的改善
作用。实验结果表明,RPBA各剂量组可显著提高血
清中SOD、CAT和GSH-Px的活力及GSH含量并降低
MDA含量,并呈现一定的量效关系,表明RPBA可通
过提高机体对自由基的防御能力而减轻酒精对肝脏
的损伤。
4 结论
RPBA可提高小鼠血清中的SOD、CAT、GSH-Px
活力及GSH水平,从而抑制脂质过氧化进程,降低小
鼠血清中的ALT、AST及TG水平,在预防酒精性肝损
伤方面具有较好的效果,由此也提示黑牛肝菌是一
种具有开发前景的天然保健品。
参考文献
[1] Diehl A M. Liver disease in alcohol abusers:clinical perspective
[J]. Alcohol,2002,27(1):7-11.
[2] 魏新峰,于元元. 酒精性肝损伤的实验研究进展[J]. 贵阳中
医学院学报,2006,28(2):56-58.
[3] Reuben A. Alcohol and the liver[J]. Current Opinion in
Gastroenterology,2008,24(3):328-338.
[4] Day C P . Treatment of alcoholic liver disease[J]. Liver
Transplantation,2007,13(11):69-75.
[5] 李波,徐贵华,芦菲,等. 七种云南产食用菌的抗氧化活性
研究[J]. 食用菌,2010(2):66-67.
[6] 李芳亮,赵立冬,高杨,等. 两种食用菌多糖提取物的抗氧
化活性比较研究[J]. 湖南农业大学学报:自然科学版,2011
(9):108-111.
[7] 孙娟,郑朝辉,刘磊,等. 4种珍稀食用菌粗多糖的抗氧化活性
研究[J].安徽农业大学学报:自然科学版,2011,38(3):404-409.
[8] Owen L M,Ernst E. Both Boletus dupainii in North America
[J]. Field Mycology,2002,3(3):103-104.
[9] 邓百万,陈文强. 美味牛肝菌营养菌丝体与野生子实体品
质分析[J]. 中国食用菌,2004,23(5):44-46.
[10] 李志洲. 美味牛肝菌多糖的抗氧化性[J]. 食品与发酵工
业,2007,33(4):49-51.
[11] 王一心,杨桂芝,狄勇,等. 黑牛肝菌对高脂血症大鼠血脂
及抗氧化能力的影响[J]. 中华预防医学杂志,2004,38(5):6-8.
[12] 江正辉,王泰龄. 酒精性肝病[M]. 北京:中国医药科技出
版社,2001:57-59.
[13] 杨万枝. 酒精性肝病发病机制研究进展[J]. 安徽医科大学
学报,2012,47(1):97-100.
组别
血清SOD
(U/mL)
血清CAT
(U/mL)
血清GSH-Px
(U/mL)
空白对照组 15.17±0.49a 169.17±19.55a 50.49±2.41a
模型组 10.14±0.28e 99.67±9.04c 27.17±1.77d
多糖低剂量组 11.45±0.28d 107.33±10.98bc 29.61±2.96d
多糖中剂量组 12.52±0.30c 105.63±5.90c 38.46±1.82c
多糖高剂量组 14.25±0.40b 118.47±7.61bc 41.47±1.44bc
阳性对照组 13.76±0.43b 128.13±2.46b 44.03±1.19b
表2 RPBA对小鼠血清SOD、CAT和GSH-Px活力的影响
(x±s,n=10)
Table 2 Effects of RPBA on SOD,CAT and GSH-Px activities
in serum of mice(x±s,n=10)
组别 血清MDA(nmol/mL) 血清GSH(μmol/L)
空白对照组 46.24±3.16c 850.19±20.20a
模型组 112.94±6.66a 648.05±7.07d
多糖低剂量组 89.06±5.49b 657.81±8.75d
多糖中剂量组 77.29±4.49b 670.67±31.65d
多糖高剂量组 78.59±9.98b 717.57±31.99c
阳性对照组 81.76±0.17b 816.62±5.05b
表3 RPBA对小鼠血清MDA和GSH含量的影响(x±s,n=10)
Table 3 Effects of RPBA on MDA and GSH contents in serum
of mice(x±s,n=10)
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2015年第24期
[14] 唐薇,鲁新成. 美味牛肝菌多糖的生物活性及其抗S-180
肿瘤的效应[J]. 西南师范大学学报:自然科学版,1999(4):
478-481.
[15] 杨立红,刘德林,钟旭生. 野生牛肝菌多糖的分离鉴定及
其抗氧化性研究[J]. 食品科学,2008,29(8):335-338.
[16] 朱建华,杨晓泉. 真菌多糖研究进展—结构、特性及制备
方法[J]. 中国食品添加剂,2005(6):75-80.
[17] 李磊,王卫国. 真菌多糖药理作用及其提取、纯化研究进
展[J]. 河南工业学报:自然科学版,2008(2):87-92.
[18] 齐惠玲,魏绍云,王继伦,等. Sevag法去除白及多糖中蛋
白的研究[J]. 天津化工,2000(2):20-21.
[19] 赵敏,池莉平,王凤岩,等. 小鼠急性酒精性肝损伤模型的
建立及应用[J]. 华南预防中医,2005,31(1):14-16.
[20] 齐慧慧,宋佳,陈岳祥. 小鼠急性酒精性肝损伤模型的建
立[J]. 世界华人消化杂志,2012(9):759-763.
[21] Stewert R R,Bewley J D. Lipid peroxidation associated with
accelerated aging of soybean axes[J]. PlantPhysiol,1980,65(2):
245-248.
[22] Chiang M L,Chou C C. Expression of superoxide dismutase,
catalase and thermostable direct hemolysin by,and growth in the
presence of various nitrogen and carbon sources of heat-shocked
and ethanol-shocked Vibrio parahaemolyticus [J]. International
Journal of Food Microbiology,2008,121(3):268-274.
[23] 董卫华,赵春澎,谷兆侠,等. 宁夏枸杞谷胱甘肽过氧化物
酶的测定[J]. 新乡医学院报,2006,23(1):31-32.
[24] 中华人民共和国卫生部,保健食品检验与评价技术规范
(2003年版)[S]. 2003:110-112.
[19] Akira N,Kiyofumi Y,Li B Z. Interleukin 6 protects pc12
cells from 4-hydroxynonenal-induced cytotoxicity by increasing
intracellular glutathione levels [J]. Free Radical Biology &
Medicine,2002,32(12):1324-1332.
[25] Nanjj A A.Apoptosis and alcoholic liver disease[J]. Seminars
in Liver Disease,1998,18(2):87-90.
[26] Harmeet M,Randal J. Kaufman. Endoplasmic reticulum stress
in liver disease[J]. Journal of Hepatology,2011,54(4):795-809.
[27] 彭文锋,钟政永. ADA与ALT、AST、GGT联合检测在肝脏
疾病诊断中的意义[J]. 当代医学,2011,17(9):4-6.
[28] 朱萍. 线粒体与酒精性肝病关系的研究[D]. 济南:山东大
学医学院,2007.
[29] 谭华炳,贺琴,李金科. 脂肪肝肝组织脂质含量与肝功能
关系的实验研究[J]. 山西医药杂志,2009,38(1):25-27.
[30] 辛晓林,刘长海. 中药多糖抗氧化作用研究进展[J]. 北京
中医药大学学报,2000,23(5):54-55.
[31] Loguerill C,Federico A. Oxidative stress in viral and alcoholic
hepatitis [J]. Free Radical Biology & Medicine,2003,34(1):
1-10.
[32] Jones B E,Liu H,Lo CR,et al. Cytochrome P450 2E1
expression induces Hepatocyte resistance to cell death from
oxidative stress[J]. Antioxid Redox Signal,2002,4(5):701-709.
[33] 张俊会,王谦. 杏鲍菇多糖的抗氧化活性研究[J]. 中国食
用菌,2002,22(2):38-39.
[34] 习雪峰,王单一,熊正英,等. 云芝多糖对运动训练大鼠脑
组织抗氧化能力和ATPase活性的影响[J]. 食品科学,2012,33
(5):256-259.
[35] Penninckx M. A short review on the role of glutathione in
the response of yeast to nutritional,environmental,and oxidative
stresses[J]. Enzyme Microb Technol,2000,26(9-10):737-742.
[36] Masalkar P D,Abhang S A. Oxidative stress and antioxidant
status in patients with alcoholic liver disease[J]. Clinica Chimica
Acta,2005,355(1-2):61-65.
[4] Soyer A,魻zalp B,Dalm覦s,譈,et al. Effects of freezing temperature
and duration of frozen storage on lipid and protein oxidation in
chicken meat[J]. Food Chemistry,2010,120(4):1025-1030.
[5] Bertram H,Kristensen M,Andersen H. Functionality of
myofibrillar proteins as affected by pH,ionic strength and heat
treatment-a low-field NMR study [J]. Meat Science,2004,68
(2):249-256.
[6] Albarracín W,Sánchez I,Grau R,et al. Salt in food processing;
usage and reduction:a review[J]. International Journal of Food
Science & Technology,2011,46(7):1329-1336.
[7] 徐慧文,谢晶,汤元睿,等. 冰藏和冷藏条件下金枪鱼品质
变化的研究[J]. 食品工业科技,2014(13):321-326.
[8] Hong H,Luo Y,Zhou Z,et al. Effects of low concentration of
salt and sucrose on the quality of bighead carp(Aristichthys
nobilis) fillets stored at 4℃ [J]. Food Chemistry,2012,133(1):
102-107.
[9] Shi C,Cui J,Luo Y,et al. Effect of lightly salt and sucrose on
rigor mortis changes in silver carp(Hypophthalmichthys molitrix)
stored at 4℃ [J]. International Journal of Food Science &
Technology,2014,49(1):160-167.
[10] Goulas A,Kontominas M. Effect of salting and smoking-
method on the keeping quality of chub mackerel(Scomber
japonicus):biochemical and sensory attributes[J]. Food Chemistry,
2005,93(3):511-520.
[11] Xu Y,Xia W,Yang F,et al. Effect of fermentation temperature
on the microbial and physicochemical properties of silver carp
sausages inoculated with Pediococcus pentosaceus [J]. Food
Chemistry,2010,118(3):512-518.
[12] Kilinc B,Cakli S. Chemical,microbiological and sensory
changes in thawed frozen fillets of sardine(Sardina pilchardus)
during marination[J]. Food Chemistry,2004,88(2):275-280.
[13] Ge L,Xu Y,Xia W. The function of endogenous cathepsin
in quality deterioration of grass carp(Ctenopharyngodon idella)
fillets stored in chilling conditions [J]. International Journal of
Food Science & Technology,2015,50(3):797-803.
[14] Gaarder M,Bahuaud D,Veiseth E,et al. Relevance of
calpain and calpastatin activity for texture in super-chilled and
ice -stored Atlantic salmon(Salmo salar L.) fillets [J]. Food
Chemistry,2012,132(1):9-17.
[15] Stefánsson G,Nielsen H,Sk覽ra T,et al. Frozen herring as
raw material for spice-salting[J]. Journal of the Science of Food
and Agriculture,2000,80(9):1319-1324.
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