全 文 ：· 4444 · 中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年12月第30卷第12期 CJTCMP , December 2015, Vol . 30, No. 12
·研究报告·
小飞蓬总生物碱提取工艺优选
邵帅，严铭铭，吴程彦，刘畅，付美丽，田双，王天宁
（长春中医药大学，长春 130117）
摘要：目的：优选小飞蓬中总生物碱的提取工艺。方法：以总生物碱提取率为指标，采用单因素和正交试验
法考察提取次数、提取时间、乙醇浓度及料液比对总生物碱提取率的影响。结果：小飞蓬中总生物碱的最佳提取
工艺为12倍量90%乙醇提取3次，每次1h。结论：优选的提取工艺稳定可行，提取率高。
关键词：小飞蓬；总生物碱；正交试验；提取工艺
基金资助：国家重大新药创制专项（No.2009ZX09103-323）
Optimization of extraction process of total alkaloids from Erigeron canadensis L.
SHAO Shuai, YAN Ming-ming, WU Cheng-yan, LIU Chang, FU Mei-li,
TIAN Shuang, WANG Tian-ning
( Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China )
Abstract: Objective: To optimize the extraction process of total alkaloids from Erigeron canadensis L. Methods:
The single factor test and orthogonal test were used to observe the eff ects of some extraction process, such as extraction times,
extraction time, concentration of ethanol and solid-liquid ratio, on the extraction rate of total alkaloids. Results: The most optimal
extraction process was as follows: extracted three times with 12 times the amount of 90% ethanol for 1h. Conclusion: This
optimized process is not only stable and feasible but also high-effi ciency.
Key words: Erigeron canadensis L.; Total alkaloids; Orthogonal test; Extraction process
Funding: National Development Program of Signifi cant New Drug (No.2009ZX09103--323)
通讯作者：严铭铭，吉林省长春市净月旅游开发区博硕路1035号长春中医药大学，邮编：130117，电话：0431-86172337
E-mail：ss36038612@163.com
小飞蓬为菊科植物小飞蓬Erigeron canadensis L.[1]的干燥全
草，又名祁州一枝蒿、白花蛇舌草、竹叶艾、鱼胆草、苦蒿，广泛
分布于中国各地。全草入药具有清热利尿、散瘀消肿之功效，用
于治疗肠炎、痢疾、传染性肝炎、胆囊炎、中耳炎等症[2]。近年来
本课题组对该药材进行了深入研究，已分离出黄酮、生物碱、三
萜、有机酸及挥发油等40余种化合物[3-7]，并对其总黄酮有效部
位申报了国家专利。本研究拟在前期工作的基础上，用乙醇从小
飞蓬中提取总生物碱，并以甜菜碱为对照品，用雷氏盐比色法[8]
测定其含量，同时采用正交试验法对提取条件进行优化。
材料
1. 仪器 UV-170 0型分光光度计（日本岛津公司）；
METTLER-AE240型电子分析天平（瑞士METTLER公司）；
BUCHI旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）
2. 药物与试剂 甜菜碱对照品（购于中国药品生物制品检
定所，批号：110894-200503）；利英纳克盐（国药集团化学试剂
有限公司）；试剂均为分析纯。
小飞蓬采于吉林省长白县，经长春中医药大学姜大成教授鉴
定为菊科飞蓬属植物小飞蓬Erigeron canadensis L.的干燥全草。
方法与结果
1. 总生物碱含量测定
1.1 对照品溶液制备 精密称取甜菜碱对照品133.1mg，置于
100mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
1.2 供试品溶液制备 精密称取小飞蓬粗粉10g，加入乙醇
100mL，加热回流提取2次，每次1h，合并提取液，过滤，滤液蒸
干，即得小飞蓬总生物碱提取物。取上述提取物2g，置于100mL
容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
1.3 最大吸收波长的确定 精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各2mL，置于100mL烧杯中，加水至30mL，用2mol/L盐酸调pH
值至1，冷至5℃，加入20mL雷氏盐，于5℃陈化3-4h，抽滤，沉淀
用乙醚洗涤，滤过，所得沉淀用丙酮溶解并转移至25mL容量瓶
中，定容，摇匀。同法制得空白溶液，在300-700nm进行全波长扫
描。结果显示二者均在523nm处有最大吸收，故确定检测波长为
523nm。见图1。
1.4 标准曲线绘制 分别精密吸取6.00、8.00、10.00、
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12.00、14.00、16.00mL对照品溶液置于100mL烧杯中，按“1.3”
项下方法显色，在523nm处测定吸光度，以吸光度（A）为纵
坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线：A=1.328C-0.3135
（r=0.9997）。表明甜菜碱在0.3194-0.8518mg/mL范围内与吸
光度呈良好的线形关系。
1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10mL置于100mL容
量瓶中，按“1.3”项下方法显色，平行测定6次，计算A的RSD为
0.56％，表明仪器精密度良好。
1.6 稳定性试验 取对照品溶液和供试品溶液，分别于制备
后15、30、45、60、120min测定A，结果RSD为0.91％表明待测溶
液在2h内稳定。
1.7 重现性试验 取同一批号样品6份，按“1.2”项下方法制
备供试品溶液，进行含量测定，结果RSD为0.79％，表明该方法
重现性良好。
1.8 加样回收率试验 精密称取5份已知含量的小飞蓬总生
物碱粗干膏约100mg置于100mL烧杯中，再分别加入甜菜碱对照
品1mg和50mL蒸馏水，超声使其溶解，过滤，滤液转移至100mL
的容量瓶中，蒸馏水定容至刻度。按“1.3”项下方法显色，结果
平均回收率99.43%，RSD为0.90%。
1.9 供试品溶液测定 精密吸取小飞蓬供试品溶液10mL，其
余步骤同“1.3”项，在523nm下测定其吸光度，带入标准曲线计算
其总生物碱含量。
2. 提取工艺优选 通过预试验考察，选取提取次数、提取
时间、溶剂浓度和溶剂用量为考察因素，以总生物碱含量为考察
指标，采用L9（34）正交表进行试验，确定最佳提取工艺。因素水
平见表1，正交试验结果见表2，方差分析见表3。
由直观分析可知，各因素对提取工艺的影响顺序为
A>D>C>B。方差分析表明，因素A有极显著性差异，因素C、D有
显著性差异，因素B对实验结果无明显影响，所以最终确定以
总生物碱含量为指标进行测定时，小飞蓬总生物碱的最佳提取
工艺为A3B1C2D3，即：90%乙醇提取3次，每次1h，溶剂用量为12
倍量。
3. 验证实验 称取小飞蓬3份，每份100g，按最佳提取工
艺进行验证试验，结果表明总生物碱平均含量6.02%，RSD为
1.10%。说明此工艺条件稳定、可行。
讨论
在对小飞蓬进行化学成分研究时，已分离出甜菜碱、盐酸小
檗碱、硫酸阿托品等生物碱类成分[5]，且甜菜碱含量较高，故选
择甜菜碱作为对照品测定其总生物碱含量。
本研究采用雷氏盐比色法进行含量测定，之前进行了验证
试验。取雷氏沉淀少许，丙酮溶解后，薄层板展开，展开剂为丙
酮∶无水乙醇∶浓盐酸=5∶3∶0.6，生物碱斑点几乎全部被沉淀下
来，达到了预期的效果，同时证实了小飞蓬总生物碱的含量测定
方法选择雷氏盐沉淀法是可行的。另外，雷氏盐要现用现配，因
表1 小飞蓬总生物碱提取工艺正交试验因素水平
水平 提取次数（A） 提取时间（B） 醇浓度（C） 加醇量（D）
1 1 1.0h 85%乙醇 8倍
2 2 1.5h 90%乙醇 10倍
3 3 2.0h 95%乙醇 12倍
图1 对照品（上）和供试品（下）的最大吸收波长
表2 小飞蓬总生物碱提取工艺正交试验结果（n=2）
实验序号 A B C D 总生物碱含量（%）
1 1 1 1 1 3.05
2 1 2 2 2 3.69
3 1 3 3 3 3.89
4 2 1 2 3 5.51
5 2 2 3 1 4.96
6 2 3 1 2 4.86
7 3 1 3 2 5.53
8 3 2 1 3 5.78
9 3 3 2 1 5.68
Ⅰ 10.6300 14.0900 13.6900 13.6900
Ⅱ 15.3300 14.4300 14.8800 14.0800
Ⅲ 16.9900 14.4300 14.3800 15.1800
Ⅰ/3 3.5433 4.6967 4.5633 4.5633
Ⅱ/3 5.1100 4.8100 4.9600 4.6933
Ⅲ/3 5.6633 4.8100 4.7933 5.0600
R 2.1200 0.1133 0.3967 0.4967
表3 小飞蓬总生物碱提取工艺正交实验方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 P值
A 7.2550 2 3.6275 282.4187 <0.05
B 0.0257 2 0.0128 1.0000
C 0.2380 2 0.1190 9.2656 <0.5
D 0.3980 2 0.1990 15.4939 <0.5
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为在室温下可分解。且雷氏盐的丙酮或丙酮-水溶液的吸收值，
随时间而变化，故应尽快的测定。
参 考 文 献
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.北京:科学
出版社,1985:348
[2] 林镕.中国植物志.第74卷.北京:科学出版社,1985:135
[3] 邵帅,严铭铭,毕胜男,等.小飞蓬化学成分的研究.中国药学
杂志,2009,44(14):1053
[4] 邵帅,严铭铭,毕胜男,等.小飞蓬中黄酮类化学成分研究.中国
中药杂志,2012,37(19):2902
[5] 严铭铭,邵帅,叶豆丹,等.小飞蓬化学成分的研究.中草药,
2012,43(10):1920
[6] 邵帅,严铭铭,毕胜男,等.小飞蓬挥发性化学成分的GC-MS
分析.中国实验方剂学杂志,2012,18(8):116
[7] 邵帅,严铭铭,毕胜男,等.小飞蓬药材薄层鉴别与含量测定.
中国实验方剂学杂志,2012,18(24):101
[8] 王曙滨,宋宏刚.雷氏盐比色法测定川芎季铵型总生物碱的
含量.中南药学,2009,7(11):824-826
（收稿日期：2014年10月14日）
·研究报告·
电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠JAK2/STAT3
mRNA及神经元凋亡的影响
韩德雄1，张莺1，冯培培2，王改梅1，刘喆2
（1浙江中医药大学附属第三医院，杭州 310005；2浙江中医药大学第三临床医学院，杭州 310053）
摘要：目的：观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3 mRNA及神经元凋亡的影响，探讨电针抗神经
元凋亡的机制。方法：将90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组，每组30只，每组按照再灌注时
间分为再灌注后2、24、72h 3个亚组，各亚组大鼠均为10只，采取改良大脑中动脉线栓法（MCAO）复制局灶性
脑缺血再灌注模型，缺血90min后再灌注。假手术组仅分离暴露右侧颈总动脉不插线栓。模型组和电针组按造模
方法造模，造模成功后模型组不进行治疗干预，电针组采用韩氏电针治疗仪，2/15Hz疏密波，刺激百会穴与内关
穴，持续30min。各亚组完成相应电针治疗后即断头取脑。运用TUNEL法检测凋亡阳性细胞数，RT-PCR检测JAK
mRNA、STAT mRNA表达。结果：再灌注2h后，模型组和电针组之间凋亡阳性粒细胞数、JAK2 mRNA、STAT3
mRNA均增高，两组差异无统计学意义，与假手术组比较有显著性差异（P<0.01）；再灌注24h、72h后，电针组
较模型组差异有统计学意义（P<0.05）。结论：电针能通过抑制脑缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3的过度表达达到
脑保护、抗神经元凋亡的作用。
关键词：电针；脑缺血再灌注；JAK2/STAT3；神经元凋亡
基金资助：浙江省自然科学基金项目（No.LQ12H27001），国家中医药管理局中医药重点学科（针灸学）建
设经费资助（No.国中医药发[2009]30号），浙江省针灸医学重点科技创新团队（No.浙委任[2014]3号）
Effects of electroacupuncture on JAK2/STAT3 mRNA and neuronal apoptosis of
rats with focal cerebral ischemia and reperfusion
HAN De-xiong1, ZHANG Ying1, FENG Pei-pei2, WANG Gai-mei1, LIU Zhe2
( 1The Third Affi liated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310005, China; 2The 3rd Clinical Medical
College of Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China )
Abstract: Objective: To observe the eff ects of electroacupuncture on JAK2/STAT3 mRNA and neuronal apoptosis of
rats with cerebral ischemia/reperfusion injury, and explore the mechanism of anti-apoptosis with electroacupuncture. Methods:
90 male SD rats were randomly divided into sham group, model group and electroacupuncture group, each of which was divided
into three subgroups according to reperfusion time (2, 24, 72h), each subgroup for 10 rats. The model of focal cerebral ischemia
通讯作者：刘喆，杭州市滨江区滨文路548号浙江中医药大学第三临床医学院，邮编：310053，电话：0571-86613516
E-mail：ssrsliu@163.com