全 文 ：生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2007, 59 (3): 285-292
http://www.actaps.com.cn
285
研究论文
Received 2006-11-09 Accepted 2007-01-25
This work was supported by the Scientific Research Foundation for Doctor in Nanhua University (No. 5-03-XJQ-03-044).
*Corresponding author. Tel: +86-734-8281785; E-mail: hubigene@yahoo.com.cn
** Contributed equally to this work.
青藤碱对吗啡依赖与戒断小鼠小脑与脊髓 NO/nNOS 系统的
影响
刘 珍 1,**，郑济芳 2,**，杨露青 2，易 岚 2，胡 弼 1,*
南华大学 1 生理学教研室；2 遗传学教研室，衡阳 421001
摘 要：本文旨在探讨青藤碱对吗啡依赖与戒断小鼠的小脑和胸腰段脊髓中一氧化氮(nitric oxide, NO)/ 神经元型一氧化氮合
酶(neural nitric oxide synthase, nNOS)系统的影响及作用机制。采用吗啡剂量递增法建立小鼠吗啡依赖模型，用纳洛酮激发
戒断症状，评价小鼠急性戒断时齿颤、扭体、直立、喷嚏、眼睑下垂等戒断症状，对成瘾小鼠用青藤碱(40 mg/kg, i.p.)
治疗后，再用纳洛酮激发观察戒断症状。半定量 RT-PCR 检测小鼠小脑和胸腰段脊髓 nNOS mRNA 表达变化，化学比色
法和硝酸还原酶法分别测定小鼠小脑和胸腰段脊髓组织匀浆的 nNOS 活性与 NO 含量。结果显示：(1)青藤碱可以扭转由吗
啡依赖引起的小鼠体重下降的趋势，减轻小鼠急性戒断时齿颤、扭体、直立、喷嚏、眼睑下垂等戒断症状；( 2 )青藤碱
可降低小鼠吗啡依赖与戒断时在小脑与胸腰段脊髓中异常上调的 nNOS mRNA 水平，使酶活性下降到接近对照组水平。
nNOS 催化产生的 NO 含量与酶活性的变化一致；(3)单独使用青藤碱，小鼠没有出现类似吗啡引起的戒断症状，小脑与胸
腰段脊髓中 nNOS mRNA 水平及酶活性没有异常升高。上述结果表明，青藤碱本身无成瘾性，但能显著减轻吗啡依赖小
鼠的戒断征状，其作用机制可能与青藤碱影响小脑与脊髓中的 NO/nNOS 系统有关。
关键词：青藤碱；吗啡；戒断；一氧化氮合酶
中图分类号：Q 4 2 6
Effects of sinomenine on NO/nNOS system in cerebellum and spinal cord of morphine-
dependent and withdrawal mice
LIU Zhen1,**, ZHENG Ji-Fang2,**, YANG Lu-Qing2, YI Lan2, HU Bi1,*
1Department of Physiology; 2Department of Genetics, Nanhua University, Hengyang 421001, China
Abstract: To explore the effect of sinomenine on the nitric oxide (NO)/neural nitric oxide synthase (nNOS) system in the cerebellum
and spinal cord of morphine-dependent and morphine-withdrawal Kunming mice, mice were subjected to injection of morphine with an
increasing dose for 5 d, and then were treated with sinomenine (40 mg/kg, i.p.) for another 5 d. Naloxone was used to develop acute
withdrawal, and the withdrawal syndromes, including teeth chattering, twisting, straightening, sneezing and ptosis, were investigated.
nNOS mRNA expressions in the cerebellum and spinal cord were determined by semi-quantitative RT-PCR. nNOS activity and NO level
were determined by the chemistry-colorimetry and nitrate reductase-reduction, respectively. The results obtained were as follows: (1)
Sinomenine restored the decrease in body weight and alleviated the signs of morphine-withdrawal in mice. (2) Sinomenine also reduced
the increases in nNOS mRNA expression and nNOS activity resulting from morphine-dependence, and simultaneously attenuated the
high level of NO in both tissues following morphine-withdrawal. (3) Administration of sinomenine alone did not develop physical
dependence in mice. The results obtained indicate that sinomenine may attenuate morphine addiction and significantly alleviate
morphine-withdrawal symptoms, and the mechanism may be associated with the effect of sinomenine on the NO/nNOS system in the
cerebellum and spinal cord.
Key words: sinomenine; morphine; withdrawal; nitric oxide synthase
DOI:10.13294/j.aps.2007.03.012
生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2007, 59 (3): 285-292286
哺乳动物的中枢神经系统(central nervous sys-
tem, CNS)中存在着一氧化氮(nitric oxide, NO) /神经
元型一氧化氮合酶(neural nitric oxide synthase, nNOS)
通路，该通路可能与吗啡耐受、戒断发生有关。吗
啡成瘾后，从突触前释放的兴奋性神经递质自由扩
散到突触后膜，与突触后膜的N- 甲基 -D-天冬氨酸
(N-methyl-D-aspartic acid, NMDA)受体结合，引起
膜去极化，开启钙离子通道，导致 Ca 2+ 内流；大
量内流的Ca2+ 与钙调蛋白结合，激活钙离子依赖型
nNOS，催化 L- 精氨酸氧化产生瓜氨酸和NO；NO
以自由扩散的方式通过细胞膜，作用于相邻的突触
前末梢和周围的星状胶质细胞，激活可溶性鸟苷酸
环化酶(soluble guanylate cyclase, sGC)，使 cGMP
水平提高；cGMP 可激活磷酸二酯酶，增加 cAMP
含量，而CNS中外源性和内源性 cAMP含量的提高
均可加重吗啡戒断症状[1,2]，因此，研究NO/nNOS
通路对了解吗啡依赖和戒断的作用机制具有重要意
义。直接或间接拮抗NO/nNOS 途径的关键酶活性
可能阻断NO/nNOS途径信号的传递[3,4]。NO是NO/
nNOS途径中一种重要的神经递质，nNOS是催化NO
在神经系统中生成的关键酶[1]。抑制 nNOS酶活性升
高可减轻吗啡戒断症状[5-7]，nNOS 基因敲除小鼠不
能产生吗啡耐受[8]。目前普遍认为，小鼠小脑与脊
髓是参与吗啡依赖与戒断形成的主要中枢组织。在
正常情况下，与其他组织相比，nNOS 基因在小脑
与脊髓中表达量最多[3]。小鼠吗啡依赖形成时，小
脑与胸腰段脊髓组织中 nNOS 基因表达显著升高；
纳洛酮激发戒断症状时，脊髓与小脑中 nNOS 活性
比吗啡依赖组急剧升高，NO 生成量增加[9]，这可
能是 nNOS 参与吗啡依赖与戒断的重要原因。
青风藤是防己科植物青藤及毛青藤的干燥藤
茎，青藤碱(sinomenine)是青风藤的主要化学成分，
化学结构类似于吗啡(图 1)，是目前所知的植物中
最强的组胺释放剂之一，有显著的镇痛、镇静、抗
炎、抑制免疫及降血压等功效[10,11]。研究表明，青
藤碱能减轻吗啡依赖大鼠的戒断症状，并降低戒断
后骤增的单胺类神经递质的含量[12] 。另外，青藤
碱自身没有奖赏和厌恶效应，能明显抑制小鼠吗啡
精神依赖模型的条件性位置偏爱(conditioned place
preference, CPP)的形成，且对已形成的CPP 有拮抗
作用[13,14]。然而，青藤碱作用于吗啡依赖小鼠时，
对小脑与脊髓NO/nNOS信号途径是否有影响尚未见
报道。本实验旨在检测青藤碱对小脑与脊髓 NO/
nNOS 系统中 nNOS mRNA 表达水平、nNOS 活性
及NO 含量的影响，探讨青藤碱对小鼠吗啡依赖与
戒断作用的分子机制。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器　　盐酸青藤碱(湖南正清制
药厂)，盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂)，纳洛酮
注射液(北京四环制药厂)，NO硝酸还原酶法试剂盒
与 nNOS 活性测定试剂盒(南京建成生物工程研究
所)，RT-PCR 试剂盒(上海生物工程有限公司)。752
型紫外分光光度计(北京市六一仪器厂)，核酸蛋白
紫外分析仪(Beckman Du640)，PCR 扩增仪(Hema
480)，数码凝胶图像分析系统(Kodak EDAS290)。
1.2 小鼠药物处理　　昆明种雄性小鼠 64 只，体
重 20~25 g，由本校实验动物中心提供。小鼠随机
分为 8 组，每组 8 只，置于(25±2) ºC、光照 12 h/d、
自由饮食条件下喂养 7 d以适应环境。参照文献[15,16]
用吗啡剂量递增法建立小鼠吗啡依赖模型。实验动
物分为两批，分组及各组处理因素见表 1，第 1、
2 批同时进行处理。第 1 批(5 d 组) ：设置 group1、
2、3、4 共四组，其中 group 1 为对照组(注射生
图 1. 青藤碱与吗啡的分子结构
Fig. 1. The molecular structures of sinomenine and morphine. A: Sinomenine. B: Morphine.
287刘 珍等：青藤碱对吗啡依赖与戒断小鼠小脑与脊髓 NO/nNOS 系统的影响
理盐水 5 d)，group 2 为吗啡成瘾组，group 3 为吗
啡成瘾后纳洛酮急性戒断组，group 4 为检测青藤碱
是否有成瘾性而设置的单独注射青藤碱组。每天8: 00
称量小鼠体重，采用吗啡剂量递增法，于第 1~5 天
对 group 2、3 小鼠注射吗啡(day 1：10 mg/kg；
day 2：20 mg/kg；day 3：30 mg/kg；day 4：40
mg/kg；day 5：50 mg/kg，注射时依据的体重为
当天测量的小鼠体重，每天注射 2 次，分别在 8:00
和 20:00，s.c.，0.15 mL/ 次)，建立吗啡成瘾模型。
对 group 1 和 4 的小鼠分别注射生理盐水(i.p.，0.15
mL/ 次)和青藤碱(40 mg/kg，i.p.，0.15 mL/ 次)。
第 5天，最后一次注射完成 2 h后，于 22: 00对group
1、3、4 小鼠注射纳洛酮(4 mg/kg，i.p.，0.15 mL/
次)，观察戒断症状，30 min 后与 group 2 小鼠同
时分别用 CO2 处死，解剖分离小脑和胸腰段脊髓组
织，置 -80 ºC 保存。第 2 批(10 d 组) ：设置 group
5、6、7、8 共四组，其中 group 5 为对照组(注射
生理盐水 10 d)，group 6 为吗啡成瘾后青藤碱治疗
组，group 7 是用青藤碱治疗吗啡成瘾小鼠后再用纳
洛酮急性戒断组。由于吗啡停药后，随着戒断时间
的延长，小鼠的身体依赖症状会逐渐减轻，为排除
时间因素的影响，设 group 8 为自然戒断组。前 5
d，对 group 5 注射生理盐水，对 group 6、7、8
注射吗啡，注射方式、剂量、时间皆与第 1 批相
同。后 5 d，青藤碱(40 mg/kg，i.p.，0.15 mL/ 次)
用于治疗已形成吗啡依赖的 group 6、7 小鼠。在停
止吗啡注射后的 5 d 内，group 8 和 5 小鼠一样注射
生理盐水(i.p.，0.15 mL/ 次)。于第 10 天最后一次用
药后 2 h 对 group 5、7、8 注射纳洛酮(4 mg/kg)以
激发急性戒断症状，观察记录小鼠戒断症状后，与
前 4 组一样用 CO2 处死，解剖分离小脑与胸腰段脊
髓组织，- 80 oC 保存。
1.3 体重变化与行为学评价　　处理期间每天 8:00
测量小鼠体重。小鼠注射纳洛酮后，置于透明烧
杯内 5 min 以适应环境。在戒断后 30 min 内，记
录小鼠相关戒断症状，最后进行评分。评分标准[15]
为：每 5 min 记录一次齿颤、扭体和直立出现的次
数，0’=0 次，1’=1~4 次，2’=5~9 次，3’ ≥ 10 次；
喷嚏与上睑下垂按每 2 min 内出现 1 次给 1’。
1.4 半定量 RT-PCR 分析　　参照文献[16]合成引
物，n N O S 基因引物序列：F ：5 ’ - T C A G T -
CTCCCAGGCTAATGG-3’，R： 5’CTGTCC-
ACCTGGATTCCTGT-3’，预期扩增片段为 200
bp；β-actin 基因引物序列：F：5’ TTTGATGT-
CACGCACGATTTCC-3’，R：5’ TGTGATGG-
TGGGAATGGGTCAG-3’，预期扩增片段为 514
bp。按说明书操作步骤，用 TRIz ol 试剂提取总
RNA。反转录反应体系 20 μL (含总 RNA 1 μg，1
mmol/L dNTP，5 mmol/L KCl，5 mmol/L MgCl2，
10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.3)，2.5 μg/μL Oligo (dT)
18 primer，1 U RNase inhibitor，2.5 U MuLV re-
verse transcriptase)，于 40 ºC 反应 30 min。PCR
反应体系 20 μL (含 cDNA 200 ng，1.5 mmol/L
MgCl2，1 U Taq DNA polymerase，250 mmol/L
dNTPs，nNOS 和 β-actin 的引物浓度各 0.5 μmol/
L)，PCR 扩增的条件为：94 ºC 30 s，56 ºC (β-
actin) / 60 ºC (nNOS) 30 s，72 ºC 40 s，对 nNOS 基
因扩增 30 个循环，β-actin基因扩增 28 个循环，最
后 72 ºC 10 min 结束反应。为排除基因组 DNA 的
污染，特设置 2 个阴性对照组，第 1 个阴性对照使
用 200 ng 总 RNA 为扩增模板，第 2 个阴性对照用
1 μL无菌去离子水为模板，其他反应物和扩增条件
表 1. 小鼠分组及药物处理
Table 1. Grouping and treatments

Groups
Treatments
Days 1-5 Day 5 (at 22:00) Days 6-10 Day10 (at 22:00)
1 Control + naloxone Saline Naloxone (sacrificed) - -
2 Morphine Morphine Sacrificed - -
3 Morphine + naloxone Morphine Naloxone (sacrificed) - -
4 Sinomenine + naloxone Sinomenine Naloxone (sacrificed) - -
5 Control + naloxone Saline - Saline Naloxone (sacrificed)
6 Morphine + sinomenine Morphine - Sinomenine Sacrificed
7 Morphine + sinomenine + naloxone Morphine - Sinomenine Naloxone (sacrificed)
8 Morphine + saline + naloxone Morphine - Saline Naloxone (sacrificed)
生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2007, 59 (3): 285-292288
与上述组织样本的扩增完全相同。每个RNA样本的
PCR 扩增至少重复 3次。取 10 μL PCR产物用 1.5%
琼脂糖凝胶进行电泳，用数码凝胶图像分析系统作
条带密度扫描，结果用 nNOS/b-actin 光密度比值表
示。
1.5 nNOS 活性与 NO 含量的测定　　将保存的小
脑与脊髓分别置于冰冷生理盐水中漂洗，滤纸拭干
后称重，转移至玻璃匀浆器，加 9 倍组织重的匀浆
液匀浆，3 500 r/min 离心 8 min，取 400 μL 上清
液，用考马斯亮蓝法、化学比色法和硝酸还原酶法
分别测小脑和脊髓样本中的总蛋白含量、nNOS 活
性及 N O 含量，实验操作严格按试剂盒说明书进
行。
1.6 数据处理　　采用统计分析软件 SPSS11.5 的
ANOVA 模块，进行单因素方差分析。各组数据以
means±SEM 表示，P<0.05 表示有显著性差异。
2 结果
2.1 行为学观察结果
2.1.1 体重变化 　　
为评价吗啡和青藤碱分别对小鼠体重变化的影
响，每天早上 8:00 注射药物前称量小鼠体重。对
第 1 批小鼠相对体重分析结果显示(图 2A)，与对照
组 group 1 小鼠的体重相比，注射吗啡的 group 2 小
鼠的相对体重从第 2 天起呈负增长趋势；而注射青
藤碱的 group 4 小鼠体重变化与 group 1 没有显著差
异，表明青藤碱没有显著影响小鼠体重的增长。对
第 2 批小鼠体重分析结果表明(图 2B)，已形成吗啡
依赖的 group 6小鼠注射青藤碱后在第8天时体重的
负增长趋势已经得到扭转，而 group 8 小鼠体重下
降却相对恢复较慢，至第 8 天时仍与 group 5 有显
著性差异。结果表明，虽然自然戒断也可扭转小鼠
体重的下降，但其作用效果不如青藤碱治疗明显。
2.1.2 戒断症状评分　　
戒断症状评分结果分析显示(表 2)，第 1批中注
射吗啡的 group 3 小鼠的戒断症状(如齿颤、扭体、
喷嚏及眼睑下垂)评分与 group 1 小鼠相比，显著升
高(P<0.05, P<0.01)，仅用青藤碱处理的 group 4 小
鼠在纳洛酮急性戒断后，没有出现明显的戒断症
状。第 2 批中已成瘾的 group 7 小鼠经青藤碱治疗
后，在纳洛酮急性戒断时症状比未经治疗的group 3
小鼠明显得到缓解。吗啡停用后注射生理盐水的
group 8 小鼠戒断症状(如扭体和上睑下垂)评分仍显
著高于对照组 group 5 小鼠(P<0.05, P<0.01)。
2.2 半定量 RT-PCR 结果　　
第 1 批中，与对照组 group 1 小鼠比较，注射
吗啡 5 d 的 group 2小鼠小脑组织的 nNOS mRNA表
达显著上调(P<0.05)，而在脊髓中上调不明显。纳
洛酮急性戒断后，group 3小鼠小脑和脊髓中 nNOS
mRNA水平都显著升高(P<0.05)。单独注射青藤碱
5 d的 group 4 小鼠在纳洛酮戒断后，脊髓与小脑中
nNOS mRNA 水平没有明显变化，表明单独使用青
藤碱不能显著升高小鼠小脑与脊髓中 nNOS mRNA
水平(图 3)。
在第 2批处理的小鼠中，对已成瘾的 group 6小
鼠用青藤碱治疗 5 d 后发现，该组小鼠的小脑和脊
髓中 nNOS mRNA 表达几乎已下降到接近对照组
group 5的水平；用纳洛酮急性戒断同样经青藤碱
图 2. 小鼠体重变化率
Fig. 2. The alteration ratio of mouse body weight. A: The relative body weight alterations within the first 5 d, during which mice were
injected with only morphine (group 2) or sinomenine (group 4). *P<0.05, **P<0.01 vs group 1 (injection with saline). B: The relative body
weight alterations within the second 5 d, during which mice were treated with sinomenine (group 6) or saline (group 8). #P<0.05, ##P<0.01 vs
group 5 (injection with saline). The alteration ratios of mouse body weight were calculated according to the formula: (the body weight
on this day – the body weight on the day before)/the body weight on the day before×100%. means±SEM, n=8.
289刘 珍等：青藤碱对吗啡依赖与戒断小鼠小脑与脊髓 NO/nNOS 系统的影响
治疗了 5 d 的 group 7 小鼠，小脑和脊髓中 nNOS
mRNA表达水平也没有出现显著升高，说明青藤碱
的使用有效地抑制了吗啡依赖与戒断小鼠小脑与脊
髓中 nNOS 的mRNA水平的异常升高。而后 5 d注
射生理盐水的group 8小鼠小脑中nNOS mRNA水平
仍显著高于对照组 group 5 (P<0.05)，表明 5 d的自
然戒断未能显著降低 nNOS mRNA 水平(图 3)。
2.3 nNOS 活性与 NO 含量测定结果　　
在第 1 批处理的小鼠中，吗啡依赖形成后，
group 2 小鼠小脑组织中的 nNOS 活性显著上调(P<
0.05)，脊髓中上调幅度不显著(图 4A) ；nNOS 催化
产生的NO 含量在小脑和脊髓中都升高，尤其是脊
髓中NO 含量与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。
纳洛酮急性戒断使 group 3 小鼠小脑与脊髓中的
nNOS 活性和NO 含量进一步升高，与对照组 group
1 相比有极显著差异(P<0.01)。青藤碱处理 5 d 的
group 4 小鼠在注射纳洛酮后，小脑与脊髓中的
nNOS活性未出现类似的异常上调，NO含量也没有
显著增加(图 4)。
在第 2 批处理的小鼠中，已形成吗啡依赖的小
鼠在后 5 d 使用青藤碱治疗取得了明显的效果。成
瘾的 group 6小鼠小脑与脊髓组织中的nNOS活性几
乎已下降到接近对照组 group 5 的水平，对青藤碱
治疗后的 group 7 小鼠注射纳洛酮急性戒断后，小
脑和脊髓中 nNOS 活性与 group 5 比较差异都不显
著，与治疗前的纳洛酮急性戒断组 group 3 比较显
著下降(P<0.05)。Group 8 小鼠经纳洛酮急性戒断，
nNOS 活性仍然显著高于 group 5。对 nNOS 活性与
表2. 吗啡和青藤碱用药后小鼠经纳洛酮急性戒断症状的评分
Table 2. Scores of morphine and/or sinomenine on the behavioral syndromes of naloxone-precipitated withdrawal in mice
Behavioral Days 1-5 Days 6-10
parameters Group 1 Group 3 Group 4 Group 5 Group 7 Group 8
Teeth chattering 1.7±0.32 4.2±1.28* 1.4±0.37 1.2±0.30 2.8±0.28 3.2±0.39
Twisting 3.0±0.75 12.2±1.92** 6.6±0.91 4.0±1.24 6.4±1.67 11.6±2.98##
Straightening 5.6±1.07 8.0±1.31 7.0±1.74 5.2±0.59 6.2±0.96 7.4±1.21
Sneezing 1.6±0.14 8.0±1.52* 4.2±0.70 2.2±0.23 5.0±0.74 6.0±0.81
Ptosis 2.3±0.33 15.0±1.25** 4.6±0.70 1.4±0.27 2.8±0.63 5.6±0.41#
Total score 14.2±2.61 47.2±7.28 25.8±4.42 14.0±2.53 23.2±4.28 28.4±5.68
means±SEM, n=8. *P<0.05, **P<0.01 vs group 1; #P<0.05, ##P<0.01 vs group 5.
图 3. 小鼠小脑与脊髓中 nNOS mRNA表达
Fig.3. Expressions of nNOS mRNA in the mouse cerebellum and spinal cord. A: Expressions of nNOS mRNA in the cerebellum. B:
Expressions of nNOS mRNA in the spinal cord. Lanes 1-8, samples of groups 1-8; M, molecular marker. C: The expression profiles showed
the relative expressions (nNOS/β-actin ratio). Total RNA and water used as the template for the negative controls were performed for
each PCR experiment and in each case no product was amplified (not shown). RT-PCR amplification was repeated at least three times
for each RNA sample. means±SEM, n=8. *P<0.05 vs group 1; △P<0.05 vs group 5; #P<0.05 vs group 3.
生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2007, 59 (3): 285-292290
NO 含量的比较发现，第 2 批中各组小鼠小脑与脊
髓中 nNOS 活性与NO 含量的升降趋势基本一致(图
4 ) 。
3 讨论
青风藤用于中药戒毒复方已获得较好的实验和
临床效果，其主要成分青藤碱已被证实对阿片类的
依赖具有防治作用[17,18]。动物实验表明，青藤碱对
吗啡身体依赖性小鼠和大鼠的戒断症状，以及豚鼠
离体回肠的戒断性收缩具抑制作用[19]，能明显减轻
吗啡依赖小鼠的催促戒断症状和体重下降[13]。本研
究表明，在青藤碱治疗后，吗啡依赖小鼠的体重减
轻和戒断症状得到显著的改善。本实验还显示，在
模型建立过程中，吗啡依赖小鼠出现显著的体重下
降，但青藤碱注射组没有出现这种现象；单独使用
青藤碱处理5 d的小鼠经纳洛酮急性戒断后没有出现
明显的戒断症状，小脑与脊髓中 nNOS mRNA水平
与 nNOS 活性及其产物NO 含量都没有出现显著变
化。这些结果表明，青藤碱虽然分子结构类似于吗
啡，但没有引起类似于吗啡的身体耐受戒断症状和
NO/nNOS 系统的异常变化。
关于吗啡成瘾对小鼠CNS中NO/nNOS系统的影
响，国内外学者做了大量研究，到目前为止，对
成瘾后该系统的变化方向仍存在争议。Cuellar 等[20]
研究发现，吗啡依赖可诱导小鼠脑内嗅球、小脑、
蓝斑核和延髓等部位 nNOS 阳性细胞增加，而下丘
脑 nNOS 的免疫反应活性降低，纳洛酮急性戒断使
下丘脑和蓝斑核 nNOS的免疫反应活性增加。Wong
等[21]研究表明，在吗啡耐受大鼠脊髓中，nNOS 表
达明显高于对照组 2 倍。本实验观察到，注射吗啡
后，小鼠小脑和脊髓中 NO/nNOS 系统出现上调，
这种上调在纳洛酮急性戒断后更加显著。但吗啡依
赖形成时，NO/nNOS 系统的上调仅在小脑中出现
显著性差异，产生这一现象的原因可能是吗啡依赖
小鼠CNS 中NO/nNOS 系统变化具有一定的组织特
异性。另外，本研究还发现，青藤碱可以抑制吗
啡依赖引起的NO/nNOS 系统的异常上调，且这种
作用不能被纳洛酮急性戒断所逆转。
有学者认为，青藤碱可能是一类 Ca2+ 拮抗剂，
对小鼠吗啡依赖与戒断的药理作用机制可能与其拮
抗 Ca 2+ 途径有关[22]。体内和体外实验都表明，吗
啡成瘾时，大鼠和小鼠脑神经细胞内的Ca2+ 含量增
加，在吗啡依赖小鼠的脊髓中，钙调蛋白依赖性蛋
白激酶 IIα (calmodulin-dependent protein kinase IIα，
CaMKIIa)基因的mRNA水平 、蛋白水平和磷酸化
活性都显著升高，这种升高可能参与吗啡耐受的发
生[23,24]。Ca2+ 拮抗剂对大鼠戒断综合征具有一定治
疗效果，Ca2+/CaM-CaMKIIa 抑制剂可以阻断吗啡
耐受的形成，其机制可能与 C a 2 + 影响钙依赖型
nNOS 活性继而影响 NO 的生成量有关[25]。本实验
结果显示，成瘾小鼠用青藤碱治疗 5 d 后，由吗啡
依赖与戒断引起异常升高的 nNOS mRNA 水平与
nNOS活性都恢复到接近对照组水平，NO含量也恢
复正常。据此推测，青藤碱能有效减轻小鼠的急性
戒断症状，其机制可能是通过拮抗钙离子通道从而
抑制NO/nNOS 系统的信号转导实现的。
图 4. 小鼠小脑和脊髓中 nNOS 酶活性与 NO 含量测定结果的分析
Fig. 4. Analysis of nNOS activity and NO level in the mouse cerebellum and spinal cord. A: nNOS activity, B: NO level. means±SEM,
n=8. *P<0.05, **P <0.01 vs group 1; △ P<0.05 vs group 5; #P<0.05 vs group 3.
291刘 珍等：青藤碱对吗啡依赖与戒断小鼠小脑与脊髓 NO/nNOS 系统的影响
已有研究表明，青藤碱能促进吗啡依赖戒断后
小鼠脑内去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)、多巴
胺(dopamine, DA)、5- 羟色胺(5-hydroxytryptamine,
5-HT)等单胺类神经递质改变趋于正常[12]。NE、DA
及5-HT等兴奋性神经递质可影响吗啡依赖与耐受的
形成[26]。NO 可由兴奋性神经递质激活产生，并调
节部分兴奋性神经递质的作用。Zarrindast等[27]研究
发现，α2-肾上腺素能及NO通路在阿片依赖的调节
中存在功能上的相互关系，NO/nNOS 系统可能通
过影响NE 神经元系统参与吗啡戒断症状。另有研
究表明，预先使用青藤碱可降低吗啡耐受小鼠神经
系统中的 cAMP 水平，阻止小鼠吗啡CPP 的形成，
防止形成心理依赖[14]。而DA 可激活腺苷酸环化酶
(adenylate cyclase, AC)，催化 cAMP 的产生，吗啡
依赖小鼠神经系统中 cAMP 水平上调[28]。由 NO/
nNOS系统激活产生的cGMP可抑制催化cAMP代谢
的磷酸二酯酶 3的活性，提高小脑中 cAMP水平[29]。
CaM和CaMKII a可反馈性地使cAMP水平升高，可
能是Ca2+ 途径介导吗啡依赖与戒断的重要机制[30]。
上述结果表明，Ca2+ 途径、cAMP 系统、NO/nNOS
系统及其它兴奋性神经递质间存在相互作用。结合
本研究的结果推测，影响NO/nNOS 系统可能不是
青藤碱作用于吗啡依赖与戒断的唯一途径。青藤碱
还可能通过调节其它信号通路与神经递质影响吗啡
依赖与戒断，这一推论还需后续研究来证实。
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