全 文 ：1316 West China Medical Journal, Vol.29, No.7 Jul. 2014 华西医学 2014, 29（7）
不同促渗剂对苗药秤钩风的透皮吸收特性研究
徐定平
【摘要】　目的　考察不同促渗剂对苗药秤钩风提取物经皮吸收的影响。 方法　采用改良 Franz扩散池，以离体
昆明小鼠皮肤为屏障，用高效液相色谱法测定透皮吸收影响因素对苗药秤钩风提取物的渗透吸收速率、增渗倍数、
滞后时间等参数的影响，对氮酮、油酸、冰片促渗效果进行考察。 结果　氮酮、3%油酸和冰片水溶液对秤钩风提取
物的经皮吸收速率常数分别为（214.187 2 ± 13.569 0）、（227.554 4 ± 9.849 0）、（168.118 7 ± 21.564 0） μg/（cm2·h），相
较于未加促渗剂时的经皮吸收速率常数（133.276 ± 11.312） μg/（cm2·h），增渗倍速分别为 1.61、1.71、1.26；3种促渗
剂对秤钩风提取物的经皮吸收滞后时间分别为 2.108 1、1.825 6、2.965 5 h。 结论　油酸和氮酮对秤钩风提取物的经
皮吸收有良好的促进作用，3%油酸效果最佳；冰片对秤钩风的经皮吸收也存在促进作用，但是滞后时间延长。
【关键词】　苗药秤钩风；青藤碱；促渗剂；经皮吸收；高效液相色谱
【文献标志码】　A　　　　DOI: 10.7507/1002-0179.20140401
Study on Effects of Different Penetration Enhancers on the Transdemal Penetration of Miao Medicine Named
Diploclisia Affinis　 XU Ding-ping. Department of Pharmacy, The Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture,
Enshi, Hubei 445000, P. R. China
【Abstract】 Objective To study the effects of different penetration enhancers on the transdermal penetration of
Miao medicine named Diploclisia affi nis. Methods　Improved Franz diffusion cell was adopted as the apparatus for in
vitro mouse’ skin permeation. The kinetic parameters of percutaneous absorption, such as penetration rate, enhancing rate
(ER), and lag time (Tlag) were determined by high performance liquid chromatography. Azone, oleic acid (OA) and borneol
were investigated for percutaneous absorption effects. Results　The penetration rates of the medicine with 3% azone, OA
and borneol added were respectively (214.187 2 ± 13.569 0), (227.554 4 ± 9.849 0), and (168.118 7 ± 21.564 0) μg/(cm2·h),
and the ER was 1.61, 1.71, and 1.26 compared with the penetration rate of that with nothing added. The Tlag was 2.108 1,
1.825 6, and 2.965 5 hours. Conclusion　All the penetration enhancers can increase signifi cantly the absorption of Miao
medicine named Diploclisia affi nis, especially 3% OA is the best, but 3% borneol may make the Tlag longer.
【Key words】　Diploclisia affi nis; Sinomenines; Penetration enhancers; Percutaneous absorption; High performance
liquid chromatography
论　著
【作者单位】 恩施土家族苗族自治州中心医院药剂科（湖北恩施，445000）
【作者简介】 徐定平（1970 －），男，湖北巴东人，主管药师，本科，
E-mail：1850750051@qq.com
【网络出版时间】 2014-07-11 16:31
【网络出版地址】 http://www.cnki.net/kcms/doi/10.7507/1002-0179.
20140401.html
瘾性的治疗 [5，6]。但青藤碱口服生物利用度低，半衰期
短，且需长时间口服给药 [7]，而在苗族医药中，秤钩
风多作为外用皮肤给药，提示青藤碱可以通过皮肤进
入人体而发挥治疗作用。
本实验研究拟以离体小鼠腹部皮肤为实验屏障，
采用改良扩散池法研究氮酮、油酸和冰片对秤钩风提
取物中青藤碱的经皮吸收的影响，为苗族医药中秤钩
风外用提供理论依据。
1　一般资料
1.1　仪器与试药
1.1.1　实验仪器　Waters高效液相色谱仪（515泵，
2487紫外检测器，美国Waters公司）；N3000色谱工作
站（浙江大学）；安捷伦 C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，
5 μm，美国安捷伦公司）；TK-12A型透皮扩散试验仪
秤钩风又名穿墙风、华防己、过山龙等，来源于
防己科秤钩风属植物秤钩风的木质茎和根，主要分布
于长江流域及其以南各省区，湖北省恩施土家苗族自
治州是其主要分布产地之一 [1，2]。秤钩风味苦性平，具
有清热利湿、活血止痛、解毒消肿等功效，民间常用
于治疗风湿骨痛、胆囊炎、尿路感染、小便淋涩及毒
蛇咬伤等症 [2，3]。青藤碱为其主要成分之一 [4]，研究表
明，青藤碱是一种副作用小、效果好的非甾体类消炎
止痛药物，具有显著的镇静、镇痛、消炎、降血压和抑
制免疫等作用，此外，青藤碱还有望用于戒除药物成
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（上海锴凯科技贸易有限公司）；AUW120电子分析天
平（日本岛津公司）；KQ5200DE型数控超声清洗器
（江苏省昆山市超声仪器有限公司）。
1.1.2　药品与试剂　秤钩风药材采集于湖北省恩施州
利川市汪营镇，经恩施州药检所鉴定为防己科秤钩风
属植物秤钩风；色谱乙腈（美国 TE-DA公司），色谱
甲醇（美国 TE-DA公司），其他试剂如石油醚、浓氨
试液、甲醇、氯仿等均为分析纯；含量测定用青藤碱
对照品（中国药品生物制品检定所）；氮酮（分析纯级，
天津市北联精细化学品开发有限公司）；油酸（分析纯
级，广州化学试剂厂）；冰片（中国药品生物制品检定
所）；水为去离子双蒸水。
1.1.3　实验动物　昆明小鼠，雌雄不限，6～ 7周龄，
体质量（30 ± 5）g，购于广州中医药大学实验动物中
心，卫生许可证号：SCXK（粤）2013-0020。
1.2　试液配制
1.2.1　样品前处理　取秤钩风干燥根茎适量，粉碎，
过 40目筛，备用。
1.2.2　供试品溶液制备　采用文献 [4]的方法：称取秤
钩风药材粉末 600 g，加石油醚适量，浸渍过夜（24 h），
过滤。滤渣用 6 000 mL pH值为 3.0的酸水提取 3次，
2 h/次，过滤，将滤液浓缩并溶解于甲醇中，再以 pH
值 8.0的氨水碱化 2 h，过滤，保留浸膏。浸膏加甲醇
溶解后以氯仿萃取，挥去溶剂，得青藤碱粗提取物，
加双蒸水溶解定容至 50 mL。
1.2.3　储备对照品溶液的配制　精密称取 60℃下
干燥至恒重的青藤碱对照品 5 mg，置 25 mL棕色容
量瓶中，加双蒸水溶解并定容至刻度，摇匀，即得
0.2 mg/mL的储备对照品溶液。
1.2.4　阴性对照溶液的制备　取双蒸水 1 mL，过
0.22 μm微孔滤膜，取滤液，即为空白阴性对照液。
1.3　分析方法的建立
1.3.1　色谱条件　ODS-C18 柱（250.0 mm×4.6 mm，
5 μm）；乙腈 -水（60︰40），用磷酸及三乙胺调整 pH
值至 7.8；流速为 1.0 mL/min；检测波长 262 nm；柱温
为室温；进样量为 10 μL。ODS-C18保护柱连接于分
析柱前。理论塔板数按青藤碱计应不小于 5 000。
1.3.2　标准曲线的制备　精密吸取储备对照品溶液
5 mL至 50 mL棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇
匀。精密吸取上述溶液 0.5、1、2、4、6、20 mL分别置
于 10 mL棕色容量瓶中，加甲醇定容，经 0.45 μm微
孔滤膜过滤，进样，以峰面积平均值（A）为纵坐标，对
照品浓度（C）为横坐标，得线性回归方程。
1.3.3　精密度试验　精密吸取浓度为 40 μg/mL的青
藤碱对照品溶液，经 0.45 μm微孔滤膜滤过后按照
1.3.1项下色谱条件进样 6次，每次进样 3针，计算平
均峰面积的相对标准偏差（RSD）。
1.3.4　稳定性试验　精密吸取浓度为 40 μg/mL的青
藤碱对照品溶液，经 0.45 μm微孔滤膜滤过后分别于
2、4、6、8、12、16、20、24 h进样，每次进样 3针，计算
平均峰面积的 RSD。
1.4　体外透皮实验方法的建立
参照文献 [8，9]的方法。
1.4.1　离体皮肤的制备　提前 2 d用脱毛膏脱去小鼠
的腹部皮肤上附着的毛。2 d后将小鼠脱颈椎处死，立
即剥取腹部皮肤，将取下的皮肤平铺在干净的玻璃板
上，角质层朝下。用载玻片小心刮去皮下脂肪层和结
缔组织，用生理盐水冲洗至无浑浊，置于 −20℃冰箱保
存，实验时目视检视皮肤完整性，不能有任何破损。
1.4.2　实验方法　取离体小鼠腹皮，常温下解冻，以
生理盐水洗净，用滤纸吸干表面水分，将处理好的皮
肤固定于扩散池的供体池和接收池之间，角质层面
向供体池，接收池内放置磁力搅拌子。接收池中加入
30%乙醇 /70%生理盐水 7 mL作为接收介质，并排
出气泡在供体池中离体鼠皮表面均匀涂抹 1.5 mL供
试液及促渗剂（不加、3%油酸、3%氮酮和 3%冰片水
溶液）。水浴保持（32.0 ± 0.5）℃，恒速 200 r/min。透
皮实验开始稳定 20 min后，于 1、2、4、6、8、10、12、
24 h从接收池取样 1 mL，同时补充等体积同温的空
白接收液。按 1.3.1项下方法分别检测接收液中秤钩
风的含量，以其渗透速率常数和增渗倍数为参考量，
考察促渗剂对秤钩风的透皮吸收特性的影响。
1.4.3　数据处理　将得到的数据依照下列公式处理，
求得累积渗透量、透皮速率和增渗倍数。公式如下：
上式中：Qn：t时间药物的面积透过量（μg/cm2）；
A：渗透面积（cm2）；Cn：t时间浓度测量值（μg/mL）；
Ci：t时间以前浓度测量值（μg/mL）；V：接收液总体积
（mL）；ER：增渗倍数；J：透皮速率常数 [μg/（cm2·h）]；
J0：未加促渗剂的透皮速率常数 [μg/（cm2·h）]。在本
实验中，A=2.92 cm2，V=7 mL。秤钩风提取物按 1.3.1
项下检测，计算得青藤碱的浓度为 4.476 mg/mL。
2　结果
2.1　线性回归方程
线性回归方程为 A=10 114.6C+9 833.7，r=0.999 7。
A
CVC
Q
n
i
in 



1
1
n
1

（i=1，2，……n-1）
J=dQn/dt（即是 Q-t方程斜率）
ER=J/J0
n
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结果表明青藤碱在 1～ 40 μg/mL的范围内线性关系
良好。
2.2　精密度试验与稳定性试验
精密度试验平均峰面积的 RSD为 1.05%，显示仪
器的精密度良好；稳定性试验平均峰面积的 RSD为
0.92%，显示青藤碱溶液在 24 h内稳定。
2.3　体外透皮实验
数据处理结果见表 1和图 1。由表 1可以看出，3%
油酸、氮酮和冰片溶液均可较好地促进秤钩风中青藤
碱的经皮吸收能力（增渗倍数）分别为 1.61、1.71和
1.26）。但从滞后时间可以看出，当秤钩风与冰片配伍
使用时，滞后时间（2.965 5 h）明显延长，提示冰片可
能与青藤碱存在竞争性透过。
由上述结果可见，与不加渗透促进剂组相较，
3种促渗剂对秤钩风均有较好的促进渗透的作用，尤以
3%油酸效果最佳。秤钩风提取物和冰片合用可以促进
青藤碱的经皮吸收，为二者的配伍提供了理论依据。
排列被破坏，分子流度增加而产生促渗效果 [12]。本研
究的结果表明，3%油酸、氮酮均可促进秤钩风中青藤
碱的经皮吸收，其中尤以 3%油酸效果最佳。
透皮吸收促进剂在经皮给药制剂中得到了越来越
广泛的应用，而以中药或其有效成分作为透皮吸收的
天然促进剂，更是引起了广泛的重视 [13]。本研究中，
冰片对秤钩风中青藤碱的透皮吸收有较好的促进作
用，说明冰片和秤钩风配伍外用是合理的。李熙等 [14]
以冰片作为促进剂，发现其对青藤碱微乳经皮渗透
有显著的促进作用，与本研究结果一致。但当以冰片
作为促渗剂时，秤钩风中青藤碱经皮吸收滞后时间
延长，其原因可能与本实验接收介质组成有关。程怡
等 [15]的研究表明，冰片经皮渗透的重要途径为细胞
间质通道，其次为皮肤的水合增强作用，其经皮渗透
特性与溶剂和促渗剂载体有关。
4　参考文献
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动力学特征 [J]. 中草药 , 2000, 31(8): 49-51.
（收稿：2013-06-29　修回：2014-03-24）
（本文编辑：熊国兵 /朱敏）
图 1　不同促渗剂对秤钩风经皮吸收的影响
表 1　不同促渗剂对秤钩风提取物的透皮特性的影响
组别 Q-t方程 R值
提取物 Q=133.276 1t−116.311 2 0.997 4
提取物 +3%氮酮 Q=214.187 2t−101.602 5 0.996 7
提取物 +3%油酸 Q=227.654 4t−124.703 2 0.999 1
提取物 +3%冰片溶液 Q=168.118 7t−56.690 6 0.990 6
3　讨论
油酸的促渗机制主要是分离脂质液化和脂质相，
它和皮肤中的脂肪酸结构相似，易于插入脂质双分子
层疏水结构，使脂质双分子层产生扭转效应，形成细
微，减少扩散阻力 [10， 11]。目前认为氮酮的促渗机制主
要是角质层双分子脂质层精密结构瓦解，其有序叠集
组别 透皮速率常数[μg/（cm2·h）]
滞后时间
（h） 增渗倍数
提取物 133.276 1 ± 11.312 0 1.145 9 1.00
提取物 +3%氮酮 214.187 2 ± 13.569 0 2.108 1 1.61
提取物 +3%油酸 227.554 4 ± 9.849 0 1.825 6 1.71
提取物 +3%冰片溶液 168.118 7 ± 21.564 0 2.965 5 1.26