全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod ResDev 2006 , 18:624-627
文章编号:1001-6880(2006)04-0624-04
　
　
　收稿日期:2005-03-03　　　接受日期:2005-04-18
＊通讯作者 E-mail:lsding@cib.ac.cn
新疆雪莲的高效液相指纹图谱及液-质联用分析
王晓玲1 , 2 ,蔡　敏2 ,周　燕2 ,丁立生2＊
(1.西南民族大学少数民族药物研究所;2.中国科学院成都生物研究所 , 成都 610041)
摘　要:建立新疆雪莲药材的高效液相指纹图谱。以 Luna C18为分析柱 ,用乙腈-0.1%醋酸梯度洗脱 , 获得分离
度较好的新疆雪莲药材 HPLC分析条件。通过 10批样品的分析和对照 , 标示出 12 个共有峰 ,相似度分析大于
0.92。最后通过 HPLC-UV-MS/MS 联用分析鉴定出其中 7 个化学成分。该方法可为新疆雪莲药材指纹图谱和质
量分析方法的建立提供参考。
关键词:新疆雪莲;指纹图谱;高效液相;液-质联用
中图分类号:R284.2;Q946.91 文献标识码:A
HPLC Fingerprint and HPLC-MS/MS Analysis for
the Aerial Parts of Saussurea involucrate
WANG Xiao-ling1 ,2 ,CAI Min2 ,ZHOU Yan2 ,DING Li-sheng2＊
(1.Institute of National Medicine , Southwest University of Nationalities;
2.Chengdu Institute of Biology , Chinese Academic of Sciences , Chengdu 610041 , China)
Abstract:The HPLC fingerprint spectrum of the aerial parts of Saussurea involucrate Kar.et Kir.was established.The HPLC
analysis was performed on a Luna C18 column with the eluting system of gradient acetonitrile and 0.1%CH3COOH.Twelve main
characteristic peaks were selected from the fingerprint spectrum of 10 barches of samples.The characteristic peaks were qualita-
tively analyzed by HPLC-UV-MS/MS , 7 of which were identified based on the UV and MS/MS spectra of each analyte with
that of authentic compounds and literature data.This method can be utilized in the fingerprinting and quality control of the crude
drug of S.involucrate
Key words:Saussurea involucrate;fingerprint;HPLC;LC-MS
　　菊科风毛菊属植物天山雪莲花 Saussurea involu-
crate Kar.et Kir.分布于我国新疆天山和昆仑山一
带 ,生长在雪线上。其干燥地上部分为新疆雪莲药
材 ,用于治疗风湿性关节炎及妇科疾病[ 1] 。按照国
家药典委员会关于“中药注射剂指纹图谱研究的技
术要求(暂行)的通知”要求 ,作者以 HPLC梯度洗脱
法对新疆雪莲药材进行 HPLC 指纹图谱探索 ,并利
用HPLC/ESI-MS技术对其化学成分进行初步鉴定 ,
可为新疆雪莲药材及含新疆雪莲成分的注射剂指纹
图谱和质量分析方法的建立提供依据。
1　仪器和材料
Waters 2690液相色谱仪 ,Finnigant LCQDETA液-质
联用仪。
新疆雪莲 S .involucrate 药材产于新疆天山 ,购
自新疆乌鲁木齐中药材公司 。芦丁购于中国药品生
物制品鉴定所 ,批号:0080-9705 ,槲皮苷为本实验室
分离得到 ,乙腈为色谱纯(美国 Fisher公司),其余试
剂均为分析纯(国产)。
2　实验条件
2.1　色谱条件
Luna C18分析柱(250 mm×4.6 mm ,5μm),乙腈-
0.1%醋酸二元梯度洗脱 ,流速 1.0 mL/min ,检测波
长 330 nm ,运行时间 80 min。
2.2　检测波长的选择
通过PDA(二极管阵列检测器)测定 ,几乎所有
色谱峰在 330 nm 波长处均有较大吸收 ,故选择 330
nm 为检测波长。
2.3　流动相的选择
实验过程中共选择了 3种流动相系统:①0.1%
醋酸-乙腈(85:15);②0.1%醋酸-乙腈(90:10);③A-
0.1%醋酸 B-乙腈 , 10%B ※35%B(线性梯度 80
DOI :10.16333/j.1001-6880.2006.04.023
min)。
结果表明 ,各种流动相以③号系统为最佳 ,其色
谱图上各色谱峰分离度好 ,保留时间适中 ,故选此流
动相系统作为新疆雪莲药材的 HPLC 指纹图谱检测
流动相。
3　指纹图谱的建立
3.1　供试品溶液的制备
取新疆雪莲药材 ,粉碎 ,过 60目筛 ,精密称取
1.0 g ,置 100 mL圆底烧瓶中 ,加 70%乙醇 50 mL ,置
沸水浴中加热回流提取 2 h ,冷却 ,过滤 ,滤渣继续加
70%乙醇 50 mL 加热回流提取 2 h ,合并两次滤液 ,
用70%乙醇稀释至 100 mL即得。
3.2　参照物溶液的制备
精密称取芦丁对照品适量 ,以甲醇溶解并配成
0.2 mg/mL的溶液作为参照物溶液 。
3.3　测定方法
按照《中国药典》2000版一部附录 VI D下高效
液相色谱法测定 。分别精密吸取参照物溶液及供试
品溶液各10μL 进样分析 ,记录时间为80min 。供试
品色谱中 ,以参照物芦丁对应的色谱峰为内标 ,其保
留时间和峰面积为 1 ,计算各指纹峰的相对保留时
间及峰面积比值。
3.4　新疆雪莲药材HLPC指纹图谱及技术参数[ 2]
3.4.1　指纹图谱及其指纹峰的标定
根据10批供试品 HPLC 图谱所给出的相关参
数可知 ,供试品所有成分色谱峰 ,在上述实验条件
下 ,60 min内基本出完(图 1)。结果表明 ,10批样品
中有12个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比
值均较固定(统计结果见表 1和 2),故标定为共有
指纹峰 。采用相似度软件分析。
图 1　新疆雪莲药材的 HPLC分析
Fig.1　HPLC analysis of aerial parts of S.involucrate
表 1　10 批雪莲药材指纹图谱的相对保留时间
Table 1　Relative retention time of 10 batches of S .involucrate
共有峰
Common peaks
药材批号Batch number
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均Average
1 0.520 0.522 0.521 0.519 0.521 0.522 0.521 0.523 0.519 0.520 0.521
2 0.868 0.865 0.869 0.867 0.871 0.872 0.866 0.868 0.869 0.867 0.868
3(S) 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
4 1.096 1.091 1.097 1.092 1.095 1.092 1.092 1.091 1.089 1.090 1.093
5 1.201 1.205 1.198 1.199 1.203 1.197 1.202 1.203 1.199 1.204 1.201
6 1.319 1.322 1.320 1.318 1.325 1.321 1.317 1.324 1.326 1.323 1.322
7 1.381 1.395 1.385 1.390 1.389 1.382 1.393 1.391 1.387 1.392 1.389
8 1.632 1.631 1.625 1.620 1.637 1.627 1.635 1.624 1.633 1.629 1.629
9 1.761 1.770 1.755 1.765 1.762 1.767 1.772 1.771 1.756 1.769 1.765
10 2.409 2.410 2.413 2.414 2.408 2.407 2.411 2.413 2.408 2.415 2.411
11 2.473 2.479 2.471 2.471 2.478 2.473 2.475 2.472 2.470 2.480 2.474
12 2.597 2.589 2.590 2.595 2.596 2.591 2.610 2.590 2.595 2.580 2.593
表 2　10批雪莲药材指纹图谱的相对峰面积比Ai/ As
Table 2　Relative peak area of 10 lots of S .involucrate
共有峰
Common peaks
药材批号Batch number
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均Average
1 0.370 0.405 0.397 0.379 0.382 0.354 0.397 0.363 0.397 0.361 0.380
2 0.116 0.111 0.114 0.106 0.114 0.114 0.113 0.111 0.109 0.117 0.113
3(S) 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
625Vol.18 王晓玲等:新疆雪莲的高效液相指纹图谱及液-质联用分析 　
4 0.173 0.188 0.186 0.159 0.169 0.174 0.165 0.170 0.165 0.167 0.172
5 0.073 0.087 0.078 0.061 0.088 0.086 0.084 0.092 0.086 0.084 0.082
6 0.092 0.090 0.087 0.075 0.093 0.091 0.089 0.087 0.092 0.096 0.089
7 0.836 0.882 0.898 0.813 0.868 0.866 0.896 0.873 0.859 0.861 0.865
8 0.200 0.209 0.232 0.208 0.233 0.229 0.221 0.220 0.210 0.216 0.218
9 0.177 0.143 0.166 0.135 0.149 0.208 0.146 0.215 0.143 0.188 0.167
10 0.278 0.258 0.264 0.244 0.266 0.262 0.259 0.228 0.237 0.245 0.254
11 0.167 0.138 0.200 0.179 0.157 0.188 0.155 0.189 0.146 0.137 0.038
12 0.093 0.102 0.075 0.089 0.078 0.112 0.106 0.094 0.099 0.084 0.093
相似度
Similiarity(%) 1.0 0.94 0.92 0.93 0.94 0.95 0.92 0.95 0.96 0.93 -
3.4.2　指纹图谱精密度试验
按照指纹图谱精密度规定方法操作 ,以药材第
1批为供试品 ,取 1 份 ,连续进样 5次 ,分别对共有
峰的相对保留时间及相对峰面积有规定的峰面积进
行统计 ,RSD%小于 3%。
3.4.3　指纹图谱重现性试验
以药材1批为供试品(n=5),按照指纹图谱重
现性规定方法操作 ,分别对共有峰的相对保留时间
及相对峰面积有规定的峰面积进行统计;RSD%小
于3%。
3.4.4　指纹图谱稳定性试验
按照指纹图谱稳定性操作方法操作 ,以药材第 1
批为供试品溶液 ,考察 0、2 、4、6和8 h溶液稳定性 ,分
别对共有峰的对保留时间及相对峰面积有规定的峰
面积进行统计 ,RSD%小于 3%,即供试品溶液 8 h稳
定。说明此方法可用于本品指纹图谱的检测。
3.4.5　指纹图谱的相似度分析
色谱指纹图谱的相似度是指图谱的整体相关
性 ,它把色谱指纹图谱的重叠率和共有峰的峰强度
结合起来。其计算方法有两种 ,一种是相关系数法 ,
一种是向量夹角余弦法 ,本文即采用该法 ,按照大连
化学物理研究所王龙星开发的软件进行分析。以第
一批样品的共有峰峰面积为对照样本 ,计算其它各
批次的相似度 ,结果均在 0.92 ～ 0.96之间 ,显示了
良好的相似度。
3.4.6　HPLC-UV-MS/MS 分析
通过正 、负离子扫描可获得各个化学成分的[M
+H] +和[M-H] -准分子离子峰 ,由此得知化合物的
分子量。由 MS/MS 得到的一些结构信息和 UV 给
出的最大吸收 ,结合相关文献报道[ 3-6]初步鉴定出 7
个指纹成分的化学结构(表 3),其中芦丁和槲皮苷
通过与标准品对照 HPLC保留时间得到确证 。
表 3　新疆雪莲药材的HPLC-UV-MS/MS 分析结果
Table 3　Results of HPLC-UV-MS/MS analysis of S .involucrate
峰号 Peak NO. 分子量M.W. [ M+H] +
m/ z
[ M-H] -
m/ z
二级质谱 MS/MS
m/ z
紫外吸收
UVλmax nm 鉴定结果 Identification
1 354 355 353＊ 191 , 179 241 , 299 , 325 东莨菪苷(Scopolin)
2 368 369＊ 367 163 239 ,325
3(S) 610 611＊ 609 303 230 , 255 , 351 芦丁(Rutin)
4 464 465＊ 463 303 231 , 254 , 351 异槲皮苷(Isoquercit rin)
5 594 595＊ 593 287 , 449 231 , 264 , 344 忍冬苷(Lonicerin)
6 448 449＊ 447 303 232 , 253 , 339 槲皮苷(Quercitrin)
7 516 517＊ 515 191 243 ,327
8 616 617 615＊ 353 , 453 239 ,327
9 594 595 593＊ 371 234 ,277
10 300 301＊ 299 286 231 , 270 , 334 高车前素(Hispidulin)
11 330 331＊ 329 316 , 301 234 , 271 , 344 粗毛豚草素(Jaceosidin)
12 786 787＊ 785 666 231 , 296 , 306
　　＊二级质谱的母离子(Mother ion for MS/MS)
4　讨论
为了有效地控制新疆雪莲药材的质量 ,使其符
合现代药物的质量控制要求 ,笔者对该药材用 HPLC
建立了控制其质量的指纹图谱测定法 ,结果表明 ,这
种方法稳定 、可靠和简便。
626 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.18
由于新疆雪莲药材的主要有效成分为黄酮类化
合物[ 3] ,且含有较多的芦丁 ,故以总黄酮为分析对
象。由于芦丁峰的保留时间居中 ,且与附近色谱峰
的分离度较好 ,色谱峰面积适中 ,故以之为参照物 。
质谱可以提供更多化合物的结构信息 ,结合紫
外光谱可以对一些指纹成分进行结构鉴定。本实验
根据芦丁 、槲皮苷对照品及新疆雪莲化学成分的报
道 ,利用 HPLC-UV-MS/MS 联用技术对其化学成分
进行了初步定性分析 ,鉴定出了7个化合物 ,可为新
疆雪莲化学成分的进一步研究及质量控制提供参
考。
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