全 文 ：2011年 8月
Aug.2011 　　　　　　　　　　　
华南师范大学学报 (自然科学版)
JOURNALOFSOUTHCHINANORMALUNIVERSITY
(NATURALSCIENCEEDITION) 　　　　　　　　　　　
2011年第 3期
　No.3, 2011
收稿日期:2010-11-17
基金项目:广东省食品工业研究所开放实验室项目(FIPL-07-006)
＊通讯作者 , tao jing qi@ 163.com
文章编号:1000-5463(2011)03-0078-04
五指毛桃指纹图谱的高效液相色谱 -质谱联用研究
陶敬奇 1＊ ,闻莹莹 1 ,王　辉1 ,王三永 2 ,陈洪伟3
(1.华南师范大学化学与环境学院 ,广东广州 510631;2.广东省食品工业研究所 ,广东广州 510308;
3.东莞理工学院化学与环境工程学院 ,广东东莞 523808)
摘要:建立了高效液相色谱 -电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MSn)法确定五指毛桃指纹图谱的方法.采用 C18柱 ,水
(A)-甲醇(B)溶液为流动相 , 梯度程序洗脱.4个产地的五指毛桃样品分离得到 16个 “共有峰” ,通过质谱鉴定出
10种成分 , 通过样品 “共有峰”含量及特征峰 ,以评价不同产地五指毛桃的优劣 , 并为五指毛桃药材的质量控制标准
提供参考.
关键词:指纹图谱;五指毛桃;高效液相色谱;液 -质联用
中图分类号:O657　　　文献标志码:A
　　五指毛桃(Radixficihirtae),是桑科植物粗叶榕
(FicushirtaVahl.)的干燥根 ,是我国重要的传统药
材之一.在中国南方 ,五指毛桃被用作传统的饮食汤
剂 ,主要活性成分包括补骨脂素 [ 1] 、佛手内酯 、油
酸 、亚油酸 、十六酸 、十八酸等[ 2-3] .
指纹图谱研究的方法主要有薄层色谱法
(TLC)[ 4] ,高效液相色谱法(HPLC)[ 5-7]和毛细管电
泳法(CE)等.高效液相色谱法具有灵敏性高 、检测
快速等优点 [ 8] .由于不同产地五指毛桃药材的各种
成分含量差别很大 ,指纹图谱技术常作为检测药材
质量的一种有效方法.有关五指毛桃的液相指纹图
谱研究 ,目前有少量文献 [ 9]报道检测到的 “共有峰 ”
少 ,峰分辨率较低 ,且未与质谱联用以确定其成分.
本文首次分离出 16个 “共有峰 ”,分辨率高 ,且首次
通过质谱确定其中补骨脂素 、脂肪酸 、大黄素甲醚 、
酯类 、醇类等 10种成分.
1　材料与方法
1.1　材料和试剂
补骨脂素 、佛手内酯(5 -甲氧基补骨脂素)标
准品(同田生物科技有限公司 ,上海);二次蒸馏水
(过 0.22 μm滤膜);甲醇 (色谱纯);五指毛桃(分
购于广东河源 、清远 、梅州和广西)经鉴定均为粗叶
榕 FicushirtaVahl.的根.
1.2　仪器和色谱条件
粉碎机(YSC-701,燕山正德机械 ,北京);液相
色谱仪(LC-10AVP,岛津 ,日本);二极管阵列检测
器(PDA).
色谱柱:HypersilC18柱 (150 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相:水(A)/甲醇 (B);梯度:0 min, 95∶5
(V(A)∶V(B),下同)保留 5 min;35 min, 40∶60并
保留 5 min;50 min, 0∶100保留 10 min;流速:0.80
mL/min,检测波长:300 nm.
质谱条件:电喷雾电离源;正离子模式;喷雾器
压力:20 psi;质量范围:m/z50 ～ 800;扫描类型:全;
进样量:10 μL;停留时间:300 ms.
1.3　样品制备
粉碎样品 ,过 0.15 mm筛 ,均质化 ,称取 2.000 0 g
目标物 ,加 30 mL甲醇于 63℃加热回流提取30 min,过
滤 ,蒸发浓缩至 0.50 mL,过 0.22 μm滤膜 ,用甲醇
定容至 10 mL的容量瓶中.取 20 μL溶液待测.
2　结果和讨论
2.1　HPLC条件的优化
检测波长为 300 nm时 ,峰形较好 、峰高较为平
均 、背景干扰较小;上述梯度洗脱条件于 60 min内
能得到全成分谱图.河源样品色谱峰总面积较大 ,峰
数较多且具代表性(图 1).
1:十六酸(hexadecanoicacid);2:十八酸(octadecanoicacid);3:大黄素甲醚(physcion);4:11 -氧基 -α-香树脂醇乙酸酯(11-oxo-α-amyri-
nacetate);5:α-香树素乙酸酯(α-amyrinacetate);6:补骨脂素(psoralen);7:未知物(unknown);8:佛手内酯(bergapten);9:芹菜素(4′, 5, 7-tri-
hydroxyflavone);10:β -谷甾醇(β -sitosterol);11:羽扇豆醇(lupeol)
图 1　五指毛桃(河源样品)液相色谱图
Figure1　HPLCchromatogramofRadixficihirtae(Heyuan)
2.2　指纹图谱分析
2.2.1　指纹图谱的建立　选择参考峰应位于谱图
中心 ,具较高强度 ,且为所有样品所共有 [ 10] .研究选
择样品中补骨脂素的峰作为参考峰 ,并以补骨脂素
的保留时间作为绝对保留时间 ,根据该峰的峰面积
及保留时间 ,得到其它峰的相对峰面积和相对保
留值.
相对保留值 (识别指纹图谱中共有峰和特征
峰)α=tm/tn,其中 tm为待测峰的绝对保留时间 , tn
为参照峰的绝对保留时间.相对峰面积的计算公式
为Sr=(待测峰的峰面积 /样品的总面积)×100%.
将样品中各组分的相对保留值 α按大小排列 ,再将
不同样品中具有相同 α值的 Sr进行比较(表 1).
2.2.2　样品的指纹图谱特征　4批样品中具有相
同保留值 α的峰 ,即为 “共有峰 ”.由表 1可见 , “共
有峰”共有 16个;5个色谱峰为其中 3个样品所共
有(α为 0.343、0.477和 0.637为广西 、河源和梅州
样品共有;0.708为广西 、河源和清远样品共有;
0.797为广西 、清远和梅州样品共有);2个色谱峰
为其中 2个样品所共有(α为 0.608的峰为河源和
梅州样品共有 , 0.903为广西和梅州样品共有);3
个色谱峰为其中 1个样品所特有.共 26个色谱峰可
作为五指毛桃的指纹成分群 ,其 α值分别为 0.046,
0.096, 0.130, 0.343, 0.477, 0.570, 0.608, 0.637,
0.668, 0.708, 0.797, 0.838, 0.874, 0.903, 0.913,
0.940, 0.952, 0.968, 0.986, 1.000, 1.032, 1.086,
1.179, 1.267, 1.527和 1.599.
表 1　五指毛桃药材样品色谱指纹图谱分析
Table1　Analysisofchromatographicfingerprintforthesamples
ofRadixficihirtae
相对保留值 α 相对峰面积(Sr)广西样品 河源样品 清远样品 梅州样品
0.046 0.991 0.267 1.716 0.591
0.096 1.736 1.889 0.650 2.443
0.130 3.817 4.184 2.369 3.665
0.343 4.127 3.467 / 2.047
0.477 2.850 3.951 / 2.383
0.570 0.989 2.069 1.055 1.785
0.608 / 1.172 / 2.205
0.637 1.066 1.931 / 2.366
0.668 / 2.104 / /
0.708 1.637 2.477 1.122 /
0.797 2.934 / 1.753 1.379
0.838 5.371 1.426 8.320 2.576
0.874 2.653 0.853 1.612 1.688
0.903 3.108 / / 1.430
0.913 1.421 0.721 2.609 1.501
0.940 1.767 / / /
0.952 2.651 2.023 5.904 4.294
0.968 2.427 0.724 3.383 1.797
0.986 1.509 0.587 1.765 1.126
1.000 27.866 34.915 35.906 35.046
1.032 0.997 0.0903 0.805 0.811
1.086 4.110 4.452 4.271 5.315
1.179 / / / 0.699
1.267 1.961 1.002 1.358 1.586
1.527 0.988 1.532 0.796 1.382
1.599 1.579 1.885 1.703 1.322
总峰数 23 22 18 23
79第 3期 陶敬奇等:五指毛桃指纹图谱的高效液相色谱 -质谱联用研究
　　从表 1看出相对保留值 α为 0.940的峰是广西
样品的特征峰;而 0.668和 1.179分别是河源和梅
州样品的特征峰.这些特征指纹峰可作为判断样品
产地的必要条件之一.
4批五指毛桃样品分别来自清远 、梅州 、河源和
广西.河源样品 ,成分含量分布比其它样品较均衡 、
总峰面积最大;广西样品的峰最多(23个),而清远
样品的峰最少(18个).尽管不同地区样品的 “共有
峰 ”极其相似 ,但 “共有峰”的峰面积比率显著不同 ,
表明了研究指纹图谱的重要性[ 9] .该指纹图谱能够
为控制五指毛桃药材的质量提供一个可靠的依据.
2.3　HPLC-MS鉴定成分
表 2呈现 HPLC-MS联用分析五指毛桃药材
的化学成分.采用正离子模式 , m/z数据均为 [ M+
H] +.由于酸结合烷基容易失去烷烃基团 ,显示出特
征 m/z数据 [ M-CnH2n+1 ] +;而高级脂肪酸酯则很
容易失去酸性阳离子 ,如 4号峰和 5号峰.由于香豆
素含有酮羰基 , 其碎片 m/z数据为 [ M +H-
CH3 ] +, [ M+H-CO] +和 [ M+H-2CO] +等.6号
峰和 9号峰的质谱图如图 2和图 3所示.
　　补骨脂素和芹菜素的质谱碎裂过程如图 4所
示.6号峰的 [ M+H] +为 187,其相对分子质量为
186, m/z为 159是碎片 [ M+H-CO] +, 131为碎片
[ M+H-2CO] + ,可确认该物质为补骨脂素[ 11] .9
号峰的 [ M+H] +为 271,其相对分子质量为 270, m/z
为 134是其碎片峰 ,通过质谱数据和碎片的结果相
比较 ,确定该物质为芹菜素.7号峰具有和补骨脂素
相同的碎片离子峰 ,说明它们很可能含有相同的
内核.
表 2　10个峰的质谱数据和物质名称
Table2　Themassdataandcompoundnamesofthe10 peaks
峰号 质谱数据 化合物
1 257[ M+H] +, 213[ M-C3H7 ] +, 115[ M-C10H21] + 十六酸
2 284[ M+H] +, 241[ M-C3H7] +, 227[ M-C4H9 ] + 十八酸
3 285[ M+H] +, 255[ M+H-HCHO] + 大黄素甲醚
4 483[ M+H] +, 405[ M-O-CH3COOH] + 11 -氧基 -α-香树脂醇乙酸酯
5 467[ M+H] +, 406[ M-CH3COOH] + α-香树素乙酸酯
6 187[ M+H] +, 159[ M+H-CO] +, 131[ M+H-2CO] + 补骨脂素
7 187[ M+H] +, 159 未知物
8 217[ M+H] +, 202[ M+H-CH3] +, 174[ M-CH3 -CO] + 佛手内酯
9 271[ M+H] +, 134 seeingbelow 芹菜素
10 415[ M+H] +, 399[ M-CH3] + β -谷甾醇
11 427[ M+H] +, 409[ M+H-H2O] + 羽扇豆醇
图 2　6号峰补骨脂素质谱图(m/z187)
Figure2　MSspectrumofpeak6ofpsoralen(m/z187)
80 华 南 师 范 大 学 学 报 (自 然 科 学 版) 2011年
图 3　9号峰芹菜素质谱图(m/z271)
Figure3　MSspectrumofpeak9, 4′, 5, 7-trihydroxyflavone(m/z271)
图 4　补骨脂素和芹菜素的碎片裂解图
Figure4　ProposedMS-MSfragmentationofpsoralenand
4′, 5, 7-trihydroxyflavone
3　结论
首次用 HPLC-MS研究五指毛桃样品 ,得到广
东 、广西等 4个产地样品的指纹图谱.16个 “共有
峰 ”代表样品的特征成分群 ,其中 10个峰经 ESI-
MS分析鉴定 ,并通过相对分子量和特征碎片峰确定
其成分.该方法可对五指毛桃药材进行评价及质量
控制.
参考文献:
[ 1] 　温玲 , 吴华碧 , 刘沙 , 等.广东不同地区野生或市售五
指毛桃中补骨脂素含量的测定 [ J] .中国医药导报 ,
2008, 5(35):29-30.
WENLing, WUHuabi, LIUSha, etal.Determinationof
psoraleninRadixficihiratefrom differentregionsand
marketsinGuangdongprovince[ J] .ChinaMedicalHer-
ald, 2008, 5(35):29-30.
[ 2] 　魏刚 , 刘春玲 , 何建雄 , 等.五指毛桃 GC-MS特征指
标成分群探讨 [ J] .中医药学刊 , 2005, 23(7):1249-
1250.
WEIGang, LIUChunling, HEJianxiong, etal.Determi-
nationofcharacteristicscomponentsgroupinRadixfici
hirtaebyGC-MS[ J] .StudyJournalofTraditionalChi-
neseMedicine, 2005, 23(7):1249-1250.
[ 3] 　赵丽萍 ,狄斌 , 冯锋.五指毛桃的化学成分 [ J] .药学与
临床研究 , 2007, 16(1):5-7.
ZHAOLiping, DIBin, FENGFeng.Chemicalconstitu-
entsfrom therootsofFicushirta[ J] .Pharmaceutical
andClinicalResearch, 2007, 16(1):5-7.
[ 4] 　陈勇 ,甄汉深 , 陈美燕.五指毛桃中补骨脂素的含量测
定 [ J] .中药材 , 2002, 25(4):265-266.
CHENYong, ZHENHanshen, CHENMeiyan.Determi-
nationofpsoraleninRadixficihirtae[ J] .ChineseHerb-
alMedicines, 2002, 25(4):265-266.
[ 5] 　李明 ,陈志维 , 黎玉翠 , 等.HPLC法测定五指毛桃中补
骨脂素和芹菜素的含量 [ J] .中药新药与临床药理 ,
2009, 20(1):52-54.
LIMing, CHENZhiwei, LIYucui, etal.Determination
ofpsoralenandapigenininRadixficihirtaebyHPLC
[ J] .TraditionalChineseDrugResearchandClinical
Pharmacology, 2009, 20(1):52-54.
[ 6] 　钟镜金 ,刘占强 , 曾元儿 , 等.HPLC法测定五指毛桃中
补骨脂素和佛手柑内酯的含量 [ J] .中药新药与临床
药理 , 2007, 18(2):126-128.
ZHONGJingjin, LIUZhanqiang, ZENGYuaner, etal.
HPLCdeterminationofpsoralenandbergapteninFicus
hirtavahl[ J] .TraditionalChineseDrugResearchand
ClinicalPharmacology, 2007, 18(2):126-128.
[ 7] 　ZHAOLH, HUANGCY, SHANZ, etal.Fingerprint
analysisofPsoraleacorylifoliaL.byHPLCandLC-MS
[ J] .JChromatographyB, 2005, 821:67-74.
[ 8] 　CHUANGWC, WUHK, SHUENNS, etal.Acompar-
ativestudyoncommercialsamplesofGinsengRadix[ J] .
PlantaMed, 1995, 61(5):459-465.
(下转第 112页)
81第 3期 陶敬奇等:五指毛桃指纹图谱的高效液相色谱 -质谱联用研究
CHANGESOFABALEVELANDEXPRESSIONOFRELATEDGENESDURING
BLUE-LIGHT-REPRESSEDMESOCOTYLELONGATIONINhar1
GAOSujuan1, 2 , XIEXiuzhi3 , CHENZhaoping1 , WANGXiaojing1＊
(1.SchoolofLifeSciences, SouthChinaNormalUniversity, GuangdongKeyLabofBiotechnologyforPlantDevelopment, Guangzhou510631, China;
2.ZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineering, Guangzhou510225, China;
3.GuangzhouAgriculturalStandardandSupervisoryCenter, Guangzhou510315, China)
Abstract:Inthisstudy, thewildtypesorghumR111 andmutanthar1 inducedbyspaceflight, wereusedasmateri-
alstoanalyzethegeneexpresionlevelofSbCRY1b, SbCOP1 andSbHY5 duringtherepressionofmesocotylmedia-
tedbybluelight(BL).Theresultsshowedthatthehypersensitivityofhar1 toBLwasrelatedtotheincreasedSb-
CRY1blevel.Additionaly, theexogenousABAenhancedtherepressionofBLtomesocotylelongationofR111, and
NAPreleasedtherepressionofmesocotylelongationofhar1.Meanwhile, afterBLirradiation, theendogenousABA
contentinmesocotylofhar1 increasedmorethanthatofR111, implyingthatABAwasinvolvedinthebluelight
mediatedelongationrepressionofmesocotylinSorghumbicolor.
Keywords:ABAlevel;geneexpression;har1 mutantofSorghumbicolor;mesocotyl;bluelight
【责任编辑　成　文】
(上接第 81页)
[ 9] 　席萍 , 黄耀海 , 黄月纯 , 等.五指毛桃药材高效液相指
纹图谱的实验研究 [ J] .时珍国医国药 , 2009, 20(3):
572-573.
XIPing, HUANG Yaohai, HUANG Yuechun, etal.
StudyonfingerprintofRadixficibyHPLC[ J] .Shizhen
MedicineandMaterialMedicalResearch, 2009, 20(3):
572-573.
[ 10] 　国家药品监督管理局.关于印发《中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求 》的通知 [ J] .中成药 , 2002, 2
(10):671-675.
[ 11] 　孙明谦 , 卢建秋 , 张宏桂.呋喃香豆素类化合物电喷
雾质谱裂解途径 [ J] .药物分析杂志 , 2009, 29(1):82
-85.
SUNMingqian, LUJianqiu, ZHANGHonggui.Frag-
mentationpathwaysofthefurocoumarinsinelectro-
sprayionizationmassspectrometry[ J] .ChinJPharma-
cyAnal, 2009, 29(1):82-85.
FINGERPRINTSTUDYOFRadixficihirtaeBYHPLCANDLC-MS
TAOJingqi1＊ , WENYingying1 , WANGHui1 , WANGSanyong2 , CHENHongwei3
(1.SchoolofChemistryandEnvironment, SouthChinaNormalUniversity, Guangzhou510631, China;
2.GuangdongFoodIndustryInstitute, Guangzhou510308, China;3.SchoolofChemistryand
EnvironmentalEngineering, DongguanUniversityofTechnology, Dongguan523808, China)
Abstract:AmethodwasdevelopedforthefingerprintofRadixficihirtae, byhighperformanceliquidchromatogra-
phycouplingelectro-sprayionization-tandemmassspectrometry(HPLC-ESI-MS).AHypersilC18 column
wasusedfortheseparation, awater(A)-methanol(B)combinationwasusedasthemobilephasethroughgradi-
entelution.Sixteencommonpeakswerefoundinfourbatchesoftheherbaland10 ofthepeakswereidentifiedby
MS.Theresultsdemonstratedthatthemethodwasfeasibleandtherelativepeakarea(Sr)ofthecommonpeaks
andcharacteristicpeakscanbeusedtoassessthequalityoftheherbfromdiferentplacesandmayserveasaquali-
tycontrolmethodforRadixficihirtae.
Keywords:fingerprint;Radixficihirtae;highperformanceliquidchromatography;liquidchromatography-mass
spectrometry
【责任编辑　成　文】
112 华 南 师 范 大 学 学 报 (自 然 科 学 版) 2011年