全 文 ：收稿日期:2007-11-28;　修订日期:2008-11-10
基金项目:广东省中医药局建设中医药强省科研课题(No.2006-1060102)
作者简介:席　萍(1953-),女(汉族),广东广州人 ,现任广州中医药大学
第一附属医院主任药师 ,主要从事中药制剂研究工作.
五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究
席　萍1 ,黄耀海 2 ,黄月纯1 ,蔡庆群 1 ,曹艳芳 1
(1.广州中医药大学第一附属医院 ,广东 广州　510405;
2.广州中医药大学中药学院 ,广东 广州　510405)
摘要:目的 建立五指毛桃药材的高效液相(HPLC)指纹图谱。方法 采用高效液相色谱法 , 选用 XDB-C18色谱柱(4.6
mm×250mm, 5μm)。柱温 25℃;检测波长 246mm。流动相为甲醇 -水。梯度洗脱:0 min,甲醇 -水(15∶85);20min, 甲
醇 -水(55∶45), 40 min;甲醇 -水(85∶15);45 min, 甲醇 -水(100∶0);50 min, 甲醇 -水(15∶85)。流速 1 ml/min;运
行时间 50min;检测波长为 246 nm。结果 五指毛桃药材共有 9个共有峰。结论 实验方法可行 , 可为检测五指毛桃药材
质量控制标准提供参考 。
关键词:五指毛桃;　指纹图谱;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)03-0572-02
StudyonFingerprintofRadixFicibyHPLC
XIPing1 , HUANGYao-hai2 , HUANGYue-chun1 , CHAIQing-qun1 , CAOYan-fang1
(1.FirstAfiliatedHospital, GuangzhouUniversityofTCM, Guangzhou510405, China;2.ColegeofPharma-
cology, GuangzhouUniversityofTCM, Guangzhou510405, China)
Abstract:ObjectiveToestablishthemethodoffingerprintanalysisinRadixFicibyHPLC.MethodsHPLCmethodwasused,chromatographyconditionswereXDB-C18 column(4.6 mm×250 mm, 5μm)withmethanol-waterasmobilephase(gradientelution), thedetectionwavelengthwas246nm.ResultsTheresultsshowedthat9peakswerecommon..ConclusionThemethod
isreliableandprovidesreferencestandardforthequalitycontrolofRadixFici.
Keywords:RadixFici;　Fingerprint;　HPLC
　　五指毛桃(RadixFici)为桑科植物粗叶榕 FicushirtaVahl.的
干燥根。最早称为无爪龙 , 记载于清代的《生草药性备要》, 目前
临床使用习称五爪龙 , 许多现代大型中药工具书称之为五指毛
桃 , 商品名亦称五指毛桃 [ 1]。 2004年版《广东省中药药材标准》
将其以五指毛桃的名称列入标准中 [ 2] 。 本品为华南地区常用中
药材 , 味甘 ,性平 , 有健脾补肺 、利湿舒筋功能 , 主治脾虚浮肿 、食
少无力 、肺痨咳嗽 、盗汗 、带下 、产后无乳 、风湿痹痛 、水肿 、肝硬化
腹水 、肝炎 、跌打损伤 , 临床疗效显著。梅州地区宜将其作为食疗
常用品 , 家喻户晓。研究表明五指毛桃药材的化学成分主要是补
骨脂素以及佛手内酯 、油酸 、亚油酸 、十六酸 、十八酸等成分 ,这些
成分在沸水中煎出均能产生香气 ,民间习惯以其香味的浓郁程度
来判断其质量的优劣 。
据文献检索有关五指毛桃的栽培技术研究 [ 3] , 组织培养研
究 [ 4] 、挥发油成分的分析 [ 5 , 6] 、以及测定其成分含量的薄层扫描
法研究 [ 7]等均有报道。但对五指毛桃药材指纹图谱的研究却未
见报道 , 为更好地评价五指毛桃药材质量的均匀性和稳定性 ,提
高其质量控制标准 ,我们收集了不同产地五指毛桃药材 , 采用高
效液相色谱法 , 建立了五指毛桃药材的指纹图谱分析方法。
1　器材
1.1 　仪器 高效液相色谱仪 (HP-1100, 安捷伦);二极管阵列
检测器(DAD);色谱柱:XDB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm,安捷
伦)。
1.2 　试药 甲醇(色谱试剂 ,批号 051105101,天津市四友生物医
学技术有限公司);水为超纯水;补骨脂素对照品(739 -200209)
(由中国药品生物制品检定所提供);样品:五指毛桃药材共 9批
(见表 1),均为当年新鲜采集晒干 , 委托广州致信中药饮片公司
在各地收集并鉴定。见表 1。
表 1　五指毛桃药材来源
编号 药材产地 采收时间 编号 药材产地 采收时间
1 广东河源Ⅰ 2006 6 广西 2006
2 广东河源Ⅱ 2006 7 广西桂林 2006
3 广东从化 2006 8 广东连平 2006
4 广东清远 2006 9 广西玉林 2006
5 广东翁源 2006
2　方法
2.1 　色谱条件 色谱柱为 Hypersi1 ODS(250 mm×4.0 mm;5
μm);流动相 ,甲醇 -水;梯度洗脱条件:0 min, 甲醇 -水(15∶
85);20 min,甲醇 -水(55∶45);40 min, 甲醇 -水(85∶15);45
min,甲醇 -水(100∶0);50 min,甲醇 -水(15∶85);流速 , 1 ml/
min;柱温为室温;进样量 , 10 μl;检测波长 246nm。
2.2 　对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素对照品 0.79 mg,
加甲醇制成 0.395 mg/ml的溶液 ,摇匀 , 即得。
2.3　供试品溶液的制备 称取五指毛桃药材粉末约 5g, 置锥形
瓶中 , 加入甲醇 50 ml,浸泡过夜 ,超声处理 30 min, 滤过。滤液蒸
干 , 残渣加甲醇溶解 , 定容至 1ml。
2.4 　测定方法 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 10
μl,注入高效液相色谱仪 ,记录 50 min的色谱图。
3　结果
3.1　精密度实验 取同一份供试品溶液 ,连续进样 5次 , 其色谱
峰保留时间的 RSD均在 0.3%以内 , 峰面积的 RSD均在 5%以
内。保留时间和峰面积基本无明显变化 , 符合指纹图谱技术
要求。
3.2　稳定性实验 取同一份供试品溶液 , 分别在 0, 2, 4, 6, 12 h
处检测 , 其色谱峰保留时间的 RSD均在 0.2%以内 , 峰面积的
RSD均在 5%以内。表明样品溶液在 12 h内稳定。
3.3　重复性实验 取同一批样品如法制备供试品 5份检测 ,其色
谱峰保留时间的 RSD均在 0.3%以内 , 峰面积的 RSD均在 5%以
内。保留时间和峰面积基本无明显变化 ,表明方法重现性较好。
3.4　主要色谱峰的建立 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶
液各 10μl,注入高效液相色谱仪 , 记录 50 min的色谱图。检测
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.3　
指认结果 9批五指毛桃药材的指纹图谱 ,与参照物补骨脂素的色
谱峰(S)相对应的位置上 , 有一主要色谱峰 , 其占总峰面积的百
分比约为 50.26% ～ 62.27%。 50min内有 9个色谱峰是 9批五
指毛桃共有的。其在 5号峰和 6号峰(保留时间约在 23.5 min
和 27 min)的位置更具有特征性 , 为主要共有峰 , 5号峰对应为补
骨脂素的色谱峰(S)。因此 ,最终确定 9个色谱峰为共有指纹峰
见图 1,共有指纹峰的保留时间见表 2, 峰面积百分含量见表 3。
a-补骨脂素　b-样品
图 1　五指毛桃药材色谱峰图
表 2　9批五指毛桃样品共有指纹峰的保留时间 min
峰号 样 1 样 2 样 3 样 4 样 5 样 6 样 7 样 8 样 9
1 2.17 2.15 2.14 2.17 2.16 2.21 2.18 2.21 2.21
2 11.20 11.21 11.19 11.55 11.53 11.46 11.40 11.62 11.40
3 16.29 15.92 16.31 16.91 16.89 16.19 15.96 15.05 15.98
4 20.15 20.97 20.90 20.39 20.54 20.01 20.40 20.61 20.39
5 23.21 23.36 23.26 23.65 23.63 23.55 23.47 23.72 23.47
6 26.78 26.96 26.84 27.29 27.27 27.16 27.09 27.37 26.60
7 28.72 29.03 28.85 29.57 29.54 28.99 28.94 28.74 29.26
8 31.87 - 31.93 31.78 32.58 32.22 31.64 - 32.18
9 41.78 41.34 41.60 42.01 42.01 41.90 41.82 42.10 41.67
表 3　指纹图谱主要共有峰的峰面积百分含量 %
峰号 样 1 样 2 样 3 样 4 样 5 样 6 样 7 样 8 样 9
1 11.09 8.77 8.55 5.44 19.41 10.11 17.51 45.19 40.34
2 3.94 1.75 4.98 4.34 5.99 1.55 8.10 5.89 14.47
3 2.46 0.27 1.69 2.58 1.12 0.18 1.03 0.78 1.11
4 0.24 3.33 0.48 0.14 0.23 0.17 0.27 0.92 0.54
5 62.27 60.21 57.30 50.40 50.26 61.77 52.61 24.00 20.64
6 7.42 8.16 11.32 6.43 4.83 13.15 3.64 2.49 0.72
7 1.20 1.04 2.28 2.69 0.37 0.19 0.41 0.59 0.80
8 0.28 - 3.37 0.26 0.88 0.17 0.46 - 0.29
9 4.94 1.49 2.63 3.68 6.58 4.06 7.99 7.70 6.19
3.5　样品指纹图谱相似度分析 五指毛桃 9批药材样品指纹图
谱与相似度计算机软件(SPSS)得出的共有模式相比较 , 其相似
度结果见表 4。
4　讨论
由于五指毛桃药材成分复杂 ,实验中选择单一流动相无法达
到很好的分离效果 , 而采用梯度洗脱可以在整个分析时间段(50
min)内 ,各色谱峰峰形尖锐 ,并能尽可能多地对各组分进行很好
的分离 , 达到较好分离效果。我们考察了甲醇 -水不同比例以及
不同洗脱梯度的试验 , 结果表明 ,本实验所采用的流动相:0 min,
甲醇 -水(15∶85);20 min, 甲醇 -水(55∶45);40 min,甲醇 -
水(85∶15);45 min,甲醇 -水(100∶0);50 min,甲醇 -水(15∶
85)。其分离效果较好。
在检测波长的选择中 ,采用二极管阵列检测器(DAD)检测 ,
在 215, 246, 270, 290和 320 nm中的色谱图进行比较 , 结果在 246
nm处的色谱图中出峰较多 ,峰形较好 , 而且是五指毛桃药材主要
成分补骨脂素的最大吸收波长 ,因此我们选取 246 nm作为其指
纹图谱的检测波长。
表 4　与共有模式比较的五指毛桃样品
相似度评价(SPSS软件)
编号 样品来源 相似度
1 广东河源Ⅰ 0.994
2 广东河源 I 0.993
3 广东从化 0.991
4 广东清远 0.951
5 广东翁源 0.979
6 广西 0.993
7 广西桂林 0.979
8 广东连平 0.502
9 广西玉林 0.456
实验中制备五指毛桃样品液 ,我们选择 7种提取溶剂系统即
50%甲醇 , 甲醇 ,乙醇 , 醋酸乙酯 , 乙醚 , 氯仿 , 石油醚进行考察。
结果显示在同样超声 30 min的情况下 , 以甲醇的提取效果最佳。
而对提取方法的考察 ,以甲醇为提取溶媒 , 分别采用浸泡 24 h, 加
热回流 2h,索氏提取 4h和超声提取 30 min等 4种提取方法的提
取效率 , 发现甲醇热回流和甲醇超声提取对五指毛桃药材进行处
理所得色谱图峰数较多 ,更能体现药材原有的面貌。经过实验比
较 , 用甲醇超声提取 30 min的操作相对简单 , 效果较佳 , 最后选
定其作为本实验的提取方法。
实验结果显示 ,五指毛桃 1 ～ 7号样品相似度均达到 95%以
上 , 说明其指纹图谱具有较高的相似性。 8 ～ 9号样品相似度偏
低 , 与其药材中参杂较多的茎枝部分有关。五指毛桃的药用部位
主要是根 , 但据市场情况来看 , 不同地区采用根茎混用的情况是
存在的 。
测定结果表明 ,不同产地的五指毛桃药材指纹图谱的 9个共
有峰保留时间 ,均具有较好的重现性;其中 , 1号样品各号峰均齐
全 , 共有峰面积大 , 5号峰和 6号峰的峰面积百分含量高 , 初步认
为它的质量最好 ,这与有关河源产地的五指毛桃质量检测最佳的
研究报道相符 [ 8];同样源于河源产地的 2号样品 , 其各号峰也较
齐全 , 但与样品 1相比 , 其 4号峰异常的高 ,且缺少 8号峰 , 由于
它们分别购于不同的时间段 , 究竟是何原因造成这种差异 , 有待
日后的调查研究。
因实验条件限制 ,我们没能在各个产地采集多批次的样品进
行试验 , 本实验也只是对五指毛桃药材指纹图谱作初步的探讨研
究 , 为提高其质量控制标准提供检测方法。
参考文献:
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州:广东科技出版社 , 2004:35.
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2000, 2(7):17.
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药材 , 2002, 25(4):265.
[ 8 ] 　刘春玲 ,徐鸿华.高效液相色谱法测定五指毛桃中补骨脂素的含量
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.3 时珍国医国药 2009年第 20卷第 3期