全 文 ：［收稿日期］ 20140505(015)
［基金项目］ 广西科技攻关计划项目(桂科攻 1355004-12) ;广西区中管局民族医药传承专项(GZBZ14-08)
［第一作者］ 洪江，在读硕士，从事中药成分分析与质量控制研究，Tel:0771-2219877，E-mail:975337896@ qq． com
［通讯作者］ * 覃洁萍，教授，硕士生导师，从事中药分析与质量控制研究，Tel:0771-2279189，E-mail:chinaqjp6380@ 163． com
广西藤茶不同提取物中 2 种黄酮类成分的含量测定
洪江，覃洁萍* ，奉艳花，王淼
(广西中医药大学 药学院，南宁 530001)
［摘要］ 目的:测定藤茶不同提取物中 2 种主要活性成分双氢杨梅树皮素及杨梅树皮素的含量，为其研究开发提供科学
依据。方法:采用反相高效液相色谱法。十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱，流动相甲醇-0. 1%磷酸水溶液梯度洗脱，检测波长
0 ～ 10 min，291 nm，10 ～ 30 min，375 nm。结果:藤茶嫩茎叶提取物中双氢杨梅树皮素含量高于地上部分提取物中的含量;藤茶
嫩茎叶经炮制后其提取物中双氢杨梅树皮素的含量有较大提高;但随着煎煮时间延长，提取物中双氢杨梅树皮素的含量减
少。结论:炮制及提取时间对藤茶提取物中活性成分的含量有较大影响。
［关键词］ 藤茶;提取物;双氢杨梅树皮素;杨梅树皮素;高效液相色谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1;Ｒ282． 7 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)04-0056-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015040056
Determination of Contents of Dihydromyricetin and Myricetin in Ampelopsis Grossdentatae Caulis Extracts
HONG Jiang，QIN Jie-ping* ，FENG Yan-hua，WANG Miao (College of Pharmacy，Guangxi University of
Chinese Medicine，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:To determine two main active constituents，dihydromyricetin and myricetin，in
Tengchasu extracts which are derived from Ampelopsis Grossdentatae Caulis，and to provide scientific basis for the
development and utilization of Ampelopsis Grossdentatae Caulis． Method:ODS was used as stationary phase，the
mobile phase consisted of methanol and 0. 1%H3PO4 water solution，and a gradient elution was used． The detection
wavelengths were set at 291 nm for dihydromyricetin and 375 nm for myricetin． Ｒesult:The content of
dihydromyricetin in the extract from the tender leave was higher than that from the aerial parts，and simple stir-fried
can make the content of dihydromyricetin in the extract from the tender leave increased，but as the decocting time
extended，the content of dihydromyricetin in the extract decreased． Conclusion:The preparation methods and
decocting time have great influences on the content of the active ingredients in tengchasu extracts．
［Key words］ Ampelopsis Grossdentatae Caulis;extract;dihydromyricetin;myricetin;ＲP-HPLC
广西藤茶又名藤茶，广泛分布于广西各地以及云
南、广东、湖南等地。《中草药汇编》及《广西药用植
物名录》记载，该药性味甘淡，具清热解毒等功效，主
治黄疸型肝炎、感冒风热、咽喉肿痛，并具解酒作
用［1-2］。药理实验表明藤茶黄酮具有明显的抗炎和镇
痛作用［3］，此外，还能明显增加小鼠胸腺和脾脏的质
量，对氢化可的松所致胸腺和脾脏萎缩有一定的保护
作用［4］，并有较好的降血糖、降血脂和抗氧化作
用［5-7］。藤茶中主要有效成分为黄酮类化合物［8-9］，前
期研究建立了简便快速的藤茶黄酮(藤茶素)提取方
法，该提取物中主要活性成分双氢杨梅树皮素和杨梅
树皮素总含量高达 90%以上［10］。为考察该提取方法
的适用性，本文测定了不同来源藤茶药材提取物中双
氢杨梅树皮素和杨梅树皮素的含量，为藤茶黄酮的规
范化提取及其开发应用提供实验依据。
1 仪器与试药
1100 系列高效液相色谱仪(包括 G1314A 型
VWD紫外检测器，G1313A 型自动进样器，G1316A
型智能化柱温箱，G1311A 型四元梯度泵，G1322A
型脱气机，美国安捷伦)。甲醇(优级纯，北京化工
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厂) ，水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯。双氢
杨梅树皮素、杨梅树皮素对照品由广西中医药大学
分析化学教研室提供，经 HPLC 进样20 μg按归一化
法检测，双氢杨梅树皮素和杨梅树皮素含量均达 ＞
99%，符合含量测定的要求。
本实验中所用藤茶采于广西金秀县和贵港市，
并经本院药用植物教研室蔡毅教授鉴定为葡萄科植
物显齿蛇葡萄 Ampelopsis grossedentata 的嫩茎叶。
药材经 60 ℃烘干或按传统炮制方法炮制后备用。
2 藤茶提取物的制备
取加工好的藤茶地上部分或嫩茎叶，按文献
［8］方法水煎煮提取，制得藤茶素提取物 1-1 ～ 1-6。
藤茶药材及提取物样品信息见表 1。取加工好的藤
茶地上部分或嫩茎叶，按文献［8］方法水煎煮提取
法，提取时煎煮时间延长 2 倍，制得表 1 中藤茶素提
取物 2-1 ～ 2-3。
表 1 藤茶药材及提取物样品信息
Table 1 Information of Ampelopsis Grossdentatae Caulis and the
extracts
批次 产地 药材部位 加工方法 提取物性状
提取物
得率 /%
1-1 金秀长洞 地上部分 60 ℃烘干 土黄色 8. 80
1-2 广西金秀 地上部分 60 ℃烘干 土黄色 8. 90
1-3 广西金秀 地上部分 传统炮制 浅黄色 12. 5
1-4 金秀长洞 嫩茎叶 60 ℃烘干 黄色 15. 7
1-5 广西贵港 嫩茎叶 传统炮制 淡黄色 25. 7
1-6 广西金秀 嫩茎叶 传统炮制 浅黄色 21. 4
2-1 广西金秀 地上部分 传统炮制 黄色 8. 80
2-2 广西金秀 嫩茎叶 传统炮制 黄色 19. 1
2-3 广西贵港 嫩茎叶 传统炮制 黄色 23. 3
3 方法与结果
3. 1 色谱条件 Shimpack CLC ODS 色谱柱
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 1% 磷
酸，梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 0 ～
10 min，291 nm;10 ～ 30 min，375 nm。见图 1。
3. 2 检测波长的选择 从双氢杨梅树皮素、杨梅树
皮素对照品的 UV 图谱，可知双氢杨梅树皮素 λmax
为 291 nm，杨梅树皮素 λmax为 254 nm 和 375 nm。
但 375 nm 处杨梅树皮素的吸收强度高于 254 nm
处，为了同时测定 2 组分，并获得最大测量灵敏度，
本实验选择 291 nm 和 375 nm 变换波长进行测定。
在双氢杨梅树皮素的出峰时间 0 ～ 10 min 选择了
291 nm作为检测波长，而在杨梅树皮素的出峰时间
1. 双氢杨梅树皮素;2. 杨梅树皮素;A. 混合对照品;B. 样品 1-2;
C. 样品 1-3;D. 样品 2-1
图 1 藤茶样品 HPLC
Fig． 1 HPLC chromatograms of Ampelopsis Grossdentatae Caulis
10 ～ 20 min选择 375 nm作为检测波长。
3. 3 对照品溶液的制备 精密称取双氢杨梅树皮
素和杨梅树皮素对照品适量，置于量瓶中，用甲醇溶
解并定容，制成含双氢杨梅树皮素 1. 15 g·L －1，杨梅
树皮素 1. 38 g·L －1的混合对照品溶液。
3. 4 供试品溶液的制备 精密称取藤茶提取物
25 mg，置于 50 mL量瓶中，加入甲醇 45 mL，超声处
理 40 min。放冷至室温后，用甲醇定容至刻度，摇
匀，过滤。精密移取续滤液 5 mL 到 10 mL 量瓶中，
加甲醇定容至刻度，摇匀。用 0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，即得供试品溶液。
3. 5 线性关系考察 分别精密吸取 3. 3 项下的混
合对照品溶液 1，2，3 μL和稀释 10 倍后的混合对照
品溶液 1，3，6 μL，按 3. 1 项下的色谱条件进行测
定，以对照品的进样量 X(μg)对峰面积的积分值 Y
进行线性回归分析，结果表明，双氢杨梅树皮素在
0. 115 ～ 3. 44 μg，杨梅树皮素在 0. 138 ～ 4. 13 μg，与
其峰面积之间均呈良好的线性关系，双氢杨梅树皮
素的回归方程为 Y = 2 901. 06X － 2. 1(r = 0. 999 9);
杨梅树皮素的回归方程为 Y = 2 409. 08X － 73. 3
(r = 0. 999 9)。
3. 6 精密度试验 精密吸取样品 1-5 的供试品溶
液，连续进样 6 次，每次进样 5 μL测定，结果表明双
氢杨梅树皮素和杨梅树皮素色谱峰面积的 ＲSD 分
别为 1. 6%，1. 7%，表明仪器精密度良好。
3. 7 稳定性试验 取样品 1-5 的供试品溶液，避强
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光放置，每隔 2 h 进样测定 1 次，连续测量 12 h，结
果双氢杨梅树皮素和杨梅树皮素峰面积的 ＲSD 分
别为 1. 4%，2. 2%。表明供试品溶液中双氢杨梅树
皮素和杨梅树皮素在 12 h内稳定。
3. 8 重复性试验 精密称取样品 1-5 的提取物粉末
25 mg各 6份，按 3. 4项下方法制备供试品溶液，再按
3. 1项下的色谱条件进行测定。结果 6 份样品测得
双氢杨梅树皮素含量平均值为 0. 883 mg·g －1，ＲSD
0. 9%;杨梅树皮素的含量平均值为 78. 6 mg·g －1，
ＲSD 2. 7%。表明该法重复性较好。
3. 9 加样回收率试验 取样品 1-5 的藤茶提取物
约 12 mg共 6 份，精密称定，分置于 6 个 50 mL量瓶
中，然后在每个量瓶中精密加入双氢杨梅树皮素
(4. 43 g·L －1) ，杨梅树皮素(0. 386 g·L －1)的对照
品储备液 2. 5 mL，按 3. 4 项下方法制备，按 3. 1 项
下的色谱条件进行测定，计算加样回收率［11］，结果
见表 2。
表 2 藤茶提取物样品中 2 种黄酮类成分的加样回收率测定
Table 2 Ｒecoveries for 2 constituents in Ampelopsis Grossdentatae
Caulis extract
成分
取样量
/mg
样品中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
双氢 11． 8 10． 4 11． 1 21． 5 100． 0 99． 6 2． 0
杨梅素 12． 7 11． 2 11． 1 22． 5 100． 0
12． 6 11． 1 11． 1 21． 9 101． 8
12． 7 11． 2 11． 1 22． 4 98． 2
12． 6 11． 1 11． 1 21． 8 100． 9
12． 0 10． 6 11． 1 21． 7 96． 4
杨梅素 11． 8 0． 93 0． 92 1． 88 103． 6 99． 4 2． 8
12． 7 1． 00 0． 92 1． 91 99． 1
12． 6 0． 99 0． 92 1． 87 95． 7
12． 7 1． 00 0． 92 1． 92 100． 2
12． 6 0． 99 0． 92 1． 89 97． 0
12． 0 0． 94 0． 92 1． 87 100． 8
3. 10 样品含量测定 取藤茶提取物25 mg，精密称
定，按 3. 4 项下方法制备供试品溶液，再按 3. 1 项下
的色谱条件进行测定，进样 5 μL，测定，计算样品中
双氢杨梅树皮素和杨梅树皮素的含量。结果见
表 3。
4 讨论
中药材及其提取物中主要活性成分的含量，直
接影响其后续产品的质量与疗效。对中药材及其提
取物中与其主治相吻合的主要活性成分进行定量分
表 3 藤茶提取物样品中 2 种黄酮类成分含量测定
Table 3 Ｒesults of 2 constituents in Ampelopsis Grossdentatae
Caulis g·g － 1
批次 双氢杨梅树皮素 杨梅树皮素
1-1 0． 087 6 0． 161
1-2 0． 103 0． 171
1-3 0． 658 0． 126
1-4 0． 116 0． 231
1-5 0． 883 0． 078 6
1-6 0． 852 0． 064 2
2-1 0． 096 3 0． 347
2-2 0． 651 0． 093 6
2-3 0． 751 0． 097 2
析，以评价其质量是中药现代化及中药走向世界的
关键问题之一。研究表明，广西藤茶中主要活性成
分为双氢杨梅树皮素和杨梅树皮素。本文应用高效
液相色谱法测定了广西藤茶不同药材来源提取物中
这两个主要活性成分的含量，旨在为藤茶提取物的
规范化提取及其开发应用提供实验基础和依据。
实验结果显示，在相同提取条件下，藤茶嫩茎叶
提取物的收率明显高于地上部分茎叶提取物的收
率，且藤茶嫩茎叶提取物中双氢杨梅树皮素和杨梅
树皮素的总含量也较高。这可能是由于藤茶嫩茎叶
中这两种成分含量较高所致。
实验中发现，在相同提取条件下，炮制后藤茶提
取物的收率明显高于未经炮制藤茶提取物的收率，
且经炮制后的藤茶提取物中双氢杨梅树皮素含量明
显提高。显然炮制对广西藤茶中主要活性成分的含
量有较大影响，经传统炮制后可使藤茶提取物中主
要活性成分双氢杨梅树皮素含量大大提高。
延长煎煮时间试验显示，水煎煮时间超过 3 h，
藤茶提取物的收率明显减少，提取物中双氢杨梅树
皮素含量也明显减少，但杨梅树皮素含量稍有提高。
实验结果显示，水煎煮时间过长，可能会造成部分活
性成分的损失，但有利于提高提取物中杨梅树皮素
的含量。
以上研究结果显示，炮制及提取时间对广西藤
茶提取物中主要活性成分的含量有较大影响。因
此，在利用广西藤茶及提取物开发藤茶相关产品时，
必须首先规范藤茶药材的来源及提取物的制备方
法，才能有效地保证相关产品的质量。
本实验采用变换波长法同时测定双氢杨梅树皮
素和杨梅树皮素的含量，目的是使藤茶中这两种活
性成分都能在其最大吸收波长下进行测定，从而在
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使各成分都能获得最大的检测灵敏度。
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［责任编辑 顾雪竹
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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