全 文 ：藤梨根提取物对人胃癌ＢＧＣ细胞凋亡及
Ｂａｘ蛋白表达的影响
郭　洁，王小平，白吉庆
（陕西中医学院，陕西 咸阳７１２０４６）
摘　要：目的：探讨藤梨根提取物对人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞凋亡的影响及其调控机制。方法：体外培养对
数生长期胃癌ＢＧＣ－８２３细胞，采用不同浓度的藤梨根提取物作用于人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞，流式细胞仪
检测细胞凋亡，采用免疫组织化学方法检测Ｂａｘ蛋白表达。结果：藤梨根作用于ＢＧＣ－８２３，在８～３２ｍｇ
·ｍＬ－１时呈不同程度的促进凋亡；藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞中Ｂａｘ表达水
平上调。结论：藤梨根提取物对人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的增殖具有明显抑制作用，在实验浓度范围内呈
浓度依赖性促进细胞凋亡，这可能与激活Ｂａｘ蛋白表达有关。
关键词：藤梨根；人胃癌ＢＧＣ细胞；Ｂａｘ蛋白
中图分类号：Ｒ２８５．６　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１４）１３－００１２－０２
收稿日期：２０１４－０２－２１
基金项目：陕西省教育厅资助项目（０８ＪＫ２６６）；陕西省科技厅中药现代化资助项目［（２００９Ｋ１９－０３（２）；２０１０Ｋ１７－０２）］
作者简介：郭洁 （１９８０－），女，陕西中医学院讲师，研究方向为中药及复方药理作用。
Ｔｈｅ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｋｉｗｉ　Ｒｏｏｔ　Ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｇａｓｔｒｉｃ　Ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ　Ｃｅｌ
Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂａｘ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
Ｇｕｏ　Ｊｉｅ，Ｗａｎｇ　Ｘｉａｏｐｉｎｇ，Ｂａｉ　Ｊｉｑｉｎｇ
（Ｓｈａｎｘｉ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｘｉ　７１２０４６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｄｉｓｃｕｓｓ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ　ｐｈａｓｅ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ａｃｔ　ｏｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ．Ｔｈｅ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ａｎｄ　Ｂａｘ　ｐｒｏ－
ｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｃａｎ　ａｃｔ　ｏｎ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ．Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｉｎ　８～３２
ｍｇｏｍｌ－１　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｖｅｌ．Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｒａｉｓｅｄ　Ｂａｘ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－
８２３ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｌａｒｇｅ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｒ　ｓｍａｌ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｈａｓ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ
ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ－８２３ｃｅｌｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｋｉｗｉ　ｒｏｏｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃｅｌ　ａｐ－
ｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ，ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｋｉｗｉ　Ｒｏｏｔ；Ｈｕｍａｎ　Ｇａｓｔｒｉｃ　Ｃａｎｃｅｒ　ＢＧＣ　Ｃｅｌ　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ｂａｘ　Ｐｒｏｔｅｉｎ
　　胃癌是我国最常见的肿瘤之一，其死亡人数在我国居
恶性肿瘤的首位［１］。藤梨根为猕猴桃科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）猕
猴桃属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｌｉｎｄｉ）软枣猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａａｒｇｕｔａ（Ｓｉｅｂ．
ｅｔ　Ｚｕｃｃ．）Ｐｌａｎｃｈ的根［２］。现代药理研究表明：藤梨根具有
抗肿瘤、调节免疫等作用，可用于治疗消化系统癌症等
症［３－４］。本实验采用藤梨根乙酸乙酯提取物，经初步实验，对
人胃腺癌ＳＧＣ－７９０１细胞有较好的抗瘤效果。为了进一步
验证藤梨根提取物的抗胃癌效果，本实验研究藤梨根提取
物对人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞凋亡及其部分作用机制，为临床
应用研究提供相关实验依据。
１　材料
人胃癌 ＢＧＣ－８２３细胞株（陕西中医学院病理学实验
室），ＲＰＭＩ　１６４０培养基（购自ＧＩＢＣＯ公司），小牛血清（Ｈｙ－
ｃｌｏｎｅ公司），Ｂａｘ一抗（北京中杉金桥生物技术有限公司提
供），ＳＡＢＣ试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司提供），
ＤＡＢ试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司提供）。Ｅｐ－ｉｃｓ
ＸＬ流式细胞仪（美国Ｂｅｃｋｍｏｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ公司）。荧光酶标仪
（ＴＥＣＡＮ公司），低温高速离心机（ＴＧＬ－１６Ｇ型上海医用分
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析仪器厂）。
２　方法
２．１　细胞培养
胃癌细胞株 ＢＧＣ－８２３培养于含１０％新生牛血清的
ＲＰＭＩ　１６４０培养液，置３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，每天换
液。待细胞生长密度８０％以上时，以０．２５％胰蛋白酶消化，
传代。
２．２　ＭＴＴ法检测细胞增殖水平
取对数增长的ＢＧＣ－８２３细胞制成１×１０５ 个／ｍＬ的细
胞悬液，每孔加入１５０μＬ，给不同浓度（８，１６，３２ｍｇ／ｍＬ）的
药物３０μＬ／孔，每个浓度重复３个孔，置ＣＯ２ 培养箱内培
养，分别在２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ测一次指标，检测前４ｈ加入５ｍｇ／
ｍＬ　ＭＴＴ贮存液２５μＬ／孔，于３７℃、５％ＣＯ２培养箱中孵育。
用自动酶标读数仪在５７０ｎｍ波长处测定每孔吸光度（Ａ）
值。计算细胞生长抑制率（ＧＩ），ＧＩ＝（１－实验组Ａ值／对照
组Ａ值）×１００％。重复实验５次。
２．３　流式细胞术检测细胞凋亡水平
取６孔板，接种培养细胞，置３７℃、５％ＣＯ２ 温箱培养，
培养至细胞生长密度为８０％以上，加无血清培养基，置
３７℃、５％ＣＯ２温箱继续培养２４ｈ，加入药物，使各组藤梨根
提取物的浓度为０、１６、３２ｍｇ／ｍＬ。置３７℃、５％ ＣＯ２ 温箱
继续培养２４ｈ。ＰＢＳ液洗涤，调整细胞浓度约为１×１０５ 个／
ｍＬ。每个浓度药物各取１ｍＬ细胞置于ＥＰ管中，每管１ｍＬ
细胞，离心５ｍｉｎ，弃上清液，每管加入１ｍＬ　ＰＢＳ，使细胞悬
浮，离心５ｍｉｎ，弃上清液；重复步骤，ＰＢＳ弃净，将细胞重悬
于２００μＬ　Ｂｕｆｆｅｒ，每管加入１０μＬ　Ａｎｎｅｘｉｎ　Ｖ－ＦＩＴＣ混匀，避
光反应１５ｍｉｎ，每管加入３００μＬ　Ｂｕｆｆｅｒ。上机前５ｍｉｎ加入
１０μＬ碘化乙啶（ＰＩ）染色，流式细胞仪检测细胞凋亡率。
２．４　Ｂａｘ蛋白表达水平检测
将对数生长期ＢＧＣ－８２３细胞接种于１２孔板内，按组加
入相应浓度的药物２４ｈ后取出，按照试剂盒使用说明检测
Ｂａｘ蛋白表达水平。
３　结果
ＭＴＴ法检测细胞增殖的影响。不同浓度的藤梨根提
取物作用于人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞１２ｈ后，对细胞增殖均有
不同程度抑制。ＭＴＴ法检测结果显示，当藤梨根提取物浓
度为８ｍｇ／ｍＬ时，对胃癌细胞增殖的抑制率为２０．９５％；浓
度为１６ｍｇ／ｍＬ，对胃癌细胞增殖的抑制率明显增强，为
２５．６３％；当浓度为３２ｍｇ／ｍＬ时，对人胃癌 ＢＧＣ－８２３细胞
的增殖抑制率达到５３．１９％。
对人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞凋亡水平的影响。本实验设空
白对照和３个藤梨根提取物组，结果表明，藤梨根提取物浓
度在１６ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ时能够显著诱导胃癌细胞的凋
亡。浓度为１６ｍｇ／ｍＬ时，凋亡细胞最多，浓度为３２ｍｇ／ｍＬ
时，死亡细胞迅速增多。见表１。
１６ｍｇ／ｍＬ藤梨根提取物处理１２ｈ后，免疫组化检测胃
癌ＢＧＣ－８２３细胞Ｂａｘ的蛋白表达水平，与对照组相比，藤梨
根提取物预处理可明显增加细胞内Ｂａｘ蛋白表达水平。见
表２。
表１　流式细胞术检测ＢＧＣ－８２３坏死、正常
和凋亡细胞比例变化
组别
剂量
（ｍｇ·ｍＬ－１）
细胞状态（％）
死亡 正常 凋亡
空白 － １０．０３　 ７６．１７　 ６．８７
藤梨根提取物 ８　 ７．３４　 ７２．７＊＊ ８．８２
藤梨根提取物 １６　 １２．４１＊＊ ５７．２４＊＊ ２１．２２＊＊
藤梨根提取物 ３２　 ３１．６２＊＊ ５０．９４＊＊ ８．２２＊＊
注：与空白对照组比较，＊＊Ｐ＜０．０１。
表２　藤梨根对胃癌ＢＧＣ－８２３细胞Ｂａｘ基因
蛋白表达的影响
组别 剂量（ｍｇ／ｍＬ） Ｂｃｌ－２阳性灰度值（珚ｘ±ｓ）
阴性对照组 － ７５．０５±１．１８
总黄酮（大） ３２　 ９３．４１±２．１１＊＊
总黄酮（中） １６　 ９４．０５±２．０３＊＊
总黄酮（小） ８　 １０４．５２±１．５９＊＊
注：与阴性对照组比较，＊＊Ｐ＜０．０１。
３　讨论
本实验中，我们通过免疫组化的方法证实了藤梨根预
处理可以有效增加Ｂａｘ表达水平，与此同时降低胃癌ＳＧＣ－
７９０１细胞中Ｐ５３和Ｂｃｌ－２的表达［５－６］，这些结果表明，藤梨根
促进胃癌细胞凋亡的细胞机制可能与Ｂａｘ、Ｐ５３和Ｂｃｌ－２的
表达密切相关，为了进一步探索藤梨根提取物的抗肿瘤作
用及其机理，我们还需进一步研究，确定其抑制肿瘤生长的
有效剂量。本研究的开展有利于指导今后藤梨根的临床用
药。
参考文献：
［１］　胡家露，樊代明．内科学［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００１：
５５７．
［２］　国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草（第三册，第
九卷）［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：５３６－５３７．
［３］　南京药学院《中草药学》编写组．中草药学（中册）［Ｍ］．南京：
江苏人民出版社，１９７６：６６２－６２３．
［４］　薛瑞，王小平．藤梨根提取物对裸鼠移植瘤的抑制作用研究
［Ｊ］．陕西中医，２００８，２９（５）：３６２－３６３．
［５］　王小平，白吉庆，叶峥嵘．藤梨根提取物对裸鼠移植人胃癌
ＳＧＣ－７９０１细胞瘤ｐ５３基因蛋白的影响［Ｊ］．现代中医药，
２０１２，３２（１）：５６－５７．
［６］　白吉庆 ，王小平，叶峥嵘．藤梨根提取物对人胃癌ＳＧＣ－７９０１
细胞凋亡及 Ｂｃｌ２的影响［Ｊ］．陕西中医学院学报，２０１２，３５
（１）：５９－６１．
（责任编辑：宋勇刚）
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