全 文 :·!!· 中国中医急症 #$$% 年 ! 月第 &’ 卷第 ! 期 ()*+,- ./0- #$$%,123- &’,42- !
表 & 各组小鼠耳廓肿胀比较 5 ! # 6
与空白对照组比较, $ 7 $- $’, $ 7 $- $&;与阳性对照组比
较,# $ 7 $- $’,## $ 7 $- $&。下同
组 别 %
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
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剂量
5 0 8 90 6
—
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耳廓肿胀度
5<0 6
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抑制率
5? 6
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五味藤 5 ABC/DEFGCG EHGIIBHFEC/3GJ KGLL9 6为远志科远志族五
味藤属攀援灌木,分布于印度、缅甸、越南、印度尼西亚和马来西
亚,在我国分布于广东、海南、广西和云南。其根茎味辛、甘、苦,
性微寒,有活血化瘀、消肿止痛、清热利尿的功效,用于跌打损
伤、风湿骨痛、腰肌劳损、急慢性肠胃炎、产后恶露不净等;其茎
叶常用于治疗过敏性皮疹,对风湿关节炎亦有较好疗效。本实
验考察五味藤提取物的抗炎药理作用并初步探寻其作用机制,
为五味藤的临床应用提供理论及实验依据。现报告如下。
! 材 料
&- & 药品 五味藤由玉林制药厂提供。五味藤浸膏 5MM*6制
备为五味藤粗粉 #’90,水煮 : 次,过滤,合并滤液,浓缩至
&$$<3,备用。地塞米松片由广东华南制药厂提供。
&- # 试剂 一氧化氮 54N6 试剂盒由南京建成生物工程研究
所提供,总蛋白 5 *O 6测定试剂盒 5双缩脲法 6由成都迈克生物试
剂公司提供,冰乙酸 5K+.6由广东汕头新宁化工厂提供,角叉菜
胶由福建食品有限公司提供,伊文思蓝由中国医药上海化学试
剂公司提供,巴豆油由桂林医学院药理教研室自行提取配制。
&- : 仪器 PQ @ %>$紫外可见光光度计由美国 RBC9
平由 AJGDJ2DE/L公司生产,微量移液器由 *SBD<2 TGULVLJB
&- > 动物 昆明种小鼠,体重 5 #$ = # 6 0;MELJGD 大鼠,体重
5 #’$ = :$ 6 0,均由广西医科大学实验动物中心提供 5许可证号:
桂动许字 #$$$ 第 $$& 号 6。
方法与结果
#- & 小鼠耳廓肿胀抑制试验 按文献 X & Y方法,取健康小鼠 ’$
只,雄性,按体重随机分为 MM*高剂量组、MM*中剂量组、
MM*低剂量组 5以下分别简称高、中、低剂量组 6、阳性对照组和
空白对照组五组,每组 &$ 只。各组均灌胃给药,连续 ’F。空白对
照组给予生理盐水,阳性对照组给予 &$<0 8 90 地塞米松,高、
中、低剂量组分别依次给予 :- $0 8 90、&- ’0 8 90、$- ;’0 8 90 MM*,
给药容量均为 $- #<3 8 &$0体重。末次给药后 &S,于每鼠右耳涂
#?巴豆油 $- $’<3致炎,>S后处死动物,剪切两耳,用直径 !<<
的打孔器在两耳相同部位打下圆形耳片,称重,计算肿胀度 5左
右耳片重量差值 6和抑制率。抑制率 Z 5& @用药组肿胀度均值 8
空白对照组肿胀度均值 6 [ &$$?。结果见表 &。与空白对照组比
较,阳性对照组与高、中、低三个剂量组耳廓肿胀度存在显著性差
异 5 $ 7 $- $& 6;对于巴豆油所致小鼠耳廓肿胀的抑制率,高剂
量组为 %>- >%?,高于阳性对照组的 ’#- %#? 5 $ 7 $- $’ 6,中剂
量组抑制率与阳性药相当 5 $ \ $- $’ 6,低剂量组抑制率
5 :%- %;? 6低于阳性对照组 5 $ 7 $- $’ 6。
#- # 角叉菜胶致小鼠足趾肿胀抑制实验 按文献 X # Y方法,取
健康小鼠 ’$只,分组及给药方法同 #- &节,连续 ’F。末次给药后
&S于每鼠右侧足趾皮下注射 &?角叉菜胶 $- $’<3,>S后沿踝关
节剪切左右两足,称重,计算肿胀度 5左右足重量差值 6 和抑制
率。抑制率 Z 5& @用药组肿胀度均值 8空白对照组肿胀度均值 6
[ &$$?。结果见表 #。阳性对照组左右足跖重量差值与空白对
照组有极显著性差异 5 $ 7 $- $& 6,抑制率为 %;- $$?,高、中、低
剂量组左右足跖重量差值与空白对照组也有极显著性差异 5 $
7 $- $& 6,抑制率分别依次为 %’- &’?、’!- $!?、>#- ;%?,高剂
&桂林医学院 5桂林 ’>&$$& 6
#广西医科大学第六附属医院 5桂林 ’>&$$$ 6
五味藤抗炎作用及其机制初探
李勇文 & 李 丽 & 李植飞 & 徐 庆 & 陈昭英 #
中图分类号:]#!’- ’ 文献标识码:. 文章编号:&$$> @ ;>’^5#$$% 6$! @ $!! @ $:
【摘要】 目的 研究五味藤水提物的抗炎作用并探寻其部分机制。方法 通过巴豆油诱导小鼠耳肿胀、角叉
菜胶诱导小鼠足爪肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶致大鼠胸膜炎和棉球诱导大鼠肉
芽肿模型,观察五味藤的抗炎作用;检测角叉菜胶致大鼠胸膜炎大鼠胸腔渗出液中总蛋白、4N及 O_)# 含
量的测定和对小鼠炎性组织中 O_)# 含量的测定,初步探索五味藤的抗炎作用机制。结果 五味藤水提物对
巴豆油诱导的小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱导的小鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿、醋酸致小鼠腹腔毛细
血管通透性增加和角叉菜胶致大鼠胸膜炎具有抑制作用,对角叉菜胶致大鼠胸膜炎大鼠胸腔液中总蛋白、
4N及 O_)# 有抑制作用。结论 五味藤有较强的抗炎作用,抗炎机制与抑制 O_)#、4N生成及抑制总蛋白渗出
有关。
【关键词】 五味藤 提取物 炎症 作用机制 前列腺素 )# 一氧化氮
·实验研究·
中国中医急症 !# 年 $ 月第 %& 卷第 $ 期 ’()*+, -./, !#,012, %&,31, $ ·$44·
组 别 !
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
%
%
%
%
%
剂量
5 / 6 7/ 8
—
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肉芽组织重
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抑制率
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表 = 各组大鼠棉球致肉芽肿比较 5 # $ 8
表 # 各组大鼠胸腔渗出液中蛋白含量、3?及 @A(! 比较 5 # $ 8
组 别 !
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
%
%
%
%
%
剂量
5 / 6 7/ 8
—
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蛋白质含量
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@A(!
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组 别 !
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
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剂量
5 / 6 7/ 8
—
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@A(! 含量 ?C值
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9, #& < , $&
表 : FF)对小鼠炎性组织中 @A(! 含量的影响 5 # $ %
组 别 !
表 ! 各组小鼠足跖肿胀比较 5 # $ 8
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
%
%
%
%
%
剂量
5 / 6 7/ 8
—
, %
9,
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, :&
足跖肿胀度
5;/ 8
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抑制率
5> 8
—
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&$, $
=9, :#
量组抑制率接近阳性对照组 5 & G , & 8。
!, 9 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 按文献 H 9 I方法,取
健康小鼠 &只,动物分组及给药同 !, % 节,连续 &J。末次给药后
%K,尾静脉注射 , &>伊文思蓝生理盐水溶液 , %;2 6 %/,随即
腹腔注射 , #>L-M , %;2 6 %/N !;OP后脱颈椎处死小鼠,腹
腔注射生理盐水 #;2,轻揉腹部,剪开腹腔,用吸管吸出洗涤液,
加入生理盐水 %;2,9QR;离心 %&;OP,取上清液用紫外分光
光度计 5 S &4P;8测 ?C值。腹腔注射稀醋酸能引起毛细血管
通透性增加,使尾静脉注入的伊文思蓝染色液渗出至腹腔内,测
定腹腔炎性渗出液的 ?C值可反映毛细血管通透性情况。结果
见表 9。高剂量组和阳性对照组动物腹腔炎性渗出液的 ?C值明
显低于空白对照组 5 & T , % 8,中剂量组与空白对照组 ?C值
的差异有显著性 5 & T , & 8,低剂量组毛细血管通透性有降低
趋势,但无统计学意义 5 & G , & 8。
!, = 对大鼠棉球肉芽肿的抑制作用 按文献 H =,& I方法,取健
康雄性大鼠 & 只,动物分组同 !, %节。在乙醚吸入浅麻醉无菌
条件下,作鼠蹊部切口,将已称重灭菌的棉球 5 !;/ 6个 8植于切
口皮下。术后外涂毒霉素溶液防止抗感染。各组大鼠于手术当日
给药,连续 :J,于第 $日处死,取棉球及肉芽组织,在 4U恒温
器中烘 %K,称重,计算肉芽重量并计算抑制率。肉芽重量 S带肉
芽组织的棉球重量 E棉球原始重量;抑制率 S 5% E用药组平均
肿胀度 6空白对照组平均肿胀度 8 D %>。在动物体内植入棉
球可引起慢性炎症,相当于某些炎症后期的病理变化相似的肉
芽增生。实验结果见表 =。阳性对照组、高剂量组和中剂量组的
肉芽组织重量明显轻于空白对照组 5 & T , % 8,高剂量组作用
与阳性对照组相当 5 & G , & 8,低剂量组与空白对照组肉芽组
织重量差异显著 5 & T , & 8。
!, & 大鼠胸腔白细胞游走抑制试验 按文献 H # I方法,取正常
健康大鼠 & 只,动物分组及给药同 !, %节,连续 &J。末次给药
后%K,于大鼠右侧胸腔 5尽量靠胸腔右后角以免损伤肺叶 8注入灭
菌%>角叉菜胶生理盐水溶液 , !;2 6 %/,&K后脱颈椎处死大
鼠,在横膈周边部剖开胸腔 5避免血液渗入胸腔 8,用微量加样器
取&!2胸腔渗出液,用 %>冰醋酸水溶液作为稀释液,稀释至
!;2,按白细胞计数法在倒置显微镜下观察计数白细胞。角叉菜
胶是常用的致炎剂,给大鼠胸腔注射,可以产生渗出和白细胞游
走等急性炎症反应。结果见表 &。阳性对照组、高剂量组和中剂量
组的白细胞数量明显低于空白对照组,且差异极其显著 5 & T
, % 8,低剂量组也显著低于空白对照组 5 & T , & 8。
!, # 对角叉菜胶致胸膜炎大鼠胸腔渗出液中蛋白含量、@A(!
及 3?的影响 按文献 H 9 I方法,将 !, & 节胸膜炎动物模型中所
取得的胸腔渗出液离心后,取 , &;2上清液对蛋白进行定量测
定 5按总蛋白药盒说明书方法 8;另取 , %&;2上清液加 , &;12 6
BV?L E甲醇溶液 %;2,&U下异构化 !;OP,用甲醇稀释至
=;2,于紫外分光光度计 5 S !:$P;8测定 ?C值 5代表 @A(!的生
成量 8;另取 !!2上清液对 3?进行定量测定 5按 3?试剂盒说
明书方法 8。结果见表 #。可见 FF)能明显降低角叉菜胶致胸膜
炎大鼠胸腔渗出液中蛋白质含量,减少大鼠胸膜炎渗出液中 3?
的产生和 @A(!的生成。
!, : 对小鼠炎性组织中 @A(! 含量的影响 按文献 H 9 I 方法,
取健康雄性小鼠 & 只,动物分组及给药同 !, % 节,连续给药
&J,第 # 日给药 , &K 后于右后足跖皮下注射 %>角叉菜胶
, %;2致炎,=K后处死小鼠,于踝关节上 , &M;处剪切炎性肿
胀足,称重,生理盐水 &;2浸泡 %K,取出,离心浸泡液,吸取上清
液 , %;2,加 , &;12 6 B V?L E甲醇溶液 !;2,在 &U下异构化
!;OP,用甲醇稀释至 !;2,置紫外 E可见分光光度计 5 S
!:$P;8测定 ?C值,以每克炎性组织相当的 ?C值表示 @A(!的
含量。结果见表 :。阳性对照组和高、中剂量组与空白对照组比
较,@A(! 含量 5?C值 8均降低,差异显著 5 & T , % 8,且高剂量
表 9 各组小鼠毛细血管通透性比较 5 # $ 8
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
%
%
%
%
%
剂量
5 / 6 7/ 8
—
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抑制率
5> 8
—
#!, :!
&%, &=
!$, =!
%&, !%
表 & 各组大鼠胸腔白细胞游走情况比较 5 # $ 8
组 别 !
空白对照组
阳性对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组
%
%
%
%
%
剂量
5 / 6 7/ 8
—
, %
9,
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白细胞
5 D %4 6 B 8
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!%, !% < 9, =$##
9, 4 < =, =!##
9=, $& < :, &9##
抑制率
5> 8
—
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=$, !
!=, &
%=, 4
组 别 ! ?C值
·!· 中国中医急症 #$ 年 % 月第 &’ 卷第 % 期 ()*+,- ./0- #$,123- &’,42- %
的炎症和损害,此为加重缺血性脑损害的主要机制 5$ 6。
本观察显示,大、中等面积 .+*患者发病时及 #周后
*47 8 !、9: 8 $水平均显著高于健康人,说明 .+*早
期存在较强的炎症及免疫应答,且持续时间较长,此可
能是迟发性神经损害的主要病理机制。而且 .+9患者
+;$#<表达与 *47 8 !、9: 8 $水平升高呈正相关,提示
细胞因子介导的中枢神经系统免疫应答、炎症损伤和
+;$#<介导血小板活化增强、微血栓形成与粒细胞及
内皮细胞黏附等是 .+9 缺血 8再灌注脑损害的病理
环节 5 ’ 6。
观察显示,.+9患者虽然证型不同,但各型 +;$#<
阳性表达率和 *47 8 !、9: 8 $ 活性水平均高于健康
人,说明不同的证型存在着相同的病理物质基础,即细
胞因子介导的炎性反应及免疫应答。而痰热痹阻、肝阳
上亢证 +;$#<、*47 8 !、9: 8 $ 水平明显高于其他各
型,表明实热证的免疫反应及炎性反应较非实热证、虚
证更为强烈,证明实热证的细胞因子介导的炎性反应
与免疫应答与热毒、瘀毒等密切相关,而 *47 8 !、9: 8
$活性水平越高则热毒、瘀毒则越盛。因此,我们以清
热解毒、活血化瘀为治疗大法,消除及抑制这些毒性物
质,以提高中风病的疗效。方中黄芩清热泻火解毒;钩
藤、菊花疏肝清热;石菖蒲、郁金开窍醒神化毒;加以醒
脑静注射液清热解毒、通闭化痰、开窍醒神,增强解毒
和醒神作用。醒脑静注射液能透过血脑屏障,抑制血管
通透性,改善脑缺氧的状态,减轻脑水肿,降低脑内压,
减轻脑组织的损害,并可降低 .+9 患者细胞因子水
平,控制炎症反应 5 = 6。本观察显示,清热解毒法治疗大、
中等面积 .+*治疗组临床总有效率明显高于对照组,
神经功能缺损程度评分明显改善,头痛、眩晕、乏力、口
臭、心烦、舌红、苔黄等热毒证候改善明显优于对照组,
+;$#<、*47 8 !、9: 8 $治疗后降低的水平与治疗前有
明显差异,说明清热解毒中药对 .+9能减轻细胞因子
介导的中枢神经系统免疫应答和炎性损伤,对缺血性
脑损伤有保护作用。
参 考 文 献
& 中华神经科学会,中华神经外科学会 > 各类脑血管疾病诊
断要点 5 ? 6 > 中华神经科杂志,&!!$,#! @$ A:B=! C B%
# 全国第 D 届脑血管学术会议 > 脑卒中患者临床神经功能缺
损程度评分标准 @ &!!’ A 5 ? 6 > 中华神经科杂志,&!!$,#! @$ A:
B%& C B%B
B 原金隆 > 中医辨治大面积脑梗塞的初探 5 ( 6 > 上海中医药大
学学报,&!!!,#$ @D A:#%
D +EF2 GH (/3IFJ *KH LIMEFNO 7P- .M/QR IJS3F TFQ2NU NRFMQI2J
S2332VIJ0 RWXRNITRJQF3 IJQFMRNRYNF3 ER T2NNEF0R IJ NFQZ 5 ( 6 -
[RZH #,%=& @& A \ ’= C $’
’ 谭峰,顾卫,黄涛,等 > 麝香注射液对急性脑梗死患者 +;$#<
与 947 8 !的影响 5 ( 6 > 中国中西医结合急救杂志,#B,&
@# A:!! C &&
$ 吴珊 > 9+., 8 &与脑缺血再灌注损害 5 ( 6 > 卒中与神经疾病
杂志,&!!%,’ @& A:D! C ’B
= 陈坚,张素平,徐武华,等 > 醒脑静注射液对急性脑出血患
者中细胞因子水平影响的研究 5 ( 6 > 中国中西医结合急救杂
志,#D,&& @D A:##D C ##$
@收稿日期 #’ 8 8 B A
@上接第 %&页 A
组的作用与阳性对照组相当;低剂量组的
! 讨 论
以上结果表明,对多种致炎剂引起的组织水肿和炎症渗出
增加,急性毛细血管通透性增高以及慢性炎症均有明显的抑制
作用,对炎症后期的肉芽组织增生也有显著的抑制作用;花生四
烯酸的代谢物
角叉菜胶所致胸腔渗出液中白细胞数量,表明其能明显抑制白
细胞游走。前列腺素对白细胞有较高的趋化性,五味藤能抑制
前列腺素合成或释放,在抑制白细胞游走方面可能起一定的作
用。4^在炎症及其机制中发挥着两方面的作用,一方面,4^促
进炎症反应的作用包括使血管舒张、形成水肿和局部红斑、增加
炎性渗出等;另一方面,4^又可与前列腺素相互作用,调节一
系列生理的和炎症的过程。4^可作为一种神经递质兴奋植物
神经系统,促使小血管、毛细血管舒张,血管壁变薄,通透性增
强,白细胞和蛋白质成分游出,局部释放组胺、缓激肽、
胸腔渗出液中蛋白质含量,减少大鼠胸膜炎渗出液中的产生。综
上所述,五味藤抗炎机理与其降低毛细血管通透性、抑制
渗出、抑制白细胞的游走等有关。
参 考 文 献
& 徐叔云,卞如濂,陈修,主编 > 药理实验方法学 5, 6 - 北京:人民卫生
出版社,&!!#:=&!
# 曾南,沈映君,刘旭光,等 > 荆芥挥发油抗炎作用研究 5 ( 6 - 中药药理
与临床,&!!%,! @# A:!! C &
B 陈奇,主编 > 中药药理研究方法学 5, 6 - 北京:人民卫生出版社,
&!!B:B’ C B’,B$# C B$$,B= C B=&
D 李仪奎 > 中药药理实验方法学 5, 6 - 上海:上海科学技术出版社,
&!!&:#!! C B&
’ 连其深,张志祖,胡晓,等 > 花椒毒酚抗炎作用的实验研究 5 ( 6 - 中草
药,&!!%,#! @# A: C &B
$ 李东晓,陈东辉,罗霞,等 > 鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎模型 5 ( 6 - 中药
药理与临床,#,&$ @’ A:D$ C D=
@收稿日期 #$ 8 & 8 # A
!# $%%#&’ (% !#$%&’( )#$* $’+ ,-.&’ ,/#%$01 () *&’+,+’+#- (% ./012,!34 5 !,67 5 0 +)
28’+#)’- 9+’ $:’#)-+,# 8); <#;+=> *&=’# .#?#@?8A +)%8?&’+()
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