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市售五指毛桃药材HPLC指纹图谱的研究



全 文 :市售五指毛桃药材 HPLC指纹图谱的研究
王晓平1,黄 翔2,陆奇丰1,刘吉成3,岑业文1 (1.玉林师范学院生命科学与技术学院,广西玉林 537000;2.玉林师范学院体育
学院,广西玉林 537000;3.广西壮族自治区玉林市食品药品检验所,广西玉林 537000)
摘要 [目的]建立五指毛桃药材的 HPLC指纹图谱。[方法]采用高效液相色谱法,甲醇 -水作为流动相,流速为 1 ml /min,检测波长为
246 nm,检测时间为 90 min,柱温为室温。[结果]五指毛桃的指纹图谱共确定了 8 个共有峰,结果稳定,重复性好。[结论]建立的五指
毛桃药材的指纹图谱,对五指毛桃药材的质量控制是可行的。
关键词 五指毛桃;指纹图谱;高效液相色谱
中图分类号 S132 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2011)24 -14586 -02
Study on Fingerprints of Ficus hirta Vahl on Sale by HPLC
WANG Xiao-ping et al (College of Life Science and Technology,Yulin Normal University,Yulin,Guangxi 537000 )
Abstract [Objective]The aim was to establish the HPLC fingerprint image of Ficus hirta Vahl. [Method]Using the HPLC method and with
the methanol—water as mobile phase,the speed was 1 ml /min,the detection wavelength was 246 nm and the time was 90 min. The tempera-
ture of detection was RT. [Result]There were eight common peaks in the fingerprint and the results were stable and with good repeatability.
[Conclusion]The fingerprint image of Ficus hirta Vahl was feasible for the control of the quality of the Ficus hirta Vahl.
Keywords Ficus hirta Vahl;Fingerprint;HPLC
基金项目 广西教育厅科研基金资助项目(No. 200911MS195)。
作者简介 王晓平(1968 - ) ,女,广西玉林人,副教授,研究生,从事药
理学和生理学方面的研究,E-mail:sywxp@ 163. com。
收稿日期 2011-06-23
五指毛桃(Radix fici Hirtae)为桑科植物粗叶榕 Ficus hir-
ta Vah1.的干燥根,又名“南芪”“五爪龙”“五指牛奶”“土北
芪”[1],主要分布于广东、广西等省区。其味辛、甘,性平,具
有健脾利湿、益肺止咳、舒筋通络的功效,医学上用于治疗脾
虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、肺痨咳嗽等症[2]。五指
毛桃主要含补骨脂素、β-谷甾醇、β-胡萝卜苷、十六酸、十八
酸、芹菜素、木犀草素等化合物[3 -4],补骨脂素为其主要有效
活性成分[5 -6]。
现代研究表明,五指毛桃具有护肝、抗菌、抗应激和增强
免疫等多种药理作用[7 -10],但对该药材质量控制研究却少有
文献报道,民间一般以五指毛桃的气味浓郁程度判断其质量
的优劣。由于药材来源不同、产地不同、采收加工不同,造成
了市售药材质量之间存在较大的差异,严重影响了临床疗
效。因此,建立一种切实可行的方法以控制五指毛桃药材的
内在质量势在必行。鉴于此,笔者收集了 7 批市售五指毛桃
药材,对其进行 HPLC法分析,建立指纹图谱,以期为五指毛
桃的质量控制提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 实验材料
1. 1. 1 仪器。高效液相色谱仪(Agilent 1100,美国) ;二极管
阵列检测器;色谱柱:Extend-C18(4. 6 mm × 250 mm,5 μm,安
捷伦) ;KQ5200型超声波清洗器。
1. 1. 2 试剂。甲醇(色谱试剂,Fisher scientific 公司) ;超纯
水;补骨脂素对照品(110739—200613) ,由中国药品生物制
品检定所提供;其余试剂均为分析纯。
1. 1. 3 样品。市售五指毛桃药材共 7 批,经烘干粉碎后过
40目筛备用。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 色谱条件。色谱柱为 Extend-C18(4. 6 mm ×250 mm,5
μm) ;流动相:0 min,甲醇 -水(5∶95) ;20 min,甲醇 -水(15
∶85) ;40 min,甲醇 -水(45∶55) ;65 min,甲醇 -水(70 ∶30) ;80
min,甲醇 -水(90 ∶10) ;85 min,甲醇 - 水(100 ∶0) ,流速:1
ml /min,柱温为室温,进样量:10 μl;检测波长:246 nm。
1. 2. 2 待测溶液的制备。精密称取 10. 4 mg的补骨脂素对
照品,甲醇溶解,配制成41. 6 μg /ml的补骨脂素对照品溶液。
精密称取五指毛桃药材粉末 1 g,加入甲醇 10 ml,超声波提
取 30 min,加入甲醇补充超声损失的重量,过滤,用 0. 22 μm
微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
1. 2. 3 HPLC测定。分别精密进样 10 μl,记录 90 min的色
谱图。
2 结果与分析
2. 1 精密度考察 取同一批供试品溶液连续进样 6 次,其
色谱峰保留时间的 RSD为 0. 6%以内,峰面积的 RSD 均在
5. 0%以内。表明该仪器精密度良好,符合指纹图谱技术
要求。
2. 2 稳定性考察 取同一批供试样品溶液在 0、2、4、8、12、
24 h各进样一次,其色谱峰保留时间 RSD均在 0. 7%以内,
峰面积的 RSD均在 5. 0%以内,表明供试品溶液在 24 h内
稳定。
2. 3 重复性试验 取同一批次的五指毛桃粉末 5份,制备 5
份供试品溶液,进样检测。其色谱峰保留时间的 RSD 值在
0. 8%以内,峰面积的 RSD 值均在 5. 0%以内。表明该方法
的重现性良好。
2. 4 主要色谱峰的建立 测定结果显示 7批五指毛桃样品
的指纹图谱,与对照品补骨脂素(图 1)的色谱峰的对应位置
上,有一主要的色谱峰,此为五指毛桃中补骨脂素的吸收峰;
在 90 min内各五指毛桃样品的 HPLC指纹图谱显示,有 8个
色谱峰是 7批药材共有(图 2) ,因此,确定该 8个色谱峰为共
有指纹峰,其相对保留时间及峰面积百分含量见表 1、表 2。
3 结论
五指毛桃因疗效独特在岭南地区广泛应用,民间多以五
指毛桃根入药。对于五指毛桃的研究近年来已经取得了初
责任编辑 屈满义 责任校对 李岩安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2011,39(24):14586 - 14587
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.24.137
图 1 补骨脂素对照品 HPLC指纹图谱
Fig. 1 The HPLC fingerprint of the psoralen
图 2 五指毛桃样品的 HPLC指纹图谱
Fig. 2 The HPLC fingerprint of the samples of Ficus hirta Vahl
表 1 五指毛桃 HPLC指纹图谱主要共有峰保留时间
Table 1 The relative retention time of common peaks of HPLC fingerprint of Ficus hirta Vahl min
峰 1
Peak 1
峰 2
Peak 2
峰 3
Peak 3
峰 4
Peak 4
峰 5
Peak 5
峰 6
Peak 6
峰 7
Peak 7
峰 8
Peak 8
样品 1 Sample 1 12. 64 39. 23 46. 25 51. 79 53. 81 56. 68 60. 64 73. 42
样品 2 Sample 2 12. 89 - 46. 33 51. 83 54. 23 - 60. 43 73. 85
样品 3 Sample 3 12. 87 - 46. 26 51. 62 54. 26 - 60. 59 73. 78
样品 4 Sample 4 12. 56 39. 35 46. 36 51. 76 54. 28 56. 42 60. 87 73. 34
样品 5 Sample 5 12. 68 39. 34 46. 22 51. 56 54. 28 56. 16 60. 53 73. 61
样品 6 Sample 6 12. 96 39. 42 46. 29 51. 74 54. 67 56. 76 60. 69 73. 82
样品 7 Sample 7 13. 01 39. 38 46. 37 51. 85 54. 76 56. 53 60. 72 73. 78
表 2 五指毛桃 HPLC指纹图谱共有峰的峰面积含量
Table 2 The result of determination of the common peaks area of HPLC fingerprint of Ficus hirta Vahl min
峰 1
Peak 1
峰 2
Peak 2
峰 3
Peak 3
峰 4
Peak 4
峰 5
Peak 5
峰 6
Peak 6
峰 7
Peak 7
峰 8
Peak 8
样品 1 Sample 1 0. 24 0. 36 80. 32 11. 01 0. 19 1. 28 0. 16 0. 76
样品 2 Sample 2 0. 35 - 57. 61 7. 42 0. 12 - 0. 21 0. 70
样品 3 Sample 3 0. 48 - 85. 23 5. 44 0. 57 - 1. 26 1. 26
样品 4 Sample 4 0. 79 3. 74 40. 51 3. 12 3. 47 1. 17 0. 32 2. 21
样品 5 Sample 5 0. 76 3. 68 57. 42 16. 56 0. 14 0. 21 0. 89 3. 56
样品 6 Sample 6 1. 12 4. 06 70. 63 10. 84 4. 23 1. 98 0. 22 5. 18
样品 7 Sample 7 0. 95 4. 48 65. 53 5. 48 8. 84 2. 23 0. 12 5. 34
步进展,其主要成分补骨脂素作为评价五指毛桃质量的重要
依据已成共识[11 -12]。实验结果显示,7批五指毛桃样品的指
纹图谱,与对照品补骨脂素的色谱峰的对应位置上,有一主
要的色谱峰。说明此为五指毛桃中补骨脂素的吸收峰。样
品中各色谱峰相对保留时间较为一致,但对其峰面积百分含
量结果分析显示,各样品的峰面积差异较大,也即其含量差
异较大,表明其质量存在一定的差异,可能是五指毛桃质量
受到不同产地及叶裂数不同的影响。而且市场上部分商家
以五指毛桃的根茎混合出售,这也影响了五指毛桃的药用价
值,故应对五指毛桃建立质量控制体系,以监管药材市场五
指毛桃的质量。实验中采用高效液相色谱法分析探讨五指
毛桃的指纹图谱,为提高五指毛桃的质量控制标准提供了实
验依据。
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