全 文 ：·研究报告·
杏香兔耳风对宫颈炎大鼠宫颈黏膜 PGE2
及外周血 T 淋巴细胞亚群表达的影响
易　剑　峰
(宜春学院美容医学院 , 宜春 336000)
　　摘要:目的:探讨中药杏香兔耳风治疗宫颈炎的作用机制。方法:采用苯酚胶浆建立大鼠宫颈炎动物模
型 ,分别于给药 4d 、10d 后观察杏香兔耳风治疗组对大鼠宫颈黏膜 PGE2 表达及外周血 T 淋巴细胞亚群的影
响 , 并进行病理组织学检查。结果:病理组织学检查显示杏香兔耳风对大鼠宫颈炎有较好的治疗作用;给药早
期(4d),杏香兔耳风治疗组即可明显降低宫颈黏膜 PGE2 表达(P<0.05);各组早期(4d)外周血 T 细胞亚群
无显著性差异;而在后期(10d), 模型组出现 CD4 淋巴细胞数减少 , CD8 淋巴细胞数增加 , CD4/ CD8 比值下降
等免疫紊乱 , 杏香兔耳风治疗组能改善这种的紊乱(P <0.05)。 结论:杏香兔耳风调节 T 细胞亚群紊乱及早
期降低宫颈黏膜 PGE2 的表达水平是其治疗宫颈炎的可能作用途径。
关键词:杏香兔耳风;宫颈炎;PGE2;T 淋巴细胞亚群
Effect of Ainsliaea fragrans Champ on PGE2 levels in cervix mucosae and subgroups
of T lymphocyte in peripheral blood of rats with cervicitis
YI Jian-feng
(Cosmetology Medical Co llege , Yichun College , Yichun 336000 , China)
　　Abstract:Objective:To study the mechanism of Ainsliaea frag rans Champ in treating cervicitis.Methods:
La tex rubber of o xybenzene w as adopted to establish the rats model of cervicitis by endovaginal injection.After 4
and 10 days , the effect of Ainsliaea frag rans Champ on PGE2 expression in cervix mucosae and the subg roups of T
lymphocyte in peripheral blood of rats w as observed , and the histopathologic examination was done.Results:om-
paring with the model group , Ainsliaea frag rans Champ can significantly decrease the PGE2 lev els in rats cervix
mucosae after 4 day s(P<0.05).By analyzing the subg roups o f T lymphocy te in peripheral blood of rats , there was
no significant difference after 4 day s;after 10 days , the levels of CD4 , CD8 , CD4/ CD8 in the model group have sig-
nificant disorder , w hile Ainsliaea fragrans Champ can improve these abnormal conditions(P <0.05).On the o ther
hand , through histopathologic examination w e found Ainsliaea fragrans Champ had a better treatment effect on rats
with cervicitis.Conclusion:Ainsliaea frag rans Champ s therapeutic effect has a relation with its decreasing PGE2
express in earlier period and regulating the subg roups o f T lymphocy te in ra ts cervix mucosae.
Key words:Ainsliaea frag rans Champ;Cervicitis;PGE2;T lymphocyte subgroups
通讯作者:易剑峰 ,江西宜春市宜春学院美容医学院药妆研发中心 ,邮编:336000 ,电话:0795-3201300 , E-mail:rainbow yjf@126.com
　　临床发现中药杏香兔耳风对宫颈炎疗效确切 ,但其作用
机制尚不清楚。本研究拟通过对宫颈炎大鼠 T 淋巴细胞亚
群变化 、宫颈 PGE2 的表达以及宫颈黏膜病理学的观察 , 探
讨杏香兔耳风治疗宫颈炎可能的作用机制。
实验方法
1.动物　Wistar 大鼠 , 雌性 , 未孕 , 体质量 200-250g ,
由江西医学院实验动物中心提供。
2.药品和试剂　CD3 、CD4 、CD8 单克隆抗体(Caltag 公
司产品), 125 I-PGE2(RIA)放射免疫试剂盒(Sigma 公司产
品)。杏香兔耳风浸膏由江西天施康中药股份有限公司提供
(批号:20051107 ,每 1g浸膏中含生药 10g)
3.主要仪器　轮转式切片机(德国 Leica 公司 型号:
RM2016) , Leica 图像分析仪(Leica microsystem Wetzlar
Gmbh , 型号:090-134 , 713-000),流式细胞仪[ 美国 Coulter
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公司 ,型号:EPICS(XL)] 。
4.造模及分组　随机分为 3 组 , 每组动物 20 只:杏香
兔耳风治疗组 , 正常组 , 模型组。参考文献方法[ 1]将苯酚
25ml ,西黄蓍胶 5g , 甘油 20ml , 加蒸馏水至 100ml , 配成含
250mg/g 苯酚胶浆。 正常组给以赋形剂(1ml/ kg)阴道内注
射 ,杏香兔耳风治疗组 、模型组给以等容量苯酚胶浆注射 , 每
天 1次 , 连续 3 次。 3 天后大鼠阴道口出现红肿或有脓性物
流出者视为造模成功。
5.给药　治疗组按 450mg·kg -1·d-1的浸膏量给予灌
胃 ,每天 1 次;模型组及正常组给予同等体积的生理盐水。
造模第 3天后开始灌胃 , 灌胃 4 天后随机处死一半动物 , 剩
余动物继续给药至 10 天后全部处死。
6.指标检测
6.1　大体观察　每天观察记录外阴变化。
6.2　组织 PGE2 测定　将称质量后的宫颈切取部分组
织按每块 300mg , 加无水乙醇(0.1 ml), 剪碎 , 轻轻研磨 , 再
加生理盐水(0.2ml), 制成匀浆 , 4℃3500r/ min 离心 15min ,
收取上清 , -20℃保存备用。放免法(RIA)按试剂盒说明书
操作检测组织 PGE2 含量。余下宫颈组织置入 10%福尔马
林溶液中固定以备组织切片用。
6.3　T淋巴细胞亚群的测定　大鼠眼球取血 ,加肝素抗
凝, 分别取血 50μl与 5μl CD3、CD4 、CD8 单克隆抗体的离心管
中震匀 , 4℃下保存 30min;加入适量红细胞溶解液 , 1 000r/min
离心 1.5min ,弃其上清;加入适量生理盐水以 1 000r/ min ,离
心 1.5min , 反复几次 ,以试管底部不见红色为度 ,过滤后上流
式细胞仪检测。
6.4　组织病理学检查　将经福尔马林溶液固定一周的
宫颈组织取出 ,常规脱水 ,石蜡包埋 ,纵向切片 ,片厚 4-6μm ,
进行 HE染色。在显微镜下观察, 并按表 1 方法进行评分。
表 1　宫颈组织病理学检查评分分度标准
+ ++ +++
鳞状上皮局部 2
-3层增厚
鳞状上皮
明显增厚
广泛增厚并使
黏膜凹凸不平
黏膜极少区域浅
表性糜烂
明显黏膜上皮
变性坏死 黏膜溃疡伴感染
柱状上皮
有鳞化趋势 柱状上皮明显鳞化
鳞化区域广泛
达至宫腔
黏膜及下浅层
少量浸润
黏膜及黏膜下
间质浸润
黏膜及间质内
深层大量浸润
炎症改变程度:
正常　1分;仅见浅层少量炎细胞浸润, 2项以下“ +”
轻度　2分;2项以上“ +” ,无“ +++”
中度　3分;2项以上“ +” ,且 2项有“++” ;或 1项“ +++” ,
3项以上“ +”
重度　4分;1项“ +++” 、2项“++” 、2项“+”;或 2项
“ +++”、1项“++”、1项“+”;或 3项“+++”
7.统计学方法　实验结果用 x ±s表示。数据处理采
用 SPSS 软件 , 用方差分析的方法进行分析 , 病理形态学分
析采用秩和检验。
结果
1.大体观察　造模后 , 造模组动物大多数阴道及宫颈
口可见大量黄色或白色的黏稠分泌物 , 少数可见出血。经杏
香兔耳风治疗后 , 少数动物阴道及宫颈口可见少量白色分泌
物 , 其余均洁净。
2.宫颈组织 PGE2、外周血淋巴细胞亚群测定　见表 2、
表 3。由表 2-表 3可知 , 模型鼠宫颈 PGE2水平在不同时间
段均明显高于正常组(P <0.01), 治疗 4 天后杏香兔耳风即
可降低宫颈 PGF2 的表达(P <0.05);外周血 CD4 、CD8、
CD4/CD8在给药早期各组间比较无显著性差异 , 10 天后
CD4模型组低于正常组(P <0.05)、CD8 高于正常组(P <
0.01), 由此导致 CD4/CD8 比值明显下降(P <0.01), CD3
各时间段组间比较均无差异 , 此外 , 各检测指标不同时段比
较无差异。
表 2　大鼠宫颈及阴道 PGE2含量变化(x±s)
组别 n
PGE2(pg/m l)
第 4d 第 10d
正常组 10 395.80±123.04＊＊ 401.22±135.16＊＊
模型组 10 823.54±213.79 784.30±242.67
杏香兔耳
风治疗组 10 641.60±185.75
＊ 621.40±119.90＊
注:与模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P <0.01。
3.宫颈组织病理观察　正常组:可见宫颈复层鳞状上
皮表面光滑 , 无坏死脱落 , 无炎细胞浸润 , 黏膜下组织正常。
模型组:4天时 , 可见广泛的宫颈黏膜变性坏死 , 脱落 , 形成
溃疡 , 黏膜下有充血水肿 , 炎细胞浸润 , 肉芽组织增生 , 成纤
维细胞增生;10 天时 ,在上述基础上 ,炎细胞浸润有所减少 ,
成纤维细胞增生有所增加(见表 4)。
讨论
本研究发现杏香兔耳风能有效改善苯酚所致大鼠宫颈
炎的宫颈病理状况。 PGE2 是体内产生的前列腺素物质中的
一种 ,具有较强的炎症免疫调节作用 , 通过释放一些炎性介
质 , 如自由基 、白三烯(LTs), 血栓素(TXs), 肿瘤坏子因子-α
(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1)等导致炎症的发生[ 2-3] ,在炎
症发生期 , PGE2的水平常表现为急剧升高 ,本研究中亦证实
了这点。而杏香兔耳风能在早期降低大鼠宫颈黏膜 PGE2
的表达 , 从而减轻炎症发应的发生。
苯酚所致大鼠宫颈炎模型存在 T 细胞免疫功能紊乱 ,
主要表现为后期CD4淋巴细胞数减少 , CD8淋巴细胞数增
加 , CD4/ CD8 比值下降为特征的免疫功能抑制状态。本研
究显示杏香兔耳风能纠正这种 T 淋巴细胞亚群紊乱。而早
期模型鼠 T 淋巴细胞亚群则无明显变化 , 这主要是由于要
使 T 细胞充分活化 , 尚须抗原提呈细胞提供的辅助刺激信
号及细胞因子 , T 细胞才能经克隆扩增 , 使克隆细胞数目增
·807·中华中医药杂志(原中国医药学报)2007 年 11月第 22 卷第 11 期 CJTCMP , November 2007 , Vol.22 , No.11
表 3　各组大鼠外周血淋巴细胞亚群测定结果比较(n=10 , x±s , %)
组别 时间 CD3 CD4 CD8 CD4/ CD8
正常组 第 4 d 45.34±3.58 31.80±1.84 12.58±0.83 2.41±0.24第 10 d 45.94±3.24 31.71±2.02＊ 13.01±0.75＊＊ 2.49±0.27＊＊
模型组 第 4 d 46.12±4.11 30.04±2.27 13.25±1.43 2.11±0.26第 10 d 45.57±3.24 27.72±3.09 15.75±2.24 1.79±0.31
杏香兔耳风治疗组 第 4 d 45.85±4.81 30.37±2.56 13.33±1.16 2.27±0.32第 10 d 46.49±3.24 30.39±3.25＊ 13.77±1.58＊ 2.23±0.37＊＊
注:与模型组同期比较 , ＊P <0.05 , ＊＊P<0.01。
表 4　各组宫颈组织病理半定量评分结果比较(只)
组别 n 第 4 d 第 10 d正常 轻度 中度 重度 P(vs model) 正常 轻度 中度 重度 P(vs model)
正常组 10 10 0 0 0 0.000＊＊ 10 0 0 0 0.000＊＊
模型组 10 0 0 5 5 0 0 3 7
杏香兔耳风治疗组 10 0 2 6 2 0.089 1 6 4 0 0.014＊＊
注:与模型组比较 , ＊P <0.05 , ＊＊P<0.01。
加 ,并经历分化及应答过程 , T 细胞产生的免疫反应常在抗
原刺激后的一段时间出现 ,外周血中才有改变[ 4] 。
综上 ,中药杏香兔耳风治疗对苯酚所致的大鼠宫颈炎有
较好的疗效 ,它能减轻宫颈及阴道的黏膜坏死 、充血水肿 , 促
进黏膜鳞状上皮增生。其调节大鼠 T 细胞亚群紊乱及早期
降低宫颈局部 PGE2 的表达水平是其可能的作用途径。
参 考 文 献
[ 1] 　龙子江 ,吕晓英 ,王桐生 ,等.阴道及宫颈炎大鼠动物模
型的研究.安徽中医学院学报, 2005 , 4(24):35-36
LONG Zi-jiang , LV Xiao-ying , WANG Tong-sheng , et al.
Research on the animal model with colpitis and cervicitis.
Journal of Anhui Traditional Chinese Medical College , 2005 , 4
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[ 2] 　Ueno A , OhIshi S.Inflammation-allergy and prostanoids.(1).
Prostanoids in experimental inflammatory reaction.Nippon
Yakurigaku Zasshi , 2001 , 117(4):255-261
[ 3] 　Burdan F , Chalas A , Szumilo J.Cyclooxygenase and prostanoids-
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60:129-141
[ 4] 　Tan W C .Viruses in asthma exacerbations.Curr Opin Palm
Med , 2005 , 11(1):21-26
(收稿日期:2007 年 2 月 26 日)
通讯作者:张晨 ,北京市宣武区北线阁 5号中国中医科学院广安门医院急诊科 ,邮编:100053 ,电话:010-88001048 , 88001047
E-mail:z csh1969@sohu.com
·研究报告·
重症监护病房铜绿假单胞菌耐药性分析
及其中医证候特点
杨秀捷　张晨　齐文升　蓝海涛　王硕　杨忆熙　赵昕　叶锡鲁　马荣
(中国中医科学院广安门医院 ,北京 100053)
　　摘要:目的:探讨重症监护病房患者感染的铜绿假单胞菌耐药性特点及其中医证候特点。方法:分析分离
自本院重症监护病房 2005年 3月-2006 年 2 月住院患者痰液标本中 73 株铜绿假单胞菌的体外药敏试验资
料及中医证候。结果:除哌拉西林/他唑巴坦 、哌拉西林 、头孢哌酮/舒巴坦 、阿米卡星外 , 73 株铜绿假单胞菌
对多种抗菌药物耐药。铜绿假单胞菌感染者的中医证候以虚实夹杂证及实证为主(共占 97.26%), 而其中虚
实夹杂证以气虚痰阻证 、阴虚热郁证为主 ,实证以痰热郁阻证 、痰瘀互阻证为主。结论:对多重耐药铜绿假单
·808· 中华中医药杂志(原中国医药学报)2007 年 11 月第 22 卷第 11 期 CJTCMP , November 2007 , Vo l.22 , No.11