全 文 ：2013年 第14卷 第3期0 3 6
恶性肿瘤是严重危害人类健康的常见病，世界
癌症发病率和死亡率急剧上升。国际癌症研究机构
的调查报告提示，到 2020年，每年将有 1 000 万人
死于癌症。近 20年来，中国癌症死亡率上升了近
30％，居各种死亡原因之首［1-2］。而恶性肿瘤的患者，
主要死于肿瘤的侵袭和转移。自从“肿瘤生长依赖血
管生成”假说提出之后，抗肿瘤血管生成的研究引起
学者广泛重视。研究表明，肿瘤的无限制生长、侵袭
和转移均需依赖于新血管生成，新生血管为肿瘤提
供营养物质，同时也是肿瘤细胞代谢产物排泄的重
要途径［3-4］。肿瘤的生长从无血管的缓慢生长阶段到
有血管的快速增殖阶段，血管的生成是促成这一转
变的关键环节。目前抑制肿瘤血管生成的研究途径
主要有对血管生成因子（如 VEGF）、血管生成抑制
因子、信号传导途径、内皮细胞的增殖以及基质金属
蛋白酶等的研究［5］。近年来藤梨根的抗肿瘤作用引
起了国内外一些学者的关注，临床研究表明藤梨根
尤其对消化道肿瘤，如胃癌、食道癌、肠癌等疗效显
著，在抗肿瘤治疗中具有一定的优势。本实验是在
前期探讨藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管生
成的影响基础上，进一步探讨藤梨根对人脐静脉血
管内皮细胞（HUVEC）增殖作用的影响。通过观察对
HUVEC作用 24 h后细胞活力的影响，来探讨藤梨
根对体外血管内皮细胞的作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物和细胞系 选取 8 w 龄 Wistar 大
鼠，雄性，180 g～200 g，购自山西医科大学实验动物
中心［合格证号 scxk（晋）2012-0001］。饲养 1 w，饲
养条件为：（22±3）℃，自由摄食、饮水。人脐静脉血管
内皮细胞株（HUVECs，）由南京凯基生物技术有限
公司购买。
1.1.2 药物 中药藤梨根由山西中医学院附属医院
中药房提供，经山西中医学院中药专家鉴定质量符
合实验要求。
1.1.3 试剂和仪器 RPMI1640培养基（含 2.05 mmol
L-谷氨酰胺）购自华美公司；标准胎牛血清，胰蛋白
酶、青链霉素混合液，噻唑蓝（MTT），二甲基亚砜
（DMSO），购自北京欣经科生物技术有限公司；Heal
force 二氧化碳培养箱（HF90 型），全自动酶标仪
（Bio-Rad 450），倒置显微镜（OLYMPUSIX 70）。
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养 HUVECs培养于含 10%胎牛血清
和 1%青链霉素的 RPMI1640培养基中，5%CO2，37 ℃
孵箱、饱和湿度环境下培养。
1.2.2 分组与给药 藤梨根浓缩液的制备：取藤梨
根 120 g，按常规中草药煎煮方法，煎煮提取浓缩至
60 mL，得含相当于藤梨根生药 2 g/mL的浓缩液，冷
却冰箱保存。清洁级 Wistar大鼠 8只，随机分为藤
梨根组与血清组，每组 4只。藤梨根浓缩液大鼠灌
胃，剂量参考李振光等［6］报道的给药剂量，为临床成
人剂量的 10倍，换算得出大鼠每 100 g体重每天给
藤梨根浓缩液 3.125 g。血清组给以每天 2 mL生理
盐水。每天 2次灌胃给药，连续给药 7 d。
1.2.3 含药血清的制备 第 7天灌胃给药 2 h后，
麻醉，无菌条件下腹主动脉取血 4 mL，室温静置 1 h，
3 500 r/min离心 20 min，吸取分离血清，置 56 ℃水
浴箱灭活，0.22 μm的微孔滤膜抽滤除菌，试管分
装，置于-20 ℃冰箱保存。待生长良好的 HUVEC细
［基金项目］山西省科技攻关项目（20120313026-9）
［作者简介］吴秋玲，医学博士，副教授，E-mail:wuqiulin1968@126.com
［收稿日期］2013-09-16
藤梨根含药血清对人脐静脉血管内皮细胞增殖作用的影响
吴秋玲 1，李建宽 2，刘竺华 3，李朝喧 1
（1.山西中医学院，山西 太原 030024； 2.山西医科大学，山西 太原 030001； 3.山西中医学院附属医院，山西 太原 030024）
摘要 目的：研究藤梨根对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECS）增殖作用的影响，从抑制血管生成途径探讨藤梨根抗肿瘤
的作用机制。方法：运用 MTT法，观察高、中、低剂量藤梨根含药血清对 HUVECS细胞活力的影响。结果：与对照组比较，
藤梨根高、中剂量血清组 OD值降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：藤梨根含药血清有一定的抑制人脐静脉血管内
皮细胞增殖的作用。
关键词 抗血管生成；藤梨根；血管内皮细胞；肿瘤
中图分类号：R285.5 文献标识码：Ａ 文章编号：1671-0258（2013）06-0021-03
实验中医药学
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2013 Vol.14 No.313 Vol.14 No.6
胞长至 80%~90%时，0.25%胰蛋白酶消化，轻轻吹
打，离心 5 min，弃上清液，重悬于培养液中，进行细
胞计数，以 1×104细胞密度接种到 96孔板中，每孔
100 μL，培养 24 h。实验设 5组：高、中、低剂量藤梨
根血清组、空白血清组与对照组。
1.2.4 观察指标及方法 细胞形态学观察: 培养 24 h
后，于光学倒置生物显微镜下观察细胞形态学变化。
MTT法测定各组对细胞活力的影响: 培养 24 h后，
每孔加入 MTT 溶液（5 mg/mL）15 μL，孵育 24 h 后
终止培养。吸弃孔内上清液，然后每孔加入 100 μL二
甲基亚砜（DMSO），振荡 10 min，酶联免疫检测仪上
测各孔光吸收值（OD值）。
1.3 统计学方法
EXCEL2003软件进行统计学分析，数据以均数±
标准差（x±s）表示，计量资料采用 t检验，以 P<0.05
为差异具有统计学意义。
2 结 果
2.1 细胞的形态学改变
对照组细胞形态正常，形态基本一致，细胞呈梭
形状，大小均等，细胞完整，透明度好，未见到凋亡细
胞。高剂量藤梨根血清组细胞与对照组比较体积皱
缩变小，甚至出现细胞破裂或死亡，细胞密度较其他
组下降。结果见图 1。
2.2 各组对 HUVECs细胞活力的影响
与对照组相比较，含药血清对 HUVECs的增殖
有一定的抑制作用。与对照组比较，高、中剂量藤梨
根血清组 OD值降低，差异有统计学意义（P<0.05）。
低剂量藤梨根血清组 OD值与对照组比较差异无统
计学意义。实验测得对细胞活力的影响显示：高、中
剂量藤梨根血清组 OD值与空白血清组比较，差异
有统计学意义（P<0.05）。结果见表 1。
3 讨 论
藤梨根又称阳桃根，为猕猴桃科猕猴桃属软枣猕
猴桃的根，其性酸、涩、凉，具有清热解毒、消肿疥、祛风
除湿、利尿止血的功效，近年来藤梨根的抗肿瘤作用引
起了国内外一些学者的关注。临床应用藤梨根抗肿瘤，
常与野葡萄藤、半枝莲、半边莲、白茅根等配伍，治疗各
种癌症，尤对消化道肿瘤，如胃癌、食道癌、肠癌等疗效
显著，具有一定的优势［7-9］。因此，了解藤梨根抗肿瘤
作用的机制有助于评价藤梨根或其提取物作为抗肿瘤
药物开发的潜力，并对指导其衍生物的合成具有重要
意义。我们在前期探讨中药藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜
血管生成的影响的基础上，进一步探讨藤梨根对人脐
静脉血管内皮细胞增殖作用的影响。实验表明，藤梨根
含药血清具有一定的抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖
的作用，需要在此基础上进一步观察其对内皮细胞的
迁移和小管形成的影响，并对内皮细胞的凋亡情况和
VEGF的表达情况等进行研究，揭示中药抗肿瘤的机
制，为临床治疗肿瘤寻找副反应小的高效中药。
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图 1 藤梨根含药血清对 HUVECs细胞形态学影响
对照组（×800） 低剂量藤梨根血清组（×800）
中剂量藤梨根血清组（×400） 高剂量藤梨根血清组（×200）
注：与对照组比较，1）P<0.05；与空白血清组比较，2）P<0.05
表 1 各组对 HUVECs细胞活力的影响
组别 OD值
对照组 0.491±0.229
空白血清组 0.468±0.084
高剂量藤梨根血清组 0.379±0.1561）2）
中剂量藤梨根血清组 0.390±0.0931）2）
低剂量藤梨根血清组 0.437±0.101
（x±s）
（下转第 25页）
实验中医药学
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Effect of Radix Actinidiae Drug-containing Serum on Proliferation of
Human Umbilical Vein Endothelial Cells
Wu Qiuling1，Li Jiankuan2，Liu Zhuhua3，Li Chaoxuan1
（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024；2.Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi 030001；3.Hospital Affiliated to
Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）
Abstract Objective：To observe the effect of Radix Actinidiae on proliferative effect of human umbilical vein endothelial
cells（HUVECS），explore anti-tumor mechanism of Radix Actinidiae from the channel of inhibiting angiogenesis. Methods：
MTT method was used to observe the effects of high，middle，low dosage of Radix Actinidiae drug-containing serum on
HUVECS viability. Results：Compared with control group，OD value of high，middle dosage of Radix Actinidiae drug-con－
taining serum group was significantly declined（P<0.05）. Conclusion：Radix Actinidiae drug-containing serum has certain
inhibitive effect on proliferation of human umbilical vein endothelial cells.
Key words antiangiogenesis；Radix Actinidiae；vascular endothelial cell；tumor
（上接第 22页）
实验中医药学
明经过奶牛的生物转化后，有机铬或 GTF的生物活
性是否进一步提高或改善，本实验结果表明，GTF功
能牛奶组与富铬酵母组比较，对 IGT小鼠的 2 h BG
及血糖上升率有抑制作用，差异有统计学意义（P<
0.05）。
关于 GTF调节糖代谢的作用机制，目前尚不清
楚。有学者曾用液谱法证实了胰岛素（INS）、葡萄糖
耐量因子（GTF）及胰岛素受体（insulin receptor，INR）3
者所形成的复合物的存在。还有研究显示，铬与
INS、INR中的琉基配位形成三价配合体，作为 INS
的协同因子，促进 INS和受体间的反应［9］。因此，GTF
调节糖代谢的作用环节存在 3种可能 ［10］：或使 INS
形态机能的稳定性增强；或通过抑制组织的 INS酶，
确保 INS量；或使 INS与组织细胞上的受体结合力
增强等等。此外，GTF中的 Cr3+还可能通过激活三羧
酸循环中的琥珀酸脱氢酶，加强琥珀酸的氧化增加
葡萄糖的利用，从而调节糖代谢。
高 GTF活性牛奶降低血糖的作用机制可能是
牛奶中的铬与牛奶中的多种氨基酸络合后形成
GTF，调节葡萄糖代谢，对 IGT小鼠起到干预作用，
其作用机制还需进一步深入研究。
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