全 文 ：天山堇菜提取物抑菌特性的研究
周晓英1　马秀敏1　田树革2　葛　亮3　王亚男2
(1　新疆医科大学基础医学院 , 新疆　乌鲁木齐　810000;2　新疆医科大学中医学院;3　新疆医科大学附属中医院)
摘　要　以天山堇菜不同溶剂的提取物作为抑菌剂进行抑菌特性的研究 , 采用吸光度法和 pH 值变化法对枯
草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)的脲酶活性进行检测 , 结果表明天山堇菜不同溶剂的提取物对枯草芽孢杆菌有较
好的抑菌作用 , 是有研究价值的抗菌中草药。
关键词　天山堇菜　提取物　抑菌特性
　　天山堇菜 , 维药名为比那夫
西 (Herba Violae tianshanicae)是
堇菜科 (Violaceae)植物天山堇
菜 (Viola tianshanica Maxim)的
干燥全草 。其气微 , 味微苦辛 ,
凉 , 清热解毒 , 具有调理 、 软
化 、 发汗的作用 。主要用于轻泻
异常胆液质 , 调节血液热性过
盛 , 生津止渴 , 发汗烧。临床用
于热性感冒 , 发烧 , 头痛 , 咽
痛 , 肢肿 , 小儿惊厥 , 也可外用
于疔疮肿痛等 。用量 6 ～ 12g ,
当茶饮或煎服 , 外用适量〔1〕。全
草经预试检出含挥发油 、 黄酮
类 、氨基酸 、 生物碱和粘液质
等〔2〕 。Binafuxi 为维吾尔医习用
名称 , 维吾尔医用药历史很长。
天山堇菜在新疆和田地区民间广
泛应用 , 但对其在抑菌实验方面
的报道却很少 , 本文做了这方面
的研究工作 , 为临床应用天山堇
菜提供科学的理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　药材 　天山堇菜 (Viola
tianshanica Maxim)的全草 , 2003
年3月购于新疆自治区维吾尔医
院 , 药材经新疆维吾尔自治区药
物研究所鉴定为正品 (830021)。
1.1.2　药液的制备〔3〕
1.1.2.1　水提天山堇菜药液的
制备:称取一定量的天山堇菜将
其粉碎 , 过 40 目的筛得到粗粉
20g , 加入 200ml 蒸馏 水 , 用
KQ—400DB 型数控超声波清洗
器超声 30min后 , 在不断搅拌下
浸提 24h , 过滤后将滤液浓缩至
20ml , 滤膜过滤除菌 , 得到 1g/
mg 水提天山堇菜药液 , 装入
20ml的无菌试管中备用。
1.1.2.2　90%乙醇提天山堇菜
药液的制备:同样称取一定量的
天山堇菜将其粉碎 , 过筛后得到
粗粉 20g , 加入 90%乙醇 200ml ,
用超声波清洗器超声 30min 后 ,
在不断搅拌下浸提 24h , 过滤所
得滤液回收乙醇后 , 加热浓缩
成浸膏 , 再加入蒸馏水 20ml ,
不断搅拌使浸膏溶解 , 滤膜过
滤除菌 , 配成 1g/ml醇提天山堇
菜药液 20ml , 装入无菌试管中
备用。以上两种不同溶剂的天
山堇菜提取液均需放置在冰箱
保存 , 于 48h内使用 , 以保证药
效稳定 。
1.1.3　仪器与培养基　721型分
光光度计 (上海第三分析仪器
厂);ZD-2型自动电位滴定计;
DZ-1型滴定装置 (上海雷磁仪
器厂);电子天平 (sartorius德国
产);RE-52旋转式蒸发器 (上
海安亭 电子仪器厂);KQ -
400DB型数控超声波清洗器 (昆
山市 超 声 仪器 有 限 公 司);
Mueller-Hinton 肉汤 、 琼脂培养
基购自杭州微生物试剂厂。
1.2　方法
1.2.1　菌种培养〔4〕〔5〕〔6〕 　枯草
芽孢杆菌 (菌株号 63501)为鉴
定后保存的标准菌种 , 经转种培
养后 , 取新传代枯草芽胞杆菌接
种于 Mueller -Hinton 肉汤培养
基 , 恒温箱 37℃培养 6 小时 ,
取一定菌液用 40mmol/ml的磷酸
盐缓冲液稀释 , 充分振荡后用麦
氏比浊管调整菌液浓度为 5×
106CFU/ml。
1.2.2　细菌脲酶活性的测定〔7〕
1.2.2.1　吸光度法〔8〕:取 5 个
试管 , 向每个试管中依次加入
3mmol/L pH6.8 的磷酸缓冲液
2.5ml , 7μg/ml 的 酚 红 溶 液
0.1ml , 0.4mmol/L 的脲素溶液
0.3ml。第1支试管作为对照加入
磷酸缓冲液 , 其它管分别加入抑
菌剂 , 浓度分别为 6.25mg/ml ,
12.5mg/ml , 25mg/ml , 50mg/ml。
最后加入枯草芽胞杆菌悬液
0.1ml , 倒入比色杯中 , 在 480nm
下测定此溶液的吸光度。
1.2.2.2　pH 值变化法〔9〕:取 5
支试管 , 向每支试管中依次加入
3mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液
2.0ml , 7μg/ml 的 酚 红 溶 液
0.1ml , 0.4mmol/L 的脲素溶液
0.4ml及待测的抑菌剂 (浓度为
113中国民族民间医药杂志 2004年总第 67期
1mg/ml , 2mg/ml , 4mg/ml , 8mg/
ml), 最后加入枯草芽胞杆菌悬
液0.1ml , 测定溶液的 pH , 作为
初始 pH , 每隔 10min , 测定其
pH值 , 脲酶活性以下式计算:
脲酶活性=(各处理及对照定时
测定的 pH -各初始 pH)/对照
液终了时的 pH -对照液初始
pH)×100%
2　结果与讨论
当细菌生长受到抑菌剂的影
响后 , 细菌脲酶活性会发生改
变 , 与抑菌剂浓度成负相关关
系 , 本实验采用吸光度法和 pH
值变化法对枯草芽胞杆菌脲酶活
性进行检测 , 研究天山堇菜的抑
菌作用 。
2.1　天山堇菜水提取液对细菌
脲酶活性的影响
天山堇菜水提取液对枯草芽
胞杆菌脲酶活性有明显的抑制作
用 , 分别见表 1 、 2。
表 1为吸光度法所测结果:
由表上可看出 , 对照管在开始测
定后 , 脲酶活性迅速上升 , 吸光
度几乎与时间成直线关系。反应
进行 40min , 480nm 的吸光度达
到峰值 (0.85), 以后随时间延
长 , 该值逐渐趋于恒定 。加入天
山堇菜水提取液 6.25mg/ml , 对
细菌脲酶活性有一定影响 , 脲酶
活性升高比对照缓慢 , 当抑菌剂
浓度达 50mg/ml , 对细菌生长有
明显的抑制作用 , 细菌几乎不能
生长 , 吸光度保持在一个很低水
平。
表 1　天山堇菜水提取液对枯草芽胞杆菌脲酶活性的影响 (吸光度法 OD480)
浓度 (mg/ml) 10min 20min 30min 40min 50min 60min
对照 0 0.25 0.48 0.69 0.85 0.86 0.85
1 6.25 0.16 0.3 0.51 0.72 0.73 0.73
2 12.5 0.09 0.15 0.3 0.48 0.49 0.49
3 25 0.07 0.1 0.2 0.28 0.28 0.28
4 50 0.05 0.09 0.12 0.14 0.14 0.14
　　表2 为 pH 值变化法测定结
果:从表中可看出 , 对照管脲酶
活性逐渐上升 , 到 60min达到高
峰 , 趋于恒定 , 其余组随抑菌物
浓度的增加 , 细菌脲酶活性迅速
下降 , 当天山堇菜水提取液的浓
度为 1mg/ml , 60min时脲酶活性
相当于对照的 82%, 当抑菌剂
浓度为 8mg/ml , 脲酶活性只有
对照的 10%, 说明细菌生长受
到明显抑制。
2.2　天山堇菜醇提取液对细菌
表 2　天山堇菜水提取液对枯草芽胞杆菌脲酶活性的影响 (pH值变化法%)
浓度 (mg/ml) 10min 20min 30min 40min 50min 60min
对照 0 42 65 77 84 97 99
1 1 30 52 61 72 82 82
2 2 16 27 35 40 43 45
3 4 7 12 18 23 29 31
4 8 3 5 6 8 9 10
脲酶活性的影响
天上堇菜醇提取液作为抑菌
剂时 , 可获得类似于水提取物的
抑菌效果 。表 3为吸光度法所测
细菌脲酶活性的结果 , 表 4 为
pH变化法所测结果。表 1 、 2比
较 , 相同浓度时 , 天山堇菜醇提
取液和水提取液抑菌效果无明显
差异。
2.3　讨论
通过本次实验 , 我们发现天
山堇菜对枯草芽胞杆菌有明显抑
制作用 。枯草芽胞杆菌可以形成
芽胞 , 对不良环境抵抗力较强 ,
能抑制枯草芽胞杆菌的药物一般
也能抑制其它许多细菌 。因此 ,
天山堇菜可能对很多致病有抑制
作用 。天山堇菜在新疆分布较
广 , 副作用低 , 价格低廉 , 是极
具有研究开发价值的新疆维吾尔
族药材。
114 中国民族民间医药杂志 2004年总第 67期
表 3　天山堇菜醇提取液对枯草芽胞杆菌脲酶活性的影响 (吸光度法 OD480)
浓度 (mg/ml) 10min 20min 30min 40min 50min 60min
对照 0 0.25 0.48 0.69 0.85 0.86 0.85
1 6.25 0.19 0.34 0.56 0.79 0.79 0.78
2 12.5 0.13 0.2 0.36 0.55 0.55 0.55
3 25 0.1 0.16 0.27 0.34 0.34 0.33
4 50 0.07 0.1 0.15 0.18 0.18 0.18
表 4　天山堇菜醇提取液对枯草芽胞杆菌脲酶活性的影响 (pH值变化法%)
浓度 (mg/ml) 10min 20min 30min 40min 50min 60min
对照 0 42 65 77 84 97 99
1 1 33 58 65 74 83 85
2 2 21 30 37 42 48 52
3 4 10 16 22 27 31 35
4 8 5 5 8 10 11 14
参考文献
1　中华人民共和国卫生部药典委员
会.中华人民共和国卫生部药品标准.维
吾尔药分册 〔M〕.乌鲁木齐:新疆科技卫
生出版社 , 1999
2　新疆维吾尔自治区卫生厅维吾尔药
材标准 〔M〕.新疆科技卫生出版社 ,
1993.54
3　田树革 , 丁剑冰 , 周晓英.维药天
山堇菜中化学成分分析及抑菌实验研究.
中国民族医药杂志 , 200 (3):36-37
4　周邦靖.常用中药的抗菌作用及其
测定方法 〔M〕.重庆:科学技术文献出版
社重庆分社 , 1987.1-36
5　盛丽 , 高农 , 张晓非等.19味中
药对淋球菌流行株的敏感性研究.中国中
医药信息杂志 , 2003 , 10(4):48-49
6　李仲兴 , 张立志 , 王秀华等.五倍
子对 140株肠球菌的抑菌效果观察.中草
药 , 2003, 34 (1):56-58
7　樊明涛 , 陈锦屏.百里香提取物抑
菌特性的研究.微生物学报 , 2001, 41
(4):499-504
8　Mobley H L Joumal of clinical Microbi-
ology , 1988 , 26:831-836
9　Motabak R.Journal of Applied Bacte-
riology , 1996, 80:667-672
(收稿日期:2004年 1月 26日)
蒙药肋柱花 24h紫外谱线组法鉴别研究
胡其图
(内蒙古民族大学学报编辑部 , 内蒙古　通辽　028041)
摘　要　目的:对蒙药肋柱花进行进一步的鉴别及掌握溶剂的稀释对吸收峰的影响。 方法:采用紫外谱组
法。结果:肋柱花的 4种溶剂不同浓度紫外光谱表明肋柱花所含成分的整体效应 、 重现性和特征性良好。
关键词　肋柱花　紫外谱线组法　鉴别
　　蒙药肋柱花为龙胆科植物肋
柱花 Lomalogoninm rotatum (L.)
Fries exnym.的干燥全草 。性味
苦 、 寒 、 钝 、糙 、轻 、燥 。功能
平息 “协日” 、 清热 、 健胃 、 解
毒。主治黄疸型肝炎 , 外感头
痛 , 发热〔1〕 。
1　材料及仪器
1.1　药品　肋柱花 (锡盟东乌旗
提供), 使用化学试剂均为分析纯。
1.2　仪器　日立 —557型双光道
双波长分光光度计 (日本 , 东
京)。
2　方法与结果
2.1　肋柱花的理化鉴定
(1)称取肋柱花粗粉 1g ,
加 20ml 甲醇振摇后静置 20min
过滤 , 取滤液 2ml加入少许镁粉
振摇 , 再滴几滴浓盐酸 , 显紫红
色〔2〕 (黄酮类)。
(2)取 2.1.1项下的甲醇滤
液1ml置试管中 , 加入α-萘酚
试剂 (称取 1g α-萘酚 , 加入
75%乙醇10ml)数滴 , 振摇试管
115中国民族民间医药杂志 2004年总第 67期
ABSTRACTSOF ORIGINAL ARTICALS
Utilization Values and Cultivation
Techniques of Pueraria Lobata (willd)Ohwi
Hani s Medi-edible Plant
LI ER , et al
(Yunnan Branch , institute of Medicinal Plant ,
Chinese Academy of Medical Sciences)
ABSTRACT:This paper in troduced Hani s medi-ed-
ible plant , utilization values and plant morpho logy of
Pueraria Lobata (willd)Ohwi and summarized cultiva-
tion techniques , managing measurements and harvest
methods according to result of the test.
(Original article on page 102)
Exploring the Method to
Determine Bacterial Endotoxin in
Eryansuankuining injection
YANGXiu-lan , er al
(Yunan Phytopharmaceutical CO., Ltd)
ABSTRACT:Objective:To ostablish a method for de-
termining bacterial endotoxin in Eryansuankuining Injec-
tion.Method:The Limulus test stated in Pharmacopoeia
of China.Result:To dilute Eryansuankuining Injection
by maximal effective multiple to eliminate the interfer-
ence.Conclusion:The method was proved to be repro-
ducible , no interference and simple , cen be used to de-
termine bacterial endotoxin in Eryansuankuining Injection
(Original article on page 106)
Dertermination of the
Gardenoside in the Traditional
Mongolian Medicine Gugule-4 Decoction
Zhaorigetu , et al
(College of Mongolian Medicine and Pharmacology , lnner
Mongolia University for Nationalities)
ABSTRACT:The gardenoside in the traditional mongo-
lian medicine Gugule-4 decoction was determined by the
thin-layer chromatography.The regression equationA=
0.0272C +0.9998;the content of the gardenoside is
1.416%, the average rate of recovery is 98.6%, RSD
=0.56%. (Original article on page 110)
Determination on Trace Elements
of Black Tea and Green Tea and Their
Extraction Solution from Yingde , Guangdong
CHEN Xue-wen , et al
(Department of Chemistry , Medical College of
Zhongshan University)
ABSTRACT:The contents of trace elements of black
tea and green tea and their extraction solution from
Yingde , Guangdong were determined respectively by
atom absorption method.The results showed that the
contents of trace elements in black tea and green tea from
Yingde are both higher.The extraction solubility of the
elements are 30% to 50%.
(Original article on page 111)
Study on Bacteriostatic Characteristic of
Extraction of Viola Tianshanica Maxim
ZHOU Xiao-ying , et al
(College of Preclinical Medicine ,
Xinjiang Medical University)
ABSTRACT:The bacteriostatic characteristic of Extrac-
tion of Viola Tianshanica Maxim had been studied , the
different solvent extraction of Viola Tianshanica Maxim
are used to restrain bacterium , and the characteristic was
summarized .In the research , the absorbance and PH
were adopted to test urease activity of Bacillus subtilis .
The results showed that the different solvent extraction of
Viola Tianshanica Maxim possessed obvious bacteriostatic
activity , and Viola Tianshanica Maxim is worthy of re-
search.
(Original article on page 113)
Differential Study on Lomalogoninm
Rotatum (L.)Fries Exnym with
Ultraviolet Spectroscopy in 24 hours
HU Qi-tu
(Inner Mongolia University for Nationalities)
ABSTRACT:Objective:To identify Lomalogoninm Ro-
tatum (L.)Fries Exnym further and grasp solvent effect
to absorption peak.Method:Ultraviolet Spectroscopy
was adopted.Result:The whole effect , reappearance ,
and characteristic of the composition of Lomalogoninm
Rotatum (L.)Fries Exnym are good.Conclusion:The
method is suitable for identifying Lomalongoinm Rotatum
(L.)Frics Exnym.
(Original article on page 115)
124 中国民族民间医药杂志 2004年总第 67期