全 文 ：　实验研究　
广西藤茶总黄酮对免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响■
广西中医学院(南宁 530001)　阎　莉　郑作文　卫智权
摘　要:目的:探讨藤茶总黄酮(TCTF)对免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响。方法:以背部皮下注射环磷酰胺(CY)复制小
鼠免疫抑制模型 , 灌胃给予 TCTFl0天后 , 以血清半数溶血值测定法测定小鼠的血清溶血素含量。结果:TCTF能够显著提高
免疫抑制小鼠血清溶血素含量 ,促进血清溶血素生成。结论:TCTF可提高免疫抑制小鼠的体液免疫功能。
关键词:藤茶总黄酮;免疫抑制;体液免疫
中图分类号:R291.5　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)10-0053-02
　　藤茶(Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W.T.
Wang)系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶 〔1〕。全
株药用 , 味甘 、淡 , 性凉 ,具有清热解毒 、祛风湿 、强筋骨等功
效 , 〔2〕为瑶族民间常用的草药之一。多项药理学研究表明 ,
藤茶不仅有降血糖 、调节血脂 、抗炎 、抗氧化等作用 , 还有保
肝 、抑制 HBV合成和分泌等作用 〔3 , 6〕 , 因此 TCTF是否通过
调节免疫功能而发挥抗 HBV等作用值得进一步深入探讨。
本研究应用环磷酰胺复制小鼠免疫抑制模型 ,研究 TCTF是
否能提高免疫抑制小鼠的体液免疫功能 ,以期为 TCTF的开
发利用提供依据。
1　材　料
1.1　试剂:注射用环磷酰胺(上海华联制药有限公司 , 批
号:010914):印度墨水(北京市西中化工厂 , 批号:020524)。
1.2　实验动物:健康昆明种小鼠 , 体重 20.0±2.0g,雌雄兼
用 , 由广西中医学院实验动物中心提供 , 合格证号:桂医动
字第 11004号。采用随机 、均衡方法分组。
1.3　SRBC由广西区人民医院药剂科惠赠。
2　方　法
2.1　SRBC悬液的制备:取阿氏液保存的 SRBC, 离心
(1500prm, 10min),弃去上清 , 加入无菌生理盐水洗涤 , 重复
2次后 ,用生理盐水稀释 , 配成 20%SRBC溶液 , 4℃冰箱中
保存。
2.2　补体的制备:取 3只豚鼠 , 心脏取血后注入无菌的离
心管中。静置 15分钟后 ,用玻棒延边缘剥离 1周 , 4℃下静
置 2h以上 ,取出吸上清 , 离心(1500PM, 10min),分离上清。
取阿氏液保存的 SRBC, 离心(1500pM, 10min), 弃去上清 ,
加入无菌生理盐水洗涤 , 重复 2次 , 去上清后将脉鼠血清以
2 ～ 3倍体积倒入 SRBC中 , 充分混合 , 冰浴 20分钟 , 并不时
搅动离心管。 取出 , 离心(1500prm, 10min), 即得补体 。将
补体分装 , 密闭 ,置于 -20℃冰箱保存。
2.3　TCTF对免疫抑制小鼠血清溶血素含量的影响:取小
　■广西藤茶总黄酮降酶片的临床前研究(广西科技厅科技攻关
项目 ,项目编号:桂科攻 0322024-5B)
鼠随机分为空白组 、免疫抑制模型组 (CY, 40mg/kg)和
TCTF高 、中 、低剂量组(200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)。空
白组 、模型组给蒸馏水 , 其余各组给予相应的药物(给药容
量为 0.1ml/10g)。灌胃给药 , 连续 10天。模型组和 TCTF
高 、中 、低剂量组隔天背部皮下注射 CY。于给药第 5天 ,腹
腔注射 20%SRBC(0.2ml/只)。免疫后第 5天摘眼球取血 ,
离心分离血清 ,用生理盐水稀释 100倍 , 取 0.5ml稀释的血
清放入另一试管中 , 依次加入 SRBC、补体 、生理盐水各 0.
5ml, 空白管用生理盐水代替血清。混匀 , 置 37℃温箱温育
1h,离心 , 取上清液测 OD值(波长 540nm), 按下面公式计
算溶血素含量(HCIgM)。
HCIgM=样本血清的 OD值 ×稀释倍数 。
3　结　果
实验结果表明 , 模型组 HCIgM值明显低于空白组 , 差异
有非常显著性(P<0.01),提示 CY能显著减少小鼠溶血素
的生成。 TCTF高 、中 、低剂量组 HCIgM值高于模型组 , 差异
均有显著性(P<0.05),提示 TCTF能促进免疫抑制小鼠溶
血素的生成 ,从而提高其体液免疫功能。结果见表 1。
表 1　TCTF对免疫抑制小鼠溶血素的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) HCIgM
空白组 - 264.96±43.22
模型组 40 215.08±51.99■■
TCTF高剂量 +CY组 200 274.88±41.66＊
TCTF中剂量 +CY组 100 263.72±46.28＊
TCTF低剂量 +CY组 50 262.36±36.50＊
　　注:与空白组比较 , ■■表示 P<0.01;与模型组比较 ,
＊表示 P<0.05
4　讨　论
近年来的研究发现 , 急性 HBV感染的病毒清除主要是
通过非细胞裂解的清除过程来完成 〔1〕。急性 HBV感染的
黑猩猩在肝脏淋巴细胞浸润的高峰之前就出现了肝脏和血
清的 HBV-DNA的清除 , 效应细胞分泌表达的 IFN和
532009年 10月第 10期　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.10.049
TNFα等细胞因子参与的体液免疫反应是介导非细胞裂解
病毒清除机制的重要因素 〔8〕。如果 HBV感染急性期这种
体液免疫反应低下 , 将增加 HBV感染慢性化的可能性。因
此 , 针对 HBV感染后不同阶段的免疫反应的特点实施有效
的免疫调节治疗可能是及时清除 HBV、避免感染慢性化的
有效方法。
本研究结果表明 , TCTF能够显著提高环磷酰胺造成的
免疫抑制小鼠血清溶血素含量 , 促进血清溶血素生成。实
验结果提示 , TCTF对于免疫抑制小鼠低水平的体液免疫有
较为明显的免疫增强作用。对于因体液免疫反应低下而不
能充分发挥非细胞裂解病毒清除机制的 HBV感染者 , 如能
使用药物增强其低下的免疫反应水平 , 将显著提高其清除
HBV的能力 , 从而根本改善预后 ,并有助于提高患者的生活
质量。 TCTF的免疫增强作用可能在此领域具有重要的实
践意义 , 值得进一步深入研究。
参考文献
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编〔M〕.北京:科学出版社 , 1983.349.
〔2〕广西植物研究所.广西药用植物名录〔M〕.南宁:广西民
族出版社 , 1974.202.
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量测定〔J〕.湖南中医药学报 , 1999, 5(12):30-31.
〔4〕钟正贤 ,覃洁萍 ,周桂芬 , 等.广西藤茶总黄酮保肝作用
的实验研究〔J〕.广西科学 , 2002, 9(1):57.
〔5〕钟正贤 ,陈学芬 ,周桂芬 , 等.广西产藤茶总黄酮的药理
研究〔J〕.广西科学 , 1999, 6(3):216-218.
〔6〕郑作文.藤茶总黄酮在 2.2.1.5细胞培养中对乙型肝炎
病毒 HBsAg、HBeAg和 HBV-DNA的抑制作用 〔J〕.山
东中医杂志 , 2003, 22(9):561-563.
〔7〕成军 ,李莉.乙型肝炎病毒的非细胞裂解机制〔J〕.世界
华人消化杂志 , 2002, 10(1):73-76.
〔8〕GuidottiLG, RochfordR, ChungJ, etal.Viralclearance
withoutdestructionofinfectedcellsduringacuteHBVin-
fection〔J〕.Sclence, 1999, 284(5415):825-829.
2009年 7月 1日收稿
正交实验优选傣药黑种草籽挥发油提取工艺的研究
云南省西双版纳州人民医院(景洪 666100)　　　　李正洪
云南省西双版纳州食品药品检验所(景洪 666100)　彭　霞
广东茂名学院(茂名 525000)　　　　　　　　　　黄　敏
摘　要:目的:采用正交实验法优选黑种草籽挥发油的提取工艺。方法:以挥发油得率为指标 ,以浸泡时间 、固液比 、粉碎粒
度 、超声时间为因素进行正交实验。结果:最佳提取工艺条件:浸泡时间为 20小时 , 固液比 1∶15, 粉碎粒度 40目 , 超声时间
40min, 在此条件下挥发油提得率为 0.88%。结论:提取工艺简便易行。
关键词:黑种草籽;挥发油;正交实验
中图分类号:R295.3　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)10-0054-02
　　傣药黑种草籽为毛茛科植物腺毛黑种草 Nigelaglandu-
liferaFreynetSint.的干燥成熟种子。为西双版纳地区傣族
常用药之一 , 具有清脑醒神 ,除风解痉 ,调经止血 ,温通止痛
之功。傣医临床常用于风塔偏盛所致的头昏头痛 , 失眠多
梦;风湿病关节肌肉肿痛及腰膝冷痛;癫痫;痧证 、晕车 、晕
船;月子病(产后病)流血不止 、贫血 , 缺乳 ,月经不调 , 痛经 ,
闭经;胃脘疼痛 , 食少 , 泄泻 〔1〕。 作者以挥发油得率为评价
指标 , 用正交实验法对黑种草籽挥发油的提取工艺进行了
优选 , 为黑种草籽的开发利用提供实验数据。
1　材　料
挥发油测定器;黑种草籽 ,购于云南省西双版纳州傣医
院傣药房 , 经西双版纳州民族医药研究所主任药师赵应红
鉴定为毛茛科植物腺毛黑种草 NigellaglanduliferaFreynet
Sint.的干燥成熟种子。
2　方法与结果
2.1　单因素考察:前期预试验:采用水蒸气蒸馏法 、 索式
提取法 、 超声波辅助挥发油提取器提取法 、 挥发油提取器
提取法 、 超声波辅助水蒸气蒸馏法进行研究 , 结果表明 ,
超声波辅助水蒸气蒸馏法所提取的挥发油得率最高。提取
方法选择超声波辅助挥发油提取器提取法 , 确定以浸泡时
间 、 固液比 、 粉碎粒度 、 超声时间为考察因素 , 每个因素
以初步最佳水平为中心选取 3个水平 , 使用 L9(34)正交表
来安排实验 ,测定出油率 , 进行正交实验分析 ,找出最佳工
艺条件。
2.1.1　粉碎度与挥发油得量的关系:准确称取已粉碎至一
定粒度的黑种草籽 25g, 按固液比(1∶12)加入一定比例的
水 ,室温下浸泡 20h后再进行水蒸气蒸馏提取。实验结果
表明 ,在粉碎粒度在 20目以下 ～ 40目之间出油率呈现递增
54 　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2009年 10月第 10期