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现 代 中 医 药
Modern Traditional Chinese Medicine
2012 年 01 月第 32 卷第 1 期
Jan． 2012 Vol． 32 No． 1
藤梨根提取物对裸鼠移植人胃癌
SGC － 7901 细胞瘤 p53 基因蛋白的影响
*
王小平 白吉庆 叶峥嵘
(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)
摘 要:目的 研究藤梨根提取物对人胃癌 SGC － 7901 细胞凋亡的影响及其部分作用机理。方法 采用免疫
组织化学方法检测 p53 基因表达。结果 藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌 SGC － 7901 细胞 p53 蛋白表达
阳性灰度值分别为 185． 48 ± 1． 05，124． 05 ± 1． 53，95． 51 ± 0． 19。结论 藤梨根提取物抑制 SGC － 7901 p53 蛋白水
平的表达有可能是促进 SGC － 7901 凋亡的作用机制。
关键词:藤梨根;提取物;胃癌;p53
中图分类号:R 285． 5 文献标识码:A 文章编号:1672 － 0571(2012)01 － 0056 － 02
Influence of Tengligen (Actinidiae)Extracts on Gene Protein
p53 in Rats Transplanted with Human Gastric Cytoma SGC － 7901
Wang Xiaoping Bai Jiqing Ye Zhengrong
(Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang，Shaanxi，712046)
Abstract:ObjectiveTo study the influence of Tengligen (Actinidiae)extracts on the apoptosis of SGC － 7901 and
part of its mechanism． MethodImmunohistochemical method was adopted to test the gene expression of p53． ResultsThe
positive gray value of Tengligen (Actinidae)extracts of large，middle and small dosage groups on p53 of SGC － 7901 are
respectively 185． 48 ± 1． 05，124． 05 ± 1． 53，95． 51 ± 0． 19． ConclusionThe function of suppressing the expression of SGC
－ 7901 p53 by Tengligen (Actinidae)extracts might be the mechanism of promoting the apoptosis of SGC － 7901．
Key Words:Tengligen (Actinidae) ;extract;gastric stomach;p53
胃癌是我国最常见的肿瘤之一，其死亡人数在
我国居恶性肿瘤的首位［1］。手术对早期胃癌有较
好的疗效，但对中晚期的胃癌疗效欠佳。因此寻找
疗效好、副作用小的治疗方法仍是目前肿瘤研究的
焦点之一。藤梨根为猕猴桃科植物中华猕猴桃
Actinidia chinensis Planch． 的根［2］。现代药理研究
表明:藤梨根具有抗肿瘤、调节免疫等作用，可用于
治疗消化系统癌症等症［3 － 4］。本实验室用乙酸乙
酯提取聚酰胺柱纯化得到的提取物，经初步的实
验，有较好的抗瘤效果，且未发现明显的毒副作用。
本实验旨在研究藤梨根提取物对人胃腺癌 SGC －
7901 细胞凋亡的影响及其部分作用机制，为其临
床应用研究以及后期研发抗胃癌新药提供相关实
验理论依据。
1 材料
动物:BALB /C － nu /nu 裸小鼠，上海斯菜克实
验动物有限责任公司提供，许可证号:SCXK(沪)
2003 － 0003。4 ～ 6 W龄，体重 18 ～ 20 g，雄性，在无
特定病原体条件下饲养。
细胞 SGC － 7901 胃癌细胞株:由第四军医大
学试验动物中心提供。
药品与试剂:藤梨根提取物自制;RPMI1640 培
养液，购自美国 GIBCO 公司;康力欣胶囊，由云南
名扬药业有限公司提供。鼠抗人 P53 单克隆抗体
(IgG1) ，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供;
SA1021 小鼠 IgG，由武汉博士德生物工程有限公司
* 基金项目:陕西省教育厅资助项目(08JK266) ;陕西省科技厅中药现代化资助项目［(2009K19 － 03(2) ;2010K17 －
02) ］
DOI:10.13424/j.cnki.mtcm.2012.01.038
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提供;即用型 SABC 免疫组化染色试剂盒，由武汉
博士德生物工程有限公司提供;DAB 显色试剂盒，
由武汉博士德生物工程有限公司提供。
主要仪器:PTC 200 多通道 PCR 扩增仪，美国
MJ公司生产;Ep － ics XL 流式细胞仪，美国 Beck-
mon － Coulter公司生产。
2 方法
造模:BALB /C － nu /nu 裸小鼠按体重随机为
五组，每组 6 只。取指数增殖期 SGC － 7901 细胞，
用 0． 25 %胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，调整细
胞密度至 1． 0 × 107 /mL，台盼蓝染色计数活细胞占
95 %以上，于每只裸鼠右后肢腋下皮下接种 2． 0 ×
106 个 /0． 2mL细胞。空白对照组每天灌胃蒸馏水;
康力欣胶囊组按 60 mg /kg 灌胃;藤梨根提取物按
大(320 mg /kg)、中(160 mg /kg)、小(80 mg /kg)剂
量分组给药。各组每天灌胃一次，每次 0． 4 mL，共
21 d。
测定:采用 10 %中性甲醛溶液固定瘤块，24 h
内进行石蜡包埋、切片。用涂有 Poly － Lysine 的磨
沙载波片捞片。采用 SABC 法染色，将上述石蜡切
片经二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化后，加入 3 %
H2O2 甲醇溶液，室温下孵育 10 min，以阻断内源性
过氧化物酶，消除非特异性染色;在 0． 01M 枸橼酸
盐缓冲液(pH 6． 0)中进行热抗原修复;滴加 5 %
BSA封闭液，室温 20 min;再加入 1∶ 100 稀释的鼠
抗人 p53 单克隆抗体，37 ℃1 小时后滴加生物素化
羊抗鼠 IgG，于 37 ℃湿盒中温育 20 min 后加入
SABC，再温育 20 min (上述各步骤之间皆用 PBS
洗涤 3 次，每次 5 min) ，DAB 显色镜下控制 5 ～
10 min，显色完成后用自来水冲洗 3 min 以终止反
应，最后以苏木精对比染色，脱水，透明，封固，镜下
观察，核染色呈棕黄色者为阳性细胞。每张切片观
察 5 个高倍视野，计算灰度值。
3 结果
表 1 对裸鼠移植人胃癌 SGC － 7901 细胞瘤
p53 基因蛋白影响 (x ± s)
组别 n 剂量(mg·kg －1) p53 阳性灰度值
模型组 6 － 78． 05 ± 1． 16
康力欣胶囊组 6 60 100． 27 ± 1． 64＊＊
藤梨根提取物 6 320 185． 48 ± 1． 05＊＊
藤梨根提取物 6 160 124． 05 ± 1． 53＊＊
藤梨根提取物 6 80 95． 51 ± 0． 19＊＊
注:与阴性对照组比较＊＊P ＜0． 01。
与阴性对照组比较，各给药组均有显著的统计
学意义(P ＜ 0． 01) ;藤梨根提取物大、中剂量组的
p53 阳性灰度值高于阴性对照组。与康力欣胶囊
组比较，藤梨根提取物大、中剂量组有统计学意义
(P ＜ 0． 05)。表明，在本次试验采用的剂量范围
内，藤梨根提取物剂量与 p53 阳性灰度值正相关。
4 讨论
采用紫外分光光度法，对藤梨根提取物中总黄
酮进行含量测定，结果藤梨根提取物中总黄酮的含
量在 12． 0 %以上。应用聚酰胺柱色谱法对藤梨根
提取物进行纯化，使总黄酮的含量达 50 %以上。
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，占消化道肿瘤
首位。我国属胃癌高发区，据最新统计数据，每年
新发现 40 万胃癌患者，占世界发病人数的
42 %［5］。对于中晚期胃癌，术后化疗是目前除手
术外最常用的治疗措施，但效果有限。因此，研究
中医药治疗中晚期胃癌具有现实意义［6］。
Kerr等于 1972 年首先提出，在细胞凋亡过程
受许多基因共同调控，已报道有三十余种基因与细
胞凋亡的抑制或增强有关［7］。其中，p53 为促凋亡
基因，但突变后的 p53 却起到癌基因的作用［8］。本
研究结果表明藤梨根提取物可能是通过抑制 p53
基因突变基因表达，诱导人胃癌 SGC － 7901 细胞
凋亡，从而延缓细胞分裂增殖速度，抑制胃癌细胞
的生长，达到抗癌目的。至于该提取物诱导细胞凋
亡作用是否还与其他调控基因有关，待于进一步研
究。
参考文献
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(收稿日期:2011 － 10 － 20)