全 文 ：肠制剂药动学程序计算 ,而五灵胶囊中乙素在胃肠内药时曲线呈
波动式上升 ,在 ig给药后 , 32 h血浆浓度达最高 ,其水平与胃内
峰浓度持平 ,用胃肠制剂药代动力学程序不能计算药动学参数 ,
产生此现象的原因可能是五灵胶囊内组分中五味子其它木脂素
在肝内药物酶作用下转化成五味子乙素 ,我们曾在体外采用大鼠
肝细胞培养进行试验 ,将五味子甲素与肝细胞培养 48 h,测定肝
细胞甲素的同时也发现有乙素的存在 ,含量分析约 30%。从药时
曲线可以看出 ,在给药 12 h又产生一个最大浓度峰并且继续呈
锯齿状增高 ,这种现象与肝脏产生代谢转化的肝药酶时间周期有
关 ,还是五味子其它成分经肝肠循环而导致不得而知。 五味子乙
素有显著降酶、清除脂质过氧化物和增强肝脏解毒作用 ,它在血
浆存在延长是有益于临床治疗作用的 ,根据文献 [3] Cmax / AUC作
为吸收速度指标 ,五灵胶囊中乙素的 Cmax /AUC是供试品乙素的
1 /5倍 ;方剂改变处方中主要成分在体内动力学参数 ,使有效成
分在血中滞留时间延长 ,生物利用度提高 ,从而增强了药物的治
疗作用。
参考文献:
[ 1]　孙　利 ,周永兴 ,连建奇 .五灵胶囊治疗慢性肝炎的临床随访观察
[ J] .第四军医大学学报 , 2000, 21( 7): 905-906.
[ 2 ]　黄泰康 .常用中药成分与药理手册 [M ].北京:中国医药科技出版
社 , 1994: 537-539.
[ 3 ]　 Endreyi L, Fri tsch S, Yan W. Cmax /AUC is A clearer measure that
Cmax f or absorption rates in investigation of bioequivalence [ J]. int j clin
pharmacol ther toxicol. 1991, 29: 394-394.
收稿日期: 2003-12-23;　修订日期: 2004-05-12
作者简介:马秀敏 ( 1968-) ,女 (汉族 ) ,新疆奇台人 ,现任新疆医科大学基
础医学院病原学讲师 ,硕士学位 ,主要从事微生物检验和中草药抗菌作
用研究 .
天山堇菜提取物的体外抗菌实验
马秀敏 1 , 周晓英 1 , 张　立 1 , 王亚男1 , 丁剑冰1 , 田树革2
( 1.新疆医科大学基础医学院 ,新疆 乌鲁木齐　 830054;
2.新疆医科大学中医学院 ,新疆 乌鲁木齐　 830054)
摘要:目的: 探讨天山堇菜不同溶剂提取物的抑菌作用。 方法: 采用纸片琼脂扩散法、比浊法和稀释法对天山堇菜不同溶
剂提取物进行抑菌实验研究。结果: 天山堇菜不同溶剂提取物对供试菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和枯草芽孢
杆菌均有一定程度的抑制作用。结论: 天山堇菜不同溶剂提取物对供试菌均有一定的抑菌作用 ,是有研究、开发价值的抗
菌中草药。
关键词: 天山堇菜 ;　提取物 ;　体外抗菌实验
中图分类号: R285. 5　　文献标识码: A　　文章编号: 1008-0805( 2004) 08-0470-02
Antimicrobial Test in Vitro of Extracts fromViola t ianshanica Maxim
M A Xiu-min
1
, ZHOU Xiao-ying
1
, ZHAN G Li
1
, WAN G Ya-nan
1
, DING Jian-bing
1
, T IAN Shu-ge
2
( 1. Department of Pathogenic Biology , X inj iang Medical University , Urumqi 830054, China;
2. Department of Traditional Chinese Medical , X injiang Medical University , Urumqi , 830054, China)
Abstract: Object ive: The different so lvent ex trac ts o f Viola tianshanica Maxim is used to restrain bacteria. We can carr y out
the r esea rch of bacteria property. Methods: We do the research of differ ent solv ent ex tracts of Viola tianshanica Maxim by
turbid comparison way and the way of diluting. Results: The things we use to restrain bacteria have cer tain inhibition effec t
against Staphy lococcus aureus、 Escherichia coli、 Shigella dy senteriae、 Bacillus subtilis. Conclusion: Th e differ ent solv ent
abstracts of Viola tianshanica Maxim have obv ious antibacteria action.
Key words: Viola tianshanica Maxim;　 Ex tracts;　 Antimicrobia l test
　　天山堇菜 ,维药名为比那夫西 ( Herba Viola e tianshanica e)是
堇菜科 ( V iolaceae)植物天山堇菜 Viola tianshanica Max im的干燥
全草。其气微 ,味微苦辛 ,凉 ,清热解毒 ,具有调理、软化、发汗的作
用。 主要用于轻泻异常胆液质 ,调节血液热性过盛 ,生津止渴 ,发
汗退烧。临床用于热性感冒 ,发烧 ,头痛 ,咽痛 ,肢肿 ,小儿惊厥 ,也
可外用于疔疮肿痛等。用量 6～ 12 g,当茶饮或煎服 ,外用适量 [1 ]。
全草经预试检出含挥发油、黄酮类、氨基酸、生物碱和黏液质
等 [2]。 Binafuxi为维吾尔医习用名称 ,维吾尔医用药历史很长。天
山堇菜作为维吾尔族药在新疆民间广泛应用 ,但对其在抑菌实验
方面的报道却很少。 笔者采用纸片琼脂扩散法、比浊法和稀释法
对天山堇菜不同溶剂提取物进行了抑菌作用的测定 ,现将结果报
道如下。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　药材 天山堇菜 Viola tianshanica Max im的全草 2003-03
购于新疆维吾尔自治区维吾尔医院 ,药材经新疆维吾尔自治区药
物研究所鉴定 ,为正品 ( 830021)。
1. 1. 2　药物的提取方法 [3]
1. 1. 2. 1　水提天山堇菜药液的制备 称取一定量的天山堇菜将
其粉碎 ,过 40目筛得到粗粉 20 g ,加入 200 ml蒸馏水 ,用 KQ-
400DB型数控超声波清洗器超声 30 min后 ,在不断搅拌下浸提
24 h,过滤后将滤液浓缩至 20 m l,滤膜过滤除菌 ,得到 1 g /ml水
提天山堇菜药液 ,装入无菌试管中备用。
1. 1. 2. 2　 90%乙醇提天山堇菜药液的制备 称取一定量的天山
堇菜将其粉碎 ,过筛后得到粗粉 20 g ,加入 90%乙醇 200 ml,用
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时珍国医国药 2004年第 15卷第 8期 LISHIZHEN M EDICINE AND M ATERIA MEDICA RESEARCH 2004 VOL. 15 NO. 8
超声波清洗器超声 30 min后 ,在不断搅拌下浸提 24 h ,过滤所得
滤液回收乙醇后 ,加热浓缩成浸膏 ,再加入蒸馏水 20 ml,不断搅
拌使浸膏溶解 ,滤膜过滤除菌 ,配成 1 g /m l醇提天山堇菜药液 20
ml,装入无菌试管中备用。
1. 1. 2. 3　天山堇菜总黄酮液的制备 称取一定量的 90%的乙醇
提取液 ,过 HP400型大孔吸附树脂柱 ,先用水洗至 Mmolish反应
阴性 ,再用无水乙醇洗脱并收集 ,黄酮检识反应为阳性 ,加热浓
缩 ,再加入蒸馏水 ,滤膜过滤除菌 ,配成 1 g /ml天山堇菜总黄酮
液 20 m l,装入无菌试管中备用。以上 3种不同溶剂的天山堇菜提
取液均需放置在冰箱保存 ,于 48 h内使用 ,以保证药效稳定。
1. 1. 3　菌种及培养 金黄色葡萄球菌 ( 26076);枯草芽孢杆菌
( 63501);痢疾杆菌 ( 51336);大肠杆菌 ( 44103) ;均购自中国药品
生物制品检定所。水解酪蛋白 ( Mueller- Hinton, M H)肉汤、琼脂
培养基购自杭州微生物试剂厂。
供试菌种经传代纯培养后 ,取一接种环菌接种于 ( M H)肉汤
培养基中 , 37℃恒温箱培养 6 h,经比浊法判定菌量后 ,再用 M H
肉汤稀释至含菌量为 105CFU /ml的菌悬液。
1. 2　方法 [4, 5]
1. 2. 1　纸片琼脂扩散法 取培养 6 h的试验菌液 ( 105CFU /ml) ,
用无菌棉拭子将菌液分别均匀涂布于 M H琼脂平板表面 ,稍干
后再用无菌镊子取经灭菌吸取不同浓度药液的圆滤纸片 (直径 6
mm,每片吸取药液 20μl) ,贴于 M H琼脂平板表面 , 37℃恒温箱
培养 24 h后观察并测量抑菌圈直径 ,每个浓度的药物抑菌实验
重复 3次 ,抑菌结果为 3次实验平均值。
1. 2. 2　比浊法 制备 M H肉汤培养基 ,分装于试管中 ,每只 9
ml,常压灭菌后加入不同浓度的天山堇菜水提取物 1 ml, M H肉
汤培养基含药浓度分别为 200, 100, 50, 25, 12. 5 mg /m l。 然后接
种制备好的实验菌液 0. 05 ml( 105CFU /ml) ,并以无药 M H肉汤
培养基接种相同菌种作为对照。 于 37℃恒温箱培养 18 h后 ,在
721型分光光度计 480 nm测定各处理液的吸光度 ,计算细菌的
相对生长率。
1. 2. 3　平板培养基连续稀释法 天山堇菜水提取物用无菌蒸馏
水作一系列倍比稀释后 ,分别将不同浓度药液 2 ml加入到 18 ml
灭菌 M H琼脂培养基中制成平板培养基 ,冷凝后 M H平板培养
基含药浓度分别为 200, 100, 50, 25, 12. 5 mg /ml。 取 0. 1 ml
( 105CFU /ml)实验菌液滴加到 M H琼脂培养基表面 ,用灭菌的 L
型玻璃棒涂匀。 每种浓度药物每个菌种接种 3皿 ,结果为 3次实
验平均值 ,并以无药 M H琼脂培养基接种相同菌种作为对照。置
37℃恒温培养 18 h后 ,计数各皿菌落数 ,计算细菌相对生长率。
2　结果与分析
2. 1　纸片琼脂扩散法天山堇菜水、乙醇提取物、总黄酮的抑菌作
用 天山堇菜提取物对 4种菌均有一定的抑制作用 , 3种提取物
的抑菌能力没有本质差异 ,抑菌作用大小主要取决于所用提取物
的浓度。 见表 1。
2. 2　天山堇菜水提取物对细菌相对生长率的影响 见表 2。从表
2可看出 ,随着抑菌物浓度的增加 ,细菌的生长迅速受到抑制。比
较两种培养方式发现 ,液体培养时 ,天山堇菜水提取物的抑菌作
用较强 ,细菌生长差 ,这可能是液体条件下更有利于抑菌物向细
菌细胞渗透 ,易于和细菌细胞膜蛋白质等相互结合 ,破坏了蛋白
质空间结构的完整性 ,细胞膜的生理功能受到损害 ,因而生长受
到影响。
3　讨论
本实验应用体外抗菌试验 [6, 7 ]测定天山堇菜的抗菌作用强
弱 ,该方法简便经济 ,是很便捷的初步筛选方法 ,但抗菌试验的结
果易受外界因素影响 ,例如药物的种类、颜色、制备方法、药物浓
度、试验菌的种类、培养的温度和时间等。为了避免纸片琼脂扩散
法抑菌物浓度不同对扩散的影响和比浊法受中药颜色的影响等
因素 ,本实验采用纸片琼脂扩散法、比浊法和稀释法同时进行抗
菌实验研究。实验结果表明天山堇菜不同溶剂的提取物对供试菌
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和枯草芽孢杆菌均有一定
程度的抑制作用 ,说明天山堇菜是极具有研究、开发价值的新疆
维吾尔族抗菌药材。
表 1　纸片法天山堇菜不同浓度水醇提取物黄酮的细菌抑菌结果
提取物 浓度
C /mg· ml-1
抑菌圈直径 d /mm
金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 痢疾杆菌 枯草杆菌
水提取物 25 12 9 8 13
50 17 13 11 17
100 21 17 16 22
醇提取物 25 12 8 7 10
50 15 13 11 14
100 21 16 16 20
总黄酮 25 15 11 9 15
50 19 15 13 20
100 23 20 19 24
表 2　天山堇菜水提取物对固体、液体培养基培养细菌相对生长率的影响
药物浓度
C /mg· ml-1
金黄色葡萄杆菌
固体 液体
大肠杆菌
固体 液体
痢疾杆菌
固体 液体
枯草杆菌
固体 液体
空白无药对照 100 100 100 100 100 100 100 100
12. 5 95 89 98 92 99 91 96 86
25 78 73 88 82 90 80 80 73
50 20 15 30 25 50 47 21 17
100 3 0 10 7 20 16 2 0
200 0 0 0 0 0 0 0 0
临床资料表明 ,具有清热解毒作用的中草药 [8 ]对多种细菌所
致的感染性疾病有良好治疗效果。 本实验进一步证明 ,天山堇菜
不同溶剂提取物在体外条件下对 4种细菌均有抑菌作用 ,不同溶
剂提取物抑菌强度有所差别。但体外实验结果与临床应用效果还
有一定差异 ,因此本实验结果仅仅是在一定条件下药物的抑菌作
用 ,尚须进行动物实验等进一步验证。
参考文献:
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LISHIZHEN M EDICIN E AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 2004 V OL. 15 NO. 8 时珍国医国药 2004年第 15卷第 8期