全 文 ：2012 年 1 月第 35 卷第 1 期 陕 西 中 医 学 院 学 报
Jan． 2012 Vol． 35 No． 1 Journal of Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine ·59·
实验研究
藤梨根提取物对人胃癌
SGC － 7901 细胞凋亡及 Bcl － 2 的影响*
白吉庆 王小平＊＊ 叶峥嵘
(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)
摘 要:目的 研究藤梨根提取物对人胃癌 SGC － 7901 细胞凋亡的影响及其部分作用机理。方法 采用不同浓
度的藤梨根提取物作用于人胃癌 SGC － 7901 细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫组织化学方法检测 Bcl － 2 基
因表达。结果 藤梨根作用于 SGC － 7901，在(8 ～ 32)mg /mL时促进该细胞呈不同程度的凋亡;藤梨根提取物大、
中、小剂量组对人胃癌 SGC － 7901 细胞 Bcl － 2 蛋白表达阳性灰度值分别为 103． 41 ± 1． 01，104． 05 ± 1． 23，90． 52 ±
1． 09。结论 藤梨根提取物对 SGC － 7901 有明显促凋亡作用;藤梨根提取物抑制 SGC － 7901 Bcl － 2 蛋白水平的表
达有可能是促进 SGC － 7901 凋亡的作用机制。
关键词:藤梨根;提取物;胃癌;Bcl － 2
中图分类号:R 735． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 168X(2012)01 － 0059 － 03
Influence of Tengligen (Actinidiae)
Extracts on the Apoptosis of SGC － 7901 and Bcl － 2
Bai Jiqing Wang Xiaoping Ye Zhengrong
(Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang，Shaanxi，712046)
Abstract:ObjectiveTo study the influence of Tengligen (Actinidiae)extracts on the apoptosis of SGC － 7901 and
part of its mechanism． MethodTengligen (Actinidiae)extracts of different concentrations were applied to SGC － 7901．
Flow cytometry (FCM)was employed to test the apoptosis and immunohistochemistry (IHC)method was adopted to test
the gene expression of Bcl － 2． ResultsTengligen (Actinidae)acts on SGC － 7901 and to some extent promotes the apop-
tosis with the concentration of 8 ～ 32 mg· mL － 1． The positive expression gray value of Tengligen (Actinidae)extracts
of large，middle and small dosage groups on Bcl － 2 protein of human cancer cells SGC － 7901 are respectively 103． 41 ±
1． 01，104． 05 ± 1． 23 and 90． 52 ± 1． 09． ConclusionTengligen (Actinidae)extracts has significant apoptosis － stimula-
tion function on SGC － 7901;The inhibition function of Tengligen (Actinidae)extracts on the expression of SGC － 7901
Bcl － 2 might be the mechanism of promoting apoptosis of SGC － 7901．
Key Words:Tengligen (Actinidae) ;extracts;gastric cancer;Bcl － 2
胃癌是我国最常见的肿瘤之一，其死亡人数在 我国居恶性肿瘤的首位［1］。手术对早期胃癌有较
＊
＊＊
基金项目:陕西省教育厅资助项目(08JK266);陕西省科技厅中药现代化资助项目［2009K19 － 03(2);2010K17 － 02］
通讯作者:王小平(1976 －)女，汉族，副教授，博士，研究方向:中药药效物质基础及新药研究。
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好的疗效，但对中晚期的胃癌疗效欠佳。因此寻找
疗效好、副作用小的治疗方法仍是目前肿瘤研究的
焦点之一。藤梨根为猕猴桃科植物中华猕猴桃
Actinidia chinensis Planch． 的根［2］。现代药理研究
表明:藤梨根具有抗肿瘤、调节免疫等作用，可用于
治疗消化系统癌症等症［3 － 4］。本实验室用乙酸乙
酯提取聚酰胺柱纯化得到的提取物，经初步的实
验，有较好的抗瘤效果，且未发现明显的毒副作用。
本实验旨在研究藤梨根提取物对人胃腺癌 SGC －
7901 细胞凋亡的影响及其部分作用机制，为其临
床应用研究以及后期研发抗胃癌新药提供相关实
验理论依据。
1 材料
1． 1 实验动物 BALB /C － nu /nu 裸小鼠，上海斯
菜克实验动物有限责任公司提供，许可证号:SCXK
(沪)2003 － 0003。(4 ～ 6)W龄，体重(18 ～ 20)g，
雄性，在无特定病原体条件下饲养。
1． 2 药品与试剂 细胞 SGC － 7901 胃癌细胞株:
由第四军医大学试验动物中心提供。
藤梨根提取物自制;RPMI1640 培养液，购自美
国 GIBCO公司;康力欣胶囊，由云南名扬药业有限
公司提供。鼠抗人 BCL － 2 单克隆抗体(IgG1) ，由
北京中杉金桥生物技术有限公司提供;SA1021 小
鼠 IgG，由武汉博士德生物工程有限公司提供;即用
型 SABC免疫组化染色试剂盒，由武汉博士德生物
工程有限公司提供;DAB 显色试剂盒，由武汉博士
德生物工程有限公司提供。
1． 3 主要仪器 PTC 200 多通道 PCR 扩增仪，美
国 MJ 公司生产;Ep － ics XL 流式细胞仪，美国
Beckmon － Coulter公司生产。
2 方法
2． 1 对细胞凋亡的影响 取对数生长期 SGC －
7901 1 × 105 培养于 50 mL 培养瓶中 24 h，提取物
浓度分别为 4，8，16，32 mg /mL － FU 100μg /mL 和
空白对照组。共同培养 48 h，0． 25 %胰酶消化，
PBS冲洗 2 次，用 100μL 含钙离子 buffer 重悬，加
5μLAnnex V － FITC 染料染色(20 ～ 30)min，加
5μLPI燃料染色 5 min，加入适量含钙离子 buffer 调
整细胞浓度到 1 × 105 个 /mL 右，上流式细胞仪检
测。激发波长为 488 nm，发射波长 530 nm。
2． 2 对 Bcl － 2 基因蛋白表达的影响 造模:
BALB /C － nu /nu裸小鼠按体重随机为五组，每组 6
只。取指数增殖期 SGC － 7901 细胞，用 0． 25 %胰
蛋白酶消化制成单细胞悬液，调整细胞密度至1． 0
× 07 /mL，台盼蓝染色计数活细胞占 95 %以上，于
每只裸鼠右后肢腋下皮下接种 2． 0 × 106 个 /
0． 2 mL细胞。空白对照组每天灌胃蒸馏水;康力欣
胶囊组按 60 mg /kg 灌胃;藤梨根提取物按大(320
mg /kg)、中(160 mg /kg)、小(80 mg /kg)剂量分组
给药。各组每天灌胃一次，每次 0． 4 mL，共 21 d。
测定:采用 10 %中性甲醛溶液固定瘤块，24 h
内进行石蜡包埋、切片。用涂有 Poly － Lysine 的磨
沙载波片捞片。采用 SABC 法染色，将上述石蜡切
片经二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化后，加入 3 %
H2O2 甲醇溶液，室温下孵育 10 min，以阻断内源性
过氧化物酶，消除非特异性染色;在 0． 01M 枸橼酸
盐缓冲液(pH 6． 0)中进行热抗原修复;滴加 5 %
BSA封闭液，室温 20 min;再加入 1∶ 50 稀释的鼠
抗人 Bcl － 2 蛋白单克隆抗体，置于 4 ℃冰箱中过
夜后滴加生物素化羊抗鼠 IgG，于 37 ℃湿盒中温育
30 min后加入 SABC 复合物，再温育 30 min(上述
各步骤之间皆用 PBS 洗涤 3 次，每次 5 min) ，DAB
显色，镜下控制 5 ～ 10 min，显色完成后用自来水冲
洗 3 min以终止反应，最后以苏木精对比染色，脱
水，透明，封固，镜下观察，核染色呈棕黄色者为阳
性细胞。每张切片观察 5 个高倍视野，采用图象分
析系统分析阳性表达。
3 结果
对 SGC －7901 细胞凋亡的影响见表 1。与对
照组相比，4 ～ 32 mg /mL藤梨根提取物不同程度的
促进 SGC － 7901 凋亡，在 8 mg /mL 藤梨根提取物
以促进 SGC －7901 凋亡为主(29． 22 %) ，在 32 mg /
mL 藤梨根提取物以促进 SGC － 7901 坏死为
主(25． 62 %)。
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表 1 对细胞凋亡的影响
组别 浓度 /(mg·mL)
细胞状态 /%
－ 死亡 正常 凋亡
空白 － 7． 18 10． 03 76． 17 6． 87
5 － FU 100 8． 31 56． 21＊＊ 17． 62＊＊ 18． 75＊＊
藤梨根提取物 4 3． 52 11． 41 66． 43 18． 72＊＊
藤梨根提取物 8 1． 68 7． 34 62． 7＊＊ 29． 22＊＊
藤梨根提取物 16 10． 2 22． 41＊＊ 53． 24＊＊ 14． 22＊＊
藤梨根提取物 32 15． 5 25． 62＊＊ 50． 94＊＊ 8． 82
与空白对照组比较，＊＊P ＜ 0． 01。
表 2 对裸鼠移植人胃癌 SGC － 7901 细胞瘤 Bcl － 2 基因蛋白影响 (x ± s)
组 别 n 剂量(mg /kg) Bcl － 2 阳性灰度值
模型组 6 － 75． 05 ± 1． 18
康力欣胶囊组 6 60 82． 23 ± 1． 264＊＊
藤梨根提取物 6 320 103． 41 ± 1． 01＊＊
藤梨根提取物 6 160 104． 05 ± 1． 23 ＊＊
藤梨根提取物 6 80 90． 52 ± 1． 09＊＊
注:与阴性对照组比较，＊＊P ＜0． 01。
对裸鼠移植人胃癌 SGC － 7901 细胞瘤 Bcl － 2
基因蛋白影响见表 2，与阴性对照组比较，各给药
组均有显著的统计学意义(P ＜ 0． 01) ;藤梨根提
取物大、中剂量组的 Bcl － 2 阳性灰度值高于阴性
对照组;与康力欣胶囊组比较，藤梨根提取物大、中
剂量组有统计学意义(P ＜ 0． 05)。本次实验表
明，在本次试验采用的剂量范围内，藤梨根提取物
剂量中、小剂量与 Bcl － 2 阳性灰度值正相关。
4 讨论
采用紫外分光光度法，对藤梨根提取物中总黄
酮进行含量测定，结果藤梨根提取物中总黄酮的含
量在 12． 0 %以上。应用聚酰胺柱色谱法对藤梨根
提取物进行纯化，使总黄酮的含量达 50 %以上。
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，占消化道肿瘤
首位。我国属胃癌高发区，据最新统计数据，每年
新发现 40 万胃癌患者，占世界发病人数的
42 %［5］。对于中晚期胃癌，术后化疗是目前除手
术外最常用的治疗措施，但效果有限。因此，研究
中医药治疗中晚期胃癌具有现实意义［6］。
Kerr等于 1972 年首先提出，在细胞凋亡过程
受许多基因共同调控，已报道有三十余种基因与细
胞凋亡的抑制或增强有关［7 － 8］。本研究结果表明
藤梨根提取物可能是通过抑制 Bcl － 2 基因表达，
诱导人胃癌 SGC － 7901 细胞凋亡，从而延缓细胞
分裂增殖速度，抑制胃癌细胞的生长，达到抗癌目
的。至于该提取物诱导细胞凋亡作用是否还与其
他调控基因有关，有待进一步研究。
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(收稿日期:2011 － 10 － 20)