全 文 ：阔叶十大功劳根中生物碱组分体外抗流感病毒试验研究
曾祥英 , 劳邦盛 , 董熙 昌 2 孙学惠 3 董玉莲 , 盛国英 , 傅家漠 ,
( 1
. 广东省环境资源利用与保护重点实验室 、 中国科学院广州地球化学研究所 , 51 仪闷。 ;
2
. 贵阳医学院 , 贵阳 5 5〕仄科 ;3 . 贵阳中医学院 ,贵阳 5 5X( X) 2 )
摘要 利用鸡胚试验技术研究了阔叶十大功劳根中生物碱成分在体外对流感病毒的抑制作用 。 试验结果表
明 , 阔叶十大功劳根中生物碱成分在 20 11 1岁耐 时对鸡胚无毒性 , 0 . 25 111留而 时仍显示出对甲 l 型流感病毒较强的
抑制作用 。
关键词 阔叶十大功劳 生物碱 流感病毒
十大功劳是小聚科十大功劳属植物 , 在我国约
有 30 余种 ,主要分布在西南部 ,有清热燥湿 、 泻火解
毒之功效 , 民间常用于清热 、解毒 、 治感 冒等〔` 〕。 该
属植物主要以根 、茎 、叶人药 , 以根 、 茎人药的称为功
劳木 , 以叶人药的称为功劳 叶川 。 功劳 叶作为常用
中药 ,具有滋阴清热的功效 ,在秦岭以南各省还被广
泛地应用为苦丁茶川 。 现已从该属植物中提取分离
出几十种生物碱 ,如尖刺碱 、小聚碱 、 异汉防己碱 、小
聚胺 、药根碱 、 巴马亭 、 非洲防己胺等 。 这些生物碱
多具有生理 活性 。 笔者 以 阔叶十大功劳的根为原
料 , 以鸡胚试验技术为辅助手段进行筛选 ,发现阔叶
十大功劳根中的生物碱成分 ( 6F 组分 )具有 良好的
抗流感病毒的作用 。
1 材料
1
.
1 病毒 流感病毒甲 1 型申防一7 7一78 株 , 来源于
中国医学科学院病毒所 。 经鸡胚尿囊腔传代后测定
IE吸 ,分装小管 , 一 80 ℃保存待用 。
,
.
2 鸡胚 贵州黄羽鸡 9 一 1 日龄鸡胚 ,购于贵
州大学农学院科研鸡场 ; 良种鸡 9 一 H 日龄鸡胚 ,购
于华南农业大学科研鸡场 。
,
.
3 鸡红细胞悬液 ( 0 . 5% ) 取健康公鸡血 , 用生
理盐水洗涤三次 , 根据血球 压积 , 用生理盐水配成
0
.
5% 鸡红细胞悬液 , 4℃保存待用 。
1
.
4 药物 的制备 阔叶十大功劳 从刀如in a 乙e “ le i
( oF rt
.
) Car
. 的干燥根用稀酸浸泡 3 一 5 天 , 过滤 ,滤
液用碱中和至 p H or 一 11 , 离心分离 除去上清液 , 沉
淀经多次水洗后干燥 。 干沉淀再用 95 % 乙醇提取 ,
提取液回收溶剂后于 4℃ 结晶 , 乙 醇重结 晶得 白色
或微黄色片状晶体 , 即 6F 组分 , 经 HP LC 分析纯度
> 9 8%
,测得 〔。 」召二 15 3 . 5D , 熔点 x7 8℃ 一 25 2℃ 。 该
组分不溶于水 ,溶于氯仿 、 乙醇 、 酸等 。
阳性对照药物病毒哇包括病毒哩注射液 lB (贵
阳制药厂生产 ,批号 01 以 18 7 ) 、 病毒哇注射液 B 2( 福
清制药厂生产 , 批号 0 10 3 01 一 l) 和病毒哇注射液 B3
中药材第 26 卷第 1期 2X() 3 年 1月
(广州市桥制药厂生产 ,批号 01 03 04 ) , 规格均为 10
m g/ 时 。
2 方 法
2
.
, 药物毒性的测定 将药物用无菌生理盐水作
倍比稀释 ,接种于 9 一 1 日龄鸡胚 ,各稀释度分别接
种 3 只鸡胚 ,每只鸡胚接种 0 . 1 而 。 接种后的鸡胚
于 35 ℃ 一 37 ℃恒温孵育 48 h , 以不引起鸡胚死亡 的
最高药物浓度作为该药物的无毒剂量 。
2
.
2 药物杭流感病毒试验 根据药物毒性试验 的
结果 , 以药物的最大无毒剂量作为该药物抗病毒试
验的最高药物浓度 , 用无菌生理盐水作系列的倍比
稀释后 ,再与等量的含 lo E ID又 )病毒的稀释液混合 ,
于 37 ℃恒温水浴箱里孵育 l h , 然后接种 9 一 1 日龄
鸡胚 ,每个稀释度各接种 3 只鸡胚 , 每只鸡胚 接种
0
.
2 时 , 同时作最高药物浓度对照 、 病毒对照 、 阳性
药物对照 。 接种后的鸡胚置于 35 ℃ 一 37 ℃ 但温孵
育箱孵育 , 48 h 后 ,将鸡胚放人 4℃ 冰箱过夜 , 次 日
取鸡胚尿囊液用 0 . 5 %鸡红细胞悬液作定性血凝试
验 。 由于血凝素是 流感病毒表 面特异的糖蛋白 , 能
引起红细胞的凝集 , 因此 ,根据红细胞的凝集与否可
以判断是否有病毒的生长繁殖 。
3 结果
3
.
1 药物的毒性试验结果 6F 组分在 20 n lg/ iln
时对鸡胚不显示毒性 ,说明其毒性较小 ;阳性对照药
物病毒哇注射液 lB 、 BZ 由于是常用 的抗病毒药物 ,
故未做 毒性试验 。 B 3 由于用量太 大 , 增做毒性 试
验 ,发现在 20 11 1岁 iln ( Z l n岁胚 )时 ,两次试验 (毒性试
验和阳性对照试验 )均发现各有一只鸡胚卵黄囊破
裂 , 可能是其毒性所致 。 据杨怡妹等人闭的报道 , 病
毒哩的最大无毒剂量为 20 In岁胚 ,其最高剂量组的
鸡胚不能发育成鸡雏 。 本试验结 果与之有相 似之
处 ,但显示毒性时的剂量却低 or 倍 。
3
.
2 药物杭流感病毒试验结果 试验一在贵阳医
学院完成 , 所用鸡胚为贵州黄羽鸡 9 一 1 日龄鸡胚 ,
·
29
.
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2003. 01. 016
试验结果见表 1 。 从表 1 可 以看出 , 6F 组分显示出
了良好的体外抗流感病毒作用 , 而病毒哇 B1 、 B Z 未
显示应有的抗病毒作用 , 重复试验结果一致 。 因此
我们换用另一种病毒哇注射液 B 3 并加大剂量进行
试验二 ,试验二在中国科学院广州地球化学研究所
微生物实验室里完成 , 所用鸡胚是华南农业大学科
研鸡场 自行培育的 良种鸡 ,试验结果见表 2 。
表 1 阔叶十大功劳生物碱抗病毒
定性血凝结果 (试验一 )
药物 浓度 (
m岁 inl )
10 5
.
0 2
.
5 2
.
0 1
.
25 1
.
0 0
.
625 0
.
5 0
.
25 0
.
125
表 2 阔叶十大功劳生物碱抗病毒
定性血凝结果 (试验二 )
药物
浓度 ( m岁耐 )
2() 1 5 10 2
.
0 1
.
0 0
.
5 0
.
2 5 0
.
1 25
4 讨论
目前 ,对流感的控制主要采用对症治疗或接种
疫苗 ,但由于流感的抗原变异多 ,常规疫苗很难起到
有效的预防作用 。 在药物方面 , 国际上已 用的化学
药金刚烷胺类药物对流感病毒甲型虽有一定的抑制
作用 ,但由于其对神经系统的毒副作用以 及在试验
条件下和临床应用中易产生药物抗性毒株困 , 限制
了其在临床上的应用 ;病毒哇也仅在喷雾或滴鼻给
药时才对甲型和乙型流感病毒具有一定的作用川 ,
且它对人体呼吸道上皮细胞有一定的抑制作用 。
根据本 试验鸡胚试验技术研究 的结果 ,初步显
示 6F 具有 良好的体外抗 流感病毒的作用 。 阔叶十
大功劳是民间常用的 中草药 , 用于清热 、 解毒 、 治感
冒等 ,在我国分布较广泛 , 如与其他镇痛 、解热 、 止咳
等中药组方 ,有望开发出一个抗流感新药 。 当然 ,阔
叶十大功劳中生物碱成分 ( 6F 组分 )在体内的抗流
感病毒作用有待进一步的试验 , 对其它病毒的抑制
作用及毒性也须进一步探索 。
注 : 本研 究 「作得到 广州 市科 技 计划 项 目的 赞助 , 项 目编 号
0 1( )料8 17 2
注 : 一 :无 血球凝集 ,表示没有病毒生 长 , 说明药物对病毒有抑制
作用 ; + : 有血球凝集 ,表示有病毒生长 ,说明药物对病毒没有抑制作
用 。 病毒对照 的定性血凝结果为 : 十
从表 1 、 表 2 可 以看出 , 试验一 时 6F 组分
在 0 . 125 1119/ 血 时在体外仍有明显的抗流感病毒的
作用 ,试验二时在 0 . 25 11 19/ 而 时在体外有明显的抗
流感病毒的作用 , 0 . 125 m岁 iln 时其血凝滴度 为 l :
32 0
,病毒对照的血凝滴度 为 1 : 12 80 , 6F 组分对病毒
血凝滴度的抑制只有二倍 , 显示 出很弱的抑制病毒
作用囚 。 对 比 、分析两次试验结果 ,其差异应与试验
环境 、 试验 条件等有关 。 而 阳性 对照 药物 lB 在 1
m g/ 耐 、 2B 在 Z m岁 inl 时均未显示抗 流感 病毒的作
用 , B3 在 20 11 19/ 血 时其血凝滴度为 :1 64 0 , 病毒哇
对病毒血凝滴度的抑制 只有一倍 , 几乎未显示抗病
毒作用困 , 但此时 已显示 出对鸡胚 有一定的毒性 。
根据对 比试验结果 ,可以初步认为 6F 组分在体外对
流感病毒的抑制作用要优于阳性对照药物病毒哩 。
参 考 文 献
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厂洲 :广 东科技 出版社 , 1995 : 13 一 巧
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( 2《X) 2 一 0 8 一 07 收稿 )
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·
30
· 中药材第 26 卷第 l 期 2 (X] 3 年 1月