全 文 ：收稿日期:2008-07-01;　修订日期:2008-12-20
基金项目:江西省卫生厅中医药科研计划(No.2005A66)
作者简介:葛　菲(1965-),女(汉族),江西武宁人 ,现任江西中医学院药
学院副教授 ,学士学位 ,主要从事中药资源开发与利用研究工作.
兔耳风提取物的抑菌作用研究
葛　菲 ,张晓伟 ,裴各琴 ,陈　武 ,赖学文 ,刘庆华
(江西中医学院 ,江西 南昌　330006)
摘要:目的 比较不同极性溶剂提取铁灯兔耳风与杏香兔耳风成分对 3种常见微生物的抑菌作用。方法 采用水 、70%乙
醇 、95%乙醇及醋酸乙酯等不同极性的溶剂提取;用管碟法测抑菌圈的大小进行抑菌实验 , 用两倍稀释法进行最小抑菌
浓度的测定。结果 极性大的溶剂所提取出的成分对细菌(金黄色葡萄球菌)有明显抑菌作用 , 杏香兔耳风水提取物的最
小抑菌浓度为 6.25%, 铁灯兔耳风水提取物的最小抑菌浓度为 3.13%。极性小的溶剂提取出的成分对霉菌(白色念球
菌)有抑菌作用。结论 不同极性的提取物抑菌作用各不相同。
关键词:兔耳风;　提取物;　抑菌作用
中图分类号:R962　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)07-1676-02
StudyonInhibitoryEffectsofAinsliaeaExtracts
GEFei, ZHANGXiao-wei,PEIGe-qin, CHENWu,LAIXue-wen,LIUQing-hua
(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine, Nanchang330006, China)
Abstract:ObjectiveTocomparetheefectofdiferentpolarityextractingreagentsAinsliaeamacroclinidioidesandA.fragrans
onthreekindsofcommonmicroorganisms.MethodsTheactivesubstancewasextractedfromAinsliaeawithwater, 70% ethanol,
95% ethanolandethylacetate.Theinhibitoryefectwasdeterminedbyadoptingthecupplatemethod.Theminimalinhibitory
concentration(MIC)wastestedbydoubledilutionmethodintubes.ResultsTheextractsfromstrongpolaritysolventhadobvious
inhibitoryefectonbacteria(Staphylococcusaureus), andtheminimalinhibitoryconcentrationofA.fragranswas6.25%whenit
wasextractedwithwater, A.macroclinidioideswas3.13%.Theextractsfromweakpolaritysolventhadinhibitoryefectonfungus
(Candidaalbicans).ConclusionAntibacterialeffectsofAinsliaeaextractsbydifferentpolaritysolventaredifferent.
Keywords:Ainsliaea;　Extracts;　 Inhibitoryefects
　　兔耳风属 AinsliaeaDC植物是菊科(Compositae)帚木菊族
(MutisieaeCass),全世界七十余种 ,分布于亚洲东南部。中国植
物志记载我国有 44种 4变种 ,除 1种产于东北外 ,其余均产于长
江流域及其以南各省。兔耳风属植物多为民间及地区常用中草
药 , 广泛用于治疗感冒咳喘 、风湿痹痛 、跌打损伤 、活血止血 、肠炎
痢疾 、咽喉炎及泌尿系统疾病等症。目前 , 对本属植物的研究不
多 , 且主要集中为化学成分方面 [ 1 ～ 5] 。 本实验对杏香兔耳风和
铁灯兔耳风的不同溶剂提取物的抑菌活性进行初步研究。
1　材料与仪器
1.1　菌种
1.1.1　细菌 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(25923)、
大肠杆菌(Escherichiacoli)(25922)由江西省儿童医院检验科
提供;
1.1.2　真菌 白色念珠菌(Candidaalbicans)(90029)由江西省医
科所微生物室提供。
1.2　仪器 SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵 , RE52 -99旋转蒸发
器 , OLSB-5/10低温冷却液泵 , 高速中药粉碎机 , 培养皿 , 移液
管 , 牛津杯 ,试管 , HF-105A数控电热恒温培养箱 , YXQ-SG46
-280型手提式压力蒸气消毒器等。
1.3　培养基 金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌用血琼脂基础培养基培
养 , 白色念球菌用沙氏培养基培养。
1.4　药材 铁灯兔耳风 AinsliaeamacroclinidioidesHayata和杏香
兔耳风 A.fragransChamp.均采自江西婺源 , 并经笔者鉴定。
2　方法
2.1　铁灯兔耳风提取物的制备
2.1.1　水提物 将铁灯兔耳风剪碎后 , 用粉碎机适当粉碎 , 称取
200 g粉碎后药材置于 5 000 ml烧瓶中 , 加入蒸馏水 , 浸泡 30
min。置电热套中缓缓加热至沸 ,并保持微沸状态 4 h,停止加热 ,
趁热过滤 ,将水提液浓缩为浸膏。
2.1.2　醇提物 称取粉碎铁灯兔耳风药材 100 g置于烧瓶中 , 加
入 95%乙醇 , 浸泡 30 min, 回流提取 2次 ,第 1次 2 h, 第 2次 1.5
h。过滤 ,合并滤液。回收乙醇 ,将滤液浓缩至浸膏状。同法可得
70%乙醇提取物。
2.1.3　酯提物 称取粉碎铁灯兔耳风药材 100g置于 1 000ml烧
瓶中 , 加入 500ml醋酸乙酯 , 浸泡 30min。回流提取 2次 ,第 1次
2 h, 第 2次 1.5 h。过滤 ,合并滤液。回收醋酸乙酯得浸膏。
2.1.4　样品制的制备 样品液的制备将铁灯兔耳风的 4种提取
物配制成含生药量为 50g/100ml的样品液。
2.2　杏香兔耳风提取物的制备
2.2.1　水提物 称取粉碎杏香兔耳风药材 100 g置于烧瓶中 , 加
入蒸馏水 ,其余步骤同铁灯兔耳风水提法。
2.2.2　醇提物 称取粉碎杏香兔耳风药材 50 g置于烧瓶中 , 加
入 95%乙醇 , 其它操作同铁灯兔耳风乙醇提取物提取法。 用
70%乙醇提取 , 其它操作同上 ,得 70%乙醇提取物 。
2.2.3　酯提物 称取粉碎杏香兔耳风药材 45 g置于烧瓶中 , 其
它操作同铁灯兔耳风醋酸乙酯提取物提取法。
2.2.4　样品液的制备 将杏香兔耳风的 4种提取物配制成含生
药量为 50g/100ml的样品液。
2.3　种菌的准备 在超净工作台上将大肠杆菌 、金黄色葡萄球
菌 、白色念珠菌分别接种于各自培养基上 , 在 37℃恒温培养箱中
培养 48h。制成种菌备用。
2.4　培养基的准备 取 30.4 g血琼脂培养基于锥形瓶中 , 加入
800 ml蒸馏水;取 6.6 g沙氏培养基及琼脂粉 8 g于锥形瓶中 , 加
入 400 ml蒸馏水 , 与包扎好的培养皿 、移液管 、牛津杯 、试管等一
起放入灭菌锅中高压蒸气灭菌 20 min(103.4kPa)。
2.5　抑菌活性的测定 培养基倒好平板后 , 冷却至凝固。用接种
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.7　
环挑取上述活化后菌种 , 涂满整个平板 , 盖好平皿盖 ,于培养箱中
培养 24 h, 制成含菌平板。然后在平板上等距离分散的轻轻放上
4个牛津杯 ,在杯内分别注入 100 μl样品液。以上操作均在无菌
室内进行。
把每个处理过的培养皿放到如下条件培养:细菌 37 ℃, 24
h;霉菌 24℃, 48 h。测定抑菌圈直径 , 取其平均值。 并以此判断
兔耳风不同溶剂提取物对供试菌的抑制效果。
2.6　最小抑菌浓度(MIC)的测定(两倍稀释法)根据抑菌圈的
测定结果 , 选取金黄色葡萄球菌做最小抑菌浓度(MIC)的测定 ,
选取杏香兔耳风和铁灯兔耳风的水 、70%乙醇 、95%乙醇提取物
做为样品溶液。
挑取金黄色葡萄球菌一环接种于肉汤培养基中 ,放入培养箱
培养 24h。取 1支无菌试管倒入 2 ml肉汤 ,接种已培养 24 h的
金黄色葡萄球菌一环 ,放入培养箱培养 6 h。
取 54支试管分为 6组 ,每组 9支。在 1 ～ 6号试管中各加入
1ml肉汤 ,并在 1号试管中加入 1 ml药液 , 从第 2支试管开始依
次从前支试管取 1 ml混合液加入下一支试管并混匀。从 6号试
管中吸取的 1 ml直接弃去。将 7号试管加入 1 ml肉汤 , 8号 、 9
号试管加入 1 ml药液。即每组试管样品含生药量浓度为:25,
12.5, 6.25, 3.l3, 1.56, 0.78, 0, 50, 50 g/100ml。 将已培养 6 h的
菌液取出 , 各取一环加入 10 ml肉汤中 ,适当振摇。用试管吸取 ,
在 1 ～ 8号试管中加入 1滴含菌的肉汤。将上述试管置 37℃培养
箱培养。于 24 h取出 ,肉眼观察结果 , 液体浑浊管为阳性管 , 液
体澄清管为阴性管 ,找出最低药物浓度的阴性管则为该种物质
的最低抑菌浓度。
2.7　数据处理 实验数据均为 3次平行实验结果的平均值。
3　结果
3.1　不同极性不同种类提取物抑菌活性比较 不同极性提取液
对金黄色葡萄球的作用不同。见表 1 ～ 2。其中杏香兔耳风水提
取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径可达 30 mm, 但醋酸乙酯提
取物对金黄色葡萄球菌无抑制作用。同时 ,杏香兔耳风的抑菌效
果要优于铁灯兔耳风 。见图 1 ～ 2。
上:70%乙醇提取物　左:醋酸乙酯提取物　　上:70%乙醇提取物　左:醋酸乙酯提取物
下:水提取物　　　　右:95%乙醇提取物　　下:水提取物　　　　右:95%乙醇提取物
图 1　杏香兔耳风对金黄色葡萄　　　图 2　铁灯兔耳风对金黄色葡萄
球菌的抑制效果　　　　　　　　　　球菌的抑制效果　
表 1　杏香兔耳风不同极性提取物的抑菌圈直径 mm
提取溶剂 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 白色念球菌
水提 30 - -
70%乙醇 22 - -
95%乙醇 22 - ±
醋酸乙酯 - - +
　　“ +”表示抑菌圈小于 10mm;“ ±”表示抑菌不明显;“ -”表示无抑
菌作用
表 2　铁灯兔耳风不同极性提取物抑菌圈直径
提取溶剂 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 白色念球菌
水提 20 - -
70%乙醇 20 - -
95%乙醇 12 - ±
醋酸乙酯 - - +
　　“ +”表示抑菌圈小于 10mm;“ ±”表示抑菌不明显;“ -”表示无抑
菌作用
3.2　最小抑菌浓度的比较 经过观察培养物中试管透明度 ,同时
对培养物用涂布平板法检查细菌生长情况 ,计算兔耳风提取物的
最小抑菌浓度。见表 3 ～ 4。
表 3　杏香兔耳风提取物对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度
提取溶剂 1 2 3 4 5 6 7 8 9
水 - - - + ++ ++ +++ - -
70%乙醇 - - - - ++ ++ +++ - -
95%乙醇 - - - ++ ++ ++++++ - -
　　-为不长菌;+为少量生长;++为较多;+++为多
表 4　铁灯兔耳风提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度
提取溶剂 1 2 3 4 5 6 7 8 9
水 - - - - ++ ++ +++ - -
70%乙醇 - - - + ++ ++ +++ - -
95%乙醇 - - ++ +++ +++ +++ +++ - -
　　“ -”为不长菌;“ +”为少量生长;“ ++”为较多;“ +++”为多
由表 3 ～ 4可知 , 杏香兔耳风水提取物的最小抑菌浓度为
6.25%,抑菌效果低于铁灯兔耳风(最小抑菌浓度 3.13%);但
70%, 95%乙醇提取物的最小抑菌浓度分别为 3.13%, 6.25%, 则
抑菌效果略高于铁灯兔耳风最小抑菌浓度。对照试管 7号有大
量菌生长。 8, 9号试管无菌。
4　讨论
通过兔耳风不同溶剂提取物对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、
白色念珠菌 3种常见微生物抑菌作用的测定 , 结果表明 , 杏香兔
耳风与铁灯兔耳风的四种不同极性提取物对金黄色葡萄球菌的
抑制作用不同 ,抑菌作用由强到弱依次为:水 >70%乙醇 >95%
乙醇 , 而醋酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌无抑制作用。由此表
明 , 提取溶剂极性越强对金黄色葡萄球菌抑菌作用越强 , 并且随
着浓度的增加 , 各提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性都得以提
高。杏香兔耳风与铁灯兔耳风的 95%乙醇 、醋酸乙酯提取物对
白色念珠菌有一定的抑制作用;水 、70%乙醇提取物对白色念珠
菌无作用。但杏香兔耳风与铁灯兔耳风的四种不同极性提取物
对大肠杆菌都无抑菌作用。
目前已将杏香兔耳风为主药制成片剂 、颗粒剂和胶囊剂上
市 , 主要用于治疗宫颈糜烂 [ 6] 、子宫内膜炎 [ 7]等疾病。民间验方
也有用杏香兔耳风配伍治疗热疖 、鹅口疮 、蛇咬伤等。 兔耳风不
同溶剂的提取物 ,对细菌 、霉菌有不同的抑菌作用 ,甚至没有抑制
作用 , 说明同一种药材里面存在着不同极性的抑菌物质 , 本文为
其在民间及临床应用提供了一定的体外抑菌实验依据。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.7 时珍国医国药 2009年第 20卷第 7期