全 文 ：2011年 10月
*江苏省中医院药剂科（210029）
2011年 7月 20日收稿
摘 要：目的：建立测定千柏鼻炎片中穗花杉双黄酮含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Hanbon Lichrospher C18（4.6×
150mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％甲酸水，流速为1.0mL·min-1，检测波长为337nm，柱温为30℃。结果：穗花杉双黄酮在0.052～0.234μg
（r＝0.9996）范围内线性良好，平均加样回收率为100.20%，RSD为1.30%。结论：本法方便、快速、准确，可用于千柏鼻炎片的质量控制。
关键词：千柏鼻炎片；穗花杉双黄酮；高效液相色谱；含量测定
中图分类号：R286.02 文献标识码：B 文章编号：1006-0979（2011）20-0041-01
HPLC 测定千柏鼻炎片中穗花杉双黄酮的含量
廖善伟 *
千柏鼻炎片载于《中华人民共和国药典》2010版一部[1]，由千里
光、卷柏、羌活、决明子、麻黄、川芎及白芷七味中药组成，具有清热
解毒、活血祛风、宣肺通窍等功能，为治疗各类鼻炎、鼻窦炎的常用
中成药。其质量标准仅有对千里光、决明子、麻黄的薄层色谱鉴
别，对处方中的主药——卷柏缺少定性、定量检验[1]。穗花杉双黄
酮是卷柏药材的特征性化学成分，可作为控制卷柏质量的指标性
成分[2]。本实验利用 HPLC对千柏鼻炎片中穗花杉双黄酮进行了
定量分析，为千柏鼻炎片的内在质量评价提供了可靠的方法。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪：G1314A VWD检测器，G1322A
脱气机，G1311A 四元泵，G1316A 柱温箱，DAD 检测器，Agilent
ChemStation（美国安捷伦公司）；电子分析天平（BP-211D型，德国
赛多利斯公司）；H66025T超声清洗机（无锡超声电子设备厂）。
千柏鼻炎片（广东奇星药业有限公司，批号：8110，8138，8106；
广东省博罗先锋药业集团有限公司，批号：090407，090213，090208；
陕西君寿堂制药有限公司，批号：090408；修正药业集团股份有限
公司，批号：090603）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分
析纯；穗花杉双黄酮为实验室自制，经光谱确定结构，HPLC峰面积
归一化法计算质量分数大于 98%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：Hanbon Lichrospher C18（4.6mm×150mm，
5μm）；预柱：ZORBAX C18柱（4.6×12.5mm，5μm）流动相：甲醇-
0.1％甲酸水，A 相为 0.1%甲酸水，B 相为甲醇；洗脱程序：0～
15min，B为 60～70%，15～25min，C为 70～72%，25～35min，72～75%；
流速：1.0mL·min-1；进样量：20μL。理论塔板数按穗花杉双黄酮峰
计算不低于 3000。
2.2 对照品溶液的制备：精密称取穗花杉双黄酮对照品 0.0013g，
置 50mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，即得对照品溶液。
2.3 线性关系考察：精密吸取上述对照品溶液适量，注入色谱仪，
使含对照品穗花杉双黄酮的量分别为 0.052、0.104、0.130、0.182、
0.208、0.234μg。按表 1的梯度洗脱，以进样量 X（μg）为横坐标，测
得的峰面积 Y为纵坐标绘制标准曲线，并计算回归方程，回归方
程为 Y=2258.5X-37.324，r=0.9996，线性范围为 0.052～0.234μg。
2.4 供试品溶液的制备：取供试品 20片，除去糖衣，精密称定，研
细，称取样品细粉约 1.0g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇 50mL，
超声提取 30min，过滤。滤渣再用甲醇同法提取两次，两次滤液合
并。减压蒸干溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至 10mL量瓶中，摇
匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.5 阴性对照溶液的制备：按处方和工艺制备不含药材卷柏的阴
性样品，按“2.2”项下方法制得阴性样品溶液。
2.6 测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶
液各 20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱见图 1。
2.7 精密度测定：精密吸取上述对照品溶液，按上述色谱条件连续
重复进样 6次，进样量 20μL，测得对照品峰面积，结果穗花杉双
黄酮峰面积的 RSD为 1.15％，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验：精密吸取供试品溶液（奇星 8106），分别于 0、2、
4、6、8、10、12h测定，进样量 20μL，测得峰面积并计算，结果穗花
杉双黄酮峰面积的 RSD为 1.87％，表明供试品溶液在 12h内稳
定。
2.9 重复性试验：取同一样品 6份（奇星 8106），按“2.2”项下方法
制备，“2.10”项下方法测定，结果穗花杉双黄酮 RSD为 1.39%。
2.10 加样回收率试验：精密称取含量已知的样品（奇星 8106），共
6份，每份约 1 g，分别精密加入一定量的对照品储备液，按“2.2”
项下方法制备，“2.10”项下方法测定，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果（n=6）
2.11 样品测定：分别制备各样品溶液，精密量取 20μL进样，以峰
面积计算样品中所含穗花杉双黄酮的含量，结果见表 2。
表 2 样品的含量测定结果（n=3）
3 讨 论
3.1 以处方主药卷柏的特征性化学成分穗花杉双黄酮作为千柏鼻
炎片的质控指标具有特别的意义。实验结果表明，各生产企业的
千柏鼻炎片中都含有卷柏药材，但其中穗花杉双黄酮含量有一定
的差别，可能与所用卷柏原药材的品种、产地、采收期、加工方法、
储存条件等因素有关。药材的品质直接关系到成药的质量，因此，
在成药生产中首先要对原料药进行质量控制。
3.2 考虑到穗花杉双黄酮在甲醇中的溶解度较好，比较了甲醇超声
和回流两种方法的提取效果，结果差异不显著，因此，采用更为简
便的超声提取法。文献[3]报道，采用聚酰胺预处理的方法后，发现其
对双黄酮的吸附较强，因而，样品损失较多。本实验中，我们采用甲
醇超声提取、梯度洗脱，并采用保护柱的方法，取得了较好的效果。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]．北京：化学工业出版
社．2010,Ⅰ：457.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]．北京：化学工业出版
社．2010,Ⅰ：210.
[3]刘海清.HPLC测定千柏鼻炎片中穗花杉双黄酮的含量[J]．中国
药学杂志，2004,39(7):555-556.
取样量/g 样品含量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/% x/% RSD/%
0.5012
0.5008
0.5026
0.5002
0.5012
0.5018
44.12
44.08
44.24
44.03
44.12
44.17
46.80
46.80
46.80
46.80
46.80
46.80
91.31
90.10
91.67
90.43
91.29
90.31
100.82%
98.33%
101.35%
99.15%
100.78%
98.59%
100.20% 1.30%
样品批号
含量（μg/片） 平均含量
（μg/片）
RSD/%
1 2 3
090213
090407
090208
8106
8110
8138
090603
090408
38.50
19.38
10.51
42.05
40.04
28.67
36.37
40.46
38.90
19.47
10.65
42.42
40.35
28.36
36.69
41.37
39.26
19.62
10.76
42.79
40.78
28.74
36.95
40.69
38.89
19.49
10.64
42.42
40.39
28.59
36.67
40.84
0.97
0.62
1.18
0.87
0.91
0.71
0.79
1.14
图 1 高效液相色谱图
A.对照品 B.供试品 C.阴性对照 1.穗花杉双黄酮
41
DOI:10.16040/j.cnki.cn15-1101.2011.20.052