免费文献传递   相关文献

液相色谱质谱联用法分析喜树果中苷类化学成分



全 文 :书液相色谱质谱联用法分析喜树果中苷类化学成分
郭 群,万军梅
(武汉职业技术学院 生物工程学院,湖北 武汉430074)
摘 要:目的:建立喜树果液相色谱质谱联用分析方法并分析其苷类化学成分。方法:大孔吸附树脂分
离,HPLC-ESI-(MS)n分析,离子碎片结构解析。结果:识别到7种苷类化合物,即3,4-dehydro-stricto-
sidinic acid、strictosidinic acid、短小蛇根草苷、金丝桃苷、20-O-β-Glucopyranosyl-18-hydroxycamptothe-
cin、喜果苷、三叶豆苷。结论:建立的分析喜树果成分的 HPLC-ESI-(MS)n方法实用可靠。
关键词:喜树果;HPLC-MS/MS;化学成分
中图分类号:R284.2   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2012)01-0026-03
收稿日期:2011-09-11
基金项目:湖北省教育厅重点项目(D200750001)
作者简介:郭群 ,女 ,硕士 ,武汉职业技术学院生物工程系主任药师,研究方向为天然药物化学。
Analysis of Glycosides in the Fruits of Camptotheca acuminata by HPLC-ESI-(MS)n
Guo Qun,Wan Junmei
(Wuhan Polytechnic,Wuhan 430074,China)
Abstract:Objective:To analyze the glycosides in the fruits of Camptotheca acuminata Decne.Methods:Folowing separation by
macroporous resin,HPLC-ESI-(MS)n was used to identify the compounds.The fragment patterns were proposed.Results:7com-
pounds were identified.They are 3,4-dehydro-strictosidinic acid,strictosidinic acid,pumiloside,hyperoside,20-O-β-glucopyranosyl-
18-hydroxycamptothecin,vincosamide,trifolin,Conclusion:stablished HPLC-ESI-(MS)n method for analysis of the ingredients in
the fruit of Camptotheca acuminata is practical and reliable.
Key Words:Camptotheca Acuminata Decne;HPLC-(MS)n;Compounds
  喜树果为珙桐科植物喜树 Camptotheca acuminata
Decne的果实,是提取抗癌药物成分喜树碱和羟基喜树碱的
重要原料。喜树果还含有其他一些重要的化合物[1-4],如果
能进行综合提取,则能提高企业的生产效益。喜树果中的
苷类化合物,有潜在的研究和经济价值,如喜果苷[1]和紫树
苷[4]等的生物活性已有报道。苷类化合物结构复杂,水溶
性大,提取难度大,获得单体较难,市场上很难获得对照品。
因此,有必要建立一种快捷有效的获得化合物的部位信息
的方法,以解决企业提取分离有价值化合物的盲目性问题。
本研究建立了喜树果的大孔吸附树脂分离、高效液相-质
谱分析方法,并针对中国湖北产喜树果,识别出了7个苷类
化合物,为生产企业综合提取苷类化合物提供了分析方法
和成分信息。
1 实验部分
1.1 样品的制备
喜树果采自中国湖北省恩施自治州。用50%乙醇提
取,将浓缩液上X-5大孔吸附树脂(苯乙烯型非极性大孔吸
附树脂,比表面为500~600m2/g)柱,先用30%乙醇洗去杂
质,再用50%乙醇洗脱,收集洗脱液再上CT-4S型大孔吸附
树脂(聚苯乙烯型,颗粒粒径0.3~1.2mm)柱,30%乙醇洗
去水溶性杂质,收集50%乙醇洗脱液,按流分合并回收,分
别编号为I、II、III、IV、V,备用做液相色谱/质谱分析。
1.2 仪器与试剂
1100高效液相色谱/质谱联用仪(LC/MSD Trap XCT)
(美国Agilent公司),配有二极管阵列(DAD)检测器,LC/
MS Trap软件(5.2版本)。乙腈,色谱纯,水为超纯水。其
它试剂为分析纯。金丝桃苷对照品由四川维克奇生物科技
有限公司提供。
1.3 色谱、质谱条件
Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(150mm×
4.6mm,5μm,美国Agilent公司);流动相:水-乙腈=80:
20;流速为1.0mL/min;柱温40℃;UV 256nm 为检测波
长;质谱:离子源类型:ESI离子模式;正离子;离子源温度:
325℃;喷雾气压:40psi;干燥气流速:11.0L/min;毛细管电
压:3 500V;毛细管出口电压:138V;扫描范围:50~1 200m/
z;扫描方式:auto MS/MSn。
2 结果与分析
2.1 样品的HPLC-(MS)n数据
样品用甲醇溶解,HPLC自动进样器进样。从 HPLC
—62—
流出直接进入ESI电离源,实时自动三级质谱扫描,数据通
过软件收集。在总离子色谱图(TIC)中提取离子峰,得到提
取离子色谱图(EIC),提取 MS图,选择[M+H]+峰提取其
子碎片离子 MS2图,进一步提取 MS3。质谱数据见表1。
表1 化合物1~7的液相色谱和质谱数据
样品 化合物 tR(min) MS[M+H]+(m/z) MS2(m/z) MS3(m/z)
I  1  3.9  515.2  353.0,335.0,309.1,264.9
(515.4→353.1)335.0,309.1,
265.0,185.0
II
2  4.6  517.2  500.2,338.1
(517.4→500.3)338.0,320.0,
302.0,276.0,250.9,221.9,193.
9,169.9
3  4.9  513.1  351.1,333.0,307.0,281.0
(513.4→351.1)332.9,305.1,
280.9,262.9
III
4  4.9  465.0  302.9
(465.3→302.9)284.9,256.8,
228.8,186.8,164.8,136.9,111.0
5  6.6  527.1  364.9,347.0 (527.5→347.1)302.9,275.0
IV  6  10.6  499.1  337.1,267.0,152.8
(499.4→337.1)319.0,266.9,
193.9,170.9,143.9
V  7  4.4  449.0  286.9
(449.2→286.9)269.0,240.8,
164.8,136.8,120.7
2.3 化合物的识别和结构解析
化合物1,准分子离子峰为515[M+H]+,分子量为
514。二级质谱碎片离子353[M-162+H]为去掉一个中性
脱水六碳糖后的离子,判断分子为苷类化合物。碎片类型
推导见图1,推测化合物为3,4-dehydro-strictosidinic acid,
与文献[5]报道一致。
图1 化合物1碎片离子类型推导
化合物2,准分子离子峰为517[M+H]+,分子量516。
二级质谱碎片离子500为去掉一个中性 OH 的碎片,338
[M-17-162+H]+为去掉OH和一个中性脱水六碳糖结构
单元后的离子,-OH在苷元上,而且容易打掉,推测为羧基
上的-OH,+MS3碎片320为[338-17-H]。推测的碎片类型
见图2。判断化合物为strictosidinic acid,与文献[6]报道的
结构一致。
图2 化合物2碎片离子类型推导
  化合物3,ESI-MS显示[M+H]+ 为513,分子量为
512,碎片离子 m/z 351[M+H-162]为打掉一个葡萄糖结
构单元后的碎片。离子碎片分析见图3,判断为短小蛇根草
苷(Pumiloside),并与文献资料[7]一致。
—72—
图3 化合物3碎片离子类型推导
  化合物4,准分子离子为465[M+H]+,分子量为464,
MS2为303[M-162+H]+,为丢掉一个六碳糖结构单元后
的碎片,MS3(465.3→302.9)为285[M-162-OH]+,257[M-
162-OH-CO]+,229[M-162-OH-CO-CO]+,其苷元裂解符
合黄酮醇类化合物槲皮素的裂解规律[8,9],结合与金丝桃苷
对照品进行高效液相色谱对照,判断化合物为金丝桃苷
(Hyperoside)。
化合物5,准分子离子峰为527[M+H]+,分子量为
526。365为527减去162,即丢失一个脱水葡萄糖结构单元
后的碎片,说明化合物为苷类。347为继续脱掉一个 H2O
的碎片,再继续脱掉CO2 则得到303的碎片。碎片解析见
图4。识别化合物为 20-O-β-Glucopyranosyl-18-hydroxy-
camptothecin,结构参考文献[6]。
图4 化合物5碎片离子类型推导
化合物6,准分子离子峰见499[M+H]+,并可见521
[M+Na]+,确定分子量为498,由337[M-162+H]+可知
为葡萄糖苷类化合物,337继续丢掉一个 H2O得到319.0,
337开裂为两部分则有194和144碎片,267,171,144等碎
片离子与文献[11]报道完全一致,判断化合物为喜果苷(vin-
cosamide)。
化合物7,准分子离子峰449[M+H]+,分子量为448。
m/z 287的碎片离子是449失去一个质量数为162(六碳糖
结构单元)的中性碎片后生成的苷元离子。离子287丢掉
一个OH和一个 H得到离子269[M-162-OH]+,269继续
丢掉一个CO得到离子241[M-162-OH-CO]+,离子165的
解析见图5,离子 m/z137和121分析见文献[12],结合文
献[10]报道,判断化合物为三叶豆苷(trifolin)。
图5  化合物7碎片离子m/z165的类型推导
3 讨论
HPLC-ESI-(MS)n分析鉴定植物成分不需要分离得到
单体,但是由于植物成分太多,且成分类型复杂,如果不进
行预先的色谱分离,尽可能地去掉杂质,很难直接通过
HPLC获得清晰的分离。较多的杂质碎片干扰,在化合物
未知的情况下,很难捕捉到有价值的化学成分。初步的分
离纯化,有助于了解 HPLC上具体峰对应的具体化合物,为
进一步有针对性地分离单体成分提供信息。
电喷雾电离模式对于分析苷类化合物有独特的优势,
除了分子中具有容易断裂的基团,如COOH 上的 OH 外,
一般二级质谱优先打掉糖结构单元而获得完整的准苷元分
子离子碎片。但本研究方法分析糖的构型有困难。
本研究建立的质谱条件,能通过三级质谱提供来源层
次分明的碎片离子,表征出更多的化合物结构特征。本研
究补充了化合物的电喷雾质谱数据,分析了电喷雾多级质
谱模式下部分化合物的解离行为和碎片特征。
参考文献:
[1] 林隆泽,沈积慧,贺湘,等.喜树中的吲哚生物碱[J].化学学
报,1988,46:1207-1211.
[2] LONGZE LIN,GEOFFREY A,CORDELLA.Quinoline alka-
loids from camptotheca acuminate[J].Phytochemistry,1989,
28(4):1295-1297.
[3] 林隆泽,宋纯清,徐任生.抗癌植物喜树化学成分的研究III:
喜树果中的鞣花酸类化合物[J].化学学报,1979,37(3):207-
214.
[4] YIN FENG,HU LIHONG.Two DNA topoisomerase I inhib-
itors from Camptotheca acuminate Decne(Nyssaceae)[J].
Chin J Nat Med Jan,2005,3(1):21-24.
—82—
HPLC测定酚磺乙胺注射液有效成分含量的方法研究
刘近荣,韩佩莲
(山西振东泰盛制药有限公司,山西 大同037300)
摘 要:目的:建立以 HPLC法测定酚磺乙胺注射液含量的方法。方法:色谱柱为氨基键合硅胶柱
(5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇-0.2%磷酸二氢钾溶液(10:90);流速为1.0mL/min;检测波长
为223nm,柱温为25℃。结果:酚磺乙胺在50.1~801.6μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好(r
=0.999 9,n=5),平均加样回收率为99.8%(RSD=0.45%)。结论:本方法测定结果准确、操作简便、
灵敏度高、重复性好,可用于本品的质量控制。
关键词:HPLC法;酚磺乙胺注射液;含量测定
中图分类号:R284   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2012)01-0029-02
收稿日期:2011-10-15
Determination of Etamsylate injection by HPLC
Han peilian
(Datongshi Huida pharmaceutical Co,Ltd,Datong 037006,China)
Abstract:Objective:To establish a HPLC method for content determination of etamsylate Injection.Methods:NH2(5μm,4.6×
250mm)column.The mobile phase consisted of methanol-0.2%KH2PO4(10:90).The UV detection wavelength was 223nm and
the flow rate was 1.0mL/min.Results:There was a good linear relationship between the sample size of etamsylate and peak area
score when the sample size was within the range of 50.1~801.6μg/mL(r=0.999 9,n=5).The average recovery was 99.8%(RSD
=0.45%).Conclusion:The method provides to be accurate,convenient,sensitive,wel reproducible and may thus be used in the
determination of etamsylate injection.
Key Words:HPLC;Etamsylate Injection;Content
  酚磺乙胺注射液是止血药,《中国药典》1995年版二部
采用紫外可见分光光度法测定其有效成分含量,因紫外法
干扰较多,为了严格控制其质量,特探讨用 HPLC法对其的
含量进行测定。
1 仪器与试药
Waters515HPLC Pump高效液相色谱仪;Waters2487
紫外检测器;酚磺乙胺对照品(中国药品生物制品检定所,
批号:0134-9302规格:50mg);酚磺乙胺注射液(

大同市惠
[5] CARMEM LUCIA CARDOSO,IAN CASTRO-CAMBOA,
DULCE HELENA SIQUEIRA SILVA,et al.Indole glucoal-
kaloids from Chimarhis turbinate and their evaluation as an-
tioxidant agents and acetylcholinesterase inhibitors[J].J Nat
Prod,2004,67:1882-1885.
[6] PAOLA MONTORO,MARIATERESA MALDINI,SONIA
PIACENTE,et al.Metabolit ngerprinting of Camptotheca
acuminata and the HPLC-ESI-MS/MS analysis of camptoth-
ecin and related alkaloids[J].Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis,2010,51:405-415.
[7] 刘荣,欧阳明安.珙桐叶中喹啉类生物碱甙pumiloside结构
鉴定[J].亚热带植物科学,2006,35(1):35-38.
[8] 于荣敏,张德志.天然药物化学成分波谱解析[M].北京:中
国医药科技出版社,2008:345-346.
[9] 李宇航,戴海学,汪明明,等.槲皮素的电喷雾离子阱质谱分
析[J].质谱学报,2009,30(6):374-378.
[10] SHIYOU LI,ZHIZHEN ZHANG,et al.Antifungal Activity
of Camptothecin,Trifolin,and Hyperoside Isolated from
Camptotheca acuminata[J].J Agric Food Chem,2005,53
(1):32-37.
[11] 王瑞芳,李家政,史作清,等.树脂吸附层析法分离喜树果中
的喜果甙[J].高等学校化学学报,2003,24(8):1534-1536.
[12] 张晓玲,段金廒,钱大玮.LC-MS/MS联用技术分析野马追
及复方野马追胶囊中的黄酮类成分[J].中国药科大学学
报,2008,39(2):147-150.
(责任编辑:陈涌涛)
—92—